TGF-β1 AS-ODN对牛眼小梁细胞TGF-β1、纤维连接蛋白、Ⅰ型胶原表达的影响

目的　观察转化生长因子 β1(transforminggrowthfactor β1,TGF β1)反义寡核苷酸对牛眼小梁细胞 (bovinetrabecularmeshworkcells,BTMC)表达TGF β1、纤维连接蛋白、Ⅰ型胶原的影响。方法　脂质体介导下 ,将 0 .1,0 .5 ,1μmol·L-1TGF β1反义寡核苷酸作用于BTMC ,对照组分别加入 1μmol·L-1TGF β1正义寡核苷酸脂质体复合物、2 0g·L-1脂质体、无血清RPMI 16 4 0。然后用半定量RT PCR检测TGF β1反义寡核苷酸对BTMC表达TGF β1、纤维连接蛋白、Ⅰ型胶原的影响。结果　与无血清RPMI 16 4 0对照组相比 ,0 .1μmol·L-1TGF β1反义寡核苷酸即可抑制BTMC表达TGF β1,0 .5 ,1μmol·L-1TGF β1反义寡核苷酸可完全抑制BTMC表达TGF β1(P <0 .0 5 )。 0 .1,0 .5 μmol·L-1TGF β1反义寡核苷酸可浓度依赖性抑制BTMC表达纤维连接蛋白、Ⅰ型胶原 ,1μmol·L-1TGF β1反义寡核苷酸可完全抑制BTMC表达纤维连接蛋白、Ⅰ型胶原 (P <0 .0 5 )。 2 0 g·L-1脂质体、1μmol·L-1TGF β1正义寡核苷酸不能抑制BTMC表达TGF β1、纤维连接蛋白、Ⅰ型胶原 (P >0 .0 5 )。结论　进一步证实TGF β1可通过自分泌方式作用BTMC ,促进细胞外基质的合成。通过TGF β1反义寡核苷酸抑制BTMC表达TGF β1、纤维连接蛋白、Ⅰ型胶原 ,     

曲尼司特对体外培养的人眼小梁细胞转化生长因子-β2表达的抑制作用

目的　观察曲尼司特对体外培养的人眼小梁细胞转化生长因子 β2 (TGF β2 )表达的影响。方法　体外培养的第 3～ 5代人眼小梁细胞经 0 0 (对照组 )、12 5、2 5 0及 5 0 0mg/L曲尼司特处理 4 8h后 ,采用半定量逆转录聚合酶链反应 (RT PCR)观察曲尼司特对体外培养的人眼小梁细胞TGF β2 表达的影响 ,以人甘油醛 3 磷酸酯脱氢酶 (G3PDH)作为内参照。结果　 12 5、2 5 0及 5 0 0mg/L曲尼司特处理组TGF β2 /G3PDH象素值比值分别为 1 85± 0 35 ,1 6 6± 0 4 2 ,1 16± 0 2 4 ,与对照组比值 3 82± 0 5 6比较 ,差异有非常显著意义 (q′ =10 77,11 80 ,14 5 4 ;P <0 0 1) ;同时 ,TGF β2 /G3PDH比值随曲尼司特浓度增加而变小 ,呈现明显的量效关系。结论　曲尼司特能明显抑制小梁细胞TGF β2 的表达。可从发病学途径探讨曲尼司特对原发性开角型青光眼的治疗机制。     

维拉帕米对牛眼小梁细胞增殖和吞噬功能的影响

目的　研究维拉帕米对牛眼小梁细胞 (BTMC)增殖和吞噬功能的影响。方法　采用MTT和3 H TDR实验检测 0 0 0 0 1、0 0 0 0 5、0 0 0 1、0 0 0 5、0 0 1、0 0 5、0 1mg/ml 7种质量浓度的维拉帕米对BTMC增殖功能的影响。以乳胶微粒为标记 ,定量检测等于和低于 0 0 1mg/ml维拉帕米对BTMC吞噬功能的影响。结果　低于 0 0 1mg/ml维拉帕米对BTMC增殖功能无抑制作用 (P >0 0 5 ) ,等于或高于 0 0 1mg/ml的维拉帕米可浓度依赖性地抑制BTMC增殖功能 (P <0 0 5 ) ,其IC50 分别为 0 0 3 2 3mg/ml(MTT)和 0 0 2 5 9mg/ml( 3 H TDR)。 0 0 0 1、0 0 0 5、0 0 1mg/ml维拉帕米可浓度依赖性地促进BTMC的吞噬功能 (P <0 0 5 )。结论　临床应用的 0 12 5 %维拉帕米滴眼剂在房水中的质量浓度为 ( 160 7± 2 72 )ng/ml ,该质量浓度范围不抑制BTMC增殖。选用等于和低于 0 0 1mg/ml作为后续实验的质量浓度。维拉帕米还可通过促进小梁细胞的吞噬功能 ,减少房水外流阻力 ,有望在发病学环节上治疗原发性开角型青光眼     

