Humanin及衍生物对阿尔茨海默病小鼠海马胶质纤维酸性蛋白表达的影响

目的探讨Humanin(HN)及衍生物[Gly14]-humanin(HNG)在体内是否存在对实验性阿尔茨海默病(AD)小鼠的神经保护作用及可能的机制。方法选择健康雄性小鼠84只,随机分为假手术组(9只)、β淀粉样蛋白(Aβ)模型组(15只)、HN治疗组(30只)和HNG治疗组(30只)。HN组又分为10 μmol/L HN组和100μmol/LHN组,HNG组又分为10 nmol/L HNG组和100 nmol/L HNG组,4组均于3、7、14天应用免疫组织化学方法观察海马胶质纤维酸性蛋白(GFAP)表达的变化。结果 HN治疗组和HNG治疗组3、7、14天GFAP阳性细胞的表达较假手术组和Aβ模型组均减少。3、14天100 μmol/L HN组GFAP阳性细胞数少于10 μmol/L HN组(P<0.05);3、7、14天100 nmol/L HNG组GFAP阳性细胞数少于10 nmol/L HNG组(P<0.05)。3天100 nmol/LHNG组GFAP阳性细胞数少于100μmol/L HN组(P<0.05)。结论在体内,HN和HNG可以减少因Aβ_(25-35),毒性引起的GFAP的表达,这种改变有时间及剂量依赖性,证实了它们具有神经保护作用。     

癫痫大鼠海马内神经干细胞移植的实验研究

取胎鼠海马进行神经干细胞(NSC)的培养、鉴定与标记,以氯化锂-匹罗卡品诱导制成大鼠急性癫痫模型,于发作后第4天将以5-溴-2'-脱氧尿苷(Brdu)标记的NSC移植入大鼠海马,检测移植后NSC在宿主体内的存活情况,移植细胞对癫痫大鼠齿状回苔藓纤维出芽(MFS)的影响.发现移植后2个月NSC在宿主体内能够存活,并向移植区周围迁移;NSC移植组大鼠海马齿状回内分子层Timm染色颗粒明显少于未移植组.认为NSC移植入癫痫大鼠海马后能够存活,并能显著抑制海马齿状回MFS.     

3-硝基丙酸诱导沙土鼠脑缺血耐受时海马区胶质纤维酸性蛋白的表达

目的　观察 3 硝基丙酸 (3 nitropropionicacid ,3 NPA)预处理后缺血再灌注不同时间海马区胶质纤维酸性蛋白(glialfibrillaryacidicprotein ,GFAP)分布、表达的动态变化 ,探讨其与 3 NPA预处理诱导脑缺血耐受的关系。方法　阻断沙土鼠双侧颈总动脉造成前脑缺血模型 ,应用免疫组织化学方法观察星形胶质细胞的反应。结果　GFAP的分布随再灌注时间而变化 ,GFAP阳性星形胶质细胞在海马CA1区主要分布于多形细胞层、辐状层、腔隙层、分子层。 3 NPA预处理后脑缺血再灌注 3dGFAP表达增强 ,7、14d维持在较高水平 ,2 8d时有所下降 ,但与对照组比较仍保持在较高水平。结论　 3 NPA预处理诱导脑缺血耐受中 ,GFAP的表达增强保持在较高水平 ,表明星形胶质细胞增生、活化可能与 3 NPA预处理诱导脑缺血耐受有关。     

神经干细胞移植治疗阿尔茨海默病的研究进展

<正>阿尔茨海默病(AD)是一个多病因的神经退行性疾病,炎症与氧化应激,代谢障碍,钙离子通道受损,线粒体障碍,神经营养因子(NT)缺乏等都与AD的发生密切相关~([1,2]),这些病因导致了AD的治疗缺乏特异性。神经元的损伤和丢失是大多数神经退行性疾病的共同的最后通路,AD复杂的病理改变,最终导致胆碱能神经元损伤和丢失,引起学习记忆障碍。目前临床上AD的治疗如药物治疗、基因治疗、康复训练等~([3])只能改善症状,并不能阻止疾病的进展。近年来,神经再生理     

