5-Fu对食管癌细胞株EC9706 凋亡及HIF-1α蛋白表达的影响

目的 探讨5-氟尿嘧啶(5-Fu)对食管癌细胞株EC9706凋亡及HIF-1α蛋白表达的影响.方法 将EC9706细胞随机分为A、B、C、D、E五组,其中A、B、C、D组于培养基内加入浓度分别为12.5、25、50、100 μg/ml的5-Fu 作用72 h, E组不加药.用流式细胞仪及免疫细胞化学染色技术检测各组细胞凋亡率及HIF-1α蛋白表达情况.结果 细胞凋亡率A组和E组均为0,B、C、D组分别为12.0%、23.2%、22.3% ,C组显著高于其他四组,P＜0.05;HIF-1α蛋白表达阳性率A组为66.50%±3.45%、B组为50.58%±4.34%、C组为37.00%±6.15%、D组为34.83%±3.25%、E组为78.58%±5.71%,E组显著高于其他四组(P＜0.05).结论 5-Fu可诱导EC9706细胞凋亡、下调HIF-1α表达,此可能是其治疗食管癌的机制之一.     

TGF-β1引发的上皮-间质转化与食管鳞癌浸润转移的关系

目的:探讨食管鳞癌中是否存在TGF-β1引发的EMT,及其与食管鳞癌的浸润转移的关系.方法:选用郑州大学第一附属医院2000-01/2004-12食管鳞癌手术切除标本100例,每例标本均选用癌组织中心及其远端正常黏膜对照.采用免疫组织化学技术检测100例食管鳞癌手术切除标本中的TGF-β1、E-cadherin和Vimentin蛋白的表达.结果:TGF-β1蛋白在食管鳞癌组织中的表达明显高于正常黏膜(85% VS 27%,P<0.01),其在深层浸润组中的表达高于浅层浸润组(91%VS 75%,P<0.05);E-cadherin蛋白在食管鳞癌组织中的表达明显低于正常黏膜(43% VS 85%.P<0.01);Vimentin蛋白在食管鳞癌组织中的表达高于正常黏膜(23% VS 0%,P<0.05);食管鳞癌组织中,TGF-β1与E-cadherin表达呈负相关(Tb=-0.257,P=0.013),而与Xrtmentin表达呈正相关(Tb=0.163,P=0.030),E-cadherin与Vimentin表达呈负相关(Th=-0.379,P=0.000).结论:食管鳞癌中可能存在TGF-β1引发的EMT,且可能与食管鳞癌的浸润转移有关.     

过/降表达miR-4746的食管鳞癌细胞增殖、迁移、侵袭能力及TGF-β/Smad通路蛋白表达观察

目的 观察过/降表达miR-4746的食管鳞癌细胞增殖、迁移、侵袭能力及转化生长因子β(TGF-β)/Smad通路蛋白的表达.方法 选取人食管鳞癌细胞ECA-109、TE-1和正常食管上皮细胞HEEC,采用实时荧光定量PCR法检测各细胞中miR-4746的表达水平.取miR-4746表达最高的食管鳞癌细胞分为miR-4...     

转化生长因子β1在食管鳞癌中表达的临床研究

背景：转化生长因子(TGF)-β1在多种肿瘤的发生、发展和凋亡过程中发挥重要作用，但其在食管癌中的作用及其与肿瘤血管生成的关系尚未明确。目的：研究TGF-β1在食管癌中的表达及其与肿瘤血管生成的关系。方法：采用免疫组化方法检测45例食管鳞癌组织和10例正常食管组织中TGF-β1的表达和肿瘤微血管密度(MVD)。应用SPSS10．0统计软件分析TGF-β1的表达与食管癌临床病理参数、预后和肿瘤MVD的关系。结果：正常食管组织黏膜细胞未见异常染色；食管痛患者的TGF-β1表达阳性率为77．8％(35/45)，肿瘤MVD半均值为15．58。TGF-β1的表达与食管癌临床病理参数和预后无关，但与肿瘤MVD显著相关(r=0．428，P=0．003)。结论：TGF-β1的表达与食管鳞癌的发生有关，但与其进展无关。TGF-β1在食管鳞癌的血管生成中可能具有一定作用。     

