热疗联合人肿瘤坏死因子对TNFR1高表达胶质瘤的细胞周期、F-肌动蛋白及其侵袭性的影响

目的探讨热疗联合重组人肿瘤坏死因子(recombinant human tumor necrosis factor,rhTNF)对肿瘤坏死因子受体1(tumornecrosis factor receptor 1,TNFR1)高表达的胶质瘤细胞的细胞周期和F-肌动蛋白(F-actin)的影响及其与胶质瘤侵袭性的关系。方法建立TNFR1高表达胶质瘤细胞株,RT-PCR和Western blot法检测胶质瘤细胞TNFR1的表达水平;碘化丙啶染色后用流式细胞术检测胶质瘤细胞细胞周期的变化;WST-8法检测细胞增殖;免疫荧光技术检测胶质瘤细胞内F-actin的表达水平;Transwell小室法检测胶质瘤细胞侵袭性改变。结果与对照组相比,TNFR1高表达胶质瘤细胞株的TNFR1 mRNA水平增加了78.5%,其蛋白质的表达水平增加了89.7%(P<0.05);经热疗联合rhT-NF处理后细胞增殖受抑制,S和G2/M期的TNFR1高表达胶质瘤细胞数之和明显增多,而F-actin的荧光强度和胶质瘤侵袭性分别降低了72.3%和83.10%。结论热疗联合rhTNF可能是通过阻滞TNFR1高表达胶质瘤细胞的细胞周期和降低F-actin的表达来实现降低胶质瘤侵袭性的作用。     

热疗降低胶质瘤侵袭性及与HSP70和iNOS表达的关系

目的 探讨热疗与热休克蛋白70（heat shock protein70, HSP70）及诱导型一氧化氮合酶（induced nitric oxide synthase, iNOS）表达的关系,阐明热疗降低胶质瘤侵袭性的作用及其可能机制。方法 热处理C6胶质瘤细胞后,酶联免疫吸附法和Western blot法动态检测胶质瘤细胞中HSP70抗体滴度和iNOS的表达水平;Griess法测定胶质瘤细胞中NO浓度;结晶紫染色法检测胶质瘤侵袭性的改变。结果 C6细胞经热疗后,HSP70抗体滴度增加,于30 min时最多（86.52 ng/L）。C6细胞内iNOS的表达水平也在热疗后明显增加,并于热疗60 min达高峰（IDV=228.31）后逐渐减少。热疗后胶质瘤细胞内NO浓度于热疗120 min时达高峰（OD=168.42）,且NO浓度越高,胶质瘤侵袭性越低（n=8.21×10⁶）。结论 胶质瘤细胞经热疗后HSP70表达水平增加,增加的HSP70可能通过某种机制提高了iNOS的表达水平,进而增加了胶质瘤细胞内的NO浓度而引起胶质瘤侵袭性的下降。     

CD70在肿瘤治疗中的研究进展

CD70是肿瘤坏死因子受体(tumor necrosis factor receptor,TNFR)超家族的成员之一,具有调控T细胞和B细胞活化、增殖及分化的能力,在维持机体免疫应答过程中起着重要的作用.同时,CD70在多种肿瘤组织中高水平表达,使其可能成为肿瘤免疫治疗的一个有效的靶点分子.本文就CD70的生物学作用、在肿瘤组织中的表达情况及其在肿瘤免疫治疗中的作用作一综述,以期为CD70在临床上的应用提供一些有利的参考和研究依据.     

重组人肿瘤坏死因子α衍生物治疗鼠脑胶质瘤

 目的　探讨重组人肿瘤坏死因子α衍生物 (rhTNF α)治疗鼠脑胶质瘤的有效性。方法　通过改造人肿瘤坏死因子α形成rhTNF α ,体外培养鼠脑胶质瘤细胞 ,加入不同浓度rhTNF α,MTT法测定细胞存活率 ,颅内立体定向种植C6细胞制成鼠脑胶质瘤模型 ,10天后MRI增强测量肿瘤大小 ,腹腔注射rhTNF α ,治疗后第 8天、15天、2 1天分别用MRI增强测量肿瘤大小。结果　体外实验 :加入rhTNF α 5天后 ,大部分C6细胞死亡 ,细胞存活率随rhTNF α的递增而降低。体内实验 ,治疗 8天后肿瘤即开始缩小 ,治疗 2 1天后 ,MRI未见明显肿瘤强化灶。结论　rhTNF α能有效治疗鼠脑胶质瘤。     