异搏定对培养角膜基质细胞分泌转移生长因子-β_1的影响

目的　探讨异搏定(Verapamil)对体外培养兔角膜基质细胞分泌TGFβ1的影响。为预防或减轻PRK后混浊(haze)形成提供线索。方法　将传代培养细胞,在加药培养后48h,应用TGFβ1EmaxTMImmunoAssaySystem试剂盒对培养上清中TGFβ1含量进行检测,根据标准曲线分别计算出各孔TGFβ1的浓度。结果　Verapamil浓度5μg/ml和10μg/ml,作用48h,培养上清中TGFβ1含量明显降低(P<0.05)。Verapamil浓度越高,培养上清中TGFβ1含量越少。结论　Verapamil能明显抑制角膜基质细胞分泌TGFβ1,可望成为预防或减轻PRK后haze形成的药物。     

维拉帕米对牛眼小梁细胞合成细胞外基质的影响

目的 探讨维拉帕米(Verapamil)对牛眼小梁细胞(BTMC)合成Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ型胶原、纤维连接蛋白、透明质酸的影响。方法 采用免疫组化结合计算机图像分析和放免技术检测等于和低于0.01 mg/ml维拉帕米对BTMC合成胶原、纤维连接蛋白、透明质酸的影响。结果 0.001、0.005、0.01mg/ml维拉帕米可质量浓度依赖性抑制Ⅰ、Ⅲ型胶原、纤维连接蛋白的合成(P<0.05),而促进透明质酸的合成(P<0.05)。0.005、0.01mg/ml维拉帕米可质量浓度依赖性抑制Ⅳ型胶原(P<0.05),而0.001mg/ml维拉帕米无此作用(P>0.05)。结论 维拉帕米可通过抑制细胞外基质在小梁网异常沉积,减少房水外流阻力,有望在发病学环节上治疗原发性开角型青光眼。     

