异基因造血干细胞移植研究进展

异基因造血干细胞移植已成为治愈血液系统恶性肿瘤、骨髓衰竭性疾病、某些先天性及代谢性疾病等的重要方法。本文就外周血干细胞移植（PBSCT）、脐血造血干细胞移植（CBSCT）、非清髓性干细胞移植（NST）、移植物抗宿主病（GVHD）与移植物抗白血病（GVL）效应以及间充质干细胞（MSC）在异基因造血干细胞移植中的应用等方面的新进展进行介绍。     

异基因造血干细胞移植后慢性移植物抗宿主病的临床分析

目的：探讨异基因造血干细胞移植（allo-HSCT）后慢性移植物抗宿主病（cGVHD）的临床特点、相关危险因素及治疗效果。方法：回顾性分析69例allo-HSCT患者的临床资料。根据供、受者的关系以及配型情况，将患者分为三组：A组为亲缘全相合异基因骨髓移植，22例；B组为亲缘全相合异基因外周血干细胞移植，37例；C组为非血缘移植和不全相合移植，10例。术前均采用化疗预处理，术后采用短程甲氨蝶呤联合环孢素A（CsA）预防移植物抗宿主病（GVHD）。局限性cGVHD患者多采用单一免疫抑制剂（CsA或糖皮质激素）治疗，病情进展者采用标准方案（CsA联合糖皮质激素）治疗；广泛性cGVHD患者则需用标准方案治疗（一线治疗方案）。一线治疗无效、病情进展者，对一线治疗依赖不能停药，或停药后病情反复者，需用他克莫司、霉酚酸酯及硫唑嘌呤治疗（二线治疗方案）。结果：移植后随访6～120个月，中位时间为43个月，39例诊断为cGVHD，其中局限性cGVHD13例（33．3％，13／39），广泛性cGVHD26例（66．7％，26／39），7例死于cGVHD或与之相关的并发症。B组cGVHD发生率较A组显著升高（P〈0．05），B组和C组的广泛性cGVHD发生率显著高于A组（P〈O．05）。外周血干细胞移植和病程中发生2～4度急性GVHD是cGVHD发生的主要危险因素。局限性cGVHD患者采用一线方案治疗的有效率显著高于广泛性cGVHD患者（P〈0．05），标准危险度cGVHD者的治疗有效率显著优于高危险度cGVHD者（P〈0．05）。结论：eGVHD是allo-HSCT后常见并发症和致死原因；广泛性cGVHD多发生于异基因外周血干细胞移植、HLA配型不全相合移植和非血缘移植，且临床治疗效果不佳。     

异基因造血干细胞移植受者外周血中可溶性HLA-G与急性GVHD的相关性

目的 探讨异基因造血干细胞移植(allo-HSCT)受者外周血中可溶性HLA-G(sHLA-G)的水平与急性移植物抗宿主病(aGVHD)间的相关性以及与CD4+CD25~(hlgh)调节性T淋巴细胞(Treg)水平的相关性.方法 选择27例allo-HSCT受者,将其中13例术后发生aGVHD者作为aGVHD组,14例未发生aGVHD者作为对照组.在移植预处理前、移植后第2、4、8、14周时,分别抽取两组受者清晨空腹肘静脉血2～4 ml,采用酶联免疫吸附试验双抗夹心法定量检测sHLA-G,采用流式细胞术检测CD4+CD25+Treg.动态监测术后第2和14周受者sHLA-G水平的变化;动态监测和分析术后第8和14周两组受者间sHLA-G的差异.观察sHLA-G与发生aGVHD的相关性;检测术后第14周两组受者CD4+CD25+Treg的数量,观察sHLA-G水平与CD4+CD25+Treg的相关性.结果 预处理前,对照组和aGVHD组受者sHLA-G的水平分别为(75.4±13.1)/μg/L和(47.0±14.1)btg/L,两组间差异有统计学意义(P<0.05).术后第8周和第14周,对照组受者sHLA-G的水平明显高于相应时间点aGVHD组受者,两组间差异均有统计学意义(P<0.01).对照组受者术后第14周的sHLA-G水平与第2周相比,增长了1.2～3.4倍,两时间点的差异有统计学意义(P<0.05).术后第14周,通过Spearman等级相关检验显示受者sHLA_G水平与CD4+CD25+Treg比例具有统计学上的相关性(相关系数r=0.810,P<0.05),结论 allo-HSCT后受者体内sHIA-G对aGVHD的发生起负性调节作用;sHLA-G的水平与外周血CD4+CD25~(hlgh) T淋巴细胞的比例旱正相关,二者之间可能存在相互诱导和调节的信号途径,在诱导和维持移植免疫耐受中起着重要的协同作用.     