TNFR1与PDC-E2对胶质瘤细胞凋亡影响的相关性研究

目的:胶质瘤是一种最常见的中枢神经系统恶性肿瘤,生长迅速,恶性程度高.研究胶质瘤细胞凋亡过程中肿瘤坏死因子受体1(TNFRl)和丙酮酸脱氢酶复合物E2(PDC-E2)蛋白的表达变化,探讨TNFR1和PDC-E2在此过程中的作用.方法:培养TNFR1的小干扰细胞,将干扰掉TNFR1的质粒转染入U87MG细胞,检测TNFR1和PDC-E2对胶质瘤细胞凋亡的影响.通过免疫共沉淀方法检测TNFR1和PDC-E2在体外的相互作用;通过免疫荧光检测两者在U87MG细胞内的共定位;在转染干扰掉TNFR1的胶质瘤细胞中,检测TNFR1和PDC-E2的相互作用对凋亡标记物Caspase-3蛋白表达量的调节作用.结果:将TNFR1的小干扰质粒转染入U87MG细胞,结果显示未干扰掉的TNFR1对胶质瘤细胞凋亡有抑制作用,干扰掉TNFR1时对胶质瘤细胞凋亡的抑制作用减弱.体外HEK293T细胞及胶质瘤细胞中的免疫共沉淀以及免疫荧光显示TNFR1和PDC-E2存在相互作用;在胶质瘤细胞中检测到TNFR1和PDC-E2的相互作用协同促进Caspase-3的表达.结论:TNFR1和PDC-E2抑制胶质瘤细胞的凋亡,协同作用比单独对凋亡的影响更加明显;TNFR1和PDC-E2存在相互作用,两者协同作用更能增高作用底物Caspase-3的表达.     

三种新兴的免疫检查点分子在肿瘤免疫治疗中的研究进展

免疫检查点作为体内的“刹车分子”,与肿瘤的增殖、侵袭、转移及患者预后评估紧密相关,是良好的肿瘤治疗靶点。现有的免疫检查点阻断剂在非小细胞肺癌、黑色素瘤等恶性肿瘤上表现出较好疗效,但随之而来的免疫治疗相关不良反应也很突出。因此,寻找新的免疫检查点分子成为近年的研究热点。B7族同源体3（B7 Homolog 3,B7-H3）、T细胞免疫球蛋白和ITIM域（T cell immunoglobulin and ITIM domain,TIGIT）、肿瘤坏死因子受体2（tumor necrosis factor receptor 2,TNFR2）作为新兴的免疫检查点分子在肿瘤免疫治疗领域备受瞩目,本文将对其分子特性及相关研究进展进行综述。     

TRAF4促进肿瘤发生发展的研究进展

肿瘤坏死因子受体相关因子4（tumor necrosis factor receptor-associated factor 4,TRAF4）是TRAFs（tumor necrosis factor receptor-associated factors）蛋白家族的成员之一,其作为信号转导的接头分子,具有E3泛素连接酶活性,可激活多种下游信号通路,在神经发生与胚胎发育、免疫调节与炎症反应、氧化损伤及代谢等多种生理过程中发挥着重要的调控作用。TRAF4在多种肿瘤中异常高表达,并调控肿瘤的发生发展。本文根据TRAF4的生理和病理调控功能,对TRAF4与肿瘤发生和发展的关系进行综述,为该基因在肿瘤治疗中的应用提供参考。      

浆细胞样树突状细胞通过GITRL活化NK细胞

NK细胞是天然免疫中一类十分重要的淋巴细胞，通过其细胞毒活性和产生淋巴因子，在机体抗感染、抗肿瘤、免疫调节和造血调控等方面发挥重要的免疫功能。该文报告通过基因芯片分析发现，静息和活化的NK细胞表面表达糖皮质激素诱导的肿瘤坏死因子受体（glucocorficoid-induced tumor necrosis factor receptor,GITR），而活化浆细胞样树突状细胞（pDC）表面优先表达糖皮质激素诱导的肿瘤坏死因子受体配体（GITRL），由受体与配体相互作用的模式推测pDC与NK细胞之间可能通过GITRL和GITR发生相互作用而调节固有免疫系统的功能。     