低剂量TGF-β1维持三维培养模型中牛角膜基质细胞生长和缓解细胞外基质纤维化的作用

背景 转化生长因子(TGF)-β1在角膜损伤修复过程中发挥重要作用,不同剂量的TGF-β1对角膜细胞外基质(ECM)的合成具有不同影响,从而影响瘢痕形成的程度.既往研究多集中于高质量浓度TGF-β1对二维培养的角膜基质细胞的影响,而低质量浓度TGF-β1对角膜基质细胞ECM合成的影响鲜见研究.目的研究低质量浓度TGF-β1对体外三维培养的角膜基质细胞生长状况及ECM合成的影响. 方法 采用两步胶原酶消化法从新鲜牛眼中分离牛角膜基质细胞并置于含体积分数10％胎牛血清(FBS)的DMEM/F12培养基,利用Pellet体外三维培养模型对牛角膜基质细胞进行培养.将细胞分为0.25 ng/ml TGF-β1+5％ FBS组和0.50 ng/ml TGF-β1+5％ FBS组,分别于培养后48 h、1周、2周、3周观察Pellet培养模型的形态变化.于培养后3周采用苏木精-伊红染色法对Pellet培养模型进行常规组织形态学检查,采用钙黄绿素-AM/碘化丙啶法(Calcein-AM/PI法)于激光扫描共焦显微镜下检查角膜基质细胞的死亡率;采用实时荧光定量PCR及免疫荧光细胞化学法分别检测细胞中α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、纤维连接蛋白(FN)、Ⅰ型胶原(Col Ⅰ)和ColⅢmRNA及其蛋白的相对表达量;采用实时荧光定量PCR法检测细胞中角膜蛋白(KERA)mRNA和基膜聚糖(LUM)mRNA的表达.结果 培养后48 h、1周、2周和3周Pellet细胞均成团生长.苏木精-伊红染色可见,Pellet球内均有大量红色淡染的胶原纤维以及大部分正常的成纤维细胞和少量坏死的成纤维细胞,坏死细胞可见细胞形态破坏,呈均质红染,且0.25 ng/ml TGF-β1+5％ FBS组和0.50 ng/ml TGF-β1+5％ FBS组培养细胞形态无明显差别.0.25 ng/ml TGF-β1+5％ FBS组和0.50 ng/ml TGF-β1+5％ FBS组细胞死亡率分别为(33.60±1.65)％和(30.90±0.78)％,差异无统计学意义(t=0.144,P=0.887).0.25 ng/ml TGF-β1+5％FBS组Pellet培养模型中α-SMA、FN、ColⅢ蛋白表达量均低于0.50 ng/ml TGF-β1+5％ FBS组,差异均有统计学意义(tα-SMA=4.622,P=0.010;tFN=2.973,P=0.040;tCol Ⅲ=7.845,P＜0.001),0.25 ng/ml TGF-β1 +5％ FBS组Col Ⅰ的表达量明显高于0.50 ng/ml TGF-β1+5％ FBS组,差异有统计学意义(tColⅠ=4.022,P=O.016).在转录水平和蛋白表达水平,0.25 ng/ml TGF-β1 +5％ FBS组ColⅢ/Col Ⅰ比值均低于0.50 ng/ml TGF-β1+5％FBS组,差异均有统计学意义(tmRNA=-3.039,P=0.038;t蛋白=3.215,P=0.032).培养后48 h、1周、2周Pellet培养模型中KERA mRNA和LUM mRNA均呈阳性表达,0.25 ng/ml TGF-β1+5％ FBS组LUM mRNA相对表达量随培养时间延长而逐渐增加;0.50 ng/ml TGF-β1 +5％ FBS组LUM mRNA相对表达量于培养后1周时达峰值.2个组Pellet培养模型中KERA mRNA相对表达量均在培养后1周达峰值. 结论 低剂量的TGF-β1既能够维持Pellet体外三维培养模型中角膜基质细胞的生长并合成ECM,也使ECM组成成分的合成倾向于正常状态,以减少瘢痕化修复的趋势.     

细胞外基质蛋白和转化生长因子β2共同作用诱导人视网膜色素上皮细胞向肌纤维母细胞转化

目的 了解转化生长因子β2（TGFβ2）和细胞外基质（ECM）调节人胚胎视网膜色素上皮（hfRPE）细胞向肌纤维母细胞分化的作用，确定这种调节的信号传导机制。 方法 hfRPE细胞培养于由ECM包被或未包被的培养皿上，培养液中加入或不加入TGFβ2，用免疫组织化学、流式细胞仪、蛋白印迹技术检测α平滑肌机动蛋白（α-SMA）的表达。在培养液中分别加入calphostin C, 染料木黄铜（genistein）, PD98059和渥曼青霉素（Wortmannin），测定α-SMA的表达。 结果 hfRPE细胞培养于ECM包被的培养板上，培养液中加入TGFβ2后，出现明显的形态学改变，包括细胞伸展变长，可见肌动蛋白微丝的形态。流式细胞仪及免疫细胞化学检测结果显示，培养液中加入TGFβ2可明显增加α-SMA的表达，并与剂量成正相关。当TGFβ2 的刺激浓度为50 ng/ml时，与培养于未包被的培养板上的hfRPE细胞相比，用纤维连接蛋白（FN）包被培养板后，〖JP1〗总的平均荧光强度（TMFI）增加（38.01±1.14）%（P<0.05）。蛋白印迹技术检测显示同样的结果。而上述效应可以大部分被蛋白激酶C（PKC）通路抑制剂calphostin C（10 nmol/L）抑制（P<0.01）。 结论 TGFβ2可诱导hfRPE细胞向肌纤维母细胞转化，并与其剂量成正相关，这种作用可被FN加强。TGFβ2和ECM的这种调节作用可能是通过PKC细胞内信号传导通路而发挥作用 。 (中华眼底病杂志, 2006, 22: 328-332)     

