反转录聚合酶链反应检测前列腺癌病人外周血中前列腺特异膜抗原

前列腺特异膜抗原 (ＰＳＭ)存在前列腺细胞上 ,患前列腺癌时 ,有很少量ＰＳＭ进入血清 ,检测病人血清中ＰＳＭ的水平 ,对前列腺癌的诊断有一定的临床意义 ,但该方法的敏感性和特异性均不理想。我们运用敏感的反转录聚合酶链反应 (ＲＴ ＰＣＲ)方法 ,检测了 3 3例前列腺癌病人外周血中ＰＳＭｍＲＮＡ的表达 ,结合临床有关资料 ,探讨其临床意义。一、材料和方法1.研究对象 :前列腺癌 3 3例 ,前列腺增生 10例 ,来自北京大学泌尿外科研究所 ,均经病理学检查确诊。男性健康体检者 5名。 3 3例前列腺癌病人分为接受内分泌治疗组和未接受治疗组 ,其…     

前列腺特异膜抗原mRNA检测方法的建立及应用

目的 建立前列腺特异膜抗原(PSM)mRNA检测方法。方法 利用异硫氰酸胍／酚／氯仿／异戊醇一步法从前列腺癌患者外周血有核细胞或前列腺癌组织中提取总RNA,进行RT-PCR扩增。结果 在PCR反应体系中投入相当于1．100个癌细胞所含总RNA量时,均能得到清晰的262bp的产物带。结论 本法有很高的稳定性和灵敏度。临床应用有助于早期发现前列腺癌转移、复发和判断疗效。     

前列腺特异膜抗原的研究现况

前列腺特异膜抗原 (ｐｒｏｓｔａｔｅ ｓｐｅｃｉｆｉｃｍｅｍｂｒａｎｅａｎｔｉｇｅｎ ,ＰＳＭＡ)是存在于前列腺细胞膜上的组织特异性抗原 ,由于其在前列腺癌分期、诊断和治疗中具有重要的临床意义 ,故将其研究现况综述如下。1　ＰＳＭＡ的生物学特性1987年 ,Ｈｏｒｏｓｚｅ     

前列腺特异抗原的检测方法及临床意义

前列腺特异抗原（PSA）作为检测前列腺癌肿瘤标记物之一，在国内已日益受到重视，本文从PSA的生物学特性及检测方法包括放射免疫法、酶联免疫法、自动微粒酶联免疫法、化学发光法、时间分辨免疫荧光法、多聚酶链反应的基本原理及方法学特点和PSA在前列腺癌诊断中的意义与缺点作一简要综述。     

血清前列腺特异抗原和前列腺特异抗原密度对前列腺癌诊断价值评价

目的探讨血清前列腺特异抗原（PSA）及前列腺特异抗原密度（PSAD）在前列腺癌诊断及其与良性前列腺增生鉴别诊断中的价值。方法采用化学发光免疫分析法检测前列腺癌患者（65例）和前列腺增生患者（116例）血清PSA水平，同时利用B超测定患者前列腺体积，计算出PSAD值，对患者进行分组比较。运用ROC曲线对PSA和PSAD诊断前列腺癌的价值进行分析。结果前列腺癌组与前列腺增生组患者在不同PSA区段和不同PSAD区段的分布差异均有非常显著性（P均〈0．01）。ROC曲线分析结果显示，PSA和PSAD的曲线下面积分别为0．948（95％CI：0.907—0．989）和0．971（95％CI：0．944～0．999）。当PSA和PSADI临界值分别为4ng／ml和0．15时，敏感性分别为98．5％和96．9％，特异性分别为24.1％和63．8％；而当PSA和PSAD临界值分别为10ng／ml和0．20时，敏感性分别为95．4％和93．8％，特异性分别为67．2％和82.8％。结论PSA和PSAD在前列腺癌诊断及其与前列腺增生鉴别诊断中均有一定的价值；PSAD更能提高诊断前列腺癌的特异性和准确度，有利于前列腺癌与良性前列腺增生的鉴别诊断。     

前列腺特异抗原的检测方法及临床意义

前列腺特异抗原作为检测前列腺癌肿瘤标记物之一，在国内已日益受到重视，本文从ＰＳＡ的生物学特性及检测方法包括放射免疫法。酶联免疫法，自动微粒酶联免疫法，化学发光法，时间分辨免疫荧光法，多聚酶反应的基本原理及方法学特点和ＰＳＡ在前列腺癌诊断中的意义与缺点作一简要综述。     

前列腺癌组织中前列腺特异性膜抗原基因表达的临床意义

目的检测前列腺特异性膜抗原(PSMA)基因在前列腺癌组织中的表达,并探讨其意义。方法利用半定量(RT-PCR)法检测52例前列腺癌组织及35例前列腺增生组织中PSMA的表达。结果 (1)PSMA在前列腺癌及前列腺增生组织中的阳性表达率分别为84.6%(44/52)及68.6%(24/35),虽然前列腺癌组织中PSMA表达阳性率高于前列腺增生组织,但两者差异无统计学意义(P>0.05)。PSMA mRNA半定量结果在两组间存在差异,癌组织中PSMA的表达量明显高于增生组织中的表达,差异有统计学意义(P<0.05)。(2)PSMA基因表达量与肿瘤的分化程度有关,分化程度越低,表达量越高,高分化前列腺癌与低分化前列腺癌间差异有统计学意义(P<0.05)。结论 PSMA在前列腺癌中的表达与肿瘤的分化程度有关,且高于前列腺增生组织,提示PSMA可作为判断预后及分化程度的指标。     

