野生型p53基因导入对膀胱癌细胞生长抑制和H－ras基因表达调控

通过逆转录病毒载体将外源野生型ｐ５３基因导入膀胱癌细胞ＢＩＵ－８７和ＥＪ，使细胞在体外标准培养条件下生长速率降低，丧失裸鼠致瘤性。细胞周期分析显示Ｇ０＋Ｇ１细胞比率明显增高，已证明，ＢＩＵ－８７和ＥＪ细胞都有ｒａｓ基因突变和表达扩增。进一步研究发现，转染的细胞内Ｈ－ｒａｓｍＲＮＡ表达低于非转染细胞。结果提示，增加细胞内野生型ｐ５３基因表达量能抑制突变的ｒａｓ基因表达，从而抑制膀胱癌细胞的恶性增殖。     

野生型P16例基因导入对膀胱癌细胞生长抑制和H—ras基因表达 …

目的 观察野生型Ｐ１６基因对膀胱肿瘤细胞恶性表型及Ｈ－ｒａｓ基因表达的影响。方法 构建Ｐ１６基因逆转录病毒表达载体，转染膀胱肿瘤细胞系ＥＪ；应用Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交交检测外源Ｐ１６基因及Ｈ－ｒａｓ基因表达；流式细胞仪检测细胞周期；双层软琼脂培养检测细胞在体外形成克隆能力。结果 转染Ｐ１６基因后，肿瘤细胞生长速率降低，体外形成克隆的能力下降，细胞被抑制在Ｇ０＋Ｇ１期，细胞内Ｈ－ｒａｓ ｍＲＮＡ表达低     

逆转录病毒载体介导HSV—TK基因在膀胱癌细胞的表达和作用

应用基因工程技术构建了带ＨＳＶＴＫ基因的逆转录病毒重组体ｐＬＮＳＸＴＫ，磷酸钙沉淀法转染ＰＡ３１７细胞，建立了重组病毒的载体产生细胞系ＰＡ３１７／ＴＫ细胞。用病毒上清感染人的膀胱癌细胞株ＢＩＵ８７，Ｇ４１８筛选抗性克隆ＢＩＵ８７／ＴＫ细胞。提取ＰＡ３１７／ＴＫ和ＢＩＵ８７／ＴＫ细胞的ＤＮＡ，用ＤＩＧ标记检测证实整合了ＨＳＶＴＫ基因，在病毒上清用ＲＴＰＣＲ检测到目的基因的转录。转导ＨＳＶＴＫ基因的膀胱癌细胞获得对ＡＣＶ的化学敏感性，给予ＡＣＶ可有效地杀伤肿瘤细胞。     

c—erbB—2,H—ras和P53,Rb基因在膀胱癌中的表达

为探讨癌基因，抑癌基因在评估膀胱移行细胞癌预后中的意义，应用免疫组化法对９３例膀胱移行细胞癌组织中癌基因ｃｅｒｂＢ２、Ｈｒａｓ及抑癌基因Ｐ５３、Ｒｂ的表达产物进行检测。结果显示ｃｅｒｂＢ２、Ｈｒａｓ和Ｐ５３的表达率分别为２６％、２４％和４８％，Ｒｂ的失表达率为３１％。大多数（６９％）肿瘤有上述癌基因和（或）抑癌基因的表达异常，其中３８％的肿瘤同时有多个基因的表达异常，多基因表达异常与肿瘤的病理分级、临床分期、复发及５年生存率关系极为密切。提示肿瘤的多基因分析比单基因分析更有价值，多基因表达异常是判断膀胱移行细胞癌预后的一个可靠指标。     

c—Ha—ras反义寡聚脱氧核苷酸对人膀胱癌细胞生长增殖的抑…

应用人工合成的ｃ－Ｈａ－ｒａｓ反义寡聚脱氧核苷酸（ＡＳＯ－ｒ）对人膀胱癌细胞株Ｔ２４进行作用。结果表明：ＡＳＯ－ｒ能够抑制膀胱癌细胞株Ｔ２４中ｒａｓＰ２１的表达及Ｔ２４细胞的生长增殖，抑制作用大小与ＡＳＯ－ｒ的浓度有关。     

野生型MTS1基因导入对人膀胱癌细胞系生长抑制作用的研究

通过逆转录病毒载体将外源野生型ＭＴＳ１基因导入该基因功能丧失的人膀胱癌细胞系Ｔ２４中，结果发现，转染ＭＴＳ１基因的膀胱癌细胞的生长速率减低，流式细胞仪检测显示Ｓ期指数及增殖指数明显降低，电镜观察显示超微结构出现生长抑制特征，接种裸鼠无致瘤性。     