EGF、bFGF、TGF-β1对培养鸡角膜缘上皮细胞增殖性的影响

目的 :探讨EGF、bFGF、TGF -β1,及EGF与TGF -β1共同作用对培养鸡角膜缘上皮细胞增殖性的影响。方法 :用DMEM和F12 (1∶1)培养基 ,3 %胎牛血清 ,加入不同浓度EGF、或bFGF、或TGF -β1、或EGF与TGF -β1,采用MTT法检测培养细胞的OD值。结果 :除 1ng/ml组外 ,其余从 5～ 160ng/ml的EGF各浓度组增殖效应均明显大于对照组 (P <0 0 5 ) ,10ng/ml组明显大于其它各浓度组 (P <0 0 2 ) ;bFGF各浓度组 ,除 1ng/ml组和 160ng/ml组外 ,其余从 5～ 80ng/ml各组均明显大于对照组 (P <0 0 2 5 ) ,2 0ng/ml组明显大于与其它各组 (P <0 0 2 5 ) ;TGF -β1各浓度组 ,除 0 1ng/ml组和 0 2ng/ml组外 ,其余从 0 4～12 8ng/ml各组抑制效应明显大于对照组 (P <0 0 2 5 ) ,6 4ng/ml和 12 8ng/ml两组比较未见显著性差异 (P =1 0 0 0 ) ,两组分别与其它各组比较均有显著性差异 (P <0 0 2 5 ) ;EGF加TGF -β1各浓度组 ,除 1ng/ml组和 160ng/ml组外 ,其余从 5～ 80ng/ml各组增殖效应均明显大于对照组 (P <0 0 5 ) ,10ng/ml组明显大于其它各组 (P <0 0 2 5 )。结论 :EGF、bFGF对培养鸡角膜缘上皮细胞有明显促增殖作用 ;TGF -β1则有明显的抑制作用 ;这些作用均呈剂量依赖性 ;EGF与TGF -β1共同表现为促增殖作用。     

Tranilast对TGF-β2抑制人眼小梁细胞生长作用的影响

目的 :观察tranilast对转化生长因子 β2 (transform inggrowthfactor β2 ,TGF β2 )抑制体外培养人眼小梁细胞生长作用的影响。方法 :采用MTT法观察 0 μg/ml、12 .5 μg/ml、2 5μg/ml和 5 0 μg/mltranilast对 3.2ng/mlTGF β2 抑制体外培养人眼小梁细胞生长作用的影响。结果 :2 5 μg/ml和 5 0 μg/ml收稿日期 :2 0 0 2 -0 3 -2 7;修回日期 :2 0 0 2 -0 4-15基金项目 :国家自然科学基金资助项目 (3 8970 75 8)。作者简介 :曹阳 (1972 -) ,男 ,湖北武汉人 ,医学博士 ,主治医师 ,研究方向 :青光眼。通信作者 :曹阳 (E -mail:ytsao @sohu .com)。tranilast处理组人眼小梁细胞的光密度A值分别为 (1.136±0 .135 )和 (1.2 4 6± 0 .15 2 ) ,与对照组的 (0 .896± 0 .190 )比较 ,差异分别有显著性 (q =3.2 3,P <0 .0 5 )和非常显著性 (q =4 .70 ,P <0 .0 1)。结论 :Tranilast可明显拮抗TGF β2 对体外培养人眼小梁细胞抑制生长的作用。利用Tranilast在发病学环节防治原发性开角型青光眼的可能性 ,值得进一步研究     

灯盏细辛抑制外源性VEGF诱导的大鼠视网膜血管病变TGFβ1的表达

目的:探讨灯盏细辛(EBHM)对外源性VEGF诱导的大鼠视网膜血管病变眼玻璃体腔TGFβ1和视网膜TGFβ1mRNA表达的影响.方法:大鼠48只随机分为rrVEGF164,rrVEGF164 EBHM,rrVEGF164 NS和正常对照4组.rrVEGF164 EBHM组每天60g/L的灯盏细辛浸膏ip.分别于不同时问收集玻璃体液后采用ELISA检测TGFβ1的浓度,并提取视网膜总的RNA后行RT-PCR检测TGFB 1mRNA的表达.结果:在2wk或6wk时VEGF、VEGF NS和VEGF EBHM组实验眼玻璃体内TGFβ1的浓度均高于正常对照组(P＜0.05).VEGF EBHM组低于VEGF组和VEGF NS组(P＜0.05).各组TGFβ1mRNA/GAPDHmRNA的差异与玻璃体内的TGFβ1浓度变化一致.结论:rrVEGF164作用大鼠玻璃体内TGFβ1浓度升高,视网膜TGFβ1mRNA表达增强.灯盏细辛能部分抑制rrVEGF164诱导的大鼠视网膜血管病变玻璃体内TGFβ1浓度的升高和视网膜TGFβ1mRNA表达的增强.     

