OPG/RANKL/RANK信号通路在牙槽骨代谢中研究进展

<正>近年来,许多细胞因子被发现在调节骨代谢方面起着重要作用。其中,以骨保护素(osteoprotegerin, OPG)、核因子-κb受体活化因子配体(receptor activator of NF-κb ligand, RANKL)、核因子-κb受体活化因子(receptor activator of NF-κb, RANK)3部分组成的OPG/RANKL/RANK信号通路是众多因子活化破骨细胞的最终环节,在牙槽骨代谢中发挥着重要作用。     

PI3K/Akt信号通路在磷酸三钙磨损颗粒诱导小鼠颅骨溶解中的作用

目的:研究PI3K/Akt信号通路在磷酸三钙(tricalcium phosphate,TCP)磨损颗粒诱导小鼠颅骨溶解中的作用。方法:36只雄性ICR小鼠随机分为假手术组(Sham)、模型组(TCP)和LY294002处理组,每组12只。取TCP磨损颗粒30 mg置于颅顶后缝合皮肤构建小鼠颅骨溶解模型。LY294002处理组小鼠于术后第2天颅顶局部注射PI3K抑制剂LY294002(5 mg·kg~(-1)),每周3次;假手术组小鼠颅骨顶仅注射生理盐水,注射时间与LY294002一致。2周后处死动物取骨膜和颅骨。通过Micro-CT分析小鼠颅骨溶解情况、骨密度(bone mineral density,BMD)和骨矿含量(bone mineral content,BMC);HE染色观察颅骨表面炎症反应及破骨细胞(osteoclasts)形成;Real-time PCR检测骨组织中破骨细胞生成标志物抗酒石酸酸性磷酸酶(tartrate-resistant acid phosphatase,TRAP)、组织蛋白酶K(cathepsin K,Cst K)、核因子κB受体活化因子配体(receptor activator for nuclear factor-κB kigand,RANKL)和c-Fos的m RNA水平;ELISA检测骨膜中炎症因子TNF-α、IL-1β和IL-6等水平;Western Blotting检测颅骨组织Akt、p-Akt Ser473和p-AktThr308等蛋白表达变化。结果:Micro-CT和组织形态学分析结果显示,PI3K抑制剂LY294002能明显抑制TCP磨损颗粒诱导小鼠颅骨溶解和破骨细胞形成(P<0.05),增加BMD和BMC含量(P<0.05);下调破骨细胞生成标志物TRAP、Cst K、RANKL和c-Fos等m RNA水平(P<0.05),并抑制炎症因子TNF-α、IL-1β和IL-6的释放(P<0.05);而且LY294002显著减弱TCP磨损颗粒诱导的Akt信号蛋白活化,导致p-Akt S-er473和p-AktThr308等蛋白表达明显下调(P<0.05)。结论:PI3K/Akt信号通路参与调控TCP磨损颗粒诱导的假体周围骨溶解,可作为假体周围骨溶解和关节松动的治疗靶标。     

低氧对小鼠成骨细胞OPG及RANKL基因表达的影响

目的:观察低氧对体外培养的小鼠成骨细胞护骨素(osteoprotegerin,OPG)及NF-κB受体活化因子配体(receptor activator of NF-κB ligand,RANKL)基因表达的影响。方法:取出生24h内的新生小鼠40只,在无菌条件下取其颅盖骨,去除纤维组织,用胰蛋白酶-胶原酶消化法进行成骨细胞的原代培养。取第3~5代细胞分为常氧组和低氧组(3%O2),分别缺氧6、12、24、48和72h后,从培养液贴壁细胞中抽提总RNA,应用RT-PCR检测各组OPG和RANKL的基因表达变化。结果:低氧组各时间点OPG基因表达均较常氧组显著减弱,且随时间延长而减弱;而RANKL基因表达均较常氧组显著增强,以24h时最为明显。结论:低氧可以抑制小鼠成骨细胞OPG基因表达,同时刺激RANKL基因的表达。     

