稳定表达MnSOD细胞系的建立及对电离辐射损伤的作用

通过基因转染技术将人ＭｎＳＯｃＤＮＡ载体导入中国仓鼠卵巢（ＣＨＯ）细胞,建立了稳定表达有义和反义ＭｎＳＯＤ的细胞系,并用引细胞模型初步探讨了ＭｎＳＯＤ在电离辐射损伤中的作用,从正两个方面说明了ＭｎＳＯＤ对电离辐射敏感性的影响。     

锰超氧化物歧化酶过表达对H2O2诱导PC12细胞凋亡的影响

目的 揭示锰超氧化物歧化酶（ＭｎＳＯＤ）在Ｈ２Ｏ２诱导ＰＣ１２细胞凋亡中的作用及机制。方法 转染人正义和反义ＭｎＳＯＤ基因的ＰＣ１２细胞,用５０μｍｏｌ Ｈ２Ｏ２攻击已转染的细胞系,并采用ＭＴＴ法、流式细胞术和Ｈｏｅｃｈｓｔ染色方法研究Ｈ２Ｏ２的细胞毒作用。结果 转染正义ＭｎＳＯＤ的细胞比原细胞的ＭｎＳＯＤ酶活性提高１．３倍,而转染反义ＭｎＳＯＤ细胞的酶活性降低６７％。结论 Ｈ２Ｏ２对ＰＣ１２细胞毒作用是通过诱发ＰＣ１２细胞凋亡作用来实现的;ＭｎＳＯＤ具有抑制Ｈ２Ｏ２诱导ＰＣ１２细胞凋亡作用,涉及线粒体的损伤,导致氧化还原失衡继而诱导细胞凋亡。     

MnSOD与GPx过表达保护活性氧诱导细胞死亡的效应比较

叔本基脂氢过氧化物和百草枯是一类具有细胞毒性作用和活性氧种，超氧化物歧化酶和谷胱甘肽过氧化物酶是细胞内清除活性氧种的重要抗氧化物。本研究以稳定表达ＭｎＳＯＤ与ＧＰｚ与ＣＨＯ细胞系为细胞模型，通过分析细胞存活能力和线粒体功能比较研究了ＭｎＳＯＤ与ＧＰｘ对ｔＢＯＯＨ和Ｐａｒａｑｕａｔ诱导细胞死亡的不同影响。     

肿瘤患者淋巴细胞和粒细胞超氧化物歧化酶活力分析

测定了５２例消化道肿瘤患者（２１例结肠癌，２１例胃癌，１０例食管癌）外周血淋巴细胞、粒细胞的铜锌超氧化物歧化酶（ＣｕＺｎＳＯＤ）、锰超氧化物歧化酶（ＭｎＳＯＤ），并与４８例健康人进行了比较。肿瘤患者粒细胞总ＳＯＤ、ＭｎＳＯＤ、ＣｕＺｎＳＯＤ活性均显著高于对照组，淋巴细胞总ＳＯＤ活性亦较对照组显著升高。淋巴细胞ＳＯＤ活性以及ＭｎＳＯＤ含量远大于粒细胞。提示肿瘤患者淋巴细胞和粒细胞ＳＯＤ活性增高可能与免疫功能有关，值得进一步探讨。     

含有机硅三元多嵌段共聚物的研究5.含有机硅三元多嵌段共聚物的形态结构

利用ＤＭＡ，ＴＥＭ和ＳＡＸＳ对ＰＳＦ－ＰＤＭＳ－ＰＨＳｎ，ＰＳＦ－ＰＤＭＳ－ＰＨＥｎ，ＰＰＯ－ＰＤＭＳ－ＰＨＳｎ和ＰＨＳ－ＰＤＭＳ－ＰＢＥｎ四种三元多嵌段共聚物的形态结构进行了研究，结果表明，不同三元多嵌段共聚物中三种链段的相互作用情况不同，其动态力学性能和形态结构有很大差异，并与嵌段共聚物微相分离的几种基本形态不同，特别是通过ＴＥＭ在ＰＳＦ－ＰＤＭＳ－ＰＨＳｎ和ＰＰＯ－ＰＤＭＳ－ＰＨＳｎ中观察到清晰的互容界面相。     