tTG硫代反义寡核苷酸抑制牛眼小梁细胞tTG的表达

目的观察组织型谷氨酰胺转移酶(tissue transglutaminase,tTG)硫代磷酸化修饰反义寡核苷酸(antisense oligodeoxynucleotide,ASODN)对体外培养牛眼小梁细胞(bovine trabecular meshwork cell,BTMC)tTG在mRNA水平和蛋白水平表达的影响,初步探讨tTG-ASODN在治疗原发性开角型青光眼中的可能性。方法根据牛tTG mRNA的二级结构设计并合成ASODN1、ASODN2,用阳离子脂质体Lipofectamin包埋后转染BTMC,以半定量逆转录-聚合酶链反应法检测转染后tTG mRNA表达的变化,以免疫组织化学SP法检测转染后tTG蛋白表达的变化。结果ASODN1组和ASOND2组的tTG/GAPDH灰度比值分别为1.0695±0.0009、1.0662±0.0007,空白对照组和错义寡核苷酸组分别为1.0185±0.0024、1.0167±0.0012;tTG-ASODN1、tTG-ASODN2对BTMC的tTG mRNA和蛋白表达均有明显的抑制作用,与空白对照组和错义寡核苷酸组相比有显著性差异(P<0.05);tTG-ASODN1与tTG-ASODN22组间无显著性差异(P>0.05)。结论tTG-ASODN可明显下调BTMC的tTG在mRNA和蛋白水平的表达,提示tTG-ASODN有望在原发性开角型青光眼的治疗中发挥重要作用。     

Mfn2在TGF-β2诱导的晶状体上皮细胞上皮-间质转化中的作用

目的　研究线粒体融合蛋白基因2（mitofusin 2,Mfn2）在转化生长因子β₂（transforming growth factor β₂,TGF-β₂）诱导的人晶状体上皮细胞（human lens epithelial cells,HLECs）发生上皮-间质转化（epithelial-mesenchymal transition,EMT）过程中的表达及作用。方法　实时荧光定量PCR检测不同浓度（10 ng·mL^-1、50 ng·mL^-1、100 ng·mL^-1）TGF-β₂处理HLECs 24 h后,各TGF-β₂处理组与对照组（0 ng·mL^-1 TGF-β₂） Mfn2 mRNA表达量差异。选取最佳作用浓度后,免疫荧光细胞化学检测TGF-β₂处理组与对照组的Mfn2蛋白表达变化,实时荧光定量PCR和免疫荧光细胞化学检测分别验证TGF-β₂处理组与对照组中E-钙黏蛋白（E-Cadherin）和波形蛋白（Vimentin） mRNA表达量和蛋白表达变化。Mfn2基因荧光表达载体（pEGFP-Mfn2）转染后实时荧光定量PCR和免疫荧光细胞化学检测分别验证转染组和对照组Mfn2、E-Cadherin和Vimentin mRNA表达量差异和蛋白表达变化。结果　TGF-β₂处理组与对照组相比,E-Cadherin mRNA表达量减少;Vimentin、Mfn2的mRNA表达量均增加,且差异均有统计学意义（均为P<0.001）。E-Cadherin蛋白表达降低,Vimentin、Mfn2的蛋白表达增加。成功转染Mfn2后转染组与对照组相比,E-Cadherin mRNA表达量下调,Vimentin mRNA表达量均增加,差异均有统计学意义（均为P<0.001）。E-Cadherin蛋白表达降低,Vimentin蛋白表达增加。结论　HLECs在发生EMT时Mfn2表达量上调,过表达Mfn2可使HLECs发生EMT。Mfn2参与了TGF-β₂诱导的HLECs的EMT过程。     