NF-κB配体受体激动因子在脊髓损伤后骨髓间充质干细胞移植中的作用

目的探讨NF-κB配体受体激动因子(receptor activator of NF-kappa B ligand,RANKL)在脊髓损伤后人骨髓间充质干细胞(hBMSCs)移植中对神经功能恢复的影响。方法Wistar大鼠60只,体重250～350 g,雌雄不限,随机分为3组:(1)hBMSCs组,脊髓半横切后行hBMSCs移植;(2)RANKL hBMSCs组,脊髓半横切后hBMSCs和RANKL协同移植;(3)PBS组,脊髓半横切,移植物以PBS代替。移植后1,7,14,21,28 d采用行为学指标观察大鼠神经功能恢复情况,应用免疫组化和免疫荧光技术检测移植的BrdU标记hBMSCs在宿主脊髓内胶质纤维酸性蛋白(GFAP)和神经元特异性核蛋白(NeuN)的表达情况。结果大鼠脊髓半横切损伤后,hBMSCs组和RANKL hBMSCs组均较PBS对照组有明显的神经功能恢复;而移植7,14 d时,RANKL hBMSCs组动物较hBMSCs组神经功能恢复明显。RANKL hBMSCs组中hBMSCs-Ne- uN和hBMSCs-GFAP双标阳性率高于hBMSCs组。结论RANKL和hBMSCs协同移植可提高脊髓损伤后神经病学预后,提高hBMSCs在宿主体内向神经细胞的分化。     

131I对分化型甲状腺癌细胞核因子κB表达和功能的影响

目的 探讨131I对DTC细胞核因子κB(NF-κB)表达和功能的影响,以及1311和NF-κB抑制剂Bay 11-7082联合治疗的可行性.方法 用不同放射性浓度131I和不同浓度Bay 11-7082处理DTC细胞,加入四氮唑盐显色,测定450 nm的吸光度(A)值,用公式(A药物处理组- A空白)/(A对照组-A空白)×100％计算癌细胞存活率(A空白为空白孔的吸光度,A对照组为单纯细胞孔的吸光度);选择癌细胞存活率约60％左右的131I和Bay 11-7082浓度进行联合实验.将131I和Bay 11-7082作用于DTC细胞6、24和48 h后,提取核蛋白,分别与NF-κB结合序列探针相结合,测定450 nm的A值,NF-κB的DNA结合率=(A药物处理组-A空白)/(A对照组- A空白)×100％.用Western blot鉴定单用131I、Bay 11-7082和联合用药6h后NF-κB核蛋白相对表达水平的变化,并以β-actin作为内参对照进行半定量分析.用配对t检验、F检验和q检验进行统计分析.结果 细胞存活分析发现不同放射性浓度131 I和不同浓度Bay 11-7082处理后癌细胞的存活率不同(F=281.07和173.84,P均＜0.01);单用131I组、单用Bay 11-7082组与联合用药组癌细胞的存活率分别为(67.33 ±5.65)％、(61.83±6.68)％和(36.67±5.35)％,差异有统计学意义(F =45.79,P＜0.01),其中前2组分别与联合处理组相比q=8.20和8.35,P均＜0.01.DNA结合实验证实131I可以诱导癌细胞内NF-κB结合率增高,24h为(255.33±29.86)％(最高);而联合使用Bay 11-7082后,在6、24和48 h时间点能够抑制到相应刺激状态下NF-κB功能的22.10％、39.75％和43.18％,联合处理组与单用131I组比较,3个时间点差异均有统计学意义(t:24.58、26.29和8.20,P均＜0.01);6h时NF-κB p65功能受抑程度最明显,DNA结合率仅为(35.33±8.21)％,与对照组相比差异有统计学意义(t=28.98,P＜0.01).半定量分析:131I作用6h后p65和p50相对表达水平均升高,Bay 11-7082联合131I作用6h后两者的表达水平均受到明显抑制;不同给药方式作用后p65和p50的相对表达水平差异均有统计学意义(F=100.93和193.55,P均＜0.01),131I组和对照组两两比较,q=4.75和8.22,P均＜0.05,联合处理组与对照组两两比较,q=30.80和22.83,P均＜0.01.结论 131I会导致DTC细胞NF-κB表达增加、功能增强,联合使用NF-κB抑制剂可以抑制这种改变,获得协同疗效.     

