广西肝癌高发区原发性肝细胞癌 HBV X 基因的整合及影响因素分析

目的 了解广西肝癌高发区乙型肝炎病毒（hepatitis B virus,HBV）X区基因在肝细胞癌（hepatocellular carcinoma,HCC）染色体中的整合及影响因素。方法 以30例与HBV相关的原发性肝细胞癌患者为研究对象。提取HCC组织及癌旁组织标本DNA作为模板,以HBV X基因上游序列和人类基因组Alu重复序列为引物,应用重复序列-多聚酶链反应（Alu-PCR）扩增整合的HBV X片段及两侧的人类基因组DNA片段。扩增产物进行测序,计算目的片段整合率并分析相关的影响因素。结果 18例HCC组织检测到HBV X基因的整合片段,整合率为60.00%（18/30）;26例癌旁组织检测到HBV X基因的整合片段,整合率为86.67%（26/30）。癌旁组织HBV病毒整合率高于HCC组织,差异有统计学意义（χ²=5.445,P=0.020）。不同性别、年龄、HBeAg、HBV DNA、ALT、AST的HCC癌组织及其癌旁组织HBV X基因整合率比较差异均无统计学意义（P＞0.05）。结论 广西肝癌高发区癌旁组织比HCC组织HBV整合率高,说明HBV整合发生在感染早期。HBV X基因整合与HCC患者性别、年龄、HBeAg、HBV DNA、ALT、AST无明显关系。     

整合型HBVDNA前C区突变和p53基因突变与肝细胞癌发生的关系

背景与目的:乙型肝炎病毒 (hepatitis B virus, HBV)的慢性感染是肝细胞癌 (hepatocellular carcinoma, HCC)发生的主要危险因素,但其确切的作用机理还不清楚.本研究拟探讨整合型 HBV 前 C区突变、 p53基因突变与 HCC发生的关系,以期更好地了解 HCC发生的分子机理.方法 :应用聚合酶链反应技术( PCR)和聚合酶链反应-单链构象多态 (single strand conformation polymorphism analysis of polymerase chain reaction products, PCR SSCP) 技术对 28例肝癌组织、 25例癌旁肝硬化组织、 12例肝硬化组织和 15例正常肝组织标本内的整合型 HBV DNA及其前 C区基因突变和肝细胞 p53基因突变进行检测分析.结果:( 1)正常肝组织、肝硬化组织、癌旁肝硬变组织和肝癌组织中整合 HBV DNA 阳性率分别为 6.66%、 66.67%、 96.43% 和 96.43%,正常肝组织与其它三组间阳性率差异有非常显著性( P< 0.005); (2)4组整合型 HBV DNA前 C区突变率分别为 0%、 25.00% 、 48.15% 和 70.37%, 4组间的突变率差异有显著性( P< 0.05); ( 3)肝癌组织的 p53基因突变率( 57.14%)明显高于肝硬化组( 16.67%) (P< 0.05);( 4)不同肝组织中 p53基因突变率与整合 HBV DNA 阳性率、 HBV前 C区基因突变率呈正相关.结论:在肝细胞癌的发生、发展中整合 HBV DNA及其前 C区基因突变和 p53基因突变可能起协同作用.     

HBV DNA阳性肝癌患者血清HBeAg检测与肝细胞癌复发转移的关系

目的:研究HBV DNA阳性肝癌(HCC)患者血清HBeAg检测与肝细胞癌复发转移的关系.方法: HBV DNA阳性HCC肝切除术患者60例,HBV DNA阴性HCC肝切除术患者60例.60例HBV DNA阳性HCC患者中依据肿瘤病灶局限、肉眼以及镜下均无肝内播散和门静脉浸润的低侵袭组,共28例;肿瘤组织伴有多发性肝内播散和(或)门静脉主肝癌栓者为高侵袭组,共32例.检测患者术前及术后1周血清HBV DNA水平,观察肝功能变化并检测血清HBeAg水平.结果:HBV DNA阳性组与HBV DNA阴性组比较,60例HBV DNA阳性HCC患者中HBeAg阳性患者为48例,阳性率为80%,60例HBV DNA阴性HCC患者中HBeAg阳性患者为12例,阳性率为20%,(P<0.05).不同侵袭组HBeAg表达比较: 32例高侵袭组中29例HBeAg检测阳性,阳性率为90.62% ,28例低侵袭组中19例HBeAg检测阳性, 阳性率为67.86%,(P<0.05).结论:早期肝癌患者血清HBV DNA和HBeAg可作为肝细胞癌复发转移监测指标.     

