丙型肝炎病毒非结构区3（NS3）I、Ⅱ型血清反应性的比较研究

目的：研究丙型肝炎病毒（HCV）非结构区3（NS3）I型、Ⅱ型血清反应性。方法：利用表达载体PBVIL1对HCV全长NS3区I型、Ⅱ型抗原表位进行克隆表达，经纯化获得电泳纯的抗原。经酶联免疫吸附（ELISA）的方法检测丙型肝炎179份总抗体可疑阳性血清，再用NS3区I、Ⅱ型抗原进行相应抗体检测。结果：通过测定HCV－NS3区I型、Ⅱ型抗体，179份HCV－NS3区I型阳性检出105份，HCV－NS3区Ⅱ型阳性检出95例。结论：重组表达的HCV－NS3 I型、Ⅱ型抗原对丙型肝炎病毒血清反应略有不同。二者具有一定的互补性。     

丙型肝炎病毒不同编码区重组抗原在抗体检测中的应用

目的　探讨丙型肝炎病毒 (HCV)不同编码区重组蛋白片段的免疫反应性及其在抗体检测中的应用。方法　分别以 4种HCV单片段抗原 (C、NS3、NS4或NS5 )检测抗 HCV抗体阳性血清 ;以 4种单片段抗原的混合物 (MIX)检测抗 HCV抗体阳性血清、大学生体检血清和抗 HCV抗体阴性质控血清。结果　 90份抗 HCV抗体阳性血清中共有 75份可与一种或多种单片段抗原反应 ,阳性率分别为 70 .0 % (C)、6 1.1% (NS3)、5 2 .2 % (NS4 )、4 4 .4 % (NS5 ) ,其中仅与C、NS3、NS4和NS5一种抗原发生反应的分别有 8份、1份、2份和 3份血清标本 ;90份抗 HCV阳性血清经MIX抗原检测 ,阳性率为 83.3% (75 / 90 ) ;10 0份大学生血清和39份阴性质控血清经混合抗原检测均阴性。结论　HCV不同编码区重组蛋白片段有不同的免疫反应性 ,在发展抗 HCV抗体诊断试剂时 ,应采用各种不同编码区的混合抗原。     

献血人群中丙型肝炎病毒第1高变区抗体检测及意义

目的研究丙型肝炎病毒(HCV)第一高变区(HVR1)抗体检测在献血者血液筛查中的意义。方法采用融合F4HVR1抗原检测不同血清样本中的抗-HVR1的存在情况,并与现有C、NS3、NS4、NS5抗体进行比较。结果在HCV-RNA阳性样本中,HVR1抗体的阳性率为96.8%;在90份可疑HCV感染血清中HVR1抗体的阳性率为61.1%,与C区、NS3区接近,高于NS4区、NS5区(P<0.05),共检测出4份单独HVR1抗体阳性血清。结论在现有HCV诊断试剂基础上,对献血人群进行HCV-HVR1抗体的检测可以提高血液筛查灵敏度,减少HCV的经血传播。     

丙型肝炎患者HCV分片段抗体的检测及分析

[目的] 研究丙肝感染者体内各分片段抗体的分布情况，以及与总抗体和HCVRNA之间的关系。[方法] 用一种新的丙型肝炎病毒抗体分片段酶联免疫测定试剂盒检测100份抗HCV总抗体阳性血清和100份抗HCV总抗体阴性血清中四种HCV分片段抗体(HCV-C、HCV-NS3、HCV-NS4、HCV-NS5)的存在情况。[结果] 100份抗HCV总抗体阴性血清中97份血清四种分片段抗体阴性，符合率为97％，有三份分片断抗体检测为阳性，分别为HCV-C、HCV-NS3阳性，HCV-C、HCV-NS3、HCV-NS4三抗体阳性，HCV-NS3、HCV-NS4阳性；100份抗HCV总抗体阳性血清中两种(或以上)分片段抗体检测阳性的标本有100份，符合率为100％。[结论] 4种分片段抗体阳性共有15种分布模式，其中HCV-C片段抗体阳性率最高有96％，HCV-C( )、HCV-NS3( )2个分片段抗体阳性率次之为80％。     