原发性肝癌患者手术前后血浆T—SOD Mn—SOD CuZn—SOD活性含量的变化

测定了２４例原发性肝癌患者治疗前后血浆Ｔ－ＳＯＤ、Ｍｎ－ＳＯＤ、ＣｕＺｎ－ＳＯＤ活性，同时测定４５名正常对照者血浆的含量。经统计学分析，肝癌患者血浆Ｔ－ＳＯＤ、Ｍｎ－ＳＯＤ活性与正常对照组比较有显著性差异（Ｐ〈０．０５），手术治疗前与术后有显著性差异（Ｐ〈０．０５）；术前Ｔ－ＳＯＤ、Ｍｎ－ＳＯＤ活性明显高于正常对照组和术后，而术后两项均逐渐恢复正常，即与正常对照组无显著性差异（Ｐ〉０．０５），说明     

老年性脑梗塞、脑动脉硬化症和非胰岛素依赖性糖尿病患者血清超氧化物歧化酶的临床实验研究

本文应用亚硝酸盐法测定了老年性脑梗塞４２例、脑动脉硬化症６１例和非胰岛素依赖性糖尿病（ＮＩＤＤＭ）３３例血清超氧化物歧化酶（ＳＯＤ）并与健康老年人（对照组）对照比较，结果显示：在脑梗塞疾病组中，锰超氧化物歧化酶（ＭｎＳＯＤ）和铜锌超氧化物歧化酶（ＣｕＺｎＳＯＤ）均有非常显著的差异（Ｐ＜０．００１），总超氧化物歧化酶（ＴＳＯＤ）无差异（Ｐ＞０．０５）；在脑动脉硬化症组中，ＴＳＯＤ无差异（Ｐ＞０．１），而ＭｎＳＯＤ增高，ＣｕＺｎＳＯＤ降低，与对照组比较均有非常显著的差异（Ｐ＜０．００１）；在ＮＩＤＤＭ组中，ＴＳＯＤ降低，ＭｎＳＯＤ增高，ＣｕＺｎＳＯＤ降低，与对照组比较均有非常显著的差异（Ｐ＜０．００１）。     

原发性肝癌患者手术前后血浆T—SODMn－SODCuZn－SOD活性含量的变化

测定了２４例原发性肝癌患者治疗前后血浆Ｔ—ＳＯＤ、Ｍｎ—ＳＯＤ、Ｃｕｚｎ—ＳＯＤ活性，同时测定４５名正常对照者血浆的含量。经统计学分析，肝癌患者血浆Ｔ—ＳＯＤ、Ｍｎ—ＳＯＤ活性与正常对照组比较有显著性差异（Ｐ＜０．０５），手术治疗前与术后有显著性差异（Ｐ＜０．０５）；术前Ｔ—ＳＯＤ、Ｍｎ—ＳＯＤ活性明显高于正常对照组和术后，而术后两项均逐渐恢复正常，即与正常对照组无显著性差异（Ｐ＞０．０５），说明Ｔ－ＳＯＤ、Ｍｎ－ＳＯＤ活性变化与肝痛病情密切相关，并能反映出肝癌治疗效果和预后，对临床有一定指导意义。原发性肝癌患者ＣｕＺｎ—ＳＯＤ治疗前、后与正常对照组三者都没有显著性差异（Ｐ＞０．０５），表明该项测定对原发性肝癌诊断与治疗无实际意义。     