用原位杂交对树鼩肝组织乙型肝炎病毒DNA定位及其与黄曲霉毒素B_1在肝癌发生中的作用

用生物素标记的HBV DNA探针对经83～158周实验的55只树鼩肝组织的福尔马林固定、石蜡包埋的切片进行原位分子杂交研究。在45只接种过人HBV的树鼩中,有30只在肝细胞检出HBV DNA。这55只树鼩,有41只摄入了AFB_1,其中肝细胞HBV DNA阳性的A组22只,有10只发生了HCC;19只HBVDNA阴性的B组,只发生2例HCC,两组差别显著(P<0.05)。未接触过AFB_1的14只树鼩中,肝细胞HBVDNA阳性的8只(C组),发生1例HCC;而HBV DNA阴性的6只(D组)无HCC发生。提示HBV和AFB_1在诱发树鼩HCC中起协同作用;并支持HBV感染与HCC存在病因学关系的观点。该实验HBV DNA阳性物质主要分布于癌外肝细胞胞浆内,少数位于肝细胞核。癌组织内HBV DNA阳性率低于癌外肝组织。与在人肝癌研究的结果一致。表明树鼩是研究HBV致癌分子机理的较好的模型。     

MSRE-gPCR技术分析多基因DNA甲基化对肝细胞癌的诊断价值

背景与目的:DNA甲基化是潜在的肿瘤标志物.本研究运用自行建立的甲基化敏感性限制性内切酶一定量PCR(methylation-sensitive restriction enzymes-based quantitative PCR,MSRE-gPCR)方法检测肝细胞癌(hepatocellutar carcinoma,HCC)组织中多个基因的DNA甲基化状态,筛选可用于HCC诊断的DNA甲基化标志物组合.方法:以47对HCC患者癌组织和癌旁组织、8例正常人肝组织为材料,运用MSRE-gPCR方法检测这102例肝组织中APC、GSTPI、RASSFIA、p16、SFRP1、RUNX3、Hint1、SOCS1和HIC-1基因的启动子甲基化状态.结果:APC、GSTPI、RASSF1A、p16、SFRP1、RUNX3基因在肿瘤组织中的甲基化率分别为70.2%、70.2%、63.8%、29.8%、44.7%和36.2%,均显著高于对应癌旁组织(P均＜0.05);而Hintl、SOCSI和HIC-1基因甲基化水平在HCC肿瘤和癌旁组织间无显著差异.联合检测APC、GSTP1、RASSF1A和SFRP1 4个靶点,可检出所有HCC病例.这些基因的甲基化水平与患者肿瘤大小、分化、包膜及HBV感染等临床病理参数均无显著相关性.结论:联合检测APC、GSTPI、RASSFIA和SFRPI的DNA甲基化状态对于HCC风险评估和分子诊断具有重要价值.     

酒精性肝病中的肝细胞癌:无HBV感染的证据

流行病学资料表明,HBV 感染有发生HCC 的高度危险。分子杂交分析更证实 HBVDNA 整合入 HBV 携带者的大多数 HCC 组织的细胞基因中。在 HBsAg 阴性的慢性肝病患者包括酒精性肝硬化和HCC病人中,HBV DNA 也可被检出。这些发现表明,在HBsAg阴     

乙型肝炎病毒感染在肝细胞癌发生机制中的研究进展

肝细胞癌（HCC）是世界范围内常见的恶性肿瘤之一,乙型肝炎病毒（HBV）感染是引起HCC的最主要原因。HBV 通过DNA整合影响插入点附近宿主基因的功能,促使宿主基因组的不稳定,产生具有致癌作用的融合蛋白;HBV的x基因产物（HBx蛋白）具有广泛的反式激活功能,如调控细胞的凋亡,抑制细胞DNA的修复,干扰细胞内信号通路及改变表观遗传学等。本文结合近年相关报道对HBV相关HCC流行和发生、HBV DNA整合、HBx蛋白等相关研究作一综述。     

