乙肝病毒前C基因/C启动子变异与不同症状乙型肝炎患者的相关性

乙型肝炎的病情与宿主及病毒均有关。乙型肝炎病毒 (ＨＢＶ)Ｃ区编码ＨＢｃＡｇ及ＨＢｅＡｇ ,其调控序列位于前Ｃ区及Ｃ基因启动子 (ＣＰ) ,ＨＢＶ前Ｃ/ＣＰ区变异可以通过阻止或减少ＨＢｅＡｇ合成和分泌来影响宿主的免疫应答。我们采用聚合酶链反应 (ＰＣＲ)直接测序法 ,测定 4 5例慢性乙型肝炎和慢性重型乙型肝炎患者血清ＨＢＶ前Ｃ/ＣＰ区核苷酸序列 ,以探明ＨＢＶ前Ｃ/ＣＰ基因区变异的临床意义。材料和方法病例选择 :共 4 5例 ,其中慢性乙型肝炎 (Ａ组 ) 2 0例 ,男 12例 ,女 8例 ,年龄 2 1～ 5 7岁 ,其中ＨＢｅＡｇ阳性 6例 ,抗 Ｈ…     

HBeAg阴性慢性乙型肝炎患者血清HBV前C区的序列分析

为了解ＨＢｅＡｇ阴性慢性乙型肝炎患者中ＨＢＶ前Ｃ区突变株流行情况 ,本研究对 31例ＨＢｅＡｇ阴性慢性乙型肝炎住院患者血清ＨＢＶ前Ｃ区序列进行了分析 ,血清标本采自广西南宁市各大医院 ,按 2 0 0 0年全国第 10次病毒性肝炎和肝病学术会议修订的“病毒性肝炎防治方案”诊断。其中男性2 5例 ,女性 6例 ,年龄为 18～ 36岁。ＨＢｓＡｇ、抗 ＨＢｓ、抗 ＨＢｃ、ＨＢｅＡｇ和抗 ＨＢｅ检测应由美国Ａｂｂｏｔｔ公司酶联免疫试剂盒 ;按常规法提取血清中ＨＢＶＤＮＡ ,并用美国Ｐｒｏｍｅｇａ公司ＤＮＡ试剂纯化 ;应用套式ＰＣＲ扩增ＨＢＶ…     

HBsAg中蛋白与IL-18联合核酸免疫HBsAg转基因小鼠的实验研究

对乙型肝炎病毒 (ＨＢＶ)转基因小鼠鼠系所进行的ＨＢＶ核酸疫苗免疫转基因小鼠的实验研究〔1,2〕 提示核酸疫苗有治疗潜力。本研究的目的是研究在白细胞介素 18(ＩＬ 18)的辅助作用下 ,ＨＢＶ表面抗原中蛋白核酸疫苗免疫ＨＢｓＡｇ转基因小鼠的效果。材料与方法质粒构建 :引物设计 :上游引物 :5′ ＧＴＡＣＴＧＣＡＧＧＣＣＡＴＧＣＡＧＴＧＧＡＡＴＴＣＣ 3′ ;下游引物 :5′ ＧＴＡＧＡＴＣＴＧＡＧＡＧＴＡＡＣＣＣＣＡＴＣＴＣＴＴＴＧ 3′。ＰＣＲ法扩增ＨＢｓＡｇ中蛋白基因序列 ,将ＰＣＲ产物亚克隆至ｐＧＥＭＴｅａｓｙ载体 (Ｐｒ…     