丙型肝炎病毒抗体单片段检测与总抗体检测的比较分析

目的通过对国产HCV抗体分片段酶联免疫检测试剂与进口第三代抗HCV检测试剂检测丙型肝炎病毒抗体的研究来了解丙肝病毒抗体单片段检测的意义。方法采用国产基因重组表达的丙型肝炎病毒不同区(C、NS3、NS4、NS5)特异性抗原分别包被酶标板,以间接EIA法检测75例丙肝患者血清中不同区特异性抗体,并以Abbott公司第三代抗HCV试剂进行总抗体检测,同时做HCVRNA检测。结果75例血清中HCV不同区抗原片段NS3、HCVC、NS4、NS5的抗体检出率分别为933%(7075)、920%(6975)、707%(5375)、640%(4875),含两个片段以上的抗体检出率为947%(7175);抗HCV总抗体的检出率为987%(7475);HCVRNA检出率为774%(5875)。结论HCV不同区抗原片段的抗体检出率有差别,NS3、HCVC检出率较高,其次为NS4、NS5。两种试剂有较好的相关性,HCV抗体单片段试剂可作为检测丙型肝炎病毒抗体的补充试剂,单独片段抗体阳性具有一定意义,动态观察NS3、NS4抗体水平可预测IFN的治疗效果。     

蛋白芯片检测丙型肝炎病毒分片段抗体

目的用蛋白芯片的方法检测丙型肝炎病毒(HCV)分片段抗体。方法利用生物芯片技术和化学发光技术将高度纯化的抗原HCV Core、NS3、NS4、NS5以特定微阵列固定在固相载体上,用化学发光免疫法检测抗HCV Core、抗HCV NS3、抗HCV NS4和抗HCV NS5。结果174份血清中HCV抗体阳性87份,HCV抗体阴性87份,其中献血员33份,非丙型肝炎的其他肝病患者39份,非肝病者15份。87例雅培公司的AxSYM(微粒子发光)检测抗HCV阳性患者中,蛋白芯片检出阳性85份,阳性率为97.70%;在174份标本中,蛋白芯片检出阳性标本88份,其中抗HCV阳性87份,阳性率98.86%;抗HCV NS3检出49份,阳性率为55.68%;抗HCV NS4检出68份,阳性率为77.27%;抗HCV NS5检出37份,阳性率为42.05%;抗HCV Core检出69份,阳性率为78.41%。结论蛋白芯片显示较高的敏感性和特异性,具有临床实用价值。     

蛋白芯片检测丙型肝炎病毒分片段抗体

目的 用蛋白芯片的方法检测丙型肝炎病毒（HCV）分片段抗体。方法 利用生物芯片技术和化学发光技术将高度纯化的抗原HCV Core、NS3、NS4、NS5以特定微阵列固定在固相载体上,用化学发光免疫法检测抗HCV Core、抗HCV NS3、抗HCV NS4和抗HCV NS5。结果 174份血清中HCV抗体阳性87份,HCV抗体阴性87份,其中献血员33份,非丙型肝炎的其他肝病患者39份,非肝病者15份。87例雅培公司的AxSYM（微粒子发光）检测抗HCV阳性患者中,蛋白芯片检出阳性85份,阳性率为97．70％;在174份标本中,蛋白芯片检出阳性标本88份,其中抗HCV阳性87份,阳性率98．86％;抗HCV NS3检出49份,阳性率为55．68％;抗HCV NS4检出68份,阳性率为77．27％;抗HCV NS5检出37份,阳性率为42．05％;抗HCV Core检出69份,阳性率为78．41％。结论 蛋白芯片显示较高的敏感性和特异性,具有临床实用价值。     

长春地区17，000献血员初复检抗HCV阳性标本中不同功能区抗体的状况及试剂改进的建议

[目的] 对献血员初检和复检抗HCV阳性及可疑血液标本同步进行不同功能区抗体状况的分析研究，以期发现问题和为今后的改进提供依据。[方法] 用两种国产抗HCVEIA检测试剂和一种进口试剂对长春地区17，000献血员进行筛选，检测出80份阳性样品，再用抗HCV单片段旁证试剂检测、同步分析四种抗体的反应强度和分布状况。[结果] HCV-Core、NS3、NS4、NS5均为阳性的26份，HCV-C^ NS3^ NS4^ 的11份，HCV-C^ NS3^ NS5^ 的9份，HCV-C^ NS3^ 的10份，HCV-C^ NS4^ 的3份，HCV-NS3^ NS5^ 的1份，HCV-NS4^ NS5^ 的1份，而Core^ ，NS3^ ，NS4^ 单独阳性分别为10、8、1。[结论] 根据抗HCV不同功能区抗体的分布状况，提示抗HCV检测试剂中两种国产试剂均可能存在着个别的漏检现象，主要是NS3抗体；建议国产试剂尚需提高和改进HCV非结构区抗原，尤其是NS3抗原，同时也应改进NS4抗原。     

