联合成骨细胞移植促进骨髓移植小鼠的造血功能重建

目的 探讨联合成骨细胞移植对骨髓移植小鼠造血功能重建的影响.方法 Balb/c小鼠60只,取其中18只制备移植用骨髓有核细胞和成骨细胞.将其余42只小鼠分为3组.单纯移植组:小鼠18只,仅进行骨髓移植(BMT);联合移植组:18只,进行BMT的同时每只小鼠输入成骨细胞2×106个;正常对照组:小鼠6只,不做任何处理,仅作为移植前的正常对照.移植组小鼠在全身照射(TBI)预处理后4 h经尾静脉注入骨髓细胞2×106个.移植后第7、14和21天,分别处死移植组小鼠6只,对小鼠的外周血细胞和骨髓单个核细胞(BMMNC)进行计数,采用流式细胞术测定BMMNC中CD34+细胞的百分比,使用HPIAS-1000高清晰度彩色病理图像系统测量骨髓造血组织面积,采用免疫组化染色法测定骨髓组织微血管密度(MVD).结果 移植后第7天,单纯移植组和联合移植组小鼠外周血细胞计数及BMMNC数均明显低于正常对照(P＜0.01).第21天时联合移植组小鼠白细胞、红细胞及BMMNC数明显恢复,血小板数已接近正常对照组;单纯移植组小鼠外周血细胞数和BMMNC数虽然有所恢复,但其恢复程度明显弱于联合移植组.移植后第7、14和21天,联合移植组外周血细胞计数及BMMNC数均明显高于同期单纯移植组(P＜0.01或P＜0.05).移植后第7、14、21天,单纯移植组和联合移植组小鼠骨髓造血组织面积、BMMNC中CD34+细胞百分比及骨髓组织MVD均明显低于正常对照组(P＜0.01),但联合移植组均高于同期单纯移植组(P＜0.01或P＜0.05).结论 联合成骨细胞移植能有效促进骨髓移植小鼠骨髓造血系统的重建.

Abstract：

Objective To explore the effects of cotransplantation with osteoblasts on hematopoietic reconstitution in mice after bone marrow transplantation (BMT). Methods The typical model of syngeneic BMT was established. 18 Balb/c mice were used to prepare the bone marrow nuclear cells and osteoblasts for BMT. The 42 Balb/c mice were randomly divided into 3 group:normal group (6 mice, without any treatment), the single BMT group ( 18 mice, given 2 × 106 bone marrow nuclear cells/each mouse) and the cotransplantation group of HSC with osteoblaats (18 mice,given 2 × 106 bone marrow nuclear cells and osteoblasts/each mouse). The following factors were measured on day 7, 14, 21 after BMT: peripheral blood cells, bone marrow mononuclear cells (BMMNC), the percentage of CD34+ cells in BMMNC (assayed by flow cytometry), the hematopoietic tissue changes (detected by HPIAS-1000 image analysis system) and micro vascular density (MVD) of bone marrow tissue (with immunohistochemistry). Results The levels of periphral WBC, RBC, PLT, BMMNC in the contransplantation group were higher than those in the single BMT group (P＜0. 01 or P＜0. 05). In the contransplantation group, the percentage of CD34+ cells in BMMNC, the hematopoietic tissue area and the MVD of bone marrow were also higher than the single BMT group on the 7th, 14th, 21st day after BMT(P＜0.01 or P＜0.05). Conclusion Cotransplantation with osteoblasts could significantly promote hematopoietic reconstruction in mice after BMT. Cotransplantation may represent a promising means of achieving higher engraftment rate after BMT.     

齐墩果酸对小鼠异基因骨髓移植免疫重建的影响

用去ＴＸ划基因骨髓成功地重建了致死量照射小鼠的免疫功能，但移植后受体免疫功能恢复缓慢。给齐墩果酸（ＯＬＡ）后，受体鼠淋巴细胞增殖反应及空斑形成细胞（ＰＦＣ）反应增强，明显促进白细胞介素２的产生，迟生性超敏反应（ＤＴＨ）也有增加趋势，受体鼠脾细胞培养上清游人液有明显的非特异性免疫抑制作用，去Ｔ细胞后抑制作用消失，给ＯＬＡ后，这一抑制作用有减弱的趋势。     