肝癌及癌旁肝组织内HBsAg和HBV—DNA定位研究

全国肝癌病理协作组研究表明肝细胞癌(HCC)和乙型肝炎病毒(HBV)感染的病理学相关性。Gowans首先应用原位分子杂交技术检测肝细胞内HBV-DNA,以及由Blum完臻这项技术以来,使HBV感染和HCC发生的相关性病理学研究提高到一个新水平。本文应用免疫组织化学ABC染色法和原位分子杂交技术检测经福马林溶液固定,石蜡包埋的肝癌及癌旁肝组织块内HBsAg和HBV-DNA。在免疫病理学和分子病理学水平上进一步研究HBV感染和HCC的相关性。     

人肝癌细胞内HBV DNA和HBsAg的分布及意义

用原位分子杂交和免疫组化技术双标记方法,在31例人肝细胞癌(HCC)的石蜡切片中检测HBV DNA和HBsAg。在31例HCC中,20例(64.5％)HBV DNA阳性,14例(45.2％)HBsAg阳性,8例(25.8％)HBV DNA和HBsAg两者同时阳性。HBV DNA主要分布于癌细胞的胞浆内(20例),也见于胞核内(16例)及核浆内(16例)。此结果表明,HCC的发生与HBV感染有密切关系。     

1986年肝细胞癌研究进展

一般认为,仅次于慢性乙型肝炎病毒(HBV)感染的慢性嗜酒与肝细胞癌(HCC)有重要关系,尤其是在非HBV感染者中。除改变免疫反应外,诱导活化致癌剂的微粒体酶影响DNA的代谢和修复,被认为是最重要的因素。在一些国家中,推测酒与猪肉的消耗是HCC的一个重要危险因素。在HBV标志     

肝细胞再生结节、变异肝细胞结节与肝细胞癌之间的对照观察

 【摘要】 目的 研究变异肝细胞结节（NAH）的形成和进展及其与肝细胞癌（HCC）的关系。方法 对HCC、来自癌周肝组织的NAH和普通再生结节（ORN）各50个进行组织学观察;通过免疫组织化学反应显示不同病变中乙型肝炎病毒（HBV）抗原表达水平,评价细胞增殖活性,检测p53蛋白异常积累。结果 在本组50例HCC切除标本的癌周肝组织中均检测到多个变异肝细胞病灶（FAH）和NAH,自FAH到HCC的演进过程中存在一系列连续的结构和形态变化;在ORN到NAH和HCC的演进过程中HBV表面及核心抗原的表达水平逐渐降低,Ki-67抗原表及指数逐渐升高,而p53蛋白异常积聚仅见于HCC,其程度随组织学分级的升高而增高。结论 NAH在慢性乙型肝炎和肝硬变的切除标本中也可以检测到,有一系列的形态学改变可供识别,具有较高的增殖活性。NAH可能代表一种常见的HCC前期病变而用于HCC发生的监测。     

组织相容抗原和肝细胞癌的研究

Sherlock等首先报告了肝癌与HBsAg的关系。而后很多国家报导了肝细胞癌(HCC)病人HBsAg的高发生率、其滴度存在差别,e抗体阳性率有增高的倾向。HCC的发生率虽有种族差异,但在HBsAg携带者中发生HCC的危险性是正常人的50倍至350倍,其死亡率相差28.3倍。 有人提出HBsAg和HCC之间的关系可能是互为因果关系的假说,其病程的发展模式为:幼年的HBV感染→HBV携带状态→慢性活动性感染→肝硬变→肝癌。 论证上述假说的根据有:(1)在培养的人肝癌细胞中产生HBsAg;(2)肝癌患者癌细胞染色体组中有HBV的DNA整合;(3)肝癌患者95％以上有乙型肝炎病毒感染;(4)肝癌患者血清中含有     

原位杂交技术研究乙肝病毒感染与原发性肝癌的关系(附50例报告)