异基因造血干细胞移植后人CMV感染与GVHD相关性的临床研究

目的 探讨异基因造血干细胞移植后人巨细胞病毒(CMV)感染与移植物抗宿主病(GVHD)的关系.方法 对1998年3月至2001年3月进行的63例造血干细胞移植受者的CMV感染情况进行检测,用聚合酶链反应法检测CMV gB分型,并统计受者GVHD的发生情况.结果 40例发生CMV感染,23例未感染,其GVHD发生率分别为82.5％(33/40)和47.8％(11/23),差异有统计学意义(P＜0.01).CMV gB-1、gB-2、gB-3型感染者发生Ⅱ～Ⅳ度急性GVHD的几率分别为58.8％(10/17)、40％(2/5)和66.7％(4/6),三者间差异无统计学意义(P＞0.05).CMV阳性受者中27.5％(11/40)出现移植后继发性造血抑制,CMV阴性的受者13.0％ (3/23)出现,发生率的差异无统计学意义(P＞0.05).结论 CMV感染者GVHD的发生率升高,而CMV感染与GVHD严重程度无关,合理治疗后不会显著抑制移植后的造血重建.     

第三方脐血预防异基因造血干细胞移植后移植物抗宿主病

目的 探讨无关供者和单倍型亲缘供者异基因造血干细胞移植(allo-HSCT)前输注第三方脐血预防移植物抗宿主病(GVHD)的效果.方法 2007年至2011年接受无关供者及单倍型亲缘供者allo-HSCT的受者共41例.脐血预防组(25例),于移植前1d予以HLA配型为4/6～6/6的第三方脐血细胞输注,平均输入有核细胞数为(1.64±0.49)×107/kg,次日再输入供者造血干细胞.其余患者作为对照组(16例).两组均采用抗胸腺细胞球蛋白+环孢素A+甲氨蝶呤+吗替麦考酚酯预防急性GVHD.比较两组间急性GVHD的发生率、严重程度以及移植相关死亡率.结果 脐血预防组和对照组aGVHD累积发生率分别为44.0％(11/25)和68.8％(11/16),两组比较,差异无统计学意义(x2=2.403,P＞0.05);Ⅲ～Ⅳ度aGVHD累积发生率分别为16.0％(4/25)和37.5％(6/16),两组比较,差异无统计学意义(x2=2.445,P＞0.05),100 d治疗相关病死率分别为12.0％(3/25)和12.5％(2/16),两组比较,差异无统计学意义(x2=0.002,P＞0.05).结论 在无关供者及单倍型亲缘供者allo-HSCT前应用第三方脐血细胞,可能有效预防GVHD的发生或减轻GVHD的严重度,但尚需要进一步设计扩大规模的随机对照临床试验验证其有效性.     

HLA-I类PCR-SSP基因分型在异基因造血干细胞移植中的应用

目的：提高异基因造血干细胞移植供、受者HLA－I类配型的精确度,有效防止移植物抗宿主病（GVHD）的发生。方法 采用准确、简便的DNA、RNA提取方法和HLA－I类PCR－SSP基因分型方法。建立HLA－A33、A68、B40、B13 PCR－SSP分型方法以及HLA基因序列测序分析。结果：对300例中清学难以判断结果的30例临床标本进行基因水平的研究发现,DNA及RNA提取方法可以满足此项研究对样本的要求。HLA－I类PCR－SSP分型方法具有良好的稳定性、可靠性和特异性;重复率达100％。同时,HLA－A33、A68、B40、B13结果与HLA－I类PCR－SSP分型结果一致。HLA基因测序分析进一步肯定了HLA－I类PCR－SSP分型的特异性。HLA－I类PCR－SSP不受某些血清学影响因素的干扰。整个实验过程仅耗时2．5h。结论：HLA－I类PCR－SSP基因分型方法准确、特异、重复性好,可作为临床骨髓移植配型和正常人群无关供者筛选的常规方法,对GVHD的发生必将起到重要的预防作用。     