移植入阿尔茨海默病大鼠海马内神经干细胞的存活、迁移和分化

目的 观察新生大鼠海马齿状回的神经干细胞(NSCs)移植到阿尔茨海默病(AD)模型大鼠海马内的存活、迁移和分化.方法 将HoechsT_33258标记的NSCs植入AD模型大鼠海马,移植2、4和6 w后,行Y迷宫检测大鼠的学习记忆能力,结合HoechsT_33258标记和荧光免疫组化技术,分析NSCs在AD大鼠海马中的存活、迁移和分化.结果 移植的NSCs在宿主脑内能够存活至少6 w,沿海马回向两侧迁移,NSCs移植2 w后,免疫荧光检测无明显神经丝蛋白-200(NF-200)、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)、谷氨酸(Glu)、胆碱乙酰转移酶(ChAT)阳性反应,而移植后4、6 w,则可见免疫阳性反应细胞.Y迷宫测试结果显示移植NSCs 2、4、6 w后大鼠学习、记忆能力明显得到恢复,与AD模型组比较有统计学意义(P<0.05),与正常对照组比较,差异无统计学意义(P＞0.05).结论 自新生大鼠海马齿状回分离培养的NSCs在AD模型大鼠海马内能够存活、迁移并分化为胆碱能、谷氨酸能神经元及神经胶质细胞.     

碘过量对仔鼠海马GFAP阳性星形胶质细胞的影响

目的探讨碘过量与甲状腺激素对仔一代Wistar大鼠大脑海马星形胶质细胞的形态学影响。方法将断乳后1个月Wistar大鼠随机分为5组(NI、5HI、10HI、50HI、100HI),饮用不同浓度的KIO3碘水,饲养3个月后雌雄合笼,取60日龄仔鼠大脑,应用免疫组织化学技术观察海马CA1、CA2、CA3、CA4区星形胶质细胞,并进行形态计量学分析。结果与NI组比较,50HI、100HI组的海马各区GFAP阳性星形胶质细胞面数密度、平均灰度值和阳性细胞的强阳性率均明显降低。结论长期严重碘过量会影响仔鼠甲状腺激素水平,阻碍其大脑海马星形胶质细胞发育,其机理可能与碘过量所致的甲状腺功能低下有关,但大鼠对碘过量有极强的耐受力,当碘摄入量为正常摄入量的50倍以内时,不会影响仔鼠大脑海马星形胶质细胞的发育。     

HIF-1α基因修饰神经干细胞移植对大鼠脊髓损伤组织NF200和GFAP表达的影响及意义

目的 探讨低氧诱导因子-1α基因(HIF-1α)修饰神经干细胞(NSC)移植治疗脊髓损伤的可行性及机制.方法 将120只SD大鼠随机分为四组各30只.假手术组仅行椎板切开术;单纯损伤组(SCI组)、神经干细胞组(NSC组)、HIF-1α基因修饰NSC组(HIF-NSC组)均采用电控脊髓损伤打击装置制作脊髓损伤模型,分别于脊髓注入生理盐水、NSC悬液、HIF-NSC悬液.采用免疫组化法检测1、3、7、14及28 d各组脊髓组织HIF-1α、NF200 、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)表达.结果 HIF-NSC组各时点HIF-1α表达明显高于其他各组(P均＜0.01),且表达高峰延迟至移植后14 d;除第1天外,NF200表达明显高于SCI组和NSC组 (P＜0.05),GFAP表达显著低于SCI组和NSC组 (P＜0.01).结论 HIF-1α基因修饰NSC移植可促进损伤脊髓神经轴突再生,减少胶质细胞的增生和胶质疤痕形成,为神经再生创造有利的微环境;其机制可能为促进HIF-1α、NF200表达,抑制GFAP表达.     