低氧对破骨细胞活性的影响及其机制

目的:观察低氧对乳兔破骨细胞分化、活性的影响,并研究其可能的机制.方法:培养乳兔破骨细胞、成骨细胞,TRAP染色鉴定破骨细胞,比较破骨细胞在常氧(含氧量20％)及低氧(含氧量3％)条件下骨吸收陷窝面积.破骨细胞加入到第3代成骨细胞中分别于常氧和低氧条件下进行共培养,第24、48、72、96 h检测RANK、OPG、RANKL、TRAP及CtsK mRNA的表达.结果:各时间点低氧组RANK、RANKL、CtsK、TRAP mRNA表达均高于常氧组;OPG mRNA的表达低于常氧组组,具有统计学差异(P＜0.05或P＜0.01).结论:低氧可激活破骨细胞TRAP和CtsK基因的上游信号,增强破骨细胞活性.     

双波长激光结合多肽凝胶治疗牙周牙髓联合病变的疗效及对MIP-1α、RANKL表达的影响

目的 探究双波长激光结合多肽凝胶治疗牙周牙髓联合病变患者的疗效,以及对巨噬细胞炎症蛋白-1α(macrophage inflammatory protein-1α,MIP-1α)和核因子κB受体活化因子配体（receptor activator of NF-κB ligand,RANKL）表达的影响。方法 选取2019年7月至2022年1月,牙周牙髓合并病变患者160例,随机分为观察组和对照组,每组患者各80例。两组患者均先进行常规牙周基础治疗后,对照组采用牙周袋内注满抗菌多肽凝胶治疗;观察组在对照组基础上给予Nd∶YAG激光（脉冲峰值功率1.5 W,频率2 Hz,脉冲能量300 mJ,光斑直径1 mm,波长532 nm）消毒牙根和Er∶YAG激光（脉冲峰值功率2.0 W,频率15 Hz,脉冲能量60 mJ,光斑直径1 mm,波长2.94μm）照射牙周袋抗炎治疗。治疗前和末次治疗后6周,采用视觉模拟评分法（visual analogue scale,VAS）判定患者的疼痛程度。末次治疗后6周,观察两组患者牙周菌斑指数（plaque index,PLI）、临床附着水平（clinical ...     