异基因造血干细胞移植后早期特发性肺炎综合征的危险因素及发病机制

目的 研究异基凶造血干细胞移植(allo-HSCT)术后早期特发性肺炎综合征(IPS)的独立危险因素及发病机制.方法 同顾件分析192例allo-HSCT受者的临床资料,观察术后急性移植物抗宿主病(aGVHD)和IPS的发牛情况及其临床表现,对患者年龄、性别、原发病、移植时疾病状态(高危组70例,疾病处于难治、未缓解状态;标危组122例,疾病处于缓解状态)、供者类型、HLA相合程度、移植类型、预处理方案、急性移植物抗宿主病(aGVHD)、aGVHD程度、aGVHD累及器官等11项临床因素进行单因素分析,将有统计学意义的因素进行Logistic多因素同归分析,筛选出发生IPS的独立危险因素,并结合文献,探讨其发病机制.结果 192例allo-HSCT受者中,有23例发生IPS,发生时间为术后76 d(32～120 d),其中20例经治疗无效死亡,发病至死亡的时间为9 d(3～92 d),其余3例治愈.23例IPS患者中,有19例发生过aGVHD,其中肠道aGVHD16例.单因素分析显示,高危组、非亲缘供者、HLA不合、发生aGVHD、Ⅲ～Ⅳ度aGVHD及肠道aGVHD等6个因素具有统计学意义;多凶素分析显示,非亲缘供者、Ⅲ～Ⅳ度aGVHD和肠道aGVHD等3个因素是发生IPS的独立危险因素.结论 非亲缘供者、Ⅲ～Ⅳ度aGVHD及肠道aGVHD是发生IPS的独立危险因素;IPS可能是由aGVHD引起的肺部病变.     

Fas/FasL途径在造血干细胞移植免疫中的实验研究

目的　探讨转染FasL的CD34+ 细胞对同种抗原特异性T细胞和白血病细胞凋亡的影响。方法　丝裂霉素C预处理表达外源FasL的骨髓CD34+ 细胞 ,分别与经过富集的T细胞 (刺激细胞 /效应细胞比例为 5∶1)和白血病细胞U937混合培养 ,借助原位末端标记法 (TUNEL)和流式细胞仪 (FCM )检测T细胞和白血病细胞的凋亡率。结果　分别以未转染和转染外源FasL的CD34+ 细胞为刺激细胞 ,5d后 ,T细胞凋亡率分别为 :3.2 %± 1.1%、12 .1%± 1.5 % (P <0 .0 1) ,经IL 2作用后 ,凋亡率上升至 17.6 %± 1.3% (P <0 .0 1) ;与白血病细胞U937混合培养 18h后 ,白血病细胞凋亡率分别为 :5 .0 %± 1.3%、10 .8%± 0 .6 % (P <0 .0 1) ,加入阿糖胞苷后 ,凋亡率上升至 17.9%±1.3% (P <0 .0 1)。结论　转染外源FasL的骨髓CD34+ 细胞 ,可诱导同种抗原特异性T细胞和白血病细胞凋亡。提示通过Fas/FasL途径可选择性清除移植物中同种抗原特异性T细胞 ,有望为造血干细胞移植中防治移植物抗宿主病 (GVHD) ,保留移植物抗白血病效应 (GVL)提供新的策略。     