乙型肝炎病毒C基因启动子及前C变异的动态研究

目的明确乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）Ｃ基因启动子（ＢＣＰ）与前Ｃ变异株在慢性乙型肝炎患者中的动态消长,及与ＨＢｅＡｇ血清学状态的关系。方法对３２例慢性乙型肝炎患者的１０５份系列血清进行错配聚合酶链反应（ＰＣＲ）－限制性片段长度多态性分析,并对其中１５例患者系列血清标本的ＰＣＲ产物进行直接测序。结果ＢＣＰ和Ａ８３变异株感染率均明显增高（６２．５％＞４６．９％;３１．３％＞１２．５％）;ＢＰＣ变异株更多地（１４／１６）表现为优势积累,且先于ＨＢｅＡｇ血清阴转;ＢＣＰ野株／变异株比例变化影响ＨＢｅＡｇ血清学的稳定性。结论两种类型的变异株在炎症活动中均具有选择优势,最终造成ＨＢｅＡｇ（－）的ＨＢＶ感染;可能与ＨＢＶ感染之持续有关。     

文摘

文摘０４４在ＨＢｓＡｇ阳性患者中，ＨＢｅＡｇ／抗－Ｈｂｅ　ＡＬＴ水平及ＨＢＶ　ＤＮＡ的ＰＣＲ结果的相互关系［英］／ＬｉｕｎｇｇｒｅｎＫＫ…ＪＭｅｄＶｉｒｏｌ．－１９９３，３９．－１９７用高敏感的多聚酶链反应（ＰＣＲ）对瑞典ＨＢｓＡｇ阳性患者的血清样品...     

乙型肝炎病毒C基因调节序列变异分析

ＨＢＶＣ基因上游约 2 0 0ｂｐ序列(ｎｔ 16 0 0～ｎｔ 185 0 )是重要ＨＢＶ基因调控区。Ｔ 176 2Ａ 176 4(ｎｔ 176 4Ａ→Ｔ ,ｎｔ 176 4Ｇ→Ａ ,)变异在慢性ＨＢＶ感染者是变异的热点。为了解我国ＨＢＶ流行株Ｃ基因调节序列及变异情况 ,分别对 7例慢性无症状ＨＢＶ携带者和 7例亚急性重症乙型肝炎患者ＨＢＶＣＰ区序列进行了分析。1　研究对象　 7例慢性无症状ＨＢＶ携带者 (ＡｓＣ) (3例来自广东地区 ,4例自东北地区 )、7例亚急性重症乙型肝炎患者 (ＦＨ) (为我科 1993～ 1996年间收治的住院患者 )。酶联免疫法检测ＨＢＶ血清标志物。2…     

HGV RNA逆转录套式聚合酶链反应法的优选实验

1995年 ,美国Ｓｉｍｏｎｓ等和Ｌｉｎｎｅｎ等分别从肝炎患者的血清中克隆出庚型肝炎病毒 (ＧＢＶ Ｃ/ＨＧＶ)的基因组 ,并建立了检测血清ＧＢＶ Ｃ/ＨＧＶＲＮＡ的逆转录套式聚合酶链反应 (ＲＴ ｎＰＣＲ)方法。但是 ,该检测方法的灵敏度存在着较大差异。本实验使用Ａ～Ｅ共 5套ＰＣＲ引物 ,基中Ａ、Ｂ、Ｄ为自行设计的ＨＧＶ 5′端非编码区引物 ,目的产物长度分别为36 8ｂｐ ,15 8ｂｐ及 2 2 0ｂｐ ;Ｃ引物为参照文献设计的核心区引物 ,目的产物为30 2ｂｐ ;Ｅ引物为李倬副研究员设计的ＮＳ3区引物 ,目的产物长度为 5 91ｂｐ。采用改良的…     

丙型肝炎患者外周血单个核细胞HCV感染的电镜研究

目的 以常规电镜和免疫电镜技术,发现和证实慢性丙型肝炎患者外周血单个核细胞９ＰＢＭＣｓ）内丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）颗粒。试图在病毒形态学和形态发生学上证实ＰＢＭＣｓ的ＨＣＶ感染和复制。方法 以逆转录多聚酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）和免疫组织化学方法,分别检测２８例患者ＰＢＭＣｓ内ＨＣＶ ＲＮＡ和ＨＣＶＡｇ,对其中阳性标本重点进行电镜研究。结果 ＨＣＶ ＲＮＡ和ＨＣＶ Ａｇ阳性检出率分别为７７．２７％（１     