弱激光对正畸过程中牙齿疼痛和牙周炎症的疗效观察

目的探讨弱激光对正畸治疗过程中牙齿疼痛和牙周炎症的影响,为其临床应用奠定数据支撑。方法前瞻性研究2017～2018年,AO自锁托槽正畸治疗患者65例,分为研究组和对照组,两组患者均在拔除上颌第一前磨牙后置入AO自锁托槽。其中对照组患者32例,正畸治疗过程中采用常规口腔管理;研究组患者33例,正畸后1、3和7 d予以波长810 nm激光照射,能量密度15.9 J/cm~2,每个点照射时间20 s。之后每月照射1次,直至取出微种植体。两组患者分别于AO自锁托槽和植入微种植体后1、3和7 d比较正畸治疗过程中的疼痛程度;正畸治疗后6个月口腔探诊,比较两组的牙龈指数、菌斑指数、改良龈沟出血指数(sulcus bleeding index,SBI)、微种植体周探诊深度(probing depth,PD)及尖牙远中移动距离(movedistance,MD);正畸治疗后7 d,1、3和6个月取龈沟液,采用ELISA实验测定炎性因子肿瘤坏死因子(tumor necrosis factorα,TNF-α)、白细胞介素1β(interleukin-1β,IL-1β)水平;疼痛介质前列腺素E_2(prostaglandin E_2,PGE_2)、前列腺素F_(2α)(prostaglandin F_(2α),PGF_(2α))水平;牙周改建标志物骨碱性磷酸酶(bone alkaline phosphatase,BALP)、核因子κB受体活化因子配体(receptor activator of nuclear factor κB ligand,RANKL)、核因子κB受体活化因子(receptor activator of nuclear factorκB,RANK)以及骨保护素(osteoprotegerin,OPG)水平。结果研究组置入自锁托槽7 d、植入微种植体3 d和7 d的疼痛评分均低于对照组,差异具有统计学意义(P0.05)。治疗6个月时,两组间的牙龈指数、菌斑指数、PD及出血指数差异均无统计学意义(P0.05);但研究组MD高于对照组,差异具有统计学意义(P0.05)。研究组治疗7 d和3个月时的TNF-α、IL-1β和PGE2水平低于对照组(P0.05),治疗3和6个月时的BALP和OPG水平高于对照组,差异具有统计学意义(P0.05)。结论弱激光能较好的缓解正畸过程中牙齿疼痛与牙周炎症,为牙周改建提供良好的微环境,具有一定的推广价值。     

MEBT/ MEBO对慢性难愈合创面 NF-κB p65、IκBα、IKK及其磷酸化蛋白表达水平的影响

【摘要】 目的 探讨创疡再生医疗技术 (MEBT/MEBO) 对慢性难愈合创面组织中核因子 κB (NF-κB) p65?NF-κB 抑制蛋白(IκB)、IκB激酶(IKK) 及其磷酸化蛋白表达水平的影响。 方法 选取 SPF 级雄性 Wistar 大鼠90 只适应性饲养1周后,按照随机数表法将其随机分为空白组、对照组、模型组、MEBO组和贝复新组,每组18 只。空白组大鼠仅做备皮处理,对照组大鼠建立急性创面模型,模型组、MEBO组、贝复新组大鼠建立慢性难愈合创面模型?空白组大鼠备皮处皮肤及对照组、模型组大鼠创面采用生理盐水纱布换药处理,MEBO 组大鼠创面采用湿润烧伤膏 (MEBO) 药纱换药处理,贝复新组大鼠创面采用重组牛碱性成纤维细胞生长因子换药处理,对比各组大鼠干预第3、7、14天创面愈合率、组织病理学变化,以及皮肤/ 创面组织中NF-κB p65、IκBα、IKK及 p-NF-κB p65、p-IκBα、p-IKK 蛋白表达水平。结果 (1)干预第 3、7 天,各组大鼠创面愈合率均无明显差异(P均＞0. 05);干预第 14 天,模型组大鼠创面愈合率明显低于对照组、MEBO组(P均＜0.05),其余各组间创面愈合率均无明显差异 (P均＞0.05)。(2)干预第 7 天,MEBO 组、贝复新组大鼠创面组织中胶原纤维量均明显增加,可见大量成纤维细胞和新生毛细血管及少量毛囊结构生成; 干预第14天,MEBO 组、贝复新组大鼠创面组织中胶原纤维量明显多于模型组,可见整齐排列的毛细血管及成熟的毛囊、皮脂腺等组织,而模型组大鼠创面组织中仍可见少量炎症细胞浸润,但已有大量成纤维细胞生成。(3) 干预第7、14天,空白组、对照组、MEBO组大鼠创面组织中 NF-κB p65、IKK、p-NF-κB p65、p-IKK、p-IκBα 蛋白表达水平均明显低于模型组(P均＜0.05);干预第 7 天,MEBO 组大鼠创面组织中 NF-κB p65、IκBα 蛋白表达水平均明显高于贝复新组 (P均＜0.05),IKK、p-NF-κB p65、p-IKK、p-IκBα 蛋白表达水平均明显低于贝复新组 (P 均＜0.05); 干预第 14天,MEBO 组大鼠创面组织中 IKK、IκBα蛋白表达水平均明显低于贝复新组 (P 均＜0.05)。结论 MEBT/ MEBO促进慢性难愈合创面愈合的机制可能与创面组织中 NF-κB p65、IκBα、IKK 及其磷酸化蛋白的表达水平有关。     

