颗粒细胞凋亡对卵母细胞发育潜能的影响

未成熟卵体外培养成熟(IVM)是近十几年在辅助生殖领域新兴起来的一种助孕技术。其主要原理是模拟体内卵母细胞的发育成熟环境,使从卵巢采集的未成熟卵母细胞在体外培养成熟,然后予以受精,胚胎培养和移植,获得妊娠[1]。目前体外培养的卵母细胞的成熟率低及受精率低,形成的胚胎发     

颗粒细胞凋亡对卵母细胞发育潜能的影响

未成熟卵体外培养成熟(IVM)是近十几年在辅助生殖领域新兴起来的一种助孕技术.其主要原理是模拟体内卵母细胞的发育成熟环境,使从卵巢采集的未成熟卵母细胞在体外培养成熟.然后予以受精,胚胎培养和移植,获得妊娠[1].     

人类不成熟卵体外培养的应用

1935年Pincus和Enzmann在家兔的实验中发现,若将不成熟卵母细胞从卵泡中释放出来,它在体外适当培养基中可发育成熟.这一现象使人们开始联想到从体内抽取的不成熟卵母细胞可在体外培养成熟,并可用来挽救发育中即将退化的卵母细胞,同时可能应用于临床提供卵子用于体外受精.人不成熟卵细胞的体外成熟(in vitro maturation, IVM),由Cha[1]首先报道成功从手术穿刺卵巢获得不同成熟阶段的未成熟卵母细胞,在体外培养到成熟卵母细胞而进行体外受精和胚胎移植.随后Trounson等[2]报道在阴道B超引导下穿刺2～10 mm直径的卵泡,未接受促激素刺激的多囊卵巢综合征(PCOS)患者卵巢获得不成熟卵进行体外培养并获得成功妊娠.     

LH对未成熟卵子体外培养成熟及发育潜能的影响

目的 探讨在体外培养液中添加LH(促黄体生成激素)对人未成熟卵母细胞体外培养成熟(IVM)及继续发育潜能的影响.方法 56例多囊卵巢综合征(PCOS)患者进行64个IVM周期治疗,其中36例共36周期在体外培养液中添加LH;另20例共28周期培养液中未添加LH.结果 LH组和对照组的卵母细胞体外培养成熟率、受精率、卵裂率、优胚率、平均胚胎移植数分别为:65.47％vs 73.02％、70.91％ vs 78.26％、92.31％ vs 86.11％、48.15％vs45.98％、2.07vs2.00,差异均无统计学意义(P＞0.05);胚胎种植率、临床妊娠率分别为:20％vs8.33％、41.67％ vs 28.57％,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 LH可能改善了未成熟卵母细胞体外成熟后胚胎的继续发育潜能.     

人类未成熟卵母细胞的体外成熟培养研究进展

随着人类生育年龄的推迟及二胎政策的全面放开,不孕症、卵巢早衰、卵巢储备功能不足等女性生殖疾病罹患率也呈逐年上升趋势。人类未成熟卵母细胞的体外成熟(in vitro maturation,IVM)培养一直是国内外生殖医学领域研究者关注的热点。体外培养卵泡生长状态受获取卵泡途径、培养环境、培养方案等多种因素影响。文章就人类未成熟卵母细胞IVM培养的临床适应证、培养方案及影响因素作一综述,为相关研究人员和临床工作者提供参考。更多还原     

卵母细胞的体外成熟

卵母细胞的体外成熟(in vitro maturation, IVM)是指将GV期或GV前期的卵母细胞在体外培养,达到次级卵母细胞(MII),能够正常受精、发育和着床,包括完整的卵泡培养[1]和单纯的卵丘复合体培养.目前应用于辅助生殖技术的主要限于后者.     

自然周期未成熟卵体外培养治疗多囊卵巢综合征性不孕症的临床研究

目的研究在自然周期获取未成熟卵母细胞体外培养成熟（IVM）治疗多囊卵巢综合征（PCOS）性不孕症的临床疗效。方法57例行体外受精一胚胎移植助孕的PCOS患者,共62个周期,获取434个未成熟卵母细胞进行体外培养,成熟后行单精子卵胞浆内注射,受精后取优质胚胎移植宫腔,统计获卵数、受精率、卵裂率和妊娠率。结果62个周期共培养出成熟卵子293个,成熟率为67．5％;271个卵子受精,受精率92．5％,卵裂率81．2％,其中52个周期进行胚胎移植,周期取消率为16．1％;17例患者妊娠,移植周期妊娠率32．7％。结论IVM是治疗多囊卵巢综合征性不孕症的有效方法。     