视网膜色素上皮细胞 LncRNA MEG3在不同葡萄糖浓度下的表达情况及对VEGF和 TGF-β1表达的影响

目的　探讨长链非编码RNA母系表达基因3（LncRNA MEG3）在不同浓度葡萄糖下表达情况及对血管内皮生长因子（VEGF）、转化生长因子β1（TGF-β1）表达的影响。 方法　按照不同浓度d-葡萄糖培养ARPE-19细胞,随机分为5 mmol·L^-1 d-葡萄糖组、15 mmol·L^-1 d-葡萄糖组、30 mmol·L^-1d-葡萄糖组。实时荧光定量PCR（RT-qPCR）检测各组ARPE-19细胞LncRNA MEG3、VEGF mRNA、TGF-β1 mRNA相对表达水平。ARPE-19细胞转染PCDNA-MEG3及PCDNA-NC质粒,建立LncRNA MEG3过表达ARPE-19细胞及转染空质粒的ARPE-19细胞。以含30 mmol·L^-1d-葡萄糖的DMEM分别培养以下各组ARPE-19细胞:LncRNA MEG3过表达ARPE-19细胞(O组);转染空质粒的ARPE-19细胞（NC组）;加入PBS的正常ARPE-19细胞(G组);同时以含5 mmol·L^-1d-葡萄糖的DMEM培养正常ARPE-19细胞（C组）;以上各组细胞培养24 h后,采用RT-qPCR法及Western blot法检测各组ARPE-19细胞VEGF mRNA和VEGF蛋白、TGF-β1 mRNA和TGF-β1蛋白的相对表达水平。 结果　与5 mmol·L^-1 d-葡萄糖组比较,15 mmol·L^-1 d-葡萄糖组和30 mmol·L^-1 d-葡萄糖组ARPE-19细胞LncRNA MEG3相对表达水平降低,VEGF mRNA、TGF-β1 mRNA相对表达水平升高,差异均有统计学意义（均为P<0.05）。与15 mmol·L^-1 d-葡萄糖组比较,30 mmol·L^-1 d-葡萄糖组ARPE-19细胞LncRNA MEG3相对表达水平降低,VEGF mRNA、TGF-β1 mRNA相对表达水平升高,差异均有统计学意义（均为P<0.05）。与G组和NC组比较,O组ARPE-19细胞VEGF mRNA和VEGF蛋白、TGF-β1 mRNA和TGF-β1蛋白相对表达水平均降低,差异均有统计学意义(均为P<0.05)。结论　高糖下调ARPE-19细胞LncRNA MEG3的表达,上调VEGF和 TGF-β1的表达。LncRNA MEG3过表达降低高糖诱导的VEGF和 TGF-β1表达的升高。LncRNA MEG3可能通过抑制VEGF和 TGF-β1的表达调节糖尿病视网膜病变的发展。     

TGF-β1和TGF-β RⅡ在视网膜母细胞瘤的表达

目的　探讨视网膜母细胞瘤的TGF β1和TGF βRⅡ的表达及其与临床病程和预后的关系。方法　应用免疫组织化学SP法检测TGF β1和TGF βRⅡ在 37例视网膜母细胞瘤瘤组织中的表达 ;用HPIAS 10 0 0彩色病理图像分析系统测量其平均积分吸光度值。结果　在 37例视网膜母细胞瘤组织切片中 ,均可见瘤细胞TGF β1表达强阳性 ,其表达水平明显高于正常视网膜 ,视神经浸润组的瘤组织中TGF β1的表达水平明显高于无视神经浸润组 (P <0 .0 5 ) ,眼外期组TGF β1的表达水平明显高于眼内期组和青光眼期组。TGF βRⅡ在 37例瘤组织中均为阴性。 结论　TGF β1的表达水平增高与临床分期和视神经浸润有关 ;高表达TGF β1可能意味预后不良 ;对TGF β1增殖抑制作用反应的丧失与视网膜母细胞瘤的发病有关     

体外培养人眼小梁细胞表达转化生长因子-β_2

目的 :了解体外培养人眼小梁细胞是否会表达转化生长因子 β2 (Transforminggrowthfactor β2 ,TGF β2 ) ,以确定TGF β2 的异常变化是否与原发性开角型青光眼发病有关。方法 :一步法提取体外培养人眼的小梁细胞RNA ,利用RT PCR检测TGF β2 的mRNA ,用双链测序鉴定PCR产物 ,并用免疫组化SUPERVISION法检测TGF β2 蛋白的表达。结果 :RT PCR扩增得到的单一产物 ,其序列与己知序列完全一致。TGF β2 免疫组化染色呈阳性。结论 :小梁细胞自身产生的TGF β2 ,是小梁网局部微环境和房水中TGF β2 的来源之一 ;TGF β2 不仅通过旁分泌方式 ,也可通过自分泌方式作用于小梁细胞。小梁细胞产生TGF β2 的异常变化是否与原发性开角型青光眼发病有关 ,值得进一步研究。     