肝脾失调型早期类风湿关节炎影像学征象与RANK/RANKL/OPG系统相关性研究

目的 :探讨肝脾失调型早期类风湿关节炎(RA)影像学征象与细胞核因子κB受体活化因子(RANK)/细胞核因子κB受体活化因子配基(RANKL)/护骨素(OPG)系统的相关性,寻找一种更完善的识别早期RA骨破坏的预警指标。方法:将符合诊断标准的90例RA早期患者进行辨证分型,分别行双手/腕和双下肢前后位平片影像学检查,并进行分期及影像学评估。按其骨侵蚀程度分为骨侵蚀组和非骨侵蚀组,观察2组中医症候量化与28个关节疾病活动度(DAS28)评分、实验室指标与影像学征象,并进行统计学分析。结果:非骨侵蚀组占70.0%(63/90),骨侵蚀组占30.0%(27/90)。骨侵蚀组Sharp总评分为(3.5±5.6)分,关节狭窄评分为(14.0±7.3)分,关节侵蚀评分为(17.5±6.5)分。骨侵蚀组Sharp评分与风湿指标、骨代谢指标均有明显相关性(均P0.05),尤其是与RANKL、OPG明显相关(均P0.01);与TRAP显著相关(均P0.05);与抗CCP抗体明显相关(均P0.01)。结论:RA发病早期,肝脾失调的功能表现大多早于关节局部症状,且RANKL、OPG、RANKL/OPG、TRAP、抗CCP抗体水平比其影像学变化能够更早预示RA出现骨质破坏的可能,抗体水平越高,预示将来进展性骨质破坏可能愈严重。     

骨桥蛋白对RANKL诱导破骨细胞分化的影响

 目的 初步探讨骨桥蛋白对破骨细胞体外分化的影响。方法 体外培养小鼠破骨前体RAW264.7细胞,RANKL诱导刺激其分化为破骨细胞,并加入骨桥蛋白进行干预。MTT法及TRAP染色分别检测破骨细胞细胞增殖及前体破骨细胞分化情况,RT-PCR检测RANK的mRNA表达水平。结果 骨桥蛋白可明显促进RAW264.7细胞向破骨细胞分化、增加细胞增殖,与对照组相比差异具有统计学意义(P＜0.05),并使破骨细胞特征性基因RANK的mRNA表达上调约2.67倍。结论 骨桥蛋白可能通过影响RANK/RANKL信号通路促进RAW264.7细胞分化为破骨细胞,有望成为防治骨质疏松等骨相关疾病的新靶点。
     

高压氧对化疗相关外周神经痛的预防作用及其机制

目的:探讨高压氧可否预防化疗相关外周神经痛(CIPNP),同时,以脊髓大麻素受体(CBRs)为主要靶点,探讨其作用机制。方法:75只雄性SD大鼠按随机数字表法分为5组,即空白对照组、模型对照组、高压氧干预组、高压氧＋AM630组及高压氧＋AM251组,每组15只。CIPNP模型采取紫杉醇腹腔注射法建立,所有干预组从第1...     