供者应用粒细胞集落刺激因子促进异基因骨髓移植受者造血重建的临床研究

目的评价供者应用粒细胞集落刺激因子（G-CSF）以增加骨髓中CD34+细胞的效果和对异基因骨髓移植造血重建的影响。方法供者采髓前应用G-CSF250μg/d,连用7d,随后对15例白血病患者进行异基因骨髓移植,观察植入物单个核细胞、CD3     

骨髓移植在骨创中的应用

骨髓移植对骨折的延迟愈合，不愈合及骨缺损具有很好的疗效，这与骨折处的骨形态发生蛋白，转化生长因子，β－成骨生长肽等活性物质浓度增高，诱导骨髓成骨有关，经皮穿刺骨髓移植为一种新颖，有效手段，在骨创中应用前景广阔。     

黄芪当归合剂及他汀类药物对缺氧复氧人肾小管上皮细胞的保护作用

目的研究黄芪当归合剂及阿托伐他汀对缺氧／复氧人肾小管上皮细胞损伤的影响。方法选用人肾小管上皮细胞建立缺氧／复氧损伤模型,设正常对照组、单纯缺氧复氧组、黄芪当归合剂组、阿托伐他汀组、黄芪当归合剂和阿托伐他汀联合用药组。检测活性氧的产生量。酶联免疫吸附法检测细胞间黏附分子-1、单核细胞趋化蛋白-1的表达,逆转录聚合酶链式反应检测细胞间黏附分子-1mRNA、单核细胞趋化蛋白-1mRNA表达,免疫印迹法检测核因子-kB。结果缺氧复氧组活性氧高于对照组,细胞间黏附分子-1、单核细胞趋化蛋白-1及各自mRNA表达上调,黄芪当归合剂组、阿托伐他汀组均降低细胞内活性氧水平,抑制炎性因子表达,黄芪当归合剂和阿托伐他汀联合用药组效果更加明显。结论黄芪当归合剂、阿托伐他汀对肾小管上皮细胞缺氧复氧性损伤有保护作用,联合用药效果显著,可能与通过抑制核因子-kB炎症通路减少细胞间黏附分子-1、单核细胞趋化蛋白-1表达从而降低氧化应激水平有关。     

巴利昔单抗在骨髓移植中防治急性移植物抗宿主病和免疫功能重建中的作用

目的 探讨抗CD25单克隆抗体（巴利昔单抗）在单倍体未去除T细胞的骨髓移植中防治重度急性移植物抗宿主病（aGVHD）的作用以及对免疫重建的影响。方法 1999年2月至2004年3月，对87例白血病患者进行了HLA单倍体未去T细胞的亲缘骨髓移植，其中2000年9月以前移植的15例受者预处理没有使用巴利昔单抗（对照组），2000年11月以后的72例预处理中加用巴利昔单抗（单抗组）。用流式细胞分析仪对受者移植术后1、3、6、9、12、18、24个月的外周血淋巴细胞亚群进行动态测定，对两组的结果进行比较。结果 移植后单抗组和对照组Ⅱ～Ⅳ度aGVHD的发生率分别为12．5％和33．3％（P=0.045）；与aGVHD相关的死亡率分别为6．9％和20％，两组差异有统计学意义。单抗组中9例临床诊断为Ⅱ～Ⅳ度aGVHD的患者因激素耐药再次使用巴利昔单抗治疗，缓解6例（66．7％），部分缓解2例，无效1例。移植后两组CD4^＋ T细胞的恢复均迟缓。单抗组CD4^＋ T细胞＞200个／μ1的时间为移植后6个月，在移植后18个月绝对数恢复正常。CD3^＋、CD8^＋和CDl9^＋ B细胞在9～12个月恢复正常水平，两组淋巴细胞亚群的恢复情况差异无统计学意义。结论 使用抗CD25单克隆抗体预防和治疗受者严重的aGVHD有一定疗效；受者白血病的复发率和移植后的感染率无明显增加；对骨髓移植后淋巴细胞亚群数量的重建无明显的影响。     