TGF-β2局部应用对大鼠角膜碱烧伤后CD44和E-selectin表达的影响

目的研究TGFβ2局部应用对大鼠角膜碱烧伤后CD44和Eselectin的mRNA合成的影响,探求其对角膜碱烧伤的治疗作用。方法制备Wistar大鼠角膜碱烧伤模型,一组给予TGFβ2(浓度为1mg·L-1)局部滴眼,每日3次,一组未给予TGFβ2治疗。于角膜碱烧伤后3d和2周应用RTPCR方法检测TGFβ2治疗组与未治疗组角膜CD44和Eselectin的mRNA合成情况。结果角膜碱烧伤3d时CD44mRNA表达无显著变化,碱烧伤2周时CD44表达量增加,同正常对照组相比差异显著(P<0.01)。TGFβ2治疗组3d和2周时CD44的mRNA合成同未治疗组相比均有增加,2组差异显著。角膜碱烧伤3d时EselectinmRNA的表达量低于正常对照组,碱烧伤2周时Eselectin表达量高于正常对照组,有显著差异(P<0.01)。TGFβ2治疗组3d和2周时Eselectin的mRNA合成同未治疗组相比均有增加,3d时增加明显,差异极显著。结论TGFβ2能促进急性期和营养紊乱期CD44和EselectinmRNA的合成,减轻碱烧伤后的炎症反应。TGFβ2能够通过影响角膜局部粘附分子的合成和表达来减轻病理损伤,促进创伤愈合。     

实时荧光聚合酶链反应定量检测准分子激光原位角膜磨镶术后兔角膜转化生长因子β2的表达

目的 :定量检测转化生长因子 β2 (TGF β2 )在LASIK术后不同时段角膜中的表达水平 ,探讨TGF β2与准分子激光原位角膜磨镶术 (LASIK)术后早期伤口的愈合关系。方法 :取 2 0只新西兰白兔 ,左眼按近视 4D行LASIK术 ,右眼作对照组。分别于术后即刻、4h、4 8h、1w、2w取角膜 ,用荧光半定量PCR方法检测兔中央手术区及周边非手术区角膜TGF β2的表达。 结果 :LASIK术后不同时段术眼中央手术区与周边非手术区角膜TGF β2的mRNA水平差异无显著性 (P>0 .0 5 ) ,左眼手术区与右眼相应对照区角膜TGF β2的表达差异同样无显著性 (P >0 .0 5 )。结论 :LASIK术后反应轻微 ,组织损伤小 ,角膜TGF β2的表达与术前相比无明显变化。     

吡非尼酮对内皮细胞间质转化的抑制作用及机制

目的:建立缺氧诱导内皮细胞的内皮-间质转化(EndoMT)模型,探讨吡非尼酮(PFD)在视网膜下纤维瘢痕形成过程中的抗纤维化作用及机制。方法:原代培养人脐静脉内皮细胞,鉴定后取4~7代用于实验。CoCl2诱导细胞缺氧建立纤维化模型。CCK-8法检测细胞增殖率,筛选药物浓度。将细胞分为对照组(无血清培养基培养)、CoCl2(200μmol/L)模型组、CoCl2+低浓度(0.3mg/mL)PFD组、CoCl2+高浓度(0.6mg/mL)PFD组。Western blot法检测细胞CD31、VE-cadherin、α-SMA、FSP1、p-p38和p38的蛋白表达水平。CD31/α-SMA免疫荧光双染法观察蛋白表达的变化。划痕实验观察细胞迁移能力的改变。q-PCR法检测TGF-β1、SNAI1 mRNA转录水平。结果:与CoCl2模型组相比,PFD能明显提高缺氧细胞的增殖率,抑制细胞的迁移能力(均P<0.05);PFD组细胞标志蛋白CD31、VE-cadherin表达增加,α-SMA、FSP1表达降低(均P<0.05)。免疫荧光检测显示PFD可明显抑制α-SMA和增加CD31的蛋白表达(P<0.05)。内皮细胞EndoMT过程中,p38总蛋白表达不变(P>0.05),但p-p38磷酸化蛋白表达增加、TGF-β1和SNAI mRNA转录水平增高的现象可明显被PFD抑制(均P<0.05)。高低浓度PFD组上述各现象无明显差异。结论:PFD可以抑制内皮细胞纤维化的发生,TGF-β/p38 MAPK通路可能是PFD调控EndoMT过程的机制之一,为视网膜下纤维化的治疗提供了新思路。     