嗅成鞘细胞与神经干细胞共移植对阿尔茨海默病大鼠的治疗作用

目的探讨嗅成鞘细胞(OECs)对神经干细胞(NSCs)移植治疗大鼠阿尔茨海默病(AD)的影响。方法 SD大鼠双侧海马注射Aβ1～40,建立AD大鼠模型。实验动物分为4组:NSCs移植组、NSCs与OECs移植组、AD模型组、正常对照组,每组30只。从SD胎鼠(孕16～18 d)取材,在体外分别培养和共培养OECs与NSCs,并将共培养的OECs与NSCs移植于AD大鼠大脑;观察各组大鼠行为学、移植细胞存活、迁移和分化以及宿主脑海马突触素表达的变化。结果①行为学测试:NSCs与OECs移植组潜伏期明显缩短、过平台次数明显增加,与NSCs移植组、AD模型组有显著性差异(P<0.05)。②根据标记跟踪,植入的NSCs与OECs大量存活,从注射部位分别向两侧海马区及其周围皮质迁移。③免疫荧光检测:植入NSCs能在AD脑内分化为神经元、神经胶质细胞以及少量胆碱能神经元,NSCs与OECs移植组分化为神经元的分化率13.97%,与NSCs移植组8.35%差异显著(P<0.05)。④海马突触素表达:NSCs与OECs移植组IA值最高,与NSCs移植组、AD模型组有显著性差异(P<0.05)。结论嗅成鞘细胞通过改善植入神经干细胞在AD脑内的存活、迁移和分化能力以及与宿主脑的联系,提高NSCs移植治疗大鼠AD的效果。     

脑老化及阿尔茨海默病患者脑中星形胶质细胞及小胶质细胞改变的观察

目的观察人脑老化及阿尔茨海默病(Alzheimer’sdisease,AD)患者脑中星形胶质细胞与小胶质细胞形态的改变。方法应用胶质纤维酸性蛋白(glialfibrillaryacidicprotein,GFAP)及铁蛋白免疫组织化学方法,观察28例正常增龄病例(分为老年组和对照组)尸检脑标本额叶、枕叶、壳核、海马及6例AD病例(AD组)海马标本中星形胶质细胞与小胶质细胞的分布及形态学改变。结果铁蛋白免疫组织化学方法能够清晰地显示石蜡切片中的小胶质细胞。对照组患者GFAP阳性星形胶质细胞主要分布于白质,铁蛋白阳性小胶质细胞主要分布于灰质。老年组患者星形胶质细胞呈不同程度增生、肥大,小胶质细胞出现增生、活化,部分出现老年斑的正常老龄脑皮质中可见活化小胶质细胞聚集成团。个别病例小血管内外均见到活化小胶质细胞。结论星形胶质细胞及小胶质细胞增生、活化是脑老化的重要形态学改变,活化小胶质细胞有可能参与了老年斑的形成。     

脐血间充质干细胞移植对阿尔茨海默病大鼠行为学的影响

目的 观察定向诱导人脐血间充质干细胞(hUCB-MSCs)移植对阿尔茨海默病(AD)大鼠行为学的影响,试图发现有效治疗AD的策略.方法 铝诱导AD模型大鼠是通过迷宫试验筛选,将大鼠按照随机数字表法分为4组,每组10只.对照组大鼠双侧海马注射生理盐水;(hUCB-MSCs)移植组大鼠注射hUCB-MSCs;常氧分化移植组大鼠注射常氧环境下向神经元样细胞诱导的脐血间充质干细胞;低氧分化移植组大鼠注射低氧环境下向神经元样细胞诱导的hUCB-MSCs.观察AD大鼠的学习和记忆能力在移植前及实验后8 w通过Y迷宫试验测定,记忆能力测定在学习能力测定48 h后进行.结果 对照组AD大鼠术后学习记忆成绩均下降,与术前相比,无差异(P＞0.05);hUCB-MSCs移植组大鼠学习记忆成绩提高,与移植前相比无差异(P＞0.05);常氧分化移植组和低氧分化移植组大鼠学习记忆成绩均较移植前提高;与对照组相比,其他3组大鼠学习记忆成绩均提高(P＜0.01).结论 hUCB-MSCs移植可以改善AD模型大鼠的学习记忆能力,提示hUCB-MSCs移植对VD大鼠的认知功能障碍有治疗作用,且定向诱导分化的hUCB-MSCs移植治疗优于未分化的hUCB-MSCs,低氧诱导分化的脐血间充质干细胞移植治疗效果最佳.     