本文利用生物素标记探针从细胞定位水平对50例原发性肝癌(HCC)手术活检标本进行了HBV DNA检测。 32例(64％)HCC切片中检出HBV DNA,其中25例(50％)系肝癌细胞与癌旁肝细胞内均检出HBV DNA,其余7例则仅在癌旁肝细胞内检出HBV DNA。光镜下观察,HBV DNA的分布具有胞浆内为主;癌旁肝细胞优势性、HCC阳性者同时伴有癌旁肝细胞阳性及不均一性等特点。上述结果提示至少占半数的HCC病例其癌细胞可能来自HBV DNA阳性肝细胞的恶变,但HBV DNA在恶变过程中的确切作用尚需进一步研究。     

原发性肝细胞癌组织Shh和Ptch-1与Gli-2表达及生物学意义的研究

目的:探讨原发性肝细胞癌(HCC)Sonic hedgehog信号通路信号肽Shh、膜受体Ptch-1和核转录因子Gli-2的表达及其生物学意义.方法:将44例HCC组织及其相应的癌旁肝组织制成含88个微组织的组织芯片,采用免疫组织化学方法分别检测了Shh、Ptch-1和Gli-2在两种组织中的表达情况.结果:在HCC组织中,Shh与Ptch-1阳性率(63.6%和45.5%)均显著高于癌旁肝组织(36.4%和25.0%),P均<0.05.Gli-2在HCC中表达阳性率(68.2%)显著高于癌旁肝组织(38.6%),P<0.01;且与HCC的组织学分级以及侵袭性相关,P均<0.05;与肿瘤大小和HBV感染无关.结论:增强的Gli-2活性导致细胞异常增殖,其所引起的Shh信号通路的过度激活可能促进HCC的发生和发展.     

肝细胞癌衍生生长因子与肝细胞癌的相关性

目的:研究肝细胞癌衍生生长因子(hepatoma-derived growth factor,HDGF)与肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)临床病理特征的相关性.方法:收集100例HCC患者术后的癌组织标本和10例正常肝组织标本及其临床病理资料.采用组织芯片技术和免疫组织化学法检测HCC、癌旁以及正常肝组织中的HDGF蛋白表达.结果:HDGF在细胞核和细胞质表达,在HCC组织中阳性率为58%,癌旁组织及正常肝组织中阳性表达率为34%和20%,差异具有统计学意义(P<0.05);HDGF表达与癌组织的分化程度及TNM分期密切相关(P<0.05).结论:HDGF在HCC组织中的表达显著高于癌旁组织和正常肝组织,HDGF与HCC分化程度和TNM分期相关.     

Raf激酶抑制蛋白和P-ERK在肝细胞癌中的表达及其临床意义

目的:探讨Raf激酶抑制蛋白(Raf kinase inhibitor protein,RKIP)和磷酸化细胞外信号调节激酶(phos-extracellular signal regulated kinase,P-ERK)在肝细胞癌( hepatocellular carcinoma,HCC )中的表达及其临床意义.方法:应用免疫组织化学方法检测RKIP和P-ERK在HCC、癌旁及正常肝组织中的表达,并分析其与HCC临床病理学特征的关系.结果:HCC组织中RKIP的表达低于癌旁及正常肝组织,而P-ERK的表达高于癌旁及正常肝组织,差异有统计学意义;HCC组织中RKIP与P-ERK 的表达呈显著负相关( r =-0.227, P =0.039);RKIP在HCC组织中的表达与有无肝内或淋巴结转移及肿瘤分化程度相关( P <0.05);P-ERK在HCC组织中的表达与肿瘤分化程度、有无癌栓及有无肝内或淋巴转移相关( P <0.05).结论:RKIP表达的减少或缺失与HCC的发生、发展密切相关,RKIP表达的减少或缺失可能通过上调P-ERK的表达促进HCC的侵袭和转移.     