Hela细胞MPF对未成熟卵母细胞的体外促成熟作用分析

【目的】研究Hela细胞M期促进因子MPF对未成熟卵母细胞的体外促成熟作用的生物活性,并观察单个成熟卵母细胞的中期染色体。【方法】应用秋水仙胺将Hela细胞阻滞在有丝分裂的中期（meta—phase）,从中提取MPF蛋白;体外培养基分为无激素组、有激素素组、注射组,将MPF提取物通过显微注射,分别导入3组培养基中的昆明小白鼠未成熟卵母细胞中,观察未成熟卵母细胞发生GVBD（生发泡破裂）、或者排出极体的数量,并对3组两两之间发生GVBD或者排出极体的情况,作统计分析;以及制备并观察成熟卵母细胞的中期相染色体。【结果】经过统计分析说明,发生GVBDD的情况,在注射组与无激素组之间差异有显著性（P〈0．05）;排出极体的情况,在注射组与无激素组之间,以及注射组与激素组之间差异有显著（P〈0．005,P〈0．05）。已经观察到了部分成熟卵母细胞的中期染色体。【结论】MPF提取物具有诱导小白鼠未成熟卵母细胞在体外提前恢复减数分裂的生物活性。     

卵泡刺激素和卵丘细胞对小鼠卵母细胞体外成熟的影响

目的：研究卵泡刺激素和卵丘颗粒细胞对体外培养的卵母细胞核成熟的影响。方法：未成熟卵母细胞来自人绝经期促性腺激素刺激后的小鼠卵巢。所得生殖泡期卵母细胞分成裸卵组和卵丘-卵母细胞复合物组，在分别添加0．1，0．5和1u／mL卵泡刺激素的合成人输卵管液培养液和不添加卵泡刺激素的合成人输卵管液培养液（对照组）中培养36h。培养过程中在倒置显微镜下观察各组卵母细胞生殖泡破裂和第一极体出现。出现第一极体的卵母细胞判为核成熟。结果：裸卵各卵泡刺激素组与对照组的卵母细胞生殖泡破裂发生率及第一极体排出率差别无显著性意义（P〉0．05）；卵丘-卵母细胞复合物各卵泡刺激素浓度组比对照组卵丘-卵母细胞复合物有更高的卵母细胞生殖泡破裂发生率及第一极体排出率（P〈0．05）；但各卵泡刺激素浓度组间卵丘-卵母细胞复合物的卵母细胞生殖泡破裂发生率及第一极体排出率差别无显著性意义（P〉0．05）。卵丘-卵母细胞复合物各组的卵母细胞生殖泡破裂发生率和第一极体排除率明显高于裸卵各组（P〈0．05）。结论：（1）卵丘细胞对卵母细胞的核成熟有重要作用。（2）卵泡刺激素对卵丘-卵母细胞复合物中卵母细胞核成熟有促进作用，其作用可能是通过颗粒细胞介导的。（3）卵泡刺激素对卵母细胞核成熟的促进作用可能主要是促进减数分裂的恢复。     

自然周期 IVF／M 手术管理及护理对策

目的：探讨自然周期IVF/M手术的管理模式。方法通过建立规章制度,人员管理、患者管理制度,做好患者的手术管理、健康管理,减轻患者术前心理焦虑及紧张状态,达到获得成熟卵母细胞和未成熟卵母细胞为目的。结果专科特殊性迫切需要建立一套完整的管理模式。结论根据自然周期IVF/M手术管理的特点,实施全程人性化服务,进行心理干预,是促进自然周期IVF/M技术成功应用的保障,是保证成熟卵母细胞和未成熟卵母细胞获得的关键,同时也是体现自然周期IVF/M手术管理的关键。     

卵子冷冻在体外受精-胚胎移植中的实验研究

目的研究人类不同成熟期卵子冷冻与复苏的实验条件,观察慢冻速融后卵子形态、存活状况,探讨卵子冷冻的方法。方法收集自愿捐赠获得的辅助生殖周期中的卵母细胞进行慢冻速融,观察成熟卵子(MII)和未成熟卵子(MI GV)的形态学变化以及未成熟卵冻融后体外成熟情况。结果本实验冻存卵子47例,存活18例,含13例成熟卵子(MII)和5例未成熟卵子(MI GV),存活率38.30%。结论本法冻融卵子有部分卵子获得短期存活,为今后卵子冷冻研究提供了一定的实验依据。     