D-柠檬烯对人膀胱癌细胞生长和ras p21表达的影响

目的 探讨D-柠檬烯对人膀胱癌EJ细胞生长和ras p21表达的影响.方法 采用还原四氮唑复合物(XTT)、实时定量PCR、蛋白质印迹法,对D-柠檬烯处理后的人膀胱癌EJ细胞增殖、ras基因mRNA表达以及ras p21蛋白表达进行检测,比较用药前后EJ细胞生长和ras p21表达变化.结果 经2、4 mmol/L D-柠檬烯处理后的EJ细胞增殖活性吸光度(A)值分别为0.8014-0.016和0.148±0.008,与未给药组1.218±0.031比较,差异有统计学意义(P<0.05).1 mmol/LD-柠檬烯作用48h,EJ细胞ras p21 mRNA表达数638±9,与未给药组11170±25比较明显下调;rasp21蛋白表达相对值为0.792,与未给药组4.459比较明显下降,差异均有统计学意义(P<0.05).结论 D-柠檬烯对EJ细胞生长具有明显的细胞毒作用,并呈一定的剂量效应关系,在无毒剂量下可促使ras基因mRNA表达F调和ras p21蛋白表达下降.抑制ras p21活性可能是D-柠檬烯抗肿瘤作用的重要机制之一.     

c－Ha－ras反义寡聚脱氧核苷酸对人膀胱癌细胞生长增殖的抑制作用

应用人工合成的ｃ－Ｈａ－ｒａｓ反义寡聚脱氧核苷酸（ＡＳＯ－ｒ）对人膀胱癌细胞Ｔ２４进行作用。结果显示：ＡＳＯ－ｒ能明显抑制癌细胞中ｒａｓＰ２１的表达，并能引起Ｔ２４中ｒａｓＰ２１的表达及Ｔ２４细胞生长增殖的抑制，且不同浓度的ＡＳＯ－ｒ其抑制率不同。结果表明：ＡＳＯ－ｒ能够抑制膀胱癌细胞株Ｔ２４中ｒａｓＰ２１的表达及Ｔ２４细胞的生长增殖，抑制作用大小与ＡＳＯ－ｒ的浓度有关。     

转Fas基因对膀胱癌细胞的作用

目的　探讨Fas基因转染对膀胱癌细胞的作用。　方法　将人FascDNA通过脂质体导入膀胱癌细胞EJ中 ,并利用Northernblot、原位杂交、流式细胞术检测细胞的FasmRNA和分子表达。用流式细胞仪、DNA梯形带和MTT法分析顺铂对转染前后的EJ细胞抑制增殖和诱导凋亡的能力。　结果　Fas基因转染可明显增强膀胱癌细胞EJ的Fas表达 ,顺铂对转染后的EJ细胞抑制细胞增殖和诱导凋亡的能力明显增强。　结论　转染的Fas基因可显著上调膀胱癌细胞EJ的Fas表达 ,促进细胞凋亡 ,联合应用Fas基因转染和顺铂可获得协同的细胞毒作用     

HESW与抗癌药物对膀胱癌细胞C—myc癌基因表达的影响

利用国产液电碎同产生高能冲击波和１０－羟基喜树碱单纯或联合处理人膀胱癌细胞系。实验分对照组，ＨＥＳＷ组，药物组和联合组。冲击波条件：２００ＳＷ，药物浓度（０．１μｇ／ｍｌ），水温３７℃，采用α－＾３２Ｐ－ｄＣＴＰ标记Ｃ－ｍｙｃ癌基因探针，通过Ｎｏｒｔｈｅｒｎ印迹杂交技术，分析四组癌细胞Ｃ－ｍｙｃ癌基因表达。结果表明：对照组Ｃ－ｍｙｃ癌基因表达明显，其转录产物为２．７ｋｂ，而实验各组Ｃ－ｍｙｃ癌基因     

野生型P53和C—Ha—ras基因在顺铂诱导膀胱癌细胞凋亡中的表及意义

应用荧光原位杂交技术观察顺铂诱导膀胱癌细胞株ＢＩＵ－８７体外细胞凋亡过程中野生型Ｐ５３和Ｃ－Ｈａ－ｒｓ基因的表达，探讨抗癌诱导膀胱癌细胞凋亡过程 抗癌基因和癌基因的作用。结果显示：顺铂能吸显地诱导膀胱细胞凋亡，具有一定范围内的作用时间和药物浓度的依赖性。     