人肠道乳酸杆菌的荧光定量PCR定量检测方法的研究

目的应用实时荧光定量PCR技术对健康人粪便内乳酸杆菌进行定量分析,建立乳酸杆菌的实时荧光定量PCR检测方法。方法依据乳酸杆菌16S rDNA序列设计属特异性引物,应用荧光定量PCR技术检测乳酸杆菌的16SrDNA,对粪便中的乳酸杆菌进行定量检测和分析,并和用传统方法所获得的结果进行比较。结果结果显示荧光定量PCR检测乳酸杆菌和传统方法检测乳酸杆菌之间无统计学差异（P〉0.05）。结论荧光定量PCR技术比传统方法特异性高、敏感性强,临床上可用此方法对患者肠道乳酸杆菌进行定量分析。     

人IFN-λ1-3型mRNA实时荧光定量PCR检测方法的建立

【目的】建立人IFN‐λ1‐3型mRNA实时荧光定量聚合酶链式反应（qRT‐PCR）检测方法。【方法】根据人IFN‐λ1‐3型mRNA的基因序列合成特异性引物及探针，用体外转录方法制备IFN‐λ1‐3型的mRNA标准品，建立人IFN‐λ1‐3型mRNA qRT‐PCR检测方法。【结果】IFN‐λ1‐3型RNA标准品与对应的CT 值有良好的线性关系；扩增效率均在90％～100％之间；灵敏度分别是：1×100 co pies／μL、1×101 co pies／μL、1×101 co pies／μL ；变异系数均小于2％；各型间交叉反应不明显。【结论】本研究建立的IFN‐λ1‐3型mRNA qRT‐PCR检测方法灵敏度高，具有良好的重复性及特异性。     

荧光定量PCR与普通定性PCR检测乙型肝炎血清HBV DNA结果的比较

目的　探讨荧光定量聚合酶链反应 (PCR)与普通定性 PCR检测血清 HBV DNA结果的差异。方法　同时采用荧光标记 (Ampli Sensor)定量 PCR方法及普通定性 PCR方法对 10 0例乙型肝炎血清样品进行 HBV DNA检测 ,并分析其相关性 ,比较其差异。结果　 10 0例荧光定量 PCR方法检测 HBV DNA阳性率为 74.0 % (74/ 10 0 ) ,定性 PCR方法检测 HBV DNA阳性率为 5 2 .0 % (5 2 / 10 0 ) ,两种方法的 HBV DNA检出率比较具有显著性差异 (P<0 .0 1)。结论　荧光定量 PCR与普通定性 PCR相比具有一定的优势 ,完全可以取代定性 PCR方法 ,尤其适用于使用抗病毒药物的患者的疗效观察和病情预测     

荧光定量PCR检测在宫颈癌筛查中的应用

目的探讨荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)检测宫颈病变人乳头瘤病毒(HPV)13种高危型DNA的可行性,为检测宫颈组织中HPV的感染提供有效的方法。方法选择197例阴道细胞学检测异常的宫颈脱落细胞,使用FQ-PCR方法检测13种高危型HPV DNA,同时取宫颈病变处组织进行组织病理学检查。结果 329例样本中HPV 13种高危型阳性者218例,阳性率为66.26%:CT值范围在13～40之间,平均为(26±2.31);组织病理学检测186例阳性,阳性率为56.53%,经χ~2检验,差异有统计学意义(χ~2=6.566,P=0.0104);阴性标本为Undet。结论 FQ-PCR方法检测宫颈病变中13种高危型HPV DNA感染,具有快速、简便、灵敏度高、特异性强等优点,对宫颈癌的普查和治疗有指导意义。     

梯度PCR在基因扩增研究中的应用

探讨和尝试一种较为迅速确定最佳退火温度的方法来扩增目的基因。方法：采用梯度PCR对醛固酮合酶基因（CYP11B2）进行扩增,通过凝胶呈像技术判断CYP11B2基因最佳退火温度。结果：与普通PCR相比,梯度PCR能够迅速地确定CYP11B2基因的最佳退火温度。结论：梯度PCR简单、直观、快速,适用于各种核酸分子的扩增,具有高效率、高通量的优点,有着广阔的应用前景。     