体外研究腺苷酸活化蛋白激酶对食管鳞癌EC9706细胞增殖及凋亡的影响

目的通过体外研究观察腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)的激活剂AICAR对人食管癌EC9706细胞的增殖及凋亡影响。方法 AICAR以不同浓度作用于人食管癌EC9706细胞,通过光学显微镜观察不同时间后EC9706细胞的生长状态,并用MTT方法检测其吸光度值及细胞存活率的变化,流式细胞术检测其细胞凋亡率情况。结果随着AICAR浓度的增加,细胞的死亡数目明显增加。MTT法检测结果表明,AICAR能够抑制EC9706细胞增殖,并呈现出良好的浓度依赖性。流式细胞术检测结果显示,不同浓度的AICAR干预24 h后早期凋亡率、晚期凋亡率及总凋亡率均高于对照组,但仅有总凋亡率有统计学意义(P0.01)。结论 AMPK可以抑制人食管癌EC9706细胞的生长增殖,并可诱导EC9706细胞凋亡。     

RNA干扰TAGLN2基因对TGF-β1诱导心肌细胞凋亡的影响

目的探讨RNA干扰TAGLN2基因对转化生长因子(TGF)-β1诱导心肌细胞凋亡的影响及机制。方法 H9c2心肌细胞分为空白对照组、NC组、TGF-β1组和TGF-β1+si-TAGLN2组,其中siRNA的转染参照Lipofectamine~(TM)2000说明,Western印迹检测TAGLN2、p53、裂解的半胱氨酸蛋白酶(Cleaved caspase)3、B细胞淋巴瘤因子(Bcl)-2、磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)、磷酸化蛋白激酶B(p-AKT)、核因子(NF)-κB p65和IκB-α的蛋白表达;流式细胞术检测细胞凋亡率及活性氧(ROS)水平。结果转染si-TAGLN2的H9c2心肌细胞TAGLN2蛋白表达显著低于空白对照组(P0.05)。与NC组比较,TGF-β1组细胞凋亡率、ROS水平及p53、 Cleaved caspase3和NF-κB p65蛋白表达均显著升高,Bcl-2、PI3K、 p-AKT、和IκB-α蛋白表达均显著降低(P0.05);与TGF-β1组比较,TGF-β1+si-TAGLN2组细胞凋亡率、ROS水平及p53、 Cleaved caspase3和NF-κB p65蛋白表达均显著降低,Bcl-2、PI3K、 p-AKT、和IκB-α的蛋白表达均显著升高(P0.05)。结论 TAGLN2基因表达抑制可降低由TGF-β1诱导的心肌细胞凋亡,机制可能与降低细胞内ROS水平、激活PI3K/AKT信号和抑制NF-κB信号有关。     

hsa＿circRNA6448-14对食管鳞癌细胞恶性增殖能力的影响

目的 分析hsa＿circRNA6448-14对食管鳞癌(esophageal squamous cell carcinoma, ESCC)细胞恶性增殖能力的影响,探讨其临床意义。方法 建立hsa＿circRNA6448-14敲低的ESCC KYSE30及KYSE150细胞系,实验分为对照组及观察组。通过qRT-PCR检测各组细胞系中hsa＿circRNA6448-14的相对表达量;采用CCK8法及平板克隆实验检测各组细胞的体外增殖能力。通过t检验比较两组细胞间hsa＿circRNA6448-14表达量差异及体外增殖能力差异。结果 与对照组相比,观察组细胞中hsa＿circRNA6448-14的相对表达量显著降低,体外增殖能力显著减弱,差异均具有统计学意义(P<0.05)。结论 hsa＿circRNA6448-14为ESCC细胞恶性增殖过程中的关键调控因子,靶向hsa＿circRNA6448-14可能抑制ESCC恶性演进。     