不同成熟阶段、不同来源的人类卵子冷冻后发育潜能的比较

目的:探索卵子冷冻的成熟阶段及来源。方法:将153个不同来源的生发卵泡期(GV期)人类卵子分为3组,未冷冻组,体外培养至成熟阶段(MⅡ期),行单精子胞浆内注射(intracytoplasmicsperminjection,ICSI);MⅡ期冷冻组,体外成熟至MⅡ期,然后将MⅡ期卵子进行冷冻,解冻后将存活的卵子行ICSI;GV期冷冻组,将GV期卵子进行冷冻,解冻后体外培养至MⅡ期,然后再行ICSI。观察解冻后卵子存活情况、体外成熟情况、受精情况及胚胎发育情况。结果:(1)冷冻对卵子具有一定程度的损伤,但GV期冷冻组的存活率、受精率显著高于MⅡ期冷冻组。(2)促排周期来源的卵子的体外成熟率高于孕期及自然周期来源的卵子,孕期来源的未成熟卵子冷冻后具有一定的发育潜能。结论:在GV期进行冷冻可降低冷冻对卵子的伤害;孕期来源的未成熟卵子冷冻后具有一定的发育潜能。     

冷冻保存对人卵母细胞纺锤体及发育潜能的影响

背景:卵子冷冻技术的发展为人类辅助生殖技术带来重大的突破,但卵子冷冻的效果并不理想.目的:研究冷冻保存对不同成熟时期人卵母细胞纺锤体及发育潜能的影响.设计、时间及地点:随机对照细胞学体外实验,于2005-04/2006-05在重庆市妇幼保健院完成.材料:体外受精-胚胎移植和卵胞浆内单精子显微注射治疗周期中剩余的未成熟卵子(GⅤ期和MⅠ期).方法:将未成熟卵子随机分为对照组、MⅠ/GⅤ卵冷冻组和体外成熟后MⅡ卵冷冻组,用慢冻速融的方法对MⅠ/GⅤ卵和体外成熟的MⅡ卵进行冷冻和解冻,应用Polscope对卵子的纺锤体进行观察,并观察卵子的发育潜能.主要观察指标:不同组卵子的纺锤体可见率,体外成熟情况,冷冻不同时期卵子的复苏情况,及后期的受精、卵裂、可用胚胎情况.结果:对照组纺锤体可见率77.3%,明显高于MⅡ卵冻融组、MⅠ/GV卵冻融组(56.3%,53.8%,P<0.05),冷冻造成了纺锤体的损伤;冷冻后未成熟卵的体外成熟率下降,但无统计学差异;MⅡ期卵、MⅠ期卵和GⅤ期卵复苏率相似;对照组的受精率(81.8%)明显高于MⅡ卵冻融组、MⅠ/GⅤ卵冻融组(62.5%,59.0%,P<0.05),冷冻后的卵子受精能力受到损害;对照组的卵裂率与MⅡ卵冻融组差异无显著性意义(84.4%,72.7%,P>0.05),MⅡ卵冷冻组的卵裂没有受到明显影响;对照组的卵裂率与MⅠ/GⅤ卵冻融组差异有显著性意义(84.4%,52.9%,P<0.05),MⅠ/GⅤ卵冻融后卵裂率明显下降;冷冻组的胚胎质量下降,可用胚胎率明显降低.结论:控制性超排卵周期中剩余的未成熟卵子无论是直接冷冻还是先体外培养成熟后再冷冻,卵子的纺锤体都受到了一定的损伤,对卵子的发育潜能造成了影响.     