基质金属蛋白酶2和金属蛋白酶2组织抑制因子及转化生长因子β_1在糖尿病性白内障患者晶状体上皮细胞的表达及意义

目的　探讨基质金属蛋白酶 2 (matrixmetalloproteinase 2 ,MMP 2 )、金属蛋白酶 2组织抑制因子 (tissueinhibitorofmetalloproteinase 2 ,TIMP 2 )及转化生长因子 β1(transforminggrowthfoctorbeta ,TGF β1)在糖尿病性白内障患者的晶状体上皮细胞中的表达及意义。方法　应用免疫组化技术检测 2 3例糖尿病性白内障患者和 7例正常人的晶状体上皮细胞中MMP 2、TIMP 2及TGF β1的表达 ,并进行比较。结果　糖尿病性白内障患者晶状体上皮细胞中MMP 2和TGF β1的阳性表达率与正常人比较 ,差异均有非常显著意义 (χ2 =2 4 5 48,16 78;P <0 0 1) ,而糖尿病性白内障患者晶状体上皮细胞中TIMP 2的阳性表达率与正常人比较 ,差异无显著意义 (χ2 =0 6 2 1,P >0 0 5 )。经Spearman等级相关分析 ,晶状体上皮细胞中 ,MMP 2和TGF β1的阳性表达率存在正相关 (r =0 5 16 ,P <0 0 1) ;MMP 2和TGF β1与TIMP 2阳性表达率间均无相关 (r =- 0 0 45 ,0 0 42 ;P >0 0 5 )。结论TGF β1介导的MMP 2和TIMP 2表达失衡在糖尿病性白内障患者晶状体前、后囊膜下纤维化的发生和发展过程中起重要作用。     

转化生长因子β 1对人巩膜成纤维细胞Smad泛素化调节因子2和Ⅰ型胶原α 1影响的研究

目的探讨Smad泛素化调节因子2(Smurf2)在人胚胎眼巩膜成纤维细胞(HFSFs)中的表达,检测转化生长因子β₁(TGF-β₁)影响下HFSFs中Smurf2和Ⅰ型胶原α₁(COLIA1)含量的变化。 方法HFSFs复苏并稳定传代后,用免疫细胞化学法检测细胞中Smurf2的表达。分别用不同浓度的TGF-β₁(0 、1 ng/ml、5 ng/ml及10 ng/ml)处理HFSFs 24 h以及10 ng/ml TGF-β₁处理HFSFs不同时长(1 h、6 h、12 h及24 h)后,用实时荧光定量法检测各组Smurf2信使核糖核酸(mRNA)和COLIA1 mRNA表达水平。数据以均数±标准差( ±s )描述,不同浓度和不同时长的组间比较采用单因素方差分析,当差异有统计学意义时,进一步采用SNK法两两比较。 结果免疫细胞化学检测的结果显示,HFSFs中有COLIA1 mRNA和Smurf2蛋白的表达。与空白对照组比较,TGF-β₁ 10 ng/ml组COLIA1 mRNA的表达呈上升趋势(F＝3.17,P<0.05),TGF-β₁ 5 ng/ml、10 ng/ml组Smurf2 mRNA表达上调(F＝2.35,2.00;P<0.05)。10 ng/ml TGF-β₁干预HFSFs培养1 h、6 h、12 h及24 h后,24 h组COLIA1 mRNA表达显著升高(F＝29.20,P<0.05)。Smurf2 mRNA表达改变呈先上升后下降趋势,在6 h达到最高(F＝10.65,P<0.05)。 结论TGF-β₁可能通过调控HFSFs Smurf2的表达,诱导HFSFs COLIA1的合成。