HCV核心抗原检测用于丙型肝炎早期诊断的价值评估

目的 探讨丙型肝炎病毒核心抗原(HCV-c Ag)检测用于丙型肝炎早期诊断的价值.方法 对门诊体检人群、无偿献血人群进行HCV抗体初检、复检,筛选HCV阳性血清标本(HCV抗体初检、复检均为阳性)、HCV可疑血清标本(初检或复检HCV抗体单项结果阳性)检测HCV核心抗原;同时对单项ALT增高的标本、血液筛查合格标本进行HCV核心抗原的检测.对HCV核心抗原阳性标本做HCV RT-PCR检测.结果 56例HCV阳性血清标本检测出HCV-c Ag阳性15例,49例HCV可疑血清标本检测出HCV-c Ag阳性11例,47例单项ALT增高的标本检测出HCV-c Ag阳性1例,112例合格标本未检出HCV-c Ag阳性.HCV-c Ag阳性标本经PCR测定HCV-RNA阳性23例.结论 HCV-c Ag检出时间早于抗体,缩短了检测"窗口期",可用于丙型肝炎的早期诊断.     

丙型肝炎病毒抗体双抗原夹心法酶联免疫试剂的初步临床评价

目的对研制的丙型肝炎病毒抗体（双抗原夹心）酶联免疫检测试剂进行临床评价。方法以克隆表达的HCV多表位嵌合蛋白作为包被抗原,经多表位嵌合蛋白修饰后用于标记抗原,研制HCV双抗原夹心酶联免疫检测试剂;检测血液筛查阴性标本440份,乙肝表面抗原阳性标本90份,HIV抗体阳性标本10份,梅毒螺旋体抗体阳性标本90份及丙型肝炎病毒抗体阳性标本259份。结果对259份HCV抗体阳性标本进行检测时,有3份标本未检出,应用Chiron RIBA确认试剂检测后,结果为阳性。其余标本的检测结果均为阴性。结论采用HCV双抗原夹心酶联免疫检测试剂共检测889份标本,其中只有3份标本结果不一致,总符合率99．7％,敏感性和特异性较好。     

生物素化HCV多抗原表位融合基因的克隆及可溶性表达

为了建立丙型肝炎病毒抗体(HCV-Ab)的双抗原夹心ELISA检测方法．克隆表达带有生物素标签的Hcv多种抗原优势表位融合蛋白，选取HCV各抗原如Core，NS3，NS4，NS5和E的优势抗原表位片段编码序列．克隆重组为融合基因，插入Pinpoint^TM Xa-1 T载体中诱导表达，并用Western blot进行抗原性及标签生物素活性鉴定；表达抗原经Promega SoftLink Soft Release Avidin Resin系统亲和层析纯化后包被酶联板，用抗HCV单片段抗体阳性血清对表达融合蛋白各区的抗原性作间接ELISA法鉴定。结果显示：成功构建了带有生物素标签的HCV多抗原表位融合基因表达载体，该载体可在JM109(DE3)中可溶性表达目的蛋白，表达产物携带生物素标签，融合的各片段区均具有良好的抗原性。结论：所构建融合抗原可可溶性表达，可以用作双抗原夹心ELISA的酶标抗原．所含生物素标签也可用作酶联检测的生物素一亲和素信号放大系统。     