内皮祖细胞抑制小鼠异基因骨髓移植后肝小静脉血栓形成的作用

目的 探讨内皮祖细胞(EPC)抑制异基因骨髓移植后肝小静脉血栓形成的作用.方法 采用随机数字表法将Balb/c小鼠分为3组,单纯骨髓移植组的小鼠在全身照射后经尾静脉输注C57BL/6小鼠的骨髓单个核细胞5×106/只 ;联合EPC移植组则在单纯骨髓移植的基础上同时输注C57BL/6小鼠的EPC 5×105/只 ;正常对照组的小鼠不作任何处理.分别于移植后第0、5、10、15和20天时,计算各组小鼠的肝脏指数,光镜下观察肝小静脉血栓形成情况以及肝细胞及血管内皮损伤情况,电镜下观察肝小静脉、肝血窦内皮、肝细胞损伤及血小板黏附情况,检测外周血活化血小板的比例及肿瘤坏死因子α(TNF-α)浓度的变化.结果 移植后第0、5、10、15和20天时,单纯骨髓移植和联合EPC移植组的活化血小板比例、肝脏指数和外周血TNF-α浓度均呈现上升趋势,至第15天时达到高峰,随后下降,但仍明显高于正常对照组(P＜0.05) ;各时间点联合EPC移植组的上述指标均明显低于单纯骨髓移植组,差异均有统计学意义(P＜0.05).与单纯骨髓移植组比较,联合EPC移植组的血小板黏附减少,肝小静脉血栓形成较少,肝细胞水肿和坏死程度均较轻,且肝脏损伤修复较快.结论 小鼠骨髓移植时联合输注EPC能显著抑制肝小静脉血栓形成,明显减轻肝脏损伤.     

黄芪当归合剂治疗原发性肾病综合征的临床研究

目的:探讨黄芪当归合剂联合强的松对原发性肾病综合征患者尿蛋白、血象白蛋白、血胆固醇、尿β<,2> 微球蛋白(β<,2>-MG)的影响.方法:将84例原发性肾病综合征患者随机分为治疗纽、对照组各42例,治疗组给予强的松、抗凝等治疗的同时给予黄芪当归合剂治疗;对照组删只给予强的松、抗凝等治疗.检测两蛆治疗前后的24小时尿蛋白、血清白蛋白、血胆固醇、尿β<,2>-MG.结果:治疗组较对照组在治疗过程中,24小时尿蛋白明王下降及血象白蛋白回升在治疗4周后有显著性统计学差异(P<0.05),血胆固醇较对照组在治疗4用后明显下降(P<0.05).尿β<,2>-MG较对照组在治疗4用后明显下降(P<0.05).结论:黄芪当归合剂能有效地增加原发性肾病综合征患者血浆白蛋白水平,降低尿蛋白,并能降低患者血清胆固醇水平,减轻蛋白尿对肾小管、肾问质的损害,但对肾功能的远期保护作用尚待进一步研究.     

自制无滤网输血器在骨髓移植中的应用

目的避免回输骨髓时聚集的小细胞团或破损细胞粘附堵塞滤网，确保输髓通畅。方法用无滤网的输液滴管替代有滤网的输血滴管，并保留输血器的瓶塞穿刺针及与头皮针相连的接管。结果自制无滤网输血器应用25例次骨髓回输中，无1例发生堵塞、吸附凝集现象。结论用无滤网输血器行骨髓回输，能确保造血干细胞有效、快速地回输给患者。     

HLA不相合异基因骨髓移植后早期造血功能障碍一例

我们曾遇到 1例接受异基因骨髓移植 (ａｌｌｏ ＢＭＴ)的慢性粒细胞性白血病患者在移植物植活、造血功能重建后早期出现造血功能障碍 ,经加大环孢素Ａ(ＣｓＡ)的用量 ,并联合应用糖皮质激素和粒细胞刺激因子 (Ｇ ＣＳＦ)治愈 ,随访至今已 2年 ,患者带慢性局限型移植物抗宿主病 (ＧＶＨＤ)存活 ,现将本例报道如下。一、病例报告1.一般资料 :患者为男性 ,2 0岁 ,1997年 12月确诊为慢性粒细胞性白血病 (ＣＭＬ)慢性期。经用羟基脲治疗 2个月 ,ＭＡ(米托恩醌 ,阿糖胞苷 )及ＨＯＡＰ(三尖杉酯碱 ,长春新碱 ,阿糖胞苷 ,泼尼松 )方案一疗程 ,血象及…     