大麻素受体2在胫骨癌痛大鼠脊髓的表达及意义

目的探讨大麻素受体2（CB2）在胫骨癌痛大鼠脊髓的表达及其在癌痛产生和维持中的作用。方法 雌性SD大鼠42只,体重160～180g,随机分为5组：对照组（C组）、假手术组（S组）、骨癌痛组（BCP组）、DMSO（二甲基亚砜）组（D组）和CB2选择性拮抗剂AM630组（A组）。采用右侧胫骨干骺端骨髓腔内注射5μlWalker256（4×105）乳腺癌细胞制备大鼠胫骨癌痛模型,于接种后第7d从S组和BCP组分别随机选取6只,同C组的大鼠一起处死取脊髓,采用免疫印迹技术观察脊髓CB2的表达,在接种后的第1、2及第3天按照分组D组和A组分别鞘内注射DMSO0.15μl和溶于1%DMSO的AM63015μg。分别于注射肿瘤前1d、注射后的第1、3、5、7、14、21d（T0～6）测定机械痛阈和热痛阈。结果免疫印迹显示C组大鼠脊髓基本没有CB2的表达,与C组及S组相比,BCP组接种后第7d脊髓CB2表达水平升高。鞘内注射AM630癌细胞后大鼠接种后肢提前出现机械痛觉过敏现象。结论脊髓CB2参与大鼠胫骨癌痛的产生和维持。     

偏瘫性肩痛患者腋囊的MRI观测及临床意义

目的通过MRI技术观察偏瘫患者肩疼痛腋囊形态变化,为影像诊断提供依据。方法对47例偏瘫性肩疼痛患者(疼痛组)和47例正常肩部(对照组),运用MRI技术对肩关节腋囊进行测量,观察腋囊下肱盂韧带信号。结果偏瘫性肩疼痛的腋囊厚度(4.1±1.45)mm,高于对照组。腋囊腔高度(8.70±1.80)mm,腋囊腔宽度(4.31±0.56)mm,小于对照组。偏瘫性肩痛下肱盂韧带呈高信号出现率达21%,腋囊厚度与VAS呈正相关,与肩关节外展外旋呈负相关。结论脑中风中后期肩周炎是引起偏瘫性肩疼痛患者的常见原因,腋囊厚度是限制肩关节活动度的重要因素。     

利莫那班改善KKAy小鼠糖脂代谢与外周CB1受体表达的初步研究

目的探讨利莫那班改善KKAy小鼠糖、脂代谢紊乱与外周组织CB1受体（CB1R）表达的关系。方法 10周龄C57BL/6J和KKAy小鼠各分两组,分别灌胃给予溶剂和10 mg/kg利莫那班,1次/d,共计26 d。给药期间每天测定小鼠体质量,给药20 d时测空腹血糖,实验结束时测定血清甘油三酯（TG）、总胆固醇（TC）;采用Multiplex法测定血清胰岛素、瘦素和脂联素含量;测定小鼠肝体、脂体系数,并对肝脏和附睾脂中CB1R表达进行免疫印迹法分析。结果 （1）KKAy小鼠糖、脂代谢明显紊乱。利莫那班特异性地改变KKAy小鼠的特征,如降低空腹血糖（P〈0.05）;降低血清TC水平（P〈0.05）、血清胰岛素（P〈0.01）并升高血清脂联素水平（P〈0.05）;减轻体质量、降低肝体和脂体系数（P〈0.05）,对C57小鼠无影响。（2）KKAy小鼠肝脏CB1R的表达水平显著低于C57小鼠（P〈0.01）,而附睾脂CB1R表达水平显著高于C57小鼠（P〈0.01）,附睾脂中CB1R表达水平达肝脏的6倍以上。（3）利莫那班可显著降低KKAy小鼠肝脏（P〈0.05）和附睾脂CB1R的表达（P〈0.01）,而对C57小鼠肝脏和附睾中CB1R表达的作用较弱。结论利莫那班能够改善KKAy小鼠糖、脂代谢紊乱,该作用与其降低外周组织尤其是附睾脂中CB1R表达相关。     