移植物中不同种类和数量的细胞对异基因外周血造血干细胞移植后急性GVHD的影响

目的 探讨移植物中单个核细胞(MNC),CD34+细胞,T淋巴细胞(包括CD3+、CD3+CD4+、CD3+CD8+和CD4+CD25+),CD3 CD16+CD56+自然杀伤(NK)细胞,以及树突状细胞(DC)Ⅰ和Ⅱ型(DC1和DC2)的数量对人类白细胞抗原(HLA)相合的同胞异基因外周血造血干细胞移植(allo-PBSCT)后急性移植物抗宿主病(aGVHD)的影响.方法 选择65例接受HLA相合的同胞allo-PBSCT的患者进入研究.采用流式细胞术检测移植物中MNC,CD34+细胞,T淋巴细胞(CD3+、CD3+CD4+及CD3+CD8+)的数量,对其中31例患者进一步检测CD4+CD25+T淋巴细胞、CD3-CD16'C+D56+NK细胞及DC的数量.按患者的每公斤体重计算出输注的移植物中以上各细胞的数量.并根据上述细胞数量的中位数分别将患者分为高数量组(>中位数)和低数量组(≤中位数),比较各高数量和低数量组aGVHD的发生情况.结果 CD3+CD4+、CD3+CD8+T淋巴细胞高数量组和相应低数量组相比,Ⅱ～Ⅳ度aGVHD的累积发生率增加,但差异无统计学意义(P值分别为0.089和0.098);CD4+CD25+T淋巴细胞高数量组Ⅲ～Ⅳ度aGVHD的累积发生率显著低于相应低数量组(P<0.05);DC1高数量组总的aGVHD累积发生率显著高于相应低数量组(P<0.05),Ⅱ～Ⅳ度aGVHD累积发生率亦明显高于相应低数量组,但差异无统计学意义(P=0.069).MNC、CD34+细胞、CD3+T淋巴细胞、CD3-CD16+CD56+NK细胞及DC2高数量组与相应低数量组比较,总的及Ⅱ～Ⅳ度aGVHD的累积发生率差异均无统计学意义(P>0.05).结论 移植物中高数量的DCl增加总的aGVHD的累积发生率;而高数量的CD4+CD25+T淋巴细胞则减少Ⅲ～Ⅳ度aGVHD的累积发生率.     

非清髓性造血干细胞移植后并发移植物抗宿主病的相关因素分析

目的 探讨和分析非清髓性造血干细胞移植(NST)后并发移植物抗宿主病(GVHD)的相关因素.方法 选择34例血液病患者,其中重型再生障碍性贫血(SAA)15例,重型β-地中海贫血(TM)1例,肿瘤性血液病18例;进行无关供者脐带血造血干细胞移植(UCBT)11例,同胞供者骨髓联合外周血干细胞移植7例,外周血造血干细胞移植(PBSCT)16例.移植前采用以抗胸腺细胞球蛋白(ATG)、抗淋巴细胞球蛋白(ALG)或者氟达拉滨强效免疫抑制为基础的非清髓性预处理方案.GVHD的预防采用短程的甲氨蝶呤(MTX)联合环孢素A(CsA).观察非清髓性造血干细胞移植后的临床特点以及急、慢性移植物抗宿主病的发生情况;分析发生慢性移植物抗宿主病(cGVHD)的相关因素.结果 NST的植入率为91.2%.移植后7例肿瘤性血液病患者形成了供、受者造血细胞混合嵌合体(MC),给予供者淋巴细胞输注(DLI)2～9次后,例由MC转变为供者造血细胞完全嵌合体(FDC).随访12(3～96)个月,共发生Ⅰ～Ⅱ度急性移植物抗宿主病(aGVHD)5例,GVHD 15例.经统计学分析,发现年龄大的肿瘤性血液病患者经以ATG为基础的NST后,再给予DLI,其cGVHD的发生率高,且合并感染,对治疗的反应差;而以氟达拉滨为基础的NST患者发生cGVHD后治疗反应较好.移植100 d前后患者分别死亡3例和5例,其中3例死于广泛性cGVHD.结论 患者的年龄大、有合并症、以ATG为基础的预处理方案、肿瘤性血液病是NST后患者并发cGVHD的危险因素.     