黄芪与当归对体外培养糖尿病骨髓干细胞增殖和血管内皮生长因子表达的影响

目的：观察黄芪、当归及二者合用对体外培养大鼠骨髓干细胞增殖的影响,并探讨其可能机制。方法：自2009年7月至2010年2月,选择5只雄性200～220gSD大鼠高糖高脂饲料喂养4周后,给予链脲佐菌素（STZ）按照30mg/kg腹腔内注射2次诱发2型糖尿病,1周后检测血糖≥16.7mmol/L为2型糖尿病造模成功。密度梯度法分离5只大鼠骨髓干细胞,分为空白对照组（A组）、黄芪组（B组）、当归组（C组）、黄芪当归组（D组）。空白对照组加入无血清DMEM100μl,黄芪组、当归组、黄芪当归组分别加入等量的用无血清DMEM配制的黄芪煎液、当归煎液、黄芪当归合煎液,终浓度分别为黄芪1100mg/L,当归1100mg/L,黄芪当归组含黄芪1100mg/L、当归220mg/L。各组细胞培养14d后,采用MTT法测定细胞增殖,ELISA法检测细胞培养上清液VEGF蛋白浓度,Western-Blot检测骨髓干细胞VEGF蛋白表达。结果：与空白对照组比较,黄芪组和黄芪当归组的骨髓干细胞增殖水平、上清液VEGF蛋白浓度、骨髓干细胞VEGF蛋白表达水平均明显增高（P〈0.05或P〈0.01）,且黄芪当归组的以上作用均较黄芪组明显增强（P〈0.05或P〈0.01）。结论：单用黄芪或其与当归合用均具有刺激体外培养骨髓干细胞增殖的作用,可能与其促进VEGF蛋白表达增加有关,但单用当归无上述作用。     

Comparative analysis of immunological reconstitution induced by vascularized bone marrow versus bone marrow cell transplantation

Abstract  We have reported previously that vascularized bone marrow transplantation (VBMT) in an orthotopic hind limb graft brings about complete repopulation of bone marrow cavities in lethally irradiated syngeneic recipients within 10 days. Intravenous infusion of an equivalent volume of bone marrow cell suspension was evidently less effective. The purpose of this study was to investigate the reconstitution of immunocompetent compartments of lethally irradiated syngeneic rats after VBMT. Lewis rat hind limbs were transplanted orthotopically into irradiated recipients. Ten days after irradiation and bone marrow transplantation, bone marrow, mesenteric lymph nodes, and sera from rats were harvested. Mesenteric lymph node lymphocytes were analyzed. The responsiveness fomesenteric lymph node lymphocytes (MLNL) to mitogens and cell proliferation in the presence of sera and bone marrow cell (BMC) culture supernatants were measured. Our studies have shown that vascularized bone marrow transplantation brings about rapid replenishment of lymphoid organs of lethally irradiated syngeneic recipients. The re-populating subsets are fully responsive to mitogens. Sera from reconstituting rats had no effect on the proliferation of mature lymphocytes. Intravenous infusion of a number of BMC in suspension equivalent to that grafted in hind limb transplant was less efficient in reconstitution of lymphoid tissue.     

Effects of ex vivo activated immune cells on syngeneic and semi-allogeneic bone marrow transplantation in mice

We have previously shown that a novel immunotherapy using ex vivo activated immune cells is capable of promoting survival and hematopoietic recovery in mice after combined chemotherapy and radiotherapy. In this study, we investigated whether the immunotherapy with ex vivo activated immune cells had the same beneficial effects after syngeneic and semiallogeneic bone marrow transplantation (BMT) in BALB/c mice subjected to a lethal dose of total body irradiation (TBI). Immune cells were cultured in vitro with a combination of cytokines and a calcium ionophore for 2 days and subsequently injected to mice daily for 4 days starting 1 day after BMT. The immunotherapy enhanced survival and multilineage peripheral blood recovery in BMT mice with limited numbers of transplanted bone marrow cells when a low dose of ex vivo activated immune cells were used. However, the beneficial effects were completely lost when a higher dose of the same therapeutic immune cells were tested, and instead the immunotherapy significantly exacerbated complications associated with the lethal radiation and BMT. This detrimental effect appeared to be the result of strong in vivo nonspecific immune responses induced by either activated therapeutic immune cells or interaction between therapeutic immune cells and MHC-mismatched bone marrow cells transplanted or both. Our data suggest that the immunotherapy with appropriately selected dosages may be beneficial to BMT but vigorous in vivo immune responses soon after BMT may exacerbate post-transplant complications.     