基于手法筛选的小鼠骨髓树突状细胞的体外培养方法

目的：通过建立简单经济的小鼠骨髓树突状细胞的体外培养方法，比较不同成熟状态下树突状细胞生物免疫学特性的变化。 方法：实验于2004-07／2005-06在南方医院检验医学中心完成。①取C57B／L小鼠骨髓细胞作为树突状细胞的前体细胞。将培养的树突状细胞分成两组，未成熟树突状细胞组(粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子+白细胞介素4诱导)；成熟树突状细胞组(粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子+白细胞介素4+脂多糖)，每天光镜观察各组细胞生长情况。第6天收集细胞，其形态采用电镜观察。②两组树突状细胞表型分析采用流式细胞仪分析。③取BALB／c小鼠脾脏细胞，分离T细胞作为反应细胞。用两组树突状细胞作为刺激细胞。按刺激细胞与反应细胞1∶5，1∶10，1∶20，1∶40的比例混合培养，并用T细胞悬液作阴性对照，观察混合淋巴细胞反应情况。 结果：①树突状细胞培养的光镜观察：未成熟树突状细胞多为圆形，少量菌幕样突起；脂多糖刺激后，树突状细胞呈悬浮状态，表面较多细长突起。②树突状细胞电镜观察结果：扫描电镜示未成熟树突状细胞表面皱褶和较少的毛刺；成熟树突状细胞表面大量树枝状细长突起。透射电镜示未成熟树突状细胞形态较规则，突起较少，胞浆内有许多吞饮泡及多泡体；成熟树突状细胞形态不规则，胞内囊泡结构减少，细胞器较丰富，细胞核偏向一侧，表面有细长树枝状突起。③各组树突状细胞表型分析：未成熟树突状细胞表面中度表达主要组织相容性复合体Ⅱ类分子，低水平表达CD40，CD86和CD25；成熟树突状细胞表面高度表达主要组织相容性复合体Ⅱ类分子，高水平表达共刺激分子。④混合淋巴细胞反应：未成熟树突状细胞只能轻度刺激同种T细胞增殖；成熟树突状细胞能够刺激T细胞大量增殖。 结论：采用重组小鼠粒-巨集落刺激因子和白细胞介素4联合诱导骨髓前体细胞可在体外培养出大量未成熟树突状细胞，低表达共刺激分子，体外诱导同种T细胞增殖能力较弱，呈现耐受性树突状细胞特性，有望应用于移植排斥反应及或自身免疫疾病的生物治疗。     

干细胞向卵母细胞样细胞分化研究进展

胚胎干细胞和成体干细胞如骨髓间充质干细胞等在特定的培养条件下可向卵母细胞样细胞分化,但形成的卵母细胞样细胞能否进行减数分裂并进一步生成有受精能力和发育潜能的配子尚不清楚。若能在体外将成体干细胞向有功能的卵母细胞样细胞诱导分化,并通过体外受精的方式生成健康的子代,将为卵子缺乏所致不育女性提供一条新的治疗途径。本文对近年发表的有关干细胞体外向卵母细胞样细胞分化的文献进行综述,以探讨其临床应用的可行性。     

铅对小鼠卵母细胞成熟和体外受精的影响

目的：探讨铅对小鼠生殖作用的影响。方法：采用小鼠卵母细胞体外培养、体外受精的方法研究了铅对小鼠卵母细胞的成熟和体外受精的影响。结果：铅对小鼠卵母细胞生发泡破裂没有影响,但可以抑制卵母细胞第一极体的释放,影响卵母细胞的存活率并可降低体外受精率和超排卵的卵母细胞数量,随着培养时间的延续,卵母细胞的第一极体的释放率和体外受精率都有显著提高,结论：铅可以破坏卵母细胞减数分裂进行,降低卵母细胞的受精能力,影     

铅对小鼠卵母细胞成熟和体外受精的影响

目的 :探讨铅对小鼠生殖作用的影响。方法 :采用小鼠卵母细胞体外培养、体外受精的方法研究了铅对小鼠卵母细胞的成熟和体外受精的影响。结果 :铅对小鼠卵母细胞生发泡破裂没有影响 ,但可以抑制卵母细胞第一极体的释放 ,影响卵母细胞的存活率并可降低体外受精率和超排卵的卵母细胞数量。随着培养时间的延续 ,卵母细胞的第一极体的释放率和体外受精率都有显著提高。结论 :铅可以破坏卵母细胞减数分裂进行 ,降低卵母细胞的受精能力 ,影响小鼠的正常生殖功能     