骨髓或外周血中CD4+CD25+Foxp3+调节性T淋巴细胞与aGVHD的关系

目的 研究患者异基因造血干细胞移植(allo-HSCT)前后骨髓或外周血单个核细胞中CD4+CD25+Foxp3+调节性T淋巴细胞(以下简称CD4+CD25+Foxp3+T细胞)的比率、Foxp3 mRNA和Foxp3蛋白的表达与急性移植物抗宿主病(aGVHD)的关系.方法 选择37例行HIA相合异基因造血干细胞移植(allo-HSCT))的患者作为研究对象.采用流式细胞术检测患者allo-HSCT前7天(-7 d)、移植当天(0 d)、移植后30天(+30d)、+60 d和+90 d时骨髓或外周血单个核细胞中CD4+CD25+Foxp3+T细胞所占的比率;定量聚合酶链反应(PCR)检测Foxp3 mRNA相对表达量;蛋白印迹(Western blot)法检测Foxp3的蛋白表达水平.结果 37例患者存移植后100 d内发生aGVHD 13例(aGVHD组),未发生aGVHD 24例(无aGVHD组).CD4+CD25+Foxp3+T细胞的比率在0 d时最低,与-7、+30、+60、+90d时比较.差异均有统计学意义(P<0.01);与aGVHD组比较,无aGVHD组患者的CD4+CD25+Foxp3+T细胞的比率明显升高,差异有统计学意义(P<0.01).aGVHD组患者移植后Foxp3的表达水平逐渐升高,但明显低于无aGVHD组,尤其在+60和+90 d时的差异有统计学意义(P<0.01).Western blot法检测结果 表明,aGVHD组受者的Foxp3蛋白表达也明显低于无aGVHD组.结论 CD4+CD25+Foxp3+T细胞对防止发生aGVHD具有重要作用,监测患者骨髓或外周血中CD4+CD25+Foxp3+T细胞的比率可以预测aGVHD的发生.     

非血缘关系造血干细胞移植61例分析

目的 探讨非血缘关系造血干细胞移植(URD-HSCT)的临床疗效,移植相关并发症及影响预后的危险因素.方法 回顾性分析61例接受URD-HSCT患者的临床资料.所有患者根据原发病分别给予非清髓性及清髓性预处理;供、受者HLA配型6/6抗原位点全相合21例,5/6相合5例,1个基因亚型不合24例,2个基因亚型不合11例;供、受者间ABO血型相合18例,不合43例;受者接受供者的有核细胞中位数为4.5×108/kg,CD34+细胞中位数为4.3×106/kg.术后移植物抗宿主病(GVHD)的预防采用以短程甲氨蝶呤+环孢素A+霉酚酸酯为基础的方案,49例加用抗CD25单克隆抗体,9例加用抗淋巴细胞或抗胸腺细胞免疫球蛋白;并常规采用促进造血功能恢复、抗感染等治疗.术后观察受者的造血功能重建、并发症以及预后情况.结果 61例患者中,59例术后经血型、染色体及DNA多态性检测证实供者细胞植活.术后23例受者发生Ⅱ～Ⅳ度急性GVHD,25例发生慢性GVHD;术后100 d内,48例受者发生细菌和(或)真菌感染,36例发生巨细胞病毒感染,以下呼吸道感染较多.术后有18例受者死亡,受者总的2年无病存活率为(68.0±6.4)%,其中12例因移植相关并发症死亡,移植相关死亡率19.7%;6例原发病复发的受者均死亡,复发率9.8%.其余受者经治疗后好转.结论 URD-HSCT是治疗造血系统恶性疾病的有效方法.急性GVHD和感染是严重影响移植疗效和预后的危险因素,需早期预防.     

非亲缘异基因造血干细胞移植治疗白血病患者疗效观察

目的探讨非亲缘异基因造血干细胞移植(URD-HSCT)治疗白血病的效果。方法 10例白血病患者(急性髓细胞白血病第1次缓解期3例,急性淋巴细胞白血病第1次缓解期3例、第2次缓解期1例,慢性髓细胞白血病慢性期3例)接受URD-HSCT治疗。所有患者均采用经典的或改良的白消安联合环磷酰胺预处理方案。4例采用环孢素+短程甲氨蝶呤+吗替麦考酚酯预防移植物抗宿主病(GVHD),另6例患者加用抗胸腺细胞免疫球蛋白。输注供者有核细胞中位数为5.6×108/kg,CD34+细胞中位数为3.3×106/kg。结果除1例在移植后早期死亡不能评估外,其余9例均证实植活。发生急性GVHDⅠ度3例和Ⅱ度、Ⅲ度、Ⅳ度各1例,局限性慢性GVHD7例;发生真菌感染4例、CMV血症3例、出血性膀胱炎3例。10例患者目前无病存活7例,生存期为3个月～10年。结论 URD-HSCT安全而耐受性好,移植相关并发症仍是影响URD-HSCT效果的主要问题。     

