荧光定量聚合酶链反应检测乙型肝炎患者血清HBV DNA及临床价值

目的探讨荧光定量聚合酶链反应法定量检测乙型肝炎病毒(HBV)核酸的临床应用价值。方法应用荧光定量聚合酶链反应定量检测1962例乙型肝炎患者血清HBV DNA水平并与血清HBV标志物进行比较,并对35例乙型肝炎患者在拉米夫定治疗前后血清HBV DNA含量及相关指标作动态观察。结果乙型肝炎患者HBVDNA定量范围在6.79×102～1.95×109拷贝/毫升之间,在HBeAg阳性患者,其检出率和定量拷贝数较高。拉米夫定治疗后患者外周血HBV DNA载量下降明显。结论荧光定量PCR法是一种相对准确、灵敏度高、特异性强的定量检测HBV DNA的技术,对乙型肝炎诊断、指导、临床用药和疗效监测方面具有实用价值。     

慢性乙型肝炎肝内炎症与HBV-DNA定量的关系

目的 探讨慢性乙型肝炎肝内炎症与HBV-DNA定量的关系，为临床正确估计肝内炎症情况提供依据。方法应用荧光定量PCR法检测74例慢性乙肝病人血清中HBV-DNA的含量，同时行肝穿刺病理检查。结果在HBsAg阳性病人中，HBV-DNA的水平与Scheuer分级无相关性，提示HBV-DNA的含量与肝内炎症活动程度无关。但是在HBeAb阳性病人有相关性，HBeAg阳性者中则无关。结论慢性乙型肝炎病人，如果不是在免疫耐受期，HBV-DNA复制水平与肝内炎症活动程度是相关的。由于HBV-DNA复制水平的增高先于ALT升高，检测HBV-DNA含量可能更有助干选择治疗的时机。     

慢性乙型肝炎患者干扰素治疗过程中乙型肝炎病毒核酸定量检测的临床意义

目的 观察慢性乙型肝炎患者干扰素治疗过程中乙型肝炎病毒核酸（HBV－DNA）的动态变化及其与乙型肝炎e抗原（HBeAg)和血清丙氨酸氨基转移酶（ALT）的关系。方法 对15例慢性乙型肝炎患者用美国生产的a-2b干扰素治疗，疗程8个月，不用其他辅助药物，并检测HBV－DNA浓度、乙型肝炎三系（HBV－M）和ALT的变化。结果 干扰素治疗后，HBV－DNA水平呈进行性下降，HBeAg转阴率为53.3%，ALT复常率为73.3%。结论 动态观察慢性乙型肝炎患者干扰素治疗前后HBV－DNA水平，可确切了解患者的感染状态，有助于病例的选择和疗程预后的估计。该指标的变化比HBeAg转阴更敏感，治疗期间应辩证地对待ALT的变化。     

肝组织HBVcccDNA定量检测在慢性乙型肝炎诊断及治疗中的作用

目的探讨肝组织HBVcccDNA定量在慢性乙型肝炎（CHB）诊断和治疗中的意义。方法使用荧光PCR检测仪,对85例CHB患者肝组织HBVcccDNA行定量检测,同时行肝组织及血清HBV-DNA定量检测。结果①85例CHB患者肝组织均检测到HBVcccDNA;②肝组织HBVcccDNA定量与肝组织HBV．DNA定量呈高度相关,与血清HBV-DNA定量亦呈正相关;③45例HBeAg阳性CHB患者应用拉米夫定治疗48周后,肝组织HBVcccDNA仍可维持一定水平（特别是血清HBV-DNA定量低于检测水平以下者）。结论肝组织HBVcccDNA定量检测,是评价HBV复制、感染持续、临床药物抗HBV疗效的可靠指标。     

定量聚合酶链反应检测慢性HBV感染者HBVDNA的临床意义

自1999年4月至2000年2月我院采用目前较灵敏的定量聚合酶链反应(PCR)技术共对320例慢性HBV感染患者进行了HBV DNA定量检测,并与HBV M指标,肝纤维化指标进行了比较,现将结果报告如下。 1.将320份病例分为HBsAg、HBeAg和抗-HBc阳性组,HBsAg、抗-HBe和抗-HBc阳性组,HB-sAg和抗-HBc阳性组,抗-HBe和抗-HBc阳性组及     