趋化因子CCL20与恶性肿瘤之间的关系

趋化因子是一类控制细胞向炎性部位迁移的细胞因子,在调控免疫细胞分化、发育及定向迁移过程中起重要作用。CCL20是趋化因子家族中的重要成员之一,属于CC亚族,其受体为CCR6。CCL20在被激活的单核细胞、T细胞、树突状细胞及内皮细胞中表达;CCR6主要在肝、肺及淋巴组织中表达。CCL20的表达可被肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factorα,TNFα)、白细胞介素1β(interleukin1β,IL-1β)、IL-17、CD40配体和干扰素γ(interferonγ,IFN-γ)等细胞因子诱导,在恶性肿瘤的生长及促进肿瘤细胞的侵袭和转移(主要是肝内转移)中发挥重要作用。     

TRAP1与恶性肿瘤的关系及研究进展

肿瘤坏死因子受体相关蛋白(Tumor necrosis factor receptor-associated protein 1,TRAP1),又称HSP75,是热休克蛋白90(HSP90)的分子伴侣蛋白,可在多种人类恶性肿瘤细胞中表达.TRAP1参与机体细胞凋亡、代谢,细胞间黏附、运动、侵袭和转移,并与肿瘤细胞的耐药性相关.最新研究发现,在乳腺癌、结肠癌、卵巢癌等多种肿瘤的发生、发展过程中都可以检测到TRAP1的异常表达.进一步研究证实,TRAP1在肿瘤细胞内能量代谢的调控方面发挥着关键作用,阻断其功能可导致肿瘤细胞的死亡,同时不会影响正常细胞.作为一个新的肿瘤治疗靶点,TRAP1越来越受到人们的关注.     

Hyperthermia Promotes Apoptosis and Suppresses Invasion in C6 Rat Glioma Cells

Gliomas are a group of heterogeneous primary central nervous system tumors. Hyperthermia has provento be a potential therapeutic tool for cancers in the clinic. However, the molecular mechanisms of hyperthermiaremain unclear. The objective of this study was to investigate the effects of hyperthermia on the invasivenessin C6 glioma cells and related molecular pathways. Here our data show hyperthermia stimulated the release oftumor necrosis factor-alpha (TNF-α) and decreased C6 glioma cell migration and invasive capability at 30, 60,120 and 180 min; with increased spontaneous apoptosis in C6 glioma cells at 120 min. We also found mitogenactivatedprotein kinase (P38 MAPK) protein expression to be increased and nuclear factor-kappa B (NF-κB)protein expression decreased. Based on the results, we conclude that hyperthermia alone reduced invasion ofC6 glioma cells through stimulating TNF-α signaling to activate apoptosis, enhancing P38 MAPK expressionand inhibiting the NF-κB pathway, a first report in C6 rat glioma cells.     

局部热化疗对鼠胶质瘤肿瘤细胞凋亡及其耐药的研究

 目的　探讨局部热化疗对大鼠胶质瘤凋亡、耐药和肿瘤微血管的作用。方法　将C6 细胞接种于大鼠背部皮下 ,肿瘤生长至 1 .5～ 2cm直径时 ,分组进行局部热疗、化疗和热化疗。观察皮下肿瘤生长情况 ;用S P免疫组化法检测bax、bcl 2和 p gp蛋白表达 ;用HE染色法、电镜、TUNWL法观察凋亡 ;电镜观察肿瘤微血管的变化。结果　热疗、化疗、热化疗组较对照组瘤体缩小 ,瘤重减轻 (P <0 .0 0 1 ) ;bax蛋白表达增强 (P <0 .0 0 1 ) ,且热化疗组较单纯热疗和化疗组均增强 (P <0 .0 0 1 ) ;bcl 2蛋白表达改变不明显 (P >0 .0 5 ) ;化疗组 p gp表达增强 (P <0 .0 0 1 ) ,热疗和热化疗组 p gp表达减弱 (P <0 .0 0 1 ) ;细胞凋亡指数增大 (P<0 .0 0 1 ) ;热化疗组出现核染色质凝聚 ,凋亡小体 ;肿瘤微血管外径变小 ,管壁变厚 ,血管减少 ,有的血管甚至只能发现完整的基膜而缺乏内皮细胞。结论　 (1 )热疗化疗、热化疗能抑制肿瘤增殖 ,促进bax蛋白表达 ,使bcl 2 /bax减小 ,诱导细胞凋亡 ,且热...     