30例慢性上颌窦炎病人血清中丙二醛含量及超氧化物歧化酶活…

对３０例慢性上颌窦炎病人血清中ＭＤＡ含量及ＳＯＤ活力测定结果表明：与健康人相比，ＭＤＡ含量和Ｍｎ－ＳＯＤ活力显著增加，Ｔ－ＳＯＤ和ＣｕＺｎ－ＳＯＤ活力显著减少。     

慢性上颌窦炎病人血清MDA含量及SOD活力测定

对３０例慢性上颌窦炎病人血清丙二醛（ＭＤＡ）含量及超氧化物岐化酶（ＳＯＤ）活力测定，ＭＤＡ含量显著增多，ＳＯＤ总量（Ｔ—ＳＯＤ）及铜锌ＳＯＤ（ＣｕＺｎ—ＳＯＤ）活力显著减少，锰ＳＯＤ（Ｍｎ—ＳＯＤ）活力显著增加，提示在慢性上颌窦炎病理过程中也有超氧自由基参与。     

MnSOD与GPx过表达保护活性氧诱导细胞死亡的效应比较

叔丁基脂红过氧化物（tBOOH）和百草枯（Paraquat）是一类具有细胞毒性作用的活性氧种，超氧化物歧化酶（MnSOD）和谷胱甘肽过氧化物酶（GPx）是细胞内清除活性氧种的重要抗氧化酶。本研究以稳定表达MnSOD与GPx的CHO细胞系为细胞模型，通过分析细胞存活能力和线粒体功能比较研究了MnSOD与GPx对tBOOH和Paraquat诱导细胞死亡的不同影响。结果表明，MnSOD能选择性地阻断Paraquat的细胞毒作用，而GPx则选择性地阻断tBOOH的细胞毒性作用。该结论揭示了不同的活性氧物质通过不同的机制诱发细胞死亡，而选择不同的抗氧化酶能特异地阻断活性氧的细胞毒性作用。同时提示，保护线粒体功能可能是抗氧化酶保护细胞免受活性氧种损伤的一个重要方面。     

Radioresistance of MnSOD and its relation with Bcl-2 and p53 mRNA expression

OUrpreviousresearchbarkshowedtLhatoverexpressionofmanganesesuperotidedismutase(MnSOD)inChinesehamsterovary(CHO)cellsnotcuLlyprotectedcellsfromnecrosisinducedbyletLhaldosesofXrayL'Jbutalsofmapoptosisinducedh}TlowdosesofX.y:".MnSODisanuclearencededthetochondriamatrixenZymethatedestSinallaerobiccellsandtLheradioresistanceofthecellsiscloselyassociatedwithitSprotectiveeffectonmitochondria.Singularly,Bcl-2hasalsobeenshot'vitolocateinthedrit.h..dri.[3)andsuppressaPOptosisinducedbyionizingra…     

白藜芦醇对人肺细胞株放射损伤的保护作用及其机制研究

目的探讨白藜芦醇对X射线照射后人支气管上皮细胞HBE和人胚肺成纤维细胞MRC5损伤的保护作用及可能机制。方法培养HBE和MRC5细胞,分为4个组:对照组(Vehicle)、白藜芦醇组(resveratrol,Res)、X射线照射组(RT+Vehicle)、白藜芦醇和X射线联合组(RT+Res)。Res(终浓度5μmol/L)为X射线前2h给药,X射线(20Gy,8.33Gy/min,照射144s)照射后,分别对各组细胞的形态、超微结构、生长活力、DNA损伤、凋亡情况进行观察;同时检测胞内的活性氧(ROS)、丙二醛(MDA)含量、总超氧化物歧化酶(SOD)活性、总谷胱甘肽(GSH)含量。结果 X射线能对HBE和MRC5细胞造成明显的损伤。白藜芦醇能有效地减轻X射线对细胞形态和超微结构的破坏,缓解X射线对细胞活力的影响和DNA的损伤,降低X射线照射后细胞的凋亡、降低细胞ROS的水平和MDA的含量,增加细胞总GSH的含量和总SOD的活性。结论白藜芦醇对HBE和MRC5细胞的放射损伤具有保护作用,其机制与减轻氧化应激损伤有关。     