丙型肝炎病毒(HCV)NS3抗原检测方法的建立与临床应用

用基因工程表达的丙型肝炎病毒 ( HCV) NS3蛋白 ,制备兔抗 - HCV NS3抗体 ,建立检测 HCVNS3抗原的 EL ISA法。该法特异性好 ,批内和批间 CV分别为 5.4%～ 8.9%和 7.8%～ 9.8% ,临床检测结果表明 :60例慢性丙型肝炎患者 ;30例抗 - HCV- Ig G合并 Ig M阳性病人 ;2 50例抗 - HCV- Ig G病人 ;2 0 0例透析病人 ;2 0例白血病病人 ;1 50例普通病人 ;30 0例供血员中 HCV NS3抗原阳性检出率分别为1 3.3% ,2 3.3% ,1 0 .4% ,3.0 % ,5.0 % ,2 .6% ,1 .0 %。结果显示 NS3抗原的检测 ,可作为一种新的方法 ,能更好地反映患者体内 HCV的感染情况     

慢性丙型病毒性肝炎患者自身抗体动态变化与HCV-RNA基因型关系研究

目的研究慢性丙型肝炎病毒感染者体内自身免疫抗体的动态变化,及其与HCV-RNA基因型的关系。方法 62例慢性(丙型病毒性肝炎患者HCV感染经RT-PCR证实。HCV基因型的检测采用Simmonds基因分型法。抗线粒体抗体(AMA)、抗肝肾微粒体抗体(LKM)、抗可溶性肝抗原(SLA)、抗去唾液酸糖蛋白受体抗体(ASG)和抗肝细胞膜抗原抗体(LMA)采用ELISA检测。结果 62例慢性丙型病毒性肝炎患者中,54例(87.75%)为Ⅰ型HCV感染,其中Ⅰa型4例(6.45%),Ⅰb型38例(61.27%),Ⅰc型12例(19.35%);4例(6.45%)为Ⅱa型;1例(1.63%)为混合型(Ⅰb型+Ⅱa型);2例(3.25%)为未分型。同时检测出Ⅰ型HCV感染的54例中有21例检出自身抗体阳性(38.9%),Ⅱa型HCV感染的4例中有1例检出自身抗体阳性(25%)。Ⅰb型和Ⅱa型混合感染的1例及未分型的2例均为阴性。62例HCV感染者中自身抗体阳性者共22例(35.48%),其中男7例(24.14%),女15例(44.45%),两者比较差异有统计学意义(P<0.05)。阳性患者平均年龄为(55.67±6.75)岁明显高于阴性患者(40.21±7.51)岁,差异有统计学意义(P<0.05)。结论在该地区的慢性丙型病毒性肝炎患者中,基因型分布以Ⅰb型为主。HCV感染者中普遍存在自身抗体,自身抗体的出现与年龄及性别有明显关系,但与HCV基因型无明显相关。基因Ⅰ型HCV感染者抗病毒治疗可诱发自身抗体水平的升高,但它是一过性的现象,在抗病毒治疗结束后部分自身抗体可降低甚至消失。     

HCV分片段抗原EIA与重组免疫印迹法分析检测HCV抗体的比较研究

【目的】探讨国产丙型肝炎病毒(HCV)分片段抗体试剂的敏感性和特异性,为丙型肝炎的早期诊断和替代昂贵的进口重组免疫印迹法确认试剂(HCV RIBA3.0)提供实验依据。【方法】用HCV分片段抗体试剂检测经确认的标本中HCV-C、NS3、NS4、NS5抗体并与HCV RIBA3.0比较。【结果】82份样品中80份判定为阳性,阳性率为97.56%,2份判定为可疑,为2.4%,40份阴性样品中有2份判定可疑,为5.00%。【结论】国产分片段抗体检测试剂检测HCV抗体,与美国第三代RIBA3.0试剂的检测符合率基本一致,有低价高效的临床实用价值。     

丙型肝炎病毒核心抗原检测试剂的研制及初步应用

目的　研制丙型肝炎病毒核心抗原 (HCV cAg)ELISA检测试剂 ,用于诊断早期丙型肝炎。方法　用基因工程表达的HCV cAg ,免疫Balb/c小鼠 ,制备抗HCV cAg单克隆抗体 ,建立检测HCV cAg双抗体夹心酶联免疫吸附试验 (ELISA) ;以此检测 12 5份抗 HCV、抗 HIV、抗 TP阴性 ,但单项ALT高的献血者血浆。结果　 12 5份单项ALT高的献血者血浆中检出 9份HCV cAg阳性。结论　HCV cAg双抗体夹心ELISA试剂 ,有望用于早期丙型肝炎诊断。     