TGF-β1与缺血再灌注心肌细胞凋亡的关系

取新生SD大鼠心肌细胞,随机分为四组：①正常对照组（A组）：在不含处理因素的含10%胎牛血清DMEM培养基中置37℃、5%CO2、95%空气培养箱培养48h;②缺血再灌注诱导凋亡模型组（B组）：在不含血清的低糖DMEM培养基,三气培养箱中培养48h后,置10%胎牛血清DMEM培养基,37℃、5%CO2、95%空气培养箱中培养3h;③转化生长因子（TGF）-β1干预组（C组）：在不含血清的低糖DMEM培养基加入TGF-β1（5ng/ml）,先于三气培养箱中培养48h后,置10%胎牛血清、TGF-β1（5ng/ml）DMEM培养基,37℃、5%CO2、95%空气培养箱中培养3h;④TGF-β1抑制剂干预组（D组）：培养基中加入TGF-β1同时加入其抑制剂LY364947（59nmol/L）,余同C组。采用流式细胞术及Tunel染色法检测各组细胞凋亡率。结果A、B、C、D组心肌细胞凋亡率分别为5.89%&#177;1.28%、26.68%&#177;6.17%、54.19%&#177;11.86%、31.31%&#177;3.78%;C组与其他各组之间比较,P均〈0.05,D组与B组比较,P〉0.05。认为TGF-β1可以诱导心肌细胞缺血再灌注损伤后心肌细胞凋亡,而LY364947可抑制TGF-β1的作用。     

肝病患者血清TGF-α和TGF-β1的检测及临床意义

探讨肝病血清TGF-α与TGF-β1的关系及在肝病患者中的临床意义.TGF-α采用放射免疫法,TGF-β1采用双抗体夹心ELISA法,对153例肝病血清进行检测分析.各型肝炎、肝硬化TGF-α明显高于对照组且随病情加重而升高(P＜0.01).各型慢性肝炎、肝硬化TGF-β1也明显升高,且与TGF-α存在正相关(r=0.512,P＜0.05).肝癌组血清TGF-α及TGF-β1均显著高于各型肝病(P＜0.01).TGF-α可反映肝损伤程度.TGF-α与TGF-β1在肝炎及肝癌中各自所能发挥的作用存在不同.血清TGF-α及TGF-β1的检测对于肝炎判断病情及预后、原发性肝癌的诊断均有重要意义.     

高血压大鼠脑缺血再灌注后TGF-β_1、Caspase-3的表达与细胞凋亡

目的观察大鼠局灶性脑缺血再灌注后细胞凋亡及转化生长因子β1（TGF—β1）、Caspase-3表达的动态变化。方法制备高血压大鼠脑缺血再灌注模型,用免疫组织化学染色法及流式细胞术分别观察脑组织中TGF-β1、Caspase-3的表达及细胞凋亡。结果随再灌注时间增加,脑缺血再灌注产生的细胞凋亡也相应增加,在48h达到高峰,72h开始下降。TGF-β1与Caspase-3主要在缺血周围区表达,TGF-β1表达增高较快,在再灌注24h达高峰;Caspase-3表达增高较慢,在48h达高峰。结论细胞凋亡在局灶性脑缺血再灌流损伤中呈动态过程,是神经细胞死亡的重要形式。脑缺血诱导了TGF—β1与Caspase-3的表达,TGF—β1表达高峰早于Caspase-3出现。恰当时间窗内对TGF-β1、Caspase-3的干预将是有效治疗措施。     