联合使用1-磷酸鞘氨醇和溶血磷脂酸对小鼠卵母细胞体外成熟和受精后胚胎发育的影响

目的通过在成熟培养液中联合添加或单独添加1-磷酸鞘氨醇(S1P)和溶血磷脂酸(LPA)研究对小鼠卵母细胞体外成熟和受精后胚胎发育的影响,以期为优化人卵母细胞的体外成熟系统和提高体外胚胎发育率奠定实验基础。方法 (1)成熟培养液中单独添加50~2 000 nmol/L S1P或1~100μmol/L LPA,体外成熟后的卵母细胞体外受精,得到的胚胎观察并统计卵裂率、8-细胞率、囊胚率。(2)成熟培养液中联合添加不同浓度组合S1P和LPA,体外成熟后的卵母细胞体外受精,得到的胚胎观察并统计卵裂率、8-细胞率、囊胚率。(3)对各组体外成熟得到的卵母细胞进行免疫荧光法染色,以评估MⅡ期卵母细胞纺锤体的完整性。(4)对各组得到的数据应用卡方检验进行分析。结果添加100 nmol/L S1P组的成熟率(81.0%)和8-细胞率(81.9%)显著高于0 nmol/L和2 000 nmol/L组;添加30μmol/L LPA的成熟率(81.8%)和8-细胞率(81.5%)显著高于0μmol/L和100μmol/L组;500 nmol/L S1P+30μmol/L LPA组的成熟率(90.7%)显著高于100 nmol/L S1P组、30μmol/L LPA组合和不添加组;500 nmol/L S1P+30μmol/L LPA组的囊胚率(77.6%)显著高于100 nmol/L S1P组和不添加组。结论联合添加S1P和LPA可能要比单独添加更能促进小鼠卵母细胞成熟,虽然在正常纺锤体百分率方面没有显示出优势,但通过体外受精得到的胚胎得到了较高的囊胚发育率。     

构建体外树突状细胞诱导淋巴细胞的调节模型

目的：观察体外培养条件下，不同成熟状态的树突状细胞在调节机体Th1／n12免疫应答的不同作用，建立体外淋巴细胞反应的调节模型。 方法：实验于2004-10／2005-04在南方医科大学南方医院完成。利用小鼠的骨髓细胞体外培养树突状细胞，将培养的树突状细胞分成两组，一组在培养结束前18h加入脂多糖刺激其成熟（以下称成熟树突状细胞组）；一组不加入脂多糖刺激，使其保留未成熟树突状细胞特性（以下称未成熟树突状组）。两组分别与同种异型T细胞混合培养，检测各组体外培养上清中自细胞介素12的水平，以及混合培养上清中干扰素1、白细胞介素2、白细胞介素4以及白细胞介素10的水平。 结果：①树突状细胞培养的情况：在倒置显微镜下观察骨髓前体细胞在培养板中的生长情况良好，细胞大量增殖，到第6天收获，每2只小鼠的骨髓细胞可得到（1．0-2．O）&;#215;10^7个树突状细胞，完全能够满足实验的要求。②白细胞介素的水平随着培养天数的增加而升高（P〈0．01）。在加入脂多糖刺激后，成熟组树突状细胞培养上清中白细胞介素12的水平高于未成熟组[（903．07&;#177;29．47）ng／L，（238&;#177;23．56）ng／L]。③在混合淋巴细胞反应上清中，未成熟组树突状细胞的培养上清中干扰素1和白细胞介素2含量低于成熟组树突状细胞的培养上清[（763．12&;#177;101．67），（1421．06&;#177;182．95）ng／L；（133．15&;#177;13．55），（236．15&;#177;14．22）ng／L]，两组比较差异有显著性妒〈0．01）。未成熟组树突状细胞培养上清中自细胞介素4和白细胞介素10的含量略高于成熟组[（90．65&;#177;11．31），（78．76&;#177;10．78）ng／L；（97．34&;#177;7．33），（93．13&;#177;8．60）ng／L），两组比较差异有显著性（P〈0．01）。 结论：不同成熟状态的树突状细胞通过分泌不同水平的细胞因子来调节机体Th1／Th2免疫应答，未成熟树突状细胞少量分泌白细胞介素12，诱导机体向Th2型反应偏倚；成熟树突状细胞分泌大量的白细胞介素12，诱导机体向Th1型反应偏倚。     

放射治疗中女性生育力的保护策略研究进展

放射治疗是恶性肿瘤的重要治疗手段,但会对女性患者的生育功能造成不良影响。近年来保护女性生育力的措施日益增多,包括临床上成熟的技术如胚胎冷冻保存、成熟卵母细胞冷冻保存;高度实验性的技术如未成熟的卵母细胞体外受精以及卵巢组织冷冻保存和移植等;此外干细胞的应用和人工卵巢的提出在对保护女性生育力保护中亦显露出很大的发展前景。现...