部分ELISA抗-HCV阴性和阳性血清丙肝抗体分片段检测分析

目的　探讨ELISA抗 HCV检测的血液丙肝不同基因抗体的反应性和血液HCV感染的具体情况。方法留取本站抗 HCV阴性血清 1 6 8份、阳性血清 80份、可疑血清 6 2份 ,分别进行丙肝分片段检测 ,检测阳性的血清再进行HCVRT PCR检测。结果　 1 6 8份阴性血清、80份阳性血清及 6 2份可疑血清中不同基因抗体的阳性数分别为 3份、76份和 2 4份 ,HCVRT PCR的阳性结果分别为 0份、5 7份和 1 1份 ,两个以上片段检测结果阳性的血清与RT PCR结果高度符合 ,单独C区和NS3阳性的血清仍有一半以上RT PCR结果阳性 ,1例NS5阳性的血清RT PCR检测阳性。结论　HCV C和NS3抗体是抗 HCV阳性的主要血清标志 ,但NS4和NS5抗体在抗 HCV检测中也具有重要意义     

电化学发光法联合检测HIV抗原抗体试剂的评价

目的 评价Roche电化学发光法联合检测HIV抗原抗体试剂的检测性能.方法 收集包括健康献血员、人类免疫缺陷病毒( HIV)感染者、丙型肝炎病毒(HCV)抗体阳性和高危人群在内的血清样本1 327例.购买美国BBI公司的7套HIV血清转换盘共计51份血清样本.采用Roche cobas e411(架式系统)电化学全自动...     

丙型肝炎病毒抗体（双抗原夹心）与HCV-IgM检测试剂性能对比研究

[目的]对研制的丙型肝炎病毒抗体（双抗原夹心）与HCV—IgM检测试剂进行对比，探门丙型肝炎病毒感染早期诊断意义。[方法]收集早期丙型肝炎病毒感染的样品43份，慢性丙肝患者27份，应用建立的丙型肝炎病毒抗体（双抗原夹心）及HCV—IgM检测试剂同时对比检测。[结果]建立的丙型肝炎病毒抗体（双抗原夹心）检测试剂与HCV—IgM对早期丙型肝炎病毒感染样品及慢性患者检出符合率均为100％，而间接抗HCV检测试剂在早期感染样品有1份检测阴性。[结论]建立的丙型肝炎病毒抗体（双抗原夹心）可同时检测抗HCV-IgG和IgM，抗HCVIgM在早期检测的抗体滴度高于慢性感染者。     

某地区丙型病毒性肝炎患者HCV基因分型研究

目的 了解该地区丙型病毒性肝炎(以下简称丙型肝炎)患者丙型肝炎病毒(HCV)基因分型情况.方法 分别以ELISA和重组免疫印迹试进行血清标本抗HCV抗体筛查和确认,对抗HCV抗体阳性标本用实时荧光定量PCR进行病毒载量检测.对病毒载量大于103 copy/mL的标本用多重PCR进行HCV基因分型.结果 125例抗HCV抗体阳性标本中,HCV基因型主要为1b、2a、3a、1c、2c的检出率分别为58.4%、21.6%、3.2%、4.0%和8.0%.结论 该地区HCV感染主要以1b型为主,其次是2a和3a型,检出其他地区少见的1c和2c型,说明该地区丙型肝炎流行的基因型呈多样性.     

HCV-NS3抗原基因的克隆表达及活性测定

[目的]研制新的更符合我国HCV感染株的NS3抗原，以进一步提高HCV免疫检试剂的灵敏度。[方法]对HCV／NS3（1192-1457aa）片段序列进行在线Blast分析，根据共有序列（consensus）设计并合成引物。以Trizol法从病人血清中提取总RNA，经反转录PCR扩增获得NS3相应目的基闪，插入载体、经测序正确后，克隆表达，表达产物经纯化后用间接ELISA法测定其反应活性。[结果]从病人血清中获得了NS3部分基闪片段，测序证明所获得的序列和我们以前的la型NS3序列有18个不同的氨基酸残基。重组新NS3抗原经活性测定，反应灵敏度有较大提高。[结论]新获得的HCV-NS3可用于试剂盒抗原，以提高对我国HCV感染病人检测的灵敏度。