人胶质细胞源性神经营养因子转染大鼠神经干细胞移植对老年帕金森病大鼠的作用

目的探讨人胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)转染大鼠神经干细胞移植对老年帕金森病(PD)大鼠的作用。方法 SD大鼠分为重组GDNF腺病毒(Ad-GDNF)组、Lac Z腺病毒(Ad-Lac Z)组和磷酸缓冲液(PBS)组。将重组腺病毒及PBS定向注射至一侧黑质附近,1 w后于同侧纹状体注射6-羟基多巴胺(OHDA)诱发多巴胺(DA)能神经元进行变性。通过旋转行为观察和中脑酪氨酸羟化酶(TH)免疫组化染色及纹状体单胺类递质高压液相色谱-电化学仪(HPLC-ECD)检测评估其治疗效应;通过RT-PCR、ELISA检测Ad-GDNF脑内表达情况。结果 Ad-GDNF组大鼠的平均旋转次数显著少于Ad-Lac Z组和PBS组(P0.05),损毁侧/损毁对侧黑质的TH阳性细胞百分比显著高于Ad-Lac Z组和PBS组(P0.05),DA、高香草酸(HAV)、3,4二羟基苯乙酸(DOPAC)损毁侧/损毁对侧百分比均显著高于Ad-Lac Z组和PBS组(P0.05),病毒注射后5 w的GDNF含量显著高于Ad-Lac Z对照组和PBS对照组(P0.05),病毒注射后9 w的GDNF含量显著高于Ad-Lac Z对照组(P0.05)。结论人GDNF转染大鼠神经干细胞移植对老年PD大鼠具有一定的保护作用。     

神经干细胞移植对阿尔茨海默病大鼠行为学及不同脑区细胞色素C表达的影响

目的探讨神经干细胞移植(NSCs)对阿尔茨海默病(AD)大鼠行为学及不同脑区细胞色素C(Cyt-C)表达的影响。方法通过切断Wistar大鼠海马穹隆伞制备AD模型大鼠;培养胎鼠的NSCs,并把该细胞移植入AD模型大鼠脑内;等量生理盐水注射设为对照组。1个月后进行morris水迷宫检测实验鼠学习记忆能力;5 d后处死实验鼠,用Western bolt检测不同脑区Cyt-C的表达。结果NSCs移植后AD模型大鼠的学习记忆能力明显改善,与生理盐水对照组相比差异显著(P<0.01),与正常组相比无显著差异(P>0.05);海马与额叶的Cyt-C表达显示生理盐水对照组与其他各组之间有显著差异(P<0.01);各实验组海马内的Cyt-C表达均高于额叶。结论NSCs移植可以改善AD模型大鼠的学习记忆能力,降低AD模型大鼠脑内的Cyt-C含量,NSCs移植可以改善AD模型大鼠的痴呆症状。     

铁梭葡胺标记对骨髓干细胞向神经样细胞分化影响的实验研究

目的探讨铁梭葡胺(SHU555A)体外标记大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)对其向神经样细胞分化的影响。方法在大鼠BMSCs培养液中分别加入10×稀释的SHU555A纳米颗粒10、20、40、80 μl,使铁的终浓度分别为14 μg/ml(14μg/ml标记组)、28 μg/ml(28 μg/ml标记组)、56 μg/ml(56 μg/ml标记组)和112 μg/ml(112 μg/ml标记组);另取无铁培养液的BMSCs作为对照组。各组BMSCs经DMSO+丁羟茴醚诱导6 h后,分别采用RT PCR和Western blot法检测神经上皮干细胞蛋白(nestin)、神经元特异性烯醇化酶(NSE)和神经胶质原纤维酸性蛋白(GFAP)的mRNA表达和nestin表达。结果与对照组比较,不同浓度标记组nestin、NSE和GFAP的mRNA均呈高表达,但差异无统计学意义(P0.05)。各组nestin表达差异无统计学意义(P0.05)。结论 14～112μg/ml的SHU555A标记浓度对大鼠BMSCs向神经样细胞分化无明显影响。     