HSCT联合不同剂量内皮祖细胞输注对小鼠造血重建的影响

目的 探讨异基因造血干细胞移植联合不同剂量内皮祖细胞(EPC)输注对移植后造血重建的影响.方法 以C57BL/6小鼠为供鼠,Balb/c小鼠为受鼠,进行HSCT,输注骨髓单个核细胞数量为5×106个/只.仅进行HSCT者为单纯骨髓细胞移植组;行HSCT的同时经尾静脉输注供者骨髓单个核细胞诱导培养的EPC的受鼠为EPC联合移植组,EPC的输注量分别为5×104、1×105、5× 105和1×106个/只.另设正常对照组和致死量照射组.观察小鼠的存活率、造血重建情况及骨髓微环境的变化.结果 各EPC联合移植组小鼠存活时间长于单纯骨髓移植组,5×105 EPC联合移植组至观察结束时存活率为100％,高于其他各组(P＜0.05).移植后10和15 d,5×105 EPC联合移植组外周血白细胞数量高于其他组(P＜0.05).移植后15 d,5×105 EPC联合移植组外周血血小板数量高于其他组(P＜0.05).5×105 EPC联合移植组造血组织增生程度也好于其他组.5×105 EPC联合移植组骨髓内HSC比例为(1.06±0.03)％,高于其他各组(P＜0.05).结论 小鼠异基因骨髓移植中联合输注5×105 EPC能够有效促进造血重建,提高小鼠存活率.     

自体骨髓、骨联合移植在脊柱融合中的应用

目的 探讨自体骨髓、骨联合移植在脊柱融合中的运用。方法 84例中2例半椎体畸形、8例胸椎及胸腰椎结核、10例椎体滑脱、4例下颈椎骨折、51例胸腰段骨折、6例腰椎骨折及3例退变节段不稳患者在处理原发病的同时行植骨融合术，二期再在X线监视下行经皮注射自体骨髓移植，其中74例合并应用内固定器。结果 78例获得随访，平均随访期30．06个月。75例融合成功。3例失败，其中2例二次取内固定术中才被发现，第3例术后8个月X线片有假关节形成表现，再次术中也证实有假关节形成。无神经系统症状加重的病例出现。结论 骨髓、骨联合移植在脊柱融合中运用失败率低(3．85％)，成骨性强、生物安全性好。     

多药耐药基因转染骨髓造血细胞移植小鼠的安全性研究

目的 探讨多药耐药基因(mdrl)转染骨髓造血细胞移植后,其在体内分布和安全性.方法 骨髓造血细胞转染mdrl基因后移植入BALB/C鼠,免疫组织化学和RT.PCR观察mdrl基因在骨髓、外周血及重要脏器的表达;监测外周血白细胞变化及重要脏器病检分析其安全性.结果 P-糖蛋白(P-gP)在骨髓表达率随时间降低,各时间组差异无统计学意义(x2=3.74,P＞0.05),在外周血表达第2月最高,为(9.95±1.84)%,各时间组差异无统计学意义(x2=2.31,P＞0.05),在重要脏器无表达;移植未转染组与移植转染组外周血白细胞计数至移植60 d后,两者差异有统计学意义(t=6.173,P＜0.05),病检除肝和肾有炎性渗出和水肿病变外,其余无异常.结论 mdrl基因在骨髓和外周血有持续较高表达,在重要脏器无表达;mdrl基因转染对造血恢复及重要脏器无明显影响.     

骨髓移植供体选择的研究

为了保证异基因骨髓移植成功，本文自１９８１年至１９９０年对拟接受骨髓移植的１８４例患者及其家属共５４１人进行了ＨＬＡ配型。患者与供体相合率为４６．８％，高于理论值并分析了偏高的原因。此外，对血清学与细胞学配型相关性和供、受者间ＨＬＡ相合程度以及不同血缘关系等进行了探讨。根据患者的不同病程、供体人数的多少、不同质量的ＨＬＡ抗血清等方面总结出一套较好的ＨＬＡ分型方法，为骨髓移植患者选择了理想供体。