乙型肝炎病毒基因聚合酶链反应分型方法的建立

根据乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）的Ｓ区序列设计了３条引物：ＨＢＳ１、ＨＢＳ２和ＨＢＳ３，与ＨＢＳ１和ＨＢＳ２配对，经２次聚合酶链反应（ＰＣＲ）扩增。即可在检测有无ＨＢＶ－ＤＮＡ存在的同时对其基因型分类，可检出１０ａｇ的ＨＢＶ－ＤＮＡ，比免疫学方法更灵敏和特异。２５份不同亚型的标准血清中的绝大多数用Ｓ－ＰＣＲ和ＡＧＩＤ／ＲＰＨＡ的分型结果一致，Ｓ－ＰＣＲ的另一突出优越性的于能够对ＨＢｓＡｇ低滴度和阴性标本     

用热启动聚合酶链反应检测血清中乙型肝炎病毒DNA技术的建立和应用

建立了热启动聚合酶链反应（ＰＣＲ）检测乙型肝炎病毒ＤＮＡ（ＨＢＶＤＮＡ）的技术。ＰＣＲ所有反应成分被２次加样。先加Ａ液（含ｄＮＴＰｓ、一对引物和ＭｇＣｌ＿２）与一粒石蜡珠。７０℃加热后冷却至室温，使蜡珠先融化后凝固形成蜡盖封住Ａ液，然后在向其上加入Ｂ液（含耐热性ＤＮＡ聚合酶、ＨＢＶＤＮＡ模板和ＫＣｌ）并开始循环扩增。当反应管内第一次变性温度升至６０℃以上时，中隔蜡层融化，蜡上浮形成防蒸发屏障，Ａ、Ｂ两液则由于热分子运动而混匀，从而保证引物与靶基因在较高温度下严格退火以减少错导非特异性扩增和引物聚体形成。提高了ＰＣＲ的特异性和灵敏性，应用这种技术对７６例肝炎血清进行了检测，结果ＨＢＶＤＮＡ检出率为６８％，其中ＨＢｓＡｇ（＋）、ＨＢｅＡｇ（＋）、抗－ＨＢｃ（＋）血清检出率为１００％；ＨＢｓＡｇ（＋）、抗－ＨＢｅ（＋）、抗－ＨＢｃ（＋）血清检出率为７０％；ＨＢｓＡｇ（＋）、抗－ＨＢＣ（＋）血清检出率为８９％；抗ＨＢＣ（＋）血清检出率为对％；标记全阴性血清检出率为３３％。     

广西不同人群庚型肝炎病毒感染状况的调查

目的 了解庚型肝炎病毒（ＨＧＶ）感染在广西柳州地区不同人群中的感染状况，并比较静脉毒瘾者与健康体检者ＨＧＶ，乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）、丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）与ＨＧＶ共同感染的特点，方法 应用酶联免疫法（ＥＬＡ）检测抗－ＨＧＶ，抗－ＨＣＶ，ＨＢＶＭ（ＨＢｓＡｇ，ＨＢｓＡｂ，ＨＢｅＡｇ，ＨＢｅＡｂ，ＨＢｃＡｂ），并对抗－ＨＧＶ阳性者随机抽取２０例（１９％）进一步用逆转录套式ＰＣＲ（ＰＴ－ｎＰＣＲ）法检测     