热疗在胶质瘤治疗中的研究进展

胶质瘤是很常见的恶性脑肿瘤,目前主要治疗方法包括手术、放疗与化疗,但患者生存率较低、预后较差。上述方法的一些局限性促使人们寻找更有效、更安全的治疗方法。热疗是一种局部或全身加热,利用高温杀灭肿瘤细胞,从而达到治疗效果的方法。在胶质瘤治疗中有着如创伤性小、精确性高等优点,与放化疗联用可以改善预后。目前已作为一种具有极大潜在优势的胶质瘤治疗手段。本文主要介绍应用于胶质瘤治疗的热疗方法,热疗在胶质瘤治疗中的应用前景与应用现状,以及研究相对成熟且已上市的、可应用于胶质瘤热疗的设备及操作方法。     

Galectin-3调控Wnt信号通路对脑胶质瘤细胞凋亡的影响

目的:半乳糖凝集素-3（Galectin-3）调控Wnt信号通路对人脑胶质瘤细胞凋亡的影响。方法:RT-PCR及Western blot检测人脑胶质瘤组织中Galectin-3的mRNA和蛋白表达;Western blot检测人脑胶质瘤U251、U87、SHG-44细胞中Galectin-3的蛋白表达;将Galectin-3的特异性siRNA(Galectin-siRNA)转染人脑胶质瘤U87细胞,Western blot、流式细胞术分别检测转染48 h后Galectin-3、Wnt5a、β-catenin和Cleaved caspase3蛋白表达及细胞凋亡率。结果:Galectin-3在人脑胶质瘤组织mRNA和蛋白表达均显著高于瘤旁组织（P＜0.01）;U251、U87、SHG-44细胞中Galectin-3蛋白表达从高到低为U87>U251>SHG-44,选择U87细胞作为后续研究;Galectin-3-siRNA1的Galectin-3蛋白表达最低,选择作为后续研究;NC-siRNA组细胞凋亡率、Cleaved caspase3、Wnt5a、β-catenin蛋白表达与对照组差异不显著（P＞0.05）,与对照组比较,Galectin-3-siRNA组细胞凋亡率明显升高,Cleaved caspase3蛋白表达明显升高,Wnt5a和β-catenin蛋白表达明显降低（P＜0.01）。结论:沉默Galectin-3表达可诱导人脑胶质瘤细胞凋亡,机制可能与Wnt信号通路的下调有关。     

和厚朴酚对人急性白血病细胞株U937细胞增殖及凋亡的影响

 目的 探讨和厚朴酚在体外对人急性白血病细胞株U937细胞增殖及凋亡的影响.方法 采用四甲基偶氮唑蓝（MTT）法检测和厚朴酚对细胞增殖的影响,Annexin V/PI双染检测细胞凋亡,RT-PCR检测Bcl-2、Bax、Caspase 3、Caspase 8 和 Caspase 9基因的表达。结果 5 μg/ml的和厚朴酚作用48 h对U937细胞增殖即可表现抑制作用,10 μg/ml的和厚朴酚作用48 h对细胞的增殖抑制率高达50%以上,作用120 h可完全抑制细胞增殖。经10 μg/ml和厚朴酚处理的U937细胞凋亡率达到26.8% (P＜0.01)。10 μg/ml的和厚朴酚处理U937细胞后48 h,Bcl-2基因表达降低（对照组：0.33±0.02,实验组：0.14±0.01,P＜0.01）,Bax基因表达升高（对照组：0.1±0.01,实验组：0.87±0.08,P＜0.01）。Caspase 3（对照组：0.48±0.01,实验组：0.87±0.06,P＜0.01）、Caspase 8（对照组：0.23±0.02,实验组：0.41±0.07,P＜0.01）和Caspase 9（对照组：0.44±0.05,实验组：0.76±0.06,P＜0.01）基因表达均升高。Caspase 3活性为0.325±0.089,较对照组有显著地升高(P＜0.01.结论 和厚朴酚能明显抑制人急性白血病细胞株U937细胞增殖并引起细胞凋亡。其机制在于上调凋亡促进基因Bax的表达,下调凋亡抑制基因Bcl 2的表达,并且内源性和外源性途径均参与了凋亡过程。     

Adenovirus-mediated transfer of p53 augments hyperthermia-induced apoptosis in U251 glioma cells