共济失调-毛细血管扩张症致病基因RNA干扰对胶质瘤细胞放射敏感性的影响

目的:观察共济失调-毛细血管扩张症致病基因(ATM基因)的RNA干扰对胶质瘤细胞放射敏感性的影响.方法:选择ATM基因不同区域的DNA序列合成并纯化寡核苷酸后转染人胚胎肾脏细胞HEK293,根据对ATM蛋白不同的阻断效应,筛选用于制备ATM发夹结构short hairpin structure(shRNA)基因的最佳序列.将有效序列克隆入pSilencer 1.0-U6载体中,构建出shRNA的表达质粒并转染恶性胶质瘤细胞系U87细胞.以U87细胞为对照,应用Western blot检测细胞中ATM基因的表达;以细胞存活分数(SF)来评估放射敏感性.结果:Western blot显示shRNA介导的ATM基因沉默能明显阻断U87细胞中的ATM蛋白;与U87细胞相比,U87 shRNA细胞SF明显降低,P＜0.05.结论:由ATM shRNA构建的表达质粒能明显抑制ATM表达,增加胶质瘤细胞的放射敏感性.     

The hypothesis of an effective safe and novel radioprotective agent: hydrogen-rich solution

Most ionizing radiation-induced damage is caused by radical oxygen species (ROS). Some radioprotectors, such as amifostine, exert radioprotective effects by scavenging radical oxygen species. Recent studies show that hydrogen (H) has antioxidant activities that protect the brain and intestine against ischaemia-reperfusion injury and stroke by selectively reducing hydroxyl and peroxynitrite radicals. However it is seldom regarded as a radioprotective agent. In like manner we hypothesize that hydrogen may be an effective, specific and novel radioprotective agent. But H2 is explosive, while hydrogen-rich solution (solution such as physiological saline saturated with molecular hydrogen) is safer.     

NADPH Oxidase Accounts for Changes in Cerebrovascular Redox Status in Hindlimb Unweighting Rats

ObjectiveThe roles of cerebrovascular oxidative stress in vascular functional remodeling have been described in hindlimb-unweighting (HU) rats. However, the underlying mechanism remains to be established.
MethodsWe investigated the generation of vascular reactive oxygen species (ROS),Nox2/Nox4 protein and mRNA levels, NADPH oxidase activity, and manganese superoxide dismutase (MnSOD) and glutathione peroxidase-1 (GPx-1) mRNA levels in cerebral and mesenteric smooth muscle cells (VSMCs) of HU rats.
ResultsROS production increased in cerebral but not in mesenteric VSMCs of HU rats compared with those in control rats.Nox2 and Nox4 protein and mRNA levels were increased significantly but MnSOD/GPx-1 mRNA levels decreased in HU rat cerebral arteries but not in mesenteric arteries. NADPH oxidases were activated significantly more in cerebral but not in mesenteric arteries of HU rats. NADPH oxidase inhibition with apocynin attenuated cerebrovascular ROS production and partially restored Nox2/Nox4 protein and mRNA levels, NADPH oxidase activity, and MnSOD/GPx-1 mRNA levels in cerebral VSMCs of HU rats.
ConclusionThese results suggest that vascular NADPH oxidases regulate cerebrovascular redox status and participate in vascular oxidative stress injury during simulated microgravity.     