荧光定量PCR检测儿童非典型EB病毒感染的临床评价

目的探讨荧光定量PCR检测对诊断和治疗非典型EB病毒(EBV)感染的临床意义。方法对2007-04-2009-10诊断为非典型EBV感染90例患儿,抽静脉血2 ml,注入枸橼酸钠抗凝剂与静脉血充分混匀,用核酸扩增荧光PCR法测定基因拷贝数,同时进行常规外周血及异型淋巴细胞检查,对照病因和首发临床表现,分析儿童感染非典型EBV时荧光定量PCR检测的基因拷贝数变化。结果 EBV-DNA拷贝数能早期反映出非典型EBV感染,拷贝数越高,出现多器官损害概率越高。结论荧光定量PCR检测EBV-DNA拷贝数有助于早期诊断非典型EBV感染,能减少诊疗的盲目性,对临床有一定指导意义。     

荧光定量PCR检测HBV-DNA室内质控物的制备及初步应用

目的：制备HBV-DNA荧光定量PCR检测的室内质控物,并对其应用价值进行初步评价。方法：留取单-乙肝模式的混合血清样本,并用正常人血清将收集的血清稀释至所需的浓度,用与待检血清相同的仪器、同一品牌的HBV-DNA定量试剂盒进行检测,确定其靶值,计算x^-、s、CV,绘制质控图。结果：自制的室内质控物高低值的变异范围分别为1.10%、1.01%（CV〈5%）,稳定性好。结论：临床实验室可以用单-乙肝模式的混合血清制备HBV-DNA定量检测的质控物,其制备容易,测定结果稳定,有一定的临床实用价值。     

血清曲霉菌游离DNA定量PCR检测方法的建立及应用初探

目的 建立并评价从血清中检测曲霉游离DNA的定量PCR方法.方法 合成曲霉28s rDNA基因特异广谱引物和Taqman探针,建立定量PCR检测方法,并进行方法学评价.用建立的方法检测33例患者的GM阳性血清标本.结果 定量PCR方法灵敏度为2拷贝/反应,标准曲线Y=-3.629X+40.187,相关系数R2为0.997 6.定量PCR方法检测33例患者的首次GM阳性血清标本,对诊断侵袭性曲霉感染的敏感性84％(21/25)、特异性87.5％(7/8)、阳性预测值95.5％(21/22)、阴性预测值63.6％(7/11).PCR阳性与PCR阴性病例组间侵袭性曲霉感染诊断率有统计学差异(95.5％ vs 36.4％),PCR阳性与侵袭性曲霉感染诊断有相关性(RR=2.625).结论 血清曲霉游离DNA定量PCR检测有助于侵袭性曲霉感染的早期诊断.     

炭疽芽孢杆菌特异性基因序列双重TaqMan聚合酶链反应快速检测体系的建立

目的 以炭疽芽孢杆菌的主基因和致病毒素基因pagA特异性序列为检测标志，建立高敏感、高特异的荧光双重实时TaqMan聚合酶链反应快速检测体系。方法 根据炭疽杆菌主基因组特异性序列（Gs）和特异的毒力岛pagA基因序列（Pag）设计引物及探针，通过构建目的质粒获得标准模板，利用TaqMan标记探针和便携式Smartcycle实时聚合酶链反应检测平台探讨该检测体系的检测敏感性和特异性。结果该体系炭疽芽孢杆菌的检测敏感度为10^2拷贝每反应体系，与其他蜡样杆菌群细菌未出现非特异性扩增，具有较高的特异性。整个反应在1h内完成，适合于实验室或野外环境下炭疽芽孢杆菌的快速检测。结论 本研究建立的双重TaqMan实时聚合酶链反应检测体系可作为炭疽芽孢杆菌快速、准确、特异、敏感的检测手段。     

多重PCR法和HPV分型基因芯片法在高危型人乳头瘤病毒感染检测中的应用

目的评价高危型人乳头瘤病毒（HPV）多重核酸扩增荧光检测法和HPV分型基因芯片检测法在HPV感染女性患者标本基因分型的临床应用效果。方法应用13种高危型HPV多重PCR荧光检测法对在深圳市人民医院进行宫颈癌筛查的653例疑似HPV感染女患者的宫颈细胞样本进行检测,并与HPV分型基因芯片检测法的检测结果进行比较,2种方法检测13种高危型HPV不一致的样本经序列分析方法进一步验证。结果13种高危型HPV多重PCR荧光检测法检测HPV阳性样本,阳性检出率为21．5％（140／653）;用HPV分型基因芯片检测法验证,与13种高危型HPV多重PCR荧光检测法一致的阳性样本占20．4％（133／653）,总一致率为98．2％。2种方法的检测结果具有高度一致性（kappa值一o．945）;用HPV分型基因芯片检测法检出：HPV单一型别感染占59．4％（79／133）,主要的高危HPV型别为HPV16、52、39、68、33和59型,6种高危型占总数的87．3％（69／79）,其中HPV16和HPV52为主要感染,占44．9％。结论高危型HPV多重PCR荧光检测法和HPV分型基因芯片检测法在13种高危型HPV的检结果具有高度一致性;多重PCR荧光检测法覆盖主要的13种高危型HPV,分型基因芯片检测法可进行具体的单一型别分型。2种检测方法的联合应用,对宫颈癌筛查和预防具有较高的临床应用价值,同时可为HPV分子流行病学和HPV疫苗的应用研究提供依据。