TWEAK对新生大鼠心肌细胞增殖力和TGF-β1水平的影响

目的 肿瘤坏死因子样凋亡弱诱导因子（TWEAK）作为一种多功能的细胞因子,在细胞生长、分化、迁移、修复中起重要作用。然而,TWEAK对新生大鼠心肌细胞增殖的影响,及其与转化生长因子-β1（TGF-β1）的关系尚不明确。方法 通过培养新生SD大鼠的原代心肌细胞,应用TWEAK（20ng/ml）干预后培养24-48小时,应用CCK-8法检测心肌细胞增殖情况,以ELISA法检测细胞上清液的TGF-β1水平,同时分析二者相关性。结果 心肌细胞培养24小时,TWEAK干预组的心肌细胞CCK-8法检测OD值显著高于对照组（0.71±0.08vs.0.42±0.08,P=0.012）;培养48小时,TWEAK组的心肌细胞增殖力仍高于对照组（1.18±0.04 vs.0.92±0.03,P〈0.01）;同时,我们发现,TWEAK干预组,细胞上清液的TGF-β1水平显著高于对照组（24小时：133.1±4.3 vs.64.8±10.5 pg/ml,P〈0.01;48小时：187.3±7.9vs.66.8±8.4,P〈0.01）。通过Pearson相关性分析,我们还发现,CCK-8检测的细胞OD值与TGF-β1水平存在正相关,提示后者可能是TWEAK促进心肌细胞增殖的因素。结论 TWEAK可以促进新生大鼠心肌细胞的增殖,该机制可能与TGF-β1表达增高有关。     

半乳糖凝集素1表达下调对食管鳞癌细胞周期及迁移能力的影响及机制

目的观察半乳糖凝集素1(Galectin-1)表达下调对食管鳞癌细胞周期及迁移能力的影响及机制。方法利用脂质体2000转染食管鳞癌EC9706细胞。细胞分为3组,即未处理组、对照siRNA组和Galectin-1 siRNA组。采用半定量RT-PCR、免疫细胞化学检测各组食管鳞癌EC9706细胞中Galectin-1 mRNA和蛋白的表达;运用流式细胞术分析Galectin-1表达下调对食管鳞癌细胞周期的影响,采用Boyden小室分析Galectin-1表达下调对食管鳞癌细胞迁移能力的影响。采用半定量RT-PCR和Western印迹方法检测Galectin-1表达下调对细胞周期相关因子(cdk2、p27和p21)以及细胞迁移相关因子基质金属蛋白酶(MMP)-14 mRNA和蛋白的表达水平的变化。结果 Galectin-1 siRNA组与未处理组和对照siRNA组相比,Galectin-1 siRNA组中Galectin-1 mRNA和蛋白的表达均显著下调(P0.05);细胞周期在G0/G1期的细胞数呈显著升高(P0.05);细胞的穿膜数明显下降。Galectin-1 siRNA组中p27和p21 mRNA和蛋白的表达均显著高于未处理组和对照siRNA组(均P0.05),而cdk2和MMP-14 mRNA和蛋白的表达均显著低于未处理组和对照siRNA组(均P0.05)。结论 Galectin-1 siRNA能有效下调食管鳞癌EC9706细胞中Galectin-1 mRNA和蛋白的表达;Galectin-1表达下调能明显抑制食管癌EC9706细胞周期静止在G0/G1期,这可能与p21和p27表达的升高及cdk2表达的下调密切相关;并能降低食管鳞癌EC9706细胞的迁移,这可能与MMP-14表达的下调有关。     

TGF-β1对大鼠肝细胞系BRL-3A凋亡和细胞周期的影响

目的:研究转化生长因子β1(TGF-β1)对大鼠肝细胞系BRL-3A凋亡和细胞周期的影响.方法:MTT法检测TGF-β1对细胞增殖的影响:将BRL-3A细胞分为6组,分别给予不同浓度的TGF-β1(0、2、4、6、8、10μg/L),检测各组细胞24、36、48 h时的增殖活性;进一步将BRL-3A细胞分为TGF-β1...     