逆转录病毒转体介导的人IL—2基因在膀胱肿瘤细胞T24中的表达

报道逆转录病毒载体介导的人白细胞介素－２（ＩＬ－２）ｃＤＮＡ在人源性膀胱肿瘤细胞Ｔ２４中的表述，ＩＬ－２ｃＤＮＡ插入到真核表达载体ｐＤＯＲ－ｎｅｏ中，构建成ＩＬ－２ｃＤＮＡ的表达载体ｐＤＯＲＩＬ２，磷酸钙沉淀法将其导入Ｔ２４细胞中，经Ｇ４１８选择，转染阳性率约为２０％；原位杂交技术检测ＩＬ－２ｃＤＮＡ可转录ＩＬ－２ｍＲＮＡ，细胞培养上汪肿ＩＬ－２活性２４小时每１０＾５细胞为８－３４Ｕ／ｍｌ。表明Ｉ     

野生型P53和C-Ha-ras基因在顺铂诱导膀胱癌细胞凋亡中的表达及意义

应用荧光原位杂交技术观察顺铂诱导膀胱癌细胞株ＢＩＵ８７体外细胞凋亡过程中野生型Ｐ５３和ＣＨａｒａｓ基因的表达，探讨抗癌药物诱导膀胱癌细胞凋亡过程中抗癌基因和癌基因的作用。结果显示：顺铂能够明显地诱导膀胱癌细胞凋亡，具有一定范围内的作用时间和药物浓度的依赖性。随凋亡细胞数上升，野生型Ｐ５３表达增强，而ＣＨａｒａｓ基因表达下降，提示膀胱癌细胞凋亡可能是顺铂的杀瘤效应途径之一。Ｐ５３和ＣＨａｒａｓ基因均参与了细胞凋亡的调控过程，野生型Ｐ５３基因可能是通过下调ＣＨａｒａｓ基因的表达而发挥其抑制细胞增殖活性，促进凋亡的发生。     

P21、P185、P53蛋白表达及ras、P53基因突变与膀胱癌的关系

为探讨癌基因及抑癌基因改变与膀胱癌生物学行为的关系，采用免疫组织化学方法及分子生物学技术，检测了８２例膀胱移行细胞癌Ｐ２１、Ｐ１８５、Ｐ５３蛋白表达及３８例ｒａｓ、Ｐ５３基因突变。结果表明：Ｐ２１、Ｐ１８５、Ｐ５３蛋白表达阳性分别为５１例（６２．２％）、４８例（５８．５％）、２６例（３１．７％）。Ｐ２１、Ｐ５３蛋白表达阳性率与膀胱移行细胞癌病理分级及临床分期呈正相关（Ｐ＜０．０１）；Ｐ１８５蛋白阳性率与膀胱移行细胞癌分级、分期呈负相关（Ｐ＜０．０５）。膀胱移行细胞癌组织中１５例（３９．５％）有Ｈａｒａｓ癌基因第１２位密码子突变；１２例（３１．６％）有Ｐ５３抑癌基因突变，其中全部有第２８０位密码子ＧＣ突变；３例合并有２４８密码子突变；１例有２４９密码子点突变。Ｈａｒａｓ癌基因及Ｐ５３抑癌基因点突变与膀胱癌病理分级和临床分期呈显著正相关（Ｐ＜０．０５）；与预后显著相关（Ｐ＜０．０５）；且死亡率高于点突变阴性者。６例既有Ｈａｒａｓ基因突变，又有Ｐ５３基因突变的病例中４例死亡。     

腺病毒介导的p16基因转染对膀胱癌细胞生长影响的研究

目的　探讨复制缺陷型腺病毒介导的 p16基因转染对人膀胱癌细胞生长的影响。 　方法　将 p16重组腺病毒 (Ad p16 )感染p16蛋白表达阴性的人膀胱移行细胞癌T2 4细胞株 ,Ad LacZ、X gal染色法检测重组腺病毒的转染效率 ;Westernblot法检测 p16蛋白的表达 ;MTT法及流式细胞术评估Ad p16对T2 4细胞增殖的影响。　结果　在感染复数 (MOI)为 5 0时 ,重组腺病毒对T2 4细胞的转染率达 97% ;此Ad p16在T2 4细胞中可获高效表达 ;与转染Ad LacZ组及未转染组相比 ,转染Ad p16组T2 4细胞生长受到明显抑制 (P <0 .0 5 ) ,细胞周期分析表明生长抑制主要发生在G1 S节点。　结论　腺病毒载体可有效地将外源 p16基因导入T2 4细胞 ;p16基因重组腺病毒载体转染能抑制T2 4细胞的生长。     