改良荧光定量PCR同步检测HBV-DNA含量及其熔解温度

目的通过改进荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)的单荧光标记,建立灵敏、特异的HBV-DNA含量及其熔解温度(Tm)的同步检测方法。方法根据荧光标记物质的不同,将FQ-PCR分为TaqMan SYBR GreenI双标记(T S组)、TaqMan探针单标记(T组)和SYBR GreenI染料单标记(S组)三种,同时检测HBV-DNA已知浓度为108.48、105.70、103.70和<1×103.00(copies/ml)的血清中HBV-DNA含量及Tm,每组FQ-PCR检测每份血清时1次做5个平行管。结果T S组检测的HBV-DNA阳性血清均为阳性,其平均含量为108.55±0.32、105.79±0.29、103.81±0.30,与T组的108.49±0.31、105.69±0.30、103.72±0.25copies/ml对应浓度值取10对数比较,无统计学意义(t=0.31、0.54和0.27,P>0.05);与S组的108.41±0.35、105.21±0.34和103.26±0.26copies/ml(不含未检出的两次血清)比较,除高浓度外,中低浓度有统计学意义(t=2.90和2.62,P<0.05)。T S组和S组阳性血清均出现明显熔解曲线,Tm分别为71.8℃、72℃和79.8℃,阴性血清未出现扩增曲线和Tm值。T S组、T组和S组的灵敏度分别为102.70、102.70和103.00copies/ml。结论改良的SYBR GreenI和TaqMan探针双标记的FQ-PCR检测HBV-DNA时,兼有TaqMan探针标记FQ-PCR的灵敏度高、特异性强和SYBR GreenI标记FQ-PCR的Tm分析的优点,能达到同步检测HBV-DNA含量及其Tm的目的,为HBV-DNA含量及其多态性分析,尤其是为HBV-DNA含量及其基因分型同步检测提供了新思路。     

定量检测慢性乙型肝炎患者肝组织HBV-DNA的临床意义

对２４例慢性乙型肝炎患者于肝穿同日留取血清,分别进行肝组织ＨＢＶ－ＤＮＡ,血清ＨＢＶ－ＤＮＡ定量检测及血清ＨＢｅＡｇ量的测定,并比较肝组织与血清ＨＢＶ－ＤＮＡ定量的差异,分析肝组织ＨＢＶＤＮＡ定量与血清ＨＢＶ－ＤＮＡ定量、ＨＢｅＡｇ量及肝功能指标之间的相关性,比较各型慢乙肝肝组织ＨＢＶ－ＤＮＡ定量的差异。结果显示,肝组织ＨＢＶ－ＤＮＡ定量明显 血清ＨＢＶ－ＤＮＡ定量,二者的对数值呈显著相关,肝组织     

病原学不明的慢性病毒性肝炎患者血清、肝组织中HBV DNA定量检测

在肝炎的诊断过程中发现 ,有相当一部分 (约 10 %～2 0 % )输血后或散发性肝炎病原学不明 ;最近研究发现 ,血清HBsAg阴性甚至血清免疫学乙型肝炎病毒标志 (HBVM)全阴性并不能排除HBV感染的存在[1 3 ] 。我们应用荧光定量聚合酶链反应 (FQ PCR)技术对 43例病原学不明的慢性病毒性肝炎患者进行了血清、肝组织HBVDNA定量检测 ,观察HBV在此类患者中的感染状况。材料与方法一、研究对象43例慢性病毒性肝炎均为近年收治的住院患者 ,男 2 9例 ,女 14例 ,年龄 ( 3 3 .2± 7.6)岁 ,诊断分型依照 2 0 0 0年 9月 (西安 )第十次全国病毒性肝…     

慢性乙型肝炎肝组织学分级与HBV DNA和HBeAg定量的关系

目的：探讨慢性乙型肝炎肝内炎症与HBV-DNA定量和HBeAg定量的关系，为临床正确估计肝内炎症提供依据。方法：应用荧光定量PCR法检测102例慢性乙肝患者血清中HBV-DNA含量，用放免法测定血清中HBeAg的含量，同时行肝穿病理学检查。结果：在HBeAg阳性患者中，HBV-DNA的水平与scheuex分级无相关性，提示HBV-DNA含量与肝内炎症活动程度无关。但在HBeAb阳性患者有相关性，HBeAg阳性中则无。HBeAg阳性患者中HBeAg定量于Scheuex分级明显相关。结论：慢性乙肝患者中，如果不是在免疫耐受期，HBV-DNA复制水平与肝内炎症活动程度是相关的。在HBeAg阳性患者中HBeAg含量与肝内炎症有密切的相关性，由于HBV-DNA复制水平先于ALT增高，检测HBV-DNA及HBeAg含量可能更有助于选择治疗的时机。     