非血缘关系造血干细胞移植61例分析

Objective To study the therapeutic effectiveness, associated complications and related factors of unrelated allogeneic hematopoietic stem cell transplantation (URD-HSCT). Methods Sixty-one patients with malignant hematological diseases received URD-HSCT. All cases were subjected to myeloablative or nonmyeloablative conditioning regimen according to primary diseases. Among 61 patients, 21 were donor-recipient 6/6 HLA-matched, 5 were 5/6 HLA antigen-matched, 24 were 1 HLA gene subtype-mismatched, 11 were 2 HLA gene subtype-mismatched. Eighteen patients were ABO-compatible with donors, while 43 ABO-incompatible with donors. The median of infused donor nucleated cells was 4.5×108/kg, and the median of CD34+ cells were 4.3×106/kg. The graft-versus-host disease (GVHD) prevention regimens were based on short-term MTX, cyclosporin A and mycophenolate mofetil (MMF) regimen. Forty-nine cases also received CD25 Mab on the day of transplantation, and the day 4 after transplantation. Nine cases were also administrated with antilymphocyte globulin (ALG) or antithymocyte globulin (ATG). Two cases received ALG and CD25 Mab. Results Among 61 patients, 59 cases were successfully engrafted, which was identified by blood type, chromosome test and DNA polymorphism. Twenty-three cases developed grade Ⅱ～Ⅳ acute GVHD. Twenty-five patients experienced chronic GVHD. Infection of bacterial and/or fungal within 100 days after URD-HSCT was documented in 48 cases. Thirty-six cases had cytomegalovirus infection. Major infection site was lower respiratory tract. Eighteen cases died after URD-HSCT, and the 2-year disease-free survival rate was (68.0±6.4)%. Among these 18 deaths, 12 cases died because of transplantation related complications with the transplantation related mortality (TRM) being 19.7 %, and the remaining 6 cases died of relapse with the relapse rate being 9. 8 %, respectively. Conclusions URD-HSCT is an effective therapeutic strategy for malignant hematopoietic diseases when related donor is not available Acute GVHD and infection are risk factors of therapeutic effect and prognosis after URD-HSCT. Early prediction and prevention of acute GVHD and infection are essential problems to overcome.     

非血缘关系造血干细胞移植61例分析

Objective To study the therapeutic effectiveness, associated complications and related factors of unrelated allogeneic hematopoietic stem cell transplantation (URD-HSCT). Methods Sixty-one patients with malignant hematological diseases received URD-HSCT. All cases were subjected to myeloablative or nonmyeloablative conditioning regimen according to primary diseases. Among 61 patients, 21 were donor-recipient 6/6 HLA-matched, 5 were 5/6 HLA antigen-matched, 24 were 1 HLA gene subtype-mismatched, 11 were 2 HLA gene subtype-mismatched. Eighteen patients were ABO-compatible with donors, while 43 ABO-incompatible with donors. The median of infused donor nucleated cells was 4.5×108/kg, and the median of CD34+ cells were 4.3×106/kg. The graft-versus-host disease (GVHD) prevention regimens were based on short-term MTX, cyclosporin A and mycophenolate mofetil (MMF) regimen. Forty-nine cases also received CD25 Mab on the day of transplantation, and the day 4 after transplantation. Nine cases were also administrated with antilymphocyte globulin (ALG) or antithymocyte globulin (ATG). Two cases received ALG and CD25 Mab. Results Among 61 patients, 59 cases were successfully engrafted, which was identified by blood type, chromosome test and DNA polymorphism. Twenty-three cases developed grade Ⅱ～Ⅳ acute GVHD. Twenty-five patients experienced chronic GVHD. Infection of bacterial and/or fungal within 100 days after URD-HSCT was documented in 48 cases. Thirty-six cases had cytomegalovirus infection. Major infection site was lower respiratory tract. Eighteen cases died after URD-HSCT, and the 2-year disease-free survival rate was (68.0±6.4)%. Among these 18 deaths, 12 cases died because of transplantation related complications with the transplantation related mortality (TRM) being 19.7 %, and the remaining 6 cases died of relapse with the relapse rate being 9. 8 %, respectively. Conclusions URD-HSCT is an effective therapeutic strategy for malignant hematopoietic diseases when related donor is not available Acute GVHD and infection are risk factors of therapeutic effect and prognosis after URD-HSCT. Early prediction and prevention of acute GVHD and infection are essential problems to overcome.