PURPOSE: Hyperthermia kills glioma cells by inducing apoptosis and is thereby an effective therapeutic modality for the treatment of malignant gliomas. However, cells harboring mutated p53 are refractory to hyperthermia-induced apoptosis. In this study, we assessed whether or not adenovirus (Adv)-mediated transduction of p53 overrides this resistant mechanism. METHODS AND MATERIALS: We transduced the p53 wild-type tumor suppressor gene into U251 glioma cells harboring mutated p53 using Adv vectors in combination with hyperthermia (43, 44.5 degrees C), and evaluated the degree of cell death and apoptosis. RESULTS: The percentage of cells that had died, as measured by trypan blue staining, among U251 cells infected with the Adv for p53 (Adv-p53) and treated with hyperthermia, was significantly higher than the percentage of cells that had died among U251 cells infected with Adv-p53 and not treated with hyperthermia, or those infected with the control Adv for dE (Adv-dE) and treated with hyperthermia. The degree of apoptosis, measured at 24 h after treatment, in hyperthermia-treated U251 cells infected with Adv-p53 (43 degrees C, 73%; 44.5 degrees C, 92%) was much higher than that infected with Adv-p53 (41%), or that infected with control Adv-dE and treated with hyperthermia (43 degrees C, 1.3%; 44.5 degrees C, 19%). Treatment with combined hyperthermia and Adv-p53 infection induced cleavage of caspase-3 in U251 cells. CONCLUSION: These results indicate that Adv-mediated transduction of p53 would render glioma cells highly sensitive to hyperthermia.     

TNFR1与PDC-E2在胶质瘤中表达的相关性及其临床意义

目的:研究TNFR1和PDC-E2在胶质瘤组织中的表达情况,分析TNFR1和PDC-E2异常表达与胶质瘤发生发展的关系。方法:采用Western blot技术检测9例不同级别胶质瘤新鲜组织中TNFR1和PDC-E2的表达情况;运用免疫组化方法检测75例胶质瘤组织石蜡切片中TNFR1和PDC-E2的表达情况,并结合临床病理资料分析TNFR1和PDC-E2与患者年龄、性别、肿瘤位置、手术切除范围以及肿瘤分级等因素之间的关系,并对其进行随访,应用Kaplan-Meier法分析TNFR1和PDC-E2与胶质瘤预后的关系,对两者的表达情况做Spearman等级相关性分析。结果:Western blot分析显示,TNFR1和PDC-E2在胶质瘤组织中的表达随级别增高而增高。免疫组化结果显示,TNFR1和PDC-E2的表达与胶质瘤组织学分级之间有统计学意义（P值均<0.001）。Kaplan-Meier分析显示胶质瘤中TNFR1和PDC-E2的高表达与患者较差的预后相关（P值均<0.01）;对两者的表达情况做Spearman等级相关性分析,结果发现TNFR1和PDC-E2的表达呈正相关（r=0.740,P<0.01）。结论:TNFR1和PDC-E2在胶质瘤中随着肿瘤级别的增加表达升高,高表达TNFR1和PDC-E2的患者预后较差,TNFR1和PDC-E2表达呈正相关。     

Multidrug-resistant hela cells overexpressing MRP1 exhibit sensitivity to cell killing by hyperthermia: interactions with etoposide

PURPOSE: Multidrug resistance (MDR) remains one of the primary obstacles in cancer chemotherapy and often involves overexpression of drug efflux transporters such as P-glycoprotein and multidrug resistance protein 1 (MRP1). Regional hyperthermia is undergoing clinical investigation in combination with chemotherapy or radiotherapy. This study evaluates whether hyperthermia can reverse MDR mediated by MRP1 in human cervical adenocarcinoma (HeLa) cells. METHODS AND MATERIALS: Cytotoxicity of hyperthermia and/or etoposide was evaluated using sulforhodamine-B in HeLa cells overexpressing MRP1 and their drug-sensitive counterparts. Glutathione, glutathione peroxidase (GPx), and glutathione S-transferase (GST) were quantified by spectrophotometry. GST isoenzymes were quantified by immunodetection. Caspase activation was evaluated by fluorometry and chromatin condensation by fluorescence microscopy using Hoechst 33258. Necrosis was determined using propidium iodide. RESULTS: The major finding is that HeLa and HeLaMRP cells are both sensitive to cytotoxicity of hyperthermia (41-45 degrees C). Hyperthermia induced activation of caspase 3 and chromatin condensation. Although total levels of cell killing were similar, there was a switch from apoptotic to necrotic cell death in MDR cells. This could be explained by decreased glutathione and GPx in MDR cells. MDR cells also contained very low levels of GST and were resistant to etoposide-induced apoptosis. Hyperthermia caused a modest increase in etoposide-induced apoptosis in HeLa and HeLaMRP cells, which required appropriate heat-drug scheduling. CONCLUSIONS: Hyperthermia could be useful in eliminating MDR cells that overexpress MRP1.