大鼠海马神经干细胞的原代培养方法

目的探索总结一种简单、高效的大鼠海马神经干细胞原代培养方法。方法选取新生24 h的SD大鼠,剥离出双侧海马,用机械吹打法制成细胞悬液,加入培养液,接种于培养皿中,3 d后半量换液,5~7 d后可传代。每天在荧光倒置显微镜下观察细胞的生长状况,采用免疫荧光法对第2代神经干细胞进行鉴定。结果本方法能准确分离出海马组织,培养出的神经干细胞中无其他混杂的细胞生长,经鉴定呈兔抗巢蛋白(Nestin)阳性和5-嗅-2-脱氧尿苷(BrdU)阳性。结论运用本方法获得的海马神经干细胞纯度高、细胞活力高、增殖能力强。     

淫羊藿苷对阿尔茨海默病模型大鼠记忆能力及其海马内GFAP、TNF-α、IL-6表达的影响

目的 观察淫羊藿苷(ICA)对脂多糖诱导的阿尔茨海默病炎症模型大鼠记忆能力的影响,并探讨其作用机制.方法 大鼠八臂迷宫训练成功后,36只Wistar大鼠随机分为对照组、模型组、ICA低剂量组、ICA高剂量组,侧脑室注射脂多糖建立AD炎症模型,八臂迷宫实验检测大鼠的空间记忆障碍,免疫组化法(SP法)检测大鼠海马内胶质纤维酸性蛋白(GFAP)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素6 (IL-6)的表达.结果 治疗结束后,与模型组相比,高剂量组大鼠的TE 、RME、WME均明显减少(P＜0.01),低剂量组大鼠的错误选择次数无统计学意义(P＞0.05).与模型组相比,大鼠海马GFAP、TNF-α、IL-6的表达在高剂量组明显降低(P＜0.01),低剂量组无统计学意义(P>0.05).结论 淫羊藿苷能显著改善AD模型大鼠的学习记忆能力,其作用机制可能是通过抑制胶质细胞的增生活化、抑制炎症对神经细胞的损伤实现的.     

电针对阿尔茨海默病大鼠海马胶质细胞源性神经营养因子及受体的影响

目的探讨电针对阿尔茨海默病(AD)大鼠海马胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)及受体GFR-a1表达的影响。方法通过Morris水迷宫筛选56只健康Wistar大鼠,随机分为正常组、模型组、西药组和电针组,每组14只。正常组常规饮水和饲料,不给予任何处理。其余三组大鼠均采用聚集态Aβ25~35所致AD模型,模型组造模后不给予任何处理。电针组施以电针双肾俞、双太溪、双足三里、百会、大椎等穴位治疗。西药组采用盐酸多奈哌齐灌胃,疗程4 w。治疗后各组大鼠灌注固定后取海马,用免疫组化和RT-PCR检测大鼠海马GDNF及受体的表达。结果与正常组大鼠比较,模型组大鼠海马GDNF及其受体GFR-a1阳性细胞表达降低明显(P0.05);与模型组比较,电针组和西药组大鼠海马GDNF、GFR-a1阳性细胞及GDNF mRNA表达增加(P0.05)。结论电针可能通过对AD大鼠海马GDNF及其受体GFR-a1表达增强的影响,对神经元起到保护作用。     

阿尔茨海默病的分子机制与神经干细胞移植治疗

随着分子生物学技术的突破，人们逐渐尝试在分子水平解释AD的发病机理。通过对AD的特征性病理改变SP和NFT的研究。发现一些蛋白如Aβ及其前体APP、tau蛋白、载脂蛋白E(ApoE)、早老素(Presenilin，PS)等在发病过程中起着极为重要的作用。     