慢性乙型肝炎患者血清、肝内HBV DNA定量及肝组织HBV DNA载量与肝组织损害程度的关系

目的 了解慢性乙型肝炎患者血清、肝内HBV DNA定量及肝组织HBV DNA载量与肝组织损害程度的关系.方法 经血清学及肝穿刺病理证实为慢性乙型肝炎患者38例,分为2组(HBeAg阳性组及HBeAg阴性组).采用ELISA法测定HBV-M、实时荧光定量检测血清及肝内HBV DNA定量、肝组织HBV DNA载量.结果 HBeAg阳性组血清、肝内HBV DNA定量及肝组织HBV DNA载量均高于HBeAg阴性组(P均<0.001);血清HBV DNA定量随肝脏纤维化程度加重而升高(P<0.01),但与肝脏炎症程度未见明显相关;肝组织HBV DNA载量则随肝脏炎症及纤维化程度加重而降低(P<0.001).结论 血清HBV DNA定量与肝组织纤维化程度呈正相关,肝组织HBV DNA载量则与肝组织的炎症及纤维化程度呈明显负相关.     

定量PCR检测慢性乙型肝炎患者HBV-DNA及其意义

目的了解慢乙肝患者抗-HBe阳性和e抗原阳性血清的病毒量及不同病变程度的慢乙肝与HBV感染量的关系.了解HBV-DNA含量和血清ALT水平之间的关系.方法临床确诊的89例慢乙肝患者,经ELISA测定后,选取30例HBeAg(+)/HBeAb(-)血清和30例HBeAg(-)/HBeAb(十)血清,采用AmpliSensor PCR定量技术,测定HBV-DNA.使用全自动生化分析仪,测定血清ALT水平.各组HBV-DNA含量和ALT水平用求算术平均值的方法计算.结果 HBeAg(+)/HBeAb(-)血清30例,HBV-DNA平均含量为(11.21±6.92)E拷贝/L;HBeAg(-)/HBeAb(+)血清22例,HBV-DNA平均含量为(9.73±5.61)E拷贝/L,两组具有显著差异(P＜0.05).轻度慢性乙肝17例,HBV-DNA平均含量为(10.93±6.22)E拷贝/L;中度慢性乙肝23例,HBV-DNA平均含量为(9.84±6.06)E拷贝/L;重度慢性乙肝12例,HBV-DNA平均含量为(8.72±5.62)E拷贝/L轻、重度组间HBV-DNA平均含量有显著差异(P＜0.05).血清ALT水平与肝组织病变程度无一致关系,与HBV-DNA含量亦无明显相关.结论多数抗-HBe阳性患者HBV仍持续复制,血清病毒量低于HBeAg(+)者.慢乙肝病变程度与HBV-DNA平均拷贝数成反比.肝脏炎症程度似可作为估计病毒量的间接指标.     

脑组织乙型肝炎病毒感染与病毒载量的关系

乙型肝炎病毒(HBV)具有泛嗜性,可在肝外组织器官中感染并复制。我们曾报道[1] 乙型肝炎肝硬化患者脑组织中存在HBV感染。为进一步了解脑组织中HBV抗原表达与血清尤其肝组织中HBV复制水平的关系,我们应用免疫组织化学技术、荧光定量聚合酶链反应(FQ PCR)技术对33例乙型肝炎肝硬化死亡患者脑组织HBsAg、HBcAg及血清、肝组织中HBVDNA含量进行了检测,并进行比较分析,现报道如下。材料与方法一、研究对象33例乙型肝炎肝硬化患者均为近年来收治的住院患者,其中男2 3例,女10例,平均年龄4 7.3岁。16例患者合并肝性脑病,死于肝功能衰竭,1…     