腺瘤性结肠息肉病基因甲基化在肝细胞癌分子诊断中的价值

目的:建立甲基化敏感性限制性内切酶-定量PCR(methylation-sensitive restriction enzyme-quantitative PCR,MSRE-qPCR)方法,并应用该方法探讨血浆腺瘤性结肠息肉病(adenomatous polyposis coli,APC)基因甲基化检测在肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)诊断中的应用价值。方法:用HhaⅠ消化DNA样品,qPCR技术评估酶切效率,建立优化的MSRE-qPCR方法。用MSRE-qPCR法检测45例肝组织(20例HCC及其相应匹配的非癌组织和5例正常肝组织)中APC甲基化水平;应用亚硫酸氢盐测序PCR(bisulfi te sequencing PCR,BSP)对MSRE-qPCR检测结果进行验证,并与甲基化特异性PCR(methylation-specifi c PCR,MSP)检测方法比较。运用MSRE-qPCR技术检测72例HCC、37例肝良性病变和41例健康志愿者血浆标本的APC甲基化状态。结果:建立的MSRE-qPCR方法可定量检测低至1%的APC甲基化片段。MSRE-qPCR和MSP检测结果均显示,HCC组织中APC基因发生高频率甲基化。MSRE-qPCR检测结果经BSP验证准确无误,且与MSP检测结果具有较好的一致性(Kappa=0.955,P<0.0001)。HCC患者血浆APC甲基化水平高于肝良性病变及健康志愿者(P<0.0001)。血浆APC甲基化分析与血清甲胎蛋白(alpha-fetoprotein,AFP)联合检测可提高HCC诊断效率。结论:MSRE-qPCR可定量检测APC甲基化水平。血浆APC甲基化分析对于HCC的非侵入性诊断具有重要价值。     

nm23—H1蛋白和c-erbB-2蛋白在人肝细胞癌中的表达

应用免疫组化检测68例肝细胞癌（HCC）及其癌旁肝组织中nm23－H1蛋白和c－erbB－2蛋白的表达。结果显示nm23－H1蛋白在癌旁肝组织中均呈强阳性表达，肝细胞癌组织中38／68（56％）例呈阳性表达。阳性产物主要定位于肿瘤细胞胞浆，nm23－H1蛋白表达与HCC肿瘤体积、组织病理学分型及分级无关，而与肝内或肝外转移呈负相关。结果表明nm23-H1在抑制HCC肝内或肝外转移中起着重要作用。有可能成为评价HCC病人预后的一项指标。     

广西HBV相关肝细胞癌及其癌旁组织中HBV S基因突变分析

目的 了解广西乙型肝炎病毒（hepatitis B virus, HBV）相关肝细胞癌 (hepatocellular carcinoma,HCC)组织及其癌旁组织中HBV S基因突变分布状况。方法 收集2015—2016 年于广西医科大学附属肿瘤医院手术切除的43例HBV相关HCC患者癌组织及其癌旁组织。采用巢式PCR扩增HBV S基因片段并测序,Chromas和DNAMAN软件分析S基因序列。结果 肝细胞癌患者HBV S基因热点突变在癌组织及癌旁组织中的分布差异无统计学意义（P>0.05）;小分子蛋白（small hepatitis B surface antigen, SHBs）终止突变只存在于癌组织中,突变位点分别为sC69*、sW74*、sL94*、sW172*和sW182*。结论 广西HBV相关HCC癌组织及其癌旁组织HBV S基因热点突变分布无特异性,SHBs终止突变可能影响HCC发生发展。     

肝细胞癌病因与HBV、烟草和乙醇消耗量的关系

作者收集了194例肝细胞癌(HCC)组及456例住院对照组的吸烟、饮酒史,并对该结果连同所有病例的HBsAg、抗-HBs和抗-HBc的血清学检测结果及HCC有无肝硬化作了分析。HBsAg阳性者中,肝细胞癌的相对危险度(RR)为13.7(8.0～23.5),而抗-HBs阳性者中,危险度小,但无统计学差异。有肝硬化而HBsAg阳性者的相对危险度明显较高(与无肝硬化而HBsAg阳性者相比为30.7:7.1)。提示HBV影响肝细胞癌的发生至少通过两个不同的潜在机理(DNA整合和肝细胞的再生)。适量的乙醇消耗不影响肝细胞癌的相对危险度,但吸烟与HBsAg阴性的肝细胞癌之间有统计学意义并有剂量依赖关系。在欧洲