乙/丙型肝炎病毒双重感染患者前C区终止变异低频率

目的了解乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）与丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）双重感染患者前Ｃ区基因变异，及其可能的临床意义。方法用聚合酶链反应（ＰＣＲ）与限制片段长度多态性（ＲＦＬＰ）来分析２５例ＨＢＶＤＮＡ和ＨＣＶＲＮＡ均阳性（Ａ组）和３１例ＨＢｓＡｇ和ＨＢＶＤＮＡ阳性但抗－ＨＣＶ和ＨＣＶＲＮＡ均阴性（Ｂ组）的慢性肝病患者前Ｃ区密码２８终止变异（终２８）。结果ＨＢＶ和ＨＣＶ双重感染患者（Ａ组）血清ＨＢＶＤＮＡ第１次ＰＣＲ阳性率（１６％）明显低于单独ＨＢＶ感染组（６５％）（Ｐ＜０．００１）；前Ｃ终２８检出率（２８％）亦明显低于单独ＨＢＶ感染（６８％）（Ｐ＜０．００１）。结论提示双重感染患者ＨＢＶ前Ｃ终止变异低频率可能与ＨＢＶ低水平复制有关     

广东地区肝炎患者血清中庚型肝炎病毒RNA的检测

目的了解庚型肝炎病毒（ＨＧＶ）感染在不同临床类型肝炎患者中的存在状况。方法用逆转录－聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）技术对７２１例肝炎患者血清进行了ＨＧＶＲＮＡ检测。结果发现８０例ＨＧＶＲＮＡ阳性，以非甲、乙、丙、丁或戊型肝炎中阳性率为高；慢性丙型肝炎（ＨＣＶ）和慢性乙型混合丙型肝炎（ＨＢＶ＋ＨＣＶ）次之；在慢性重型肝炎和肝硬化时较低。结论庚型肝炎病毒在广东地区现症肝炎患者中有一定程度的流行     

HGV／GBV—C与HCV混合感染者HGV／GBV—C复制中间体的研究

目的 关于ＨＧＶ／ＢＧＶ－Ｃ组织亲和性的研究尚无结论性资料。我们研究了ＨＧＶ／ＧＢＶ－Ｃ与ＨＣＶ混合感染者ＰＢＭＣ和肝脏中ＨＧＶ／ＧＢＶ－Ｃ复制中间体（负链ＲＮＡ）的存在状况。方法 应用逆转录－巢式ＰＣＲ技术,检测了３２例肝炎患者ＨＧＶ／ＧＢＶ－Ｃ和ＨＶＣ正、负链ＲＮＡ。结果 有２６例ＨＧＶ／ＧＢＶ－Ｃ与ＨＣＶ混合感染者ＰＢＭＣ和肝脏中均未检测到ＨＧＶ／ＧＢＶ－Ｃ负链ＲＮＡ;而在９份ＰＢＭＣ和１５     

乙型肝炎病毒前C区1 896位点突变的PCR分析法

近年研究表明,乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）感染者体内,可能存在ＨＢＶ前Ｃ区突变。我们根据ＨＢＶ前Ｃ区ＤＮＡ序列,建立了３′碱基特异性聚合酶链反应（３′ＢＳＰＣＲ）法,检测ＨＢＶ前Ｃ区第１８９６位核苷酸的突变,并检测了７２例ＨＢＶ感染者、１４例甲型肝炎患者的血清ＨＢＶ前Ｃ区１８９６位的突变。病例选择为１９９６年１１月～１９９７年８月期间,在安徽医科大学附属医院传染科就诊的门诊和住院病人。７２例ＨＢＶ感染者中,抗ＨＢｅ阳性７２例,其中慢性乙型肝炎４７例、慢重肝９例、肝炎后肝硬化１６例、另有甲型肝炎患…     