膀胱移行细胞癌nm23—H1和nm23—H2基因表达的检测及临床意义

目的 探讨ｎｍ２３基因与膀胱移行细胞癌转移之间的关系。方法 应用Ｎｏｒｔｈｅｒｎ ｂｌｏｔ技术分析１２例膀胱移行细胞癌和６例膀胱粘膜ｎｍ２３－Ｈ１和ｎｍ２３－Ｈ２的基因表达。结果 膀胱癌标本ｎｍ２３－Ｈ１ ｍＲＮＡ表达水平较膀胱粘膜显著升高，有盆腔淋巴结转移膀胱癌标本的ｎｍ２３－Ｈ１ ｍＲＮＡ表达显著高于无转移组（Ｐ〈０．０５），而ｎｍ２３－Ｈ２ ｍＲＮＡ在各组间的表达无显著性差异。结论 ｎｍ２３     

自稳定反义IGF1R基因片段对膀胱癌细胞的影响

目的　探讨针对胰岛素样生长因子 1受体 (IGF1R )基因的自稳定反义脱氧寡核苷酸(ODN)对膀胱癌细胞的影响。　方法　采用RT -PCR、Westernblot、MTT试验、流式细胞仪对经反义ODN作用后的T2 4膀胱癌细胞进行动态分析。　结果　自稳定反义ODN在血清培养基中 2 4h内均保持稳定状态 ,而硫代反义ODN 4h后基本降解。自稳定反义ODN可有效降低T2 4膀胱癌细胞IGF1R基因及蛋白表达 ,增强膀胱癌细胞对丝裂霉素的敏感性及凋亡易感性。　结论　IGF1R基因的自稳定反义ODN可能是一种治疗膀胱肿瘤的新途径     

生长抑制基因p33INGl在膀胱移行细胞癌中的表达及意义

目的探讨膀胱移行细胞癌（TCC）组织中生长抑制基因p33ING1表达的意义.方法采用免疫组织化学方法,对68例膀胱TCC组织标本中p33ING1表达进行检测.男58例,女10例.平均年龄65岁.病理分级Ⅰ级16例,Ⅱ级22例,Ⅲ级30例.临床分期T125例、T217例、T314例、T412.例.复发性膀胱癌47例.12例正常膀胱组织作对照.结果 12例正常膀胱黏膜组织中p33ING1均为强阳性.68例TCC标本中,p33ING1表达阳性23例,阳性率为33.8%.p33ING表达与膀胱TCC病理分级、临床分期以及复发密切相关（P＜0.05）.结论 p33ING1在膀胱TCC组织中存在表达缺失,其表达缺失程度与肿瘤病理分级、临床分期及复发相关,可作为观察膀胱TCC复发指标之一.     

HESW与抗癌药物对膀胱癌细胞C－myc癌基因表达的影响

利用国产液电碎石机（ＥＳＷＬ－Ⅲ／２Ｍ型）产生的高能冲击波和１０－羟基喜树碱单纯或联合处理人膀胱癌细胞系（ＢＴ５６３７）。实验分对照组，ＨＥＳＷ组，药物组和联合组。冲击波条件：２００ＳＷ（１０ｋＶ，６０次／ｍｉｎ），药物浓度（０．１μｇ／ｍｌ），水温３７℃。采用α－３２Ｐ－ｄＣＴＰ标记Ｃ－ｍｙｃ癌基因探针，通过Ｎｏｒｔｈｅｒｎ印迹杂交技术，分析四组癌细胞Ｃ－ｍｙｃ癌基因表达。结果表明：对照组Ｃ－ｍｙｃ癌基因表达明显，其转录产物为２．７ｋｂ，而实验各组Ｃ－ｍｙｃ癌基因表达完全被抑制。结论：ＨＥＳＷ，１０－羟基喜树碱及其联合对人膀胱癌细胞的生长抑制作用与Ｃ－ｍｙｃ癌基因表达有密切关系。     

膀胱癌转化生长因子α和P53基因表达及生物学意义

通过现代分子生物学方法，对膀胱癌实体肿瘤的ＴＧＦα和Ｐ５３表达及生物学意义进行了探讨。３４例膀胱癌中２９例ＴＧＦαｍＲＮＡ表达，表达率为８５．３％（２９／３４）；１３例癌旁对照组织中，６例无表达，６例低表达，１例高于自身肿瘤表达。肿瘤的表达量是癌旁正常对照的２～５倍，统计学分析，Ｐ＜０．０１。１４例膀胱癌４例（２８．５％）Ｐ５３高表达，２例低表达，２例正常和８例癌组织未见表达。膀胱癌ＴＧＦα基因的高表达可能是膀胱癌发生发展的早期信号，Ｐ５３基因的变异表达可能主要参与癌细胞的分化，它可能与膀胱癌恶性表行相关。