Smad4、TGF-β1、TGF-βR1表达与乳腺癌细胞恶性程度的相关性

目的探讨乳腺癌细胞株与乳腺癌临床标本中Smad4及转化生长因子(TGF)-β1、TGF-β受体(R)1的蛋白表达水平与乳腺癌发生、发展、转移等生物学行为及预后的相关性。方法利用免疫组织化学检测30例乳腺癌临床标本Smad4和TGF-β1、TGF-βR1蛋白表达,免疫细胞化学检测MCF-7、T47D、SKBR-3三种乳腺癌细胞的TGF-β1、TGF-βR1和Smad4蛋白表达,Western印迹检测乳腺癌TGF-βR1和Smad4蛋白表达,分析三种乳腺癌细胞TGF-β1、TGF-βR1和Smad4蛋白表达情况。结果免疫组化法结果显示,Smad4和TGF-βR1的表达水平在低度恶性的MCF-7细胞中明显高于高度恶性的SKBR-3细胞,中度恶性的T47D细胞介于二者之间。病理类型非浸润性癌组,TGF-β1、TGF-βR1及Smad4的表达水平明显高于恶性程度高的浸润性癌患者组,早期浸润性癌组介于二者之间。Western印迹显示,恶性程度低的MCF-7细胞,其TGF-βR1和Smad4的蛋白含量明显高于恶性程度高度的SKBR-3细胞。恶性程度低的患者TGF-βR1和Smad4的蛋白含量明显高于恶性程度高的患者。结论 TGF-β/Smads信号传导通路活性与乳腺癌的恶性程度呈负相关,Smad4、TGF-β1、TGF-βR1可能在乳腺癌演变中起抑制作用。     

TGF-β1、p15在食管鳞癌中的表达及其生物学意义

目的探讨转化生长因子β1（TGF-β1）、p15基因及其蛋白在食管鳞癌中的表达与食管鳞癌发生的关系。方法采用免疫组化SP法和原位杂交技术检测48例食管鳞癌组织,18例癌旁不典型增生组织和10例切缘正常组织中TGF-β1,与p15 mRNA及其蛋白的表达。结果食管鳞癌组织中TGF-β1的阳性表达率（62．5％）低于正常组织（100％）,P〈0．05;食管鳞癌组织中p15 mRNA和p15蛋白的阳性表达率分别为56．3％和47．9％,二者表达明显相关（X^2=22,P〈0．05）,均低于在正常组织和不典型增生组织中的表达（P〈0．05）;食管鳞癌组织中TGF-β1的表达与p15 mRNA的表达明显相关（X^2=23．84,P〈0．05）。结论食管鳞癌组织中TGF-β1对p15基因及其蛋白的转录可能有正向调节作用TGF-β1、p15基因及其蛋白的低表达可能与食管鳞癌的发生有关。     

miR-451对食管癌EC9706细胞增殖、凋亡及侵袭能力的影响

目的:探讨miR-451对食管癌EC9706细胞增殖、凋亡及侵袭能力的影响.方法:化学合成miR-451mimics,脂质体包裹转染EC9706细胞为miR-451组,同时设立无关序列(Scramble-miR)对照组、脂质体对照组和空白对照组.转染后48h,荧光定量RT-PCR检测miR-451表达量的变化,Westernblot检测Bcl-2、AKT和磷酸化AKT蛋白表达水平,流式细胞仪检测细胞凋亡情况,Transwell侵袭实验检测细胞侵袭能力的改变;MTT法检测转染后l、2、3、4、5、6d各组细胞增殖率.结果:miR-451组的miR-451表达水平显著上调(P<0.01,F=69.26),为空白对照组的15.84倍;miR-451组细胞Bcl-2、AKT和磷酸化AKT蛋白表达均显著下调(P<0.05,F=5.83);miR-451组细胞凋亡率为12.07%±1.12%,与3个对照组比较显著升高(P<0.01,F=26.72);miR-451组平均侵袭细胞数为47.4±7.4,与3个对照组比较显著降低(P<0.01,F=34.55).miR-451组细胞的生长在转染后2d出现显著抑制(P<0.05,F=5.95),并且随时间的延长而日益显著.结论:上调miR-451表达可抑制食管癌EC9706细胞增殖和侵袭,促进细胞凋亡.     