广东省东莞地区慢性乙型肝炎患者HBV基因型分析

目的探讨东莞地区乙型肝炎患者HBV基因型的分布特点。方法采用PCR-微板核酸杂交-ELISA法检测HBVA—F基因型，采用荧光定量-聚合酶链反应法检测血清HBVDNA定量。结果在295例乙型肝炎患者中检出HBV基因型247例（83．7％），其中HBV基因C型占62．3％（154／247）、B型15．4％（38／247）、D型6．9％（17／247）、B／C混合型4．9％（12／247）、C／D混合型5．3％（13／247）、B／D混合型5．3％（13／247），48例未检出基因型；基因C型感染者之间无性别差异（x^2=0．043，P〉0．05）；各基因型患者血清HBVDNA水平无显著性相差，但与48例未检出基因型者比，后者HBVDNA水平明显降低（P〈0．01）。结论PCR-微板核酸杂交-ELISA法检测HBV基因型具有特异、敏感、简单和实用的特点，东莞地区乙型肝炎患者HBV基因型以C型为主，混合型比例相对较高，HBV复制强弱与病毒基因型无关。     

慢性乙型肝炎病毒感染者病毒载量与丙氨酸氨基转移酶水平的关系

用荧光定量聚合酶链反应(PCR)方法检测血清乙型肝炎病毒(HBV)DNA含量，对不同HBV感染状态患者血清HBV载量与丙氨酸氨基转移酶(ALT)水平的关系进行了探讨。     

乙型肝炎患者肝活动指数与血清HBV DNA含量关系初探

为了研究肝组织活动性积分(HAI)与血清HBV DNA含量之间的关系,我们对21例CHB患者行肝穿活检、计算HAI,采用信号引物能量转移定量PCR测定患者血清HBV DNA水平。结果显示随着肝功能损害程度增加,HAI增加、患者血清HBV DNA含量有降低趋势,但均无显著性差别(P>0.05)。结果显示,肝脏组织学损害程度与血清HBV DNA含量无明显相关。血清HBV DNA水平测定并不能准确判断患者病情。     

丙氨酸氨基转移酶正常人群隐匿型乙型肝炎病毒核酸的检测

[目的]了解隐匿型乙型肝炎病毒(occult HBV)在丙氨酸氨基转移酶(ALT)正常人群中的感染情况。[方法]应用荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)方法检测538例ALT正常、HBsAg阴性人群血清中HBV-DNA水平。[结果]538例人群中HBV-DNA阳性率为15.6%,男性(22.8%)显著高于女性(7.8%)(P<0.01),≥50岁(16.7%)与<50岁(15.5%)差异无统计学意义(P>0.05),有输血史(21.9%)高于无输血史(14.1%)(P<0.05),且HBV-DNA水平均<103.6copies/ml。[结论]ALT正常人群中存在隐匿型HBV感染,且与输血史和性别有关。提示临床进行输血和器官移植等异体成分治疗时,在检测ALT和HBV标志物的同时,应结合灵敏度高的FQ-PCR方法检测HBV-DNA,以杜绝隐匿型HBV传播的可能性。     

定量检测慢性乙型肝炎患者肝组织乙型肝炎病毒DNA的临床价值

目的探讨慢性乙型肝炎(CHB)患者肝内乙型肝炎病毒(HBV)DNA载量与血清HBV DNA、乙型肝炎病毒e抗原(HBeAg)水平的相关性及其在抗病毒治疗中的意义.方法41例HBeAg阳性CHB患者,在干扰素α和拉米夫定联合治疗前进行肝穿刺,取肝组织分别进行HBV DNA检测及组织学检查,据肝组织HBVDNA载量小于等于或大于104fg/cm3将其分为两组,治疗前及治疗期间监测其肝功能、血清HBeAg及HBV DNA情况.结果(1)肝组织HBV DNA载量高于血清HBV DNA载量(对数值4.081±1.127与3.163±1.010,t=2.218,P＜0.05),二者高度相关(r=0.840,t=4.322,P＜0.001);肝组织HBV DNA载量与血清HBeAg亦呈正相关(r=0.459,t=3.056,P＜0.005).(2)肝组织HBV DNA载量与肝组织炎症活动度呈反向关系(x2=3.874,P＜0.05).(3)治疗期间两组患者血清HBV DNA水平均明显下降,治疗前肝组织HBV DNA水平低者效果较好;治疗1年时HBeAg、抗-HBe血清转化率以肝组织HBV DNA水平低者为高(HBeAg转阴率68.4%与36.4%,x2=4.194,P＜0.05;抗-HBe阳转率73.7%与40.9%,x2=4.447,P＜0.05).结论肝组织HBV DNA水平较血清HBV DNA、HBeAg水平更能准确反映肝组织HBV DNA复制情况,且能间接反映机体的免疫状态,可作为抗病毒治疗适应证选择及疗效预测因子.     