免疫诱导IRM-2小鼠再生障碍性贫血模型的研究

目的 建立IRM-2小鼠再生障碍性贫血(AA)实验动物模型, 并检测其血液及相关免疫学指标。 方法 IRM-2小鼠经137Cs γ射线6 Gy照射后, 输入DBA/2小鼠的胸腺细胞, 建成免疫介导型AA模型。实验分3组, 即对照组、照射组和AA模型组, 于照射后第15天检测小鼠的血常规和免疫学指标。 结果 IRM-2小鼠AA模型组外周血WBC、RBC、骨髓有核细胞数和网织红细胞百分比分别为(2.38±0.53)×109/L、(8.22±0.21)×1012/L、(7.14±1.19)×106/股骨和(50.2±8.9)‰, 均低于对照组[(8.23±0.41)×109/L、(10.24±0.91)×1012/L、(16.5±1.61)×106/股骨和(76.2±9.7)‰]; IRM-2小鼠AA模型组免疫学指标中CD4+细胞比例[(8.91±2.55)%]低于对照组[(16.14±3.09)%], CD8+细胞比例[(13.55±2.12)%]高于对照组[(6.83±1.14)%]。IRM-2小鼠AA模型组外周血及免疫学指标与对照组比较, 差异均具有统计学意义。 结论 IRM-2小鼠AA动物模型的建立, 对AA的研究具有较好的应用价值。     

Evaluation of the angiogenesis inhibitor KR-31831 in SKOV-3 tumor-bearing mice using (64)Cu-DOTA-VEGF(121) and microPET

KR-31831 ((2R,3R,4S)-6-amino-4-[N-(4-chloropheyl)-N-(1H-imidazol-2ylmethyl)amino]-3-hydroxyl-2-methyl-2-dimethoxymethyl-3,4-dihydro-2H-1-benzopyran), an angiogenesis inhibitor, was evaluated in tumor-bearing mice using molecular imaging technology. Pre-treatment microPET images were acquired on SKOV-3 cell-implanted nude mice after injection with (64)Cu-DOTA-VEGF(121). KR-31831 (50 mg/kg) was then injected intraperitoneally into the treatment group (n=3), while injection vehicle was injected into the control (n=4) and blocking (n=3) groups. After injections occurred daily for 28 days, all groups of mice underwent post-treatment microPET imaging after injection with (64)Cu-DOTA-VEGF(121). The post-treatment images showed high tumor uptake in the control group and reduced tumor uptake in both the blocking and treatment groups. ROI analysis of the tumor images revealed 6.25%±1.18% ID/g at 1 h, 6.55%±0.69% ID/g at 2 h, and 4.68%±0.63% ID/g at 16 h in the control group; 3.87%±0.45% ID/g at 1 h, 4.50%±0.44% ID/g at 2 h, and 3.63%±0.25% ID/g at 16 h in the blocking group; and 4.03%±0.74% ID/g at 1 h, 4.37%±0.67% ID/g at 2 h, and 3.83%±0.90% ID/g at 16 h in the treatment group. Biodistribution obtained after the post-treatment microPET imaging also demonstrated high tumor uptake (3.74%±0.27% ID/g) in the control group and reduced uptakes in both the blocking group (2.69%±0.73% ID/g, P<.05) and the treatment group (3.11%±0.25% ID/g, P<.05), which correlated well with microPET imaging data. Immunofluorescence analysis showed higher levels of VEGFR2 and CD31 expressions in tumor tissues of the control and blocking groups than in tumor tissues of the treatment group. These results suggest that the antiangiogenic activity of KR-31831 is mediated through VEGFR2 and microPET serves as a useful molecular imaging tool for evaluation of a newly developed angiogenesis inhibitor, KR-31831.     