不同剂量17β-雌二醇对血管性痴呆大鼠的神经保护作用

目的探讨不同剂量17β-雌二醇对血管性痴呆（vascular dementia，VD）大鼠认知功能及海马CA1区神经胶质纤维酸性蛋白（glial fibrillary acidic protein，GFAP）、神经型一氧化氮合酶（neuronal nitric oxide synthase，nNOS）表达的影响。方法取健康雄性Wistar大鼠50只，随机分成假手术组、模型组、治疗组（又分为80、200、400μg／kg组），每组10只大鼠。采用结扎双侧颈总动脉方法制备VD模型，治疗组于术后第2天予以腹腔注射17β-雌二醇，假手术组和模型组给予等量消毒花生油。连续给药30次，隔天1次，共60d。手术后60d应用Y迷宫法检测大鼠学习、记忆能力（测试30次的正确次数）；采用免疫组化法检测大鼠海马CA1区GFAP、nNOS的表达情况。结果假手术组，模型组，治疗组中80、200、400μg/kg组学习能力的正确次数分别为25．8±1．8、15．5±2．0、21．2±2．2、23．7±2．0、20．5±2．1；记忆能力的正确次数为26．2±1．7、16．0±1．9、21．3±1．7、23．4±2．1、21．6±2．0。GFAP阳性细胞数分别为16．5±1．7、28．8±1．6、23．4±1．4、20．2±1．6、27．6±2．0；nNOS阳性细胞数为30．3±2．5、17．8±1．7、22．1±1．9、25．8±1．7、21．4±1．8。模型组与其他组比较，学习、记忆能力、GFAP及nNOS阳性细胞表达，差异均有统计学意义（F=37．620，P=0．000；F=39．112，P=0．000；F=91．484，P=0．000；F=58．839，P=0．000）。200μg/kg组与80、400μg/kg组比较差异亦有统计学意义（F=4．983，P=0．000；F=16．718，P=0．000）。结论17β-雌二醇能够明显改善慢性缺血后大鼠的认知功能障碍，其机制可能与降低GFAP、提高nNOS阳性细胞表达有关；其疗效与剂量有关，200μg／kg的雌二醇对大鼠神经保护作用优于80μg／kg及400μg／kg。     

脉冲射频对神经源性疼痛大鼠脊髓GFAP、PICK1水平的影响

目的探讨脉冲射频对神经源性疼痛(NP)大鼠脊髓胶质原纤维酸性蛋白(GFAP)、蛋白激酶C-α1相互作用蛋白(PICK1)水平的影响。方法 150只雄性成年SD大鼠随机分为假性手术组、模型组、脉冲射频2 Hz组、4 Hz组、8 Hz组,每组30只。分别于术前、术后1、3、7、14 d记录各组大鼠热缩腿反射潜伏期(TWL)、机械缩足反射阈值(MWT),抽取各组大鼠脊髓应用Western印迹法测定各组脊髓中GFAP蛋白、PICK1蛋白水平。结果模型组、2 Hz组、4 Hz组、8 Hz组术后1、3、7、14 d TWL、MWT水平显著短于假性手术组(P<0.05),模型组显著短于射频2 Hz组、4 Hz组、8 Hz组(P<0.05);随着射频频率增加,TWL、MWT水平显著升高(P<0.05),模型组、射频2 Hz组、4 Hz组、8 Hz组脊髓术后1、3、7、14 d GFAP、PICK1表达水平显著高于假性手术组(P<0.05),模型组高于射频2 Hz组、4 Hz组、8 Hz组(P<0.05);而射频组中随着作用频率的增加,脊髓GFAP蛋白、PICK1蛋白表达水平显著下降(P<0.05)。结论脉冲射频能有效减轻坐骨神经压迫性损伤所致NP大鼠热和机械性痛觉过敏,能有效抑制脊髓GFAP、PICK1表达;随着射频频率的增加,效果越理想,射频对NP有治疗效果。