2种实时荧光定量聚合酶链式反应法检测HBeAg阳性慢性乙型肝炎患者血清HBV RNA的一致性分析

目的 评价S（Shengxiang）公司、X（Xinbo）公司两种实时荧光定量聚合酶链式反应（real-time PCR）方法定量检测HBV RNA结果的一致性。方法 从2007年7月—2008年8月组建的108例慢性乙型肝炎（CHB）前瞻性随访患者队列中,选取HBeAg血清学转换患者20例进行1∶1倾向性评分匹配未转换患者20例,采用S公司和X公司两种real-time PCR定量检测方法,回顾性检测基线、12周、24周及48周血清样本HBV RNA。符合正态分布的计量资料组间比较采用配对t检验;不符合正态分布的计量资料组间比较采用Mann-Whitney U检验。计数资料采用χ²检验。通过Pearson相关系数、组内相关系数（ICC）和Bland-Altman法评价检测结果的一致性。结果 S试剂检测132份血清样本,X试剂检测154份血清样本,两种试剂对送检样本中HBV RNA检出率均为100%。两种试剂共同检测血清样本131份,在基线、随访12周、24周及48周分别检测34、29、35及33份血清,X试剂检测HBV RNA定量数据分别为（5.75±1.64、...     

e抗原阴性和阳性慢性乙型肝炎患者血清HBVDNA定量与肝组织病理学关系

目的研究HBeAg阴性和阳性慢性乙型肝炎（以下简称慢乙肝）患者血清HBVDNA定量与肝组织炎症活动度及纤维化程度的关系。方法选取慢乙肝患者68例,行肝穿刺病理检查,并检测血清HBVDNA定量,按照HBeAg阴性和阳性分组,进行相关性检验。结果HBeAg阴性患者血清HBVDNA定量与肝组织炎症活动度及纤维化程度之间呈明显正相关,r分别为0．706、0．689,P均小于0．05;HBeAg阳性者血清HBVDNA定量与肝组织炎症活动度及纤维化程度之间均无相关性,r分别为-0．119、-0．096,P均大于0．05。结论血清HBVDNA定量可作为HBeAg阴性慢乙肝患者肝组织损伤程度的预测指标之一。     

两种乙型肝炎病毒核酸定量检测试剂的检验重复性与一致性比较

目的评估罗氏与国产乙型肝炎病毒核酸定量检测试剂的检验重复性与一致性分析,为临床应用提供参考。方法采用原装进口罗氏与国产乙型肝炎病毒核酸定量检测试剂盒检测滴度为60、170、1 700、17 000 IU/mL的WHO标准HBV DNA样本各20次,评估两种试剂的可溯源性和可重复性。再检测曾经或正在接受乙肝抗病毒治疗的患者9组(HBV DNA载量分别为50、50~200、~102、~103、~104、~105、~106、~107、~108IU/mL),每组20例,评估两种试剂的一致性。结果 WHO标准HBV DNA样本检测得到罗氏检测试剂ICC值为0.93(F=12.51,P0.0001),国产检测试剂为0.82(F=8.72,P0.0001),可得罗氏检测重复性优于国产组。通过两组临床血清检测的检测结果进行相关性分析结果得两者相关系数r=0.849,P0.0001,相关性良好。两组临床血清检测的Bland-Altman图,可见两种检测试剂结果差值90%的位点位于95%置信区间参考范围内,说明两种检验方法间一致性良好。结论罗氏乙型肝炎病毒核酸定量检测试剂的检测结果与国产试剂相比,一致性良好,但罗氏乙型肝炎病毒核酸定量检测试剂的重复性优于国产试剂,是乙肝患者抗病毒治疗过程中病毒载量监控的金标准。