大肠癌细胞 XRCC2基因对电离辐射损伤的反应

目的：构建稳定的XRCC2基因沉默大肠癌细胞系及阐明沉默XRCC2基因表达的大肠癌细胞对电离辐射损伤的反应。方法采用Western blot法检测不同肿瘤细胞系人大肠癌细胞系（ T84、HT29、Lovo）、食管癌EC9706细胞、乳腺癌MCF－7细胞和人正常胚肾HEK293细胞中XRCC2蛋白的表达水平。大肠癌T84细胞经0、2、4、8、12 Gy X射线照射后和8 Gy X线照射后0、6、24、48 h,用Western blot法和实时定量PCR法测定XRCC2蛋白和mRNA的表达水平。将XRCC2 shRNA质粒转染T84细胞,用嘌呤霉素进行细胞筛选,采用Western blot法和实时定量PCR法,检测沉默XRCC2蛋白和mRNA表达的效率。将XRCC2 shRNA质粒转染T84细胞,经X线照射后,采用单细胞凝胶电泳测定沉默XRCC2基因表达的T84细胞的DNA损伤修复。结果与人正常胚肾HEK293细胞相比,在不同肿瘤细胞系中XRCC2蛋白均呈不同程度的高表达,其中在大肠癌T84细胞中XRCC2蛋白表达最高。随着X线照射剂量的增加,T84细胞中XRCC2蛋白的表达水平逐渐升高,8 Gy照射后XRCC2蛋白表达水平在48 h内随着时间的延长而逐渐升高;XRCC2 mRNA表达也表现出随剂量增加和时间延长而逐渐升高。与未处理的细胞相比,转染XRCC2 shRNA质粒的细胞中XRCC2蛋白和mRNA表达明显下降,约分别减少了70％和60％。照射后的T84细胞DNA损伤修复中shRNA－XRCC2组TDNA％、TM和OTM均显著高于未处理组和shR-NA－SC组,差异有统计学意义（t＝15.12、11.36、13.15,P＜0.01）。结论成功建立了稳定表达XRCC2基因沉默的大肠癌T84细胞系,XRCC2基因沉默导致辐射诱导的DNA损伤修复能力下降。     

腺病毒介导MnSOD基因转染对香烟烟雾提取物致内皮细胞氧化损伤及凋亡的影响

目的探讨香烟烟雾提取物(CSE)对内皮细胞氧化损伤及凋亡的影响,腺病毒介导锰超氧化物岐化酶(MnSOD)基因转染内皮细胞后,能否部分抑制CSE致内皮细胞的氧化损伤及凋亡。方法体外培养人脐静脉内皮细胞株(ECV304),质粒转染MnSOD基因后将内皮细胞分为3组:对照组、空质粒组及MnSOD组,同时分别给予0%、5%及10%CSE刺激。收集不同CSE浓度刺激后的培养上清液和细胞爬片,TBA法检测上清丙二醛(MDA)浓度,TUNEL法检测细胞凋亡率。结果(1)CSE刺激对照组内皮细胞,可致MDA浓度增加和细胞凋亡,存在CSE浓度和时间依赖性。(2)与空质粒组比较,CSE刺激后MnSOD组MDA含量和凋亡减少,有统计学意义(P<0.05)。结论(1)CSE能导致内皮细胞氧化损伤及凋亡。(2)腺病毒介导MnSOD基因可以部分抑制香烟烟雾提取物致内皮细胞氧化损伤及凋亡。     

外源蛋白在CHO细胞染色体上一个新位点的定点整合和稳定表达

寻找中国仓鼠卵巢（CHO）细胞染色体上稳定表达位点是解决CHO细胞长期培养表达不稳定问题的有效手段。本课题组前期利用慢病毒转染将示踪基因（Zsgreen1）整合CHO细胞染色体上并发现多个潜在稳定表达位点。本研究验证了其中一个位点稳定表达外源蛋白的能力,该位点位于染色体NW_003614241.1上148 052～148 157 bp区域。首先观察Zsgreen1基因的表达情况,随后采用CRISPR/Cas9技术将增强绿色荧光蛋白（EGFP）基因定点整合至该位点,获得3株EGFP基因定点整合的细胞,经60代悬浮培养,细胞荧光强度无明显变化,证明此位点可稳定表达EGFP基因。采用同样方法构建了表达人血清白蛋白（HSA）基因的重组CHO细胞株,经Western blot验证,此位点可分泌表达HSA,表明上述位点可定点整合和稳定表达外源蛋白。