重型乙型肝炎病人中乙型肝炎病毒C基因启动子变异的研究

目的　了解重型乙型肝炎（ 乙肝） 病人血清乙肝病毒（ＨＢＶ）ＤＮＡＣ基因启动子（ＣＰ） 的变异。方法　对用聚合酶链反应（ＰＣＲ） 法扩增的血清ＨＢＶＤＮＡ 直接测序。结果　７ 例亚急性重型肝炎病人的ＨＢＶ 分离株ＣＰ区分别有２～１２ 个替代变异，１ 例病人有１１ｂｐ 的碱基插入。ＣＰ变异主要发生于ＣＰ的第１ 和第２ 个ＡＴ丰富区，ｎｔ１ ７６２ 和ｎｔ１ ７６４ 的替代变异见于７ 例亚急性重型肝炎病人的４ 例中，是ＣＰ变异的热点，其中３ 例ＨＢｅＡｇ 阴性，说明和ＨＢｅＡｇ 阴性表型相关。ＣＰ的第３ 个ＡＴ丰富区、ＨＢＶ逆转录起始位点（ＤＲ１） 和前Ｃ基因、前基因组转录起始位点未见变异。结论　重型肝炎病人的ＨＢＶＣＰ区存在较多的变异，ＣＰ变异主要发生于和前Ｃ基因相关的第１ 和第２ 个ＡＴ丰富区，可能和ＨＢｅＡｇ 阴性表型相关     

丙型肝炎血症水平与慢性丙型肝炎患者的关系

为了研究丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）血症水平与慢性丙型肝炎患者临床特征的关系,我们对２４例慢性丙肝患者血清ＨＣＶＲＮＡ水平进行了定量检测。２４例慢性丙型肝炎患者,男１６例,女８例,平均年龄４０－５±５－８岁,诊断符合１９９５年５月北京第五次全国传染病寄生虫病学术会议讨论修订的病毒性肝炎防治方案。血清标本来自患者应用抗病毒药物前的空腹静脉血。逆转录引物选自ＨＣＶＲＮＡ的５′非编码区,为５′ＧＡＣＣＣＡＡＣＡＣＴＡＣＴＣＧＧＣＴＡ３′,非对称ＰＣＲ扩增引物来自延长逆转录引物的ｃＤＮＡ产物内的非对称扩增…     

定量聚合酶链反应检测肝病患者血清中乙型肝炎病毒 …

目的 了解肝病患者血清乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）ＤＮＡ的含量，以便观察临床抗病毒治疗效果及血清ＨＢＶ ＤＮＡ水平与病情及预后的关系。方法 应用荧光素标记的半巢式引物在扩增中能量转移的定量聚合酶 链反应（ＱＰＣＲ），对６３例肝功能异常的肝病患者血清进行ＨＢＶ ＤＮＡ含量测定，并与普通ＰＣＲ及酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）进行比较。结果 ＱＰＣＲ阳性率为８２。５４％，普通ＰＣＲ法为７１．４３％，ＥＬＩＳＡ     

PCR鉴定HBsAg阴性肝炎HBV DNA感染的意义

ＰＣＲ鉴定ＨＢｓＡｇ阴性肝炎ＨＢＶＤＮＡ感染的意义１李伟１王学春１张金池２刁玉贞收集ＨＢｓＡｇ阴性ＨＢｃＡｂ阳性的慢性肝炎病人血清３０例及恢复期急性乙型肝炎病人血清１００例（共计１３０例），利用聚合酶链反应（ＰＣＲ）检测ＨＢＶＤＮＡ。ＰＣＲ方法及步骤...     

慢性乙型肝炎重叠HGV感染对HBV复制的影响

目的观察慢性乙型肝炎重叠ＨＧＶ感染对ＨＢＶ复制的影响．方法采用逆转录聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）检测患者血清ＨＢＶ－ＤＮＡ．ＨＢＶ－ＤＮＡ定量采用荧光信号引物能量转换法．以单纯慢性乙型肝炎患者作对照研究．结果２３例ＨＧＶ重叠感染的慢性乙型肝炎患者 ＨＢＶ－ＤＮＡ、ＨＢｅＡｇ和抗－ＨＢｅ的阳性率分别为５６．５％、１７．４％和６０．９％而３４例单纯慢性乙型肝炎患者三项指标的阳性率分别为９１．２％、８５．３％和１１．８％．定量分析显示,前组ＨＢＶ－ＤＮＡ量为２．０２、后组为４．１２．经统计学处理,两组各项指标均有显著性差异．结论慢性乙型肝炎重叠ＨＧＶ感染可能会抑制ＨＢＶ的复制．