食管鳞癌中TGF-β1、CDK 4与临床病理因素关系的研究

目的研究食管鳞癌TGF-β1、CDK4蛋白水平及其在增殖、侵袭、转移中的作用.方法用免疫组化方法研究TGF-β1和CDK4蛋白表达,显微镜下计数阳性细胞指数(LI),进行分析.结果(1)TGF-β1与CDK 4表达正常食管黏膜阳性率与食管鳞癌组织相比两指标差异均有显著性;LI后者高于前者.(2)TGF-β1和CDK 4在食管鳞癌组织中的表达与年龄、性别、不同分化级别无明显关系(P＞0.05),而与淋巴结转移、食管外膜浸润临床分期有关(P＜0.05).(3)TGF-β1和CDK4两者表达呈正相关,Speaman相关系数=0.6122,P＜0.0001.结论(1)食管鳞癌中存在TGF-β1的高表达,其检测有辅助诊断价值,表达水平检测有助于判断肿瘤转移、浸润和后继治疗;其表达水平与组织分级无关,提示TGF-β1在促进肿瘤局部侵袭转移中的重大作用,有助于理解临床上一些肿瘤生物学行为与组织分级不符的现象.(2)CDK4在食管鳞癌中表达,促进了肿瘤发展、侵袭转移,是食管癌发生发展中的重要事件.(3)CDK 4升高可能在某一阶段,在促使肿瘤细胞对TGF-β1介导的生长抑制和促进凋亡作用产生逃逸现象中起一定作用.     

益肾活血胶囊对兔血管平滑肌细胞TGF-β1表达的影响

目的 探讨益肾活血胶囊提取液(YSHXC)对同型半胱氨酸(HCY)诱导的兔血管平滑肌细胞(VSMCs)转化生长因子β1(TGF-β1)表达的影响.方法 组织贴块法体外原代培养兔VSMCs,由HCY诱导建立细胞增殖模型并分组:正常组、HCY刺激组(HCY 1 mmol/L)、HCY 叶酸组(HCY 1 mmol/L 叶酸5 mmol/L)、HCY YSHXC大剂量组(HCY 1 mmol/L YSHXC 5 000 mg/L)、HCY YSHXC小剂量组(HCY 1 mmol/L YSHXC 500 mg/L).分别采用免疫组化及RT-PCR技术检测各组TGF-β1蛋白及mRNA的表达,同时通过MTT比色法测定细胞增殖活度.结果 HCY刺激后细胞数目明显增多,细胞内TGF-β1表达显著增强(P＜0.01),而YSHXC大、小剂量组细胞增殖活度减低,TGF-β1蛋白和mRNA的表达水平均下降(P＜0.01),并呈现剂量依赖性(P＜0.05),且此抑制作用优于叶酸组(P＜0s.01或P＜0.05).结论 YSHXC可明显抑制HCY诱导的细胞内TGF-β1的表达,减少平滑肌细胞的增殖,这可能对延缓动脉粥样硬化进程起到一定的作用.     

血清TGF-β1和IGF-1水平对冠心病患者心功能的影响

目的探讨血清转化生长因子(TGF-β1)和胰岛素样生长因子(IGF-1)水平对冠心病患者心功能的影响.方法选择因胸痛住院患者88例分为急性心肌梗死(AMI)组、心绞痛(AP)组和对照组,填调查表,入院择日行选择性冠状动脉造影术,术前采股动脉血,以ABC双抗体夹心ELISA法检测血清TGF-β1和IGF-1浓度,入院2周内完成超声心动图,所有资料用SPSS10.0软件处理.结果AMI患者与AP患者相比,血清TGF-β1浓度较低(P<0.05),IGF-1血清浓度较低(P<0.001);冠心病患者血清IGF-1水平与EF(P<0.05)和FS(P<0.02)正相关.结论TGF-β1和IGF-1对冠心病患者具有某种保护作用,其中IGF-1能保护冠心病患者的心功能.