细菌鞭毛蛋白衍生物CZLC331对溃疡性结肠炎小鼠抑郁行为的影响

 目的 研究细菌鞭毛蛋白衍生物CZLC331对溃疡性结肠炎(ulcerative colitis, UC)小鼠抑郁行为的影响。方法 将18只小鼠随机分为模型组、治疗组和对照组,每组6只。模型组与治疗组首先采用2,4,6-三硝基苯磺酸(2,4,6-Trinitrobenzenesulfonic acid,TNBS)溶液灌肠的方法建立小鼠UC模型,模型组正常喂养2 d,而治疗组在造模后4 h腹腔注射3.2 mg/kg CZLC331蛋白;对照组采用380 ml/L乙醇溶液灌肠1次,正常喂养2 d。比较三组小鼠强迫游泳实验时间、小鼠悬尾实验时间、小鼠糖水偏爱百分比。结果 在强迫游泳实验和悬尾实验中,治疗组小鼠不动时间[(64.7±10.4)s,(62.5±13.9)s]均低于模型组[(86.7±16.0)s,(111.3±41.1)s],并且高于对照组[(21.0±5.3)s,(16.0±8.3)s],差异均有统计学意义(P＜0.01)。在糖水偏爱实验中,治疗组小鼠糖水偏爱(66.5±7.3)%高于模型组(34.5±4.6)%,低于对照组(77.2±7.7)%,差异均有统计学意义(P＜0.01)。结论 细菌鞭毛蛋白衍生物CZLC331可以有效改善UC小鼠的抑郁程度。     

Cannabinoid receptor type 2 is time-dependently expressed during skin wound healing in mice

Dynamic localization of CB2R and quantitative analysis of CB2R mRNA during skin wound healing in mice were performed. Co-localization of CB2R with F4/80 or α-SMA was detected by double-color immunofluorescence microscopy. A total of 110 male mice were divided into control, injury, and postmortem groups. Sixty-five mice were sacrificed, followed by sampling at 0.5 h-21?days post-injury. Five mice without incision were used as control. The other 40 mice that received incised wound were sacrificed at 5?days after injury. The samples were collected at 0?h-3?days postmortem. In the uninjured controls, CB2R immunoreactivity was detected in the epidermis, hair follicles, sebaceous glands, dermomuscular layer, and vascular smooth muscle. In the incision groups, polymorphonulcear cells, macrophages, and myofibroblasts showed positive staining for CB2R. Morphometrically, the average ratios of CB2R-positive cells were more than 50?% at 5?days post-wounding, whereas it was <50?% at the other posttraumatic intervals. The average ratios of CB2R-positive macrophages maximized at 3?days post-wounding, and the average ratios of CB2R-positive myofibroblasts peaked at 5?days post-wounding. The relative quantity of CB2R mRNA expression maximized at posttraumatic 5?days in comparison with control as detected by real-time PCR, with an average ratio of >4.10, which was also confirmed by Western blotting. There was no significant change for CB2R protein within 6?h postmortem and for mRNA within 3?h postmortem as compared with the control group. In conclusion, dynamic distribution and expression of CB2R suggest that CB2R is involved in modulating macrophages and myofibroblasts in response to inflammatory event and repair process in mouse skin wound healing, and CB2R is available as a marker for wound age determination.     

重组融合蛋白rTMP-GH促进放射损伤小鼠 血小板生成的实验研究

目的 研究TPO模拟肽(TMP)与人生长激素(GH)的重组融合蛋白rTMP-GH对放射损伤小鼠血小板生成的促进作用。方法 ⁶⁰Coγ射线全身一次性均匀照射5 Gy,照后皮下注射200 μg／kg 的rTMP-GH或rhGH,每日1次,连续用药7 d,对照组给予同等体积生理盐水。尾静脉取血检测血小板数量变化;照后16 d取小鼠股骨,组织切片观察骨髓病理变化。结果 照后10 d起,rTMP-GH处理组各时相的外周血血小板数明显高于rhGH处理组和生理盐水对照组,尤其是血小板的最低值显著升高( P <0.01),照后22 d已升至正常水平的80%,对照组仅为30%。骨髓病理观察显示,rTMP-GH处理组骨髓造血重建明显,并见大量不同时期巨核细胞;rTMP-GH处理组骨髓组织切片每个视野下的巨核细胞平均数(3.07±0.32)明显高于rhGH处理组(2.20±0.22, P <0.05)和生理盐水对照组(0.87±0.19, P <0.01)。结论 rTMP-GH能快速、有效地促进放射损伤小鼠骨髓巨核细胞增生和血小板生成。