扇贝多肽对抗UVB辐照所致小鼠胸腺淋巴细胞凋亡的研究

目的研究扇贝多肽(PCF)对中波紫外线(UVB)辐照损伤小鼠胸腺淋巴细胞的保护作用。方法以UVB辐照制备损伤模型,预先给予PCF,应用透视电镜观察细胞超微结构的变化;免疫细胞化学检测细胞p53,Bcl-2,Bax基因蛋白的表达;原位杂交检测细胞P38mRNA的基因表达。结果UVB辐照引起小鼠胸腺淋巴细胞凋亡,PCF能明显减轻UVB辐射损伤引起的细胞超微结构改变。PCF还能抑制突变型p53蛋白和促凋亡蛋白Bax的表达,增强凋亡抑制蛋白Bcl-2的表达以及抑制P38 mRNA基因的表达。结论PCF对UVB辐照的体外小鼠胸腺淋巴细胞具有明显的保护作用。     

扇贝多肽对紫外线辐照小鼠胸腺淋巴细胞的保护作用

建立体外培养的小鼠胸腺淋巴细胞紫外线（UV）辐射损伤的病理模型，采用MTT法检测细胞活性；酶生化法测定胞浆超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）、活性氧（ROS）、丙二醛（MDA）含量以及细胞抗超氧阴离子能力（A-SAC）和总抗氧化能力（T-AOC）；流式细胞仪Rhodamine 123荧光染色测定线粒体膜电位（△ψM）等方法，探扇讨贝多肽（PCF）对小鼠胸腺淋巴细胞辐射损伤的保护作用及机制。结果显示PCF能显著提高小鼠胸腺淋巴细胞的活性；抑制紫外线辐射所致淋巴细胞的损伤，显著提高细胞荣中SOD、GSH-Px的活性，降低ROS，MDA含量，提高A-SAC及T-AOC；稳定线拉体的膜电位；表明扇贝多肽对紫外线辐射损伤的小鼠胸腺淋巴细胞具有保护作用。其作用机制与PCF能清除氧自由基、提高抗氧化酶活性，保护细胞膜组织结构有关。     

扇贝多肽对UVB辐射小鼠胸腺淋巴细胞PI3K/Akt和ASK1-JNK信号通路的影响

目的 研究扇贝多肽(polypeptide from Chlamys farreri,PCF)对紫外线B(UVB)辐射损伤小鼠胸腺淋巴细胞后P13K/Akt和ASK1-JNK信号通路的影响.方法 UVB辐射小鼠胸腺淋巴细胞,用比色法测定胸腺淋巴细胞活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平;western-blot检测Akt的活性,预先加入或不加入P13K/Akt通路特异性抑制剂LY294002检测细胞凋亡信号调节激酶Ⅰ(apoptosis signal regulating kinase-1,ASK1)、JNK的活性、线粒体膜电位(ACM)和DNA ladder.结果 PCF能激活AKT的活性,抑制UVB对小鼠胸腺淋巴细胞ASK1凋亡通路的活化.结论 PCF通过降低细胞内活性氧的含量,提高AKT的活性,引起ASK1的降解,导致ASK1-JNK诱导的细胞凋亡抑制.     

扇贝多肽对UVB损伤HaCaT细胞的抗氧化作用

目的研究扇贝多肽(PCF)对UVB损伤HaCaT细胞的抗氧化作用。方法HaCaT细胞与PCF孵育1h后，接受UVB辐射，继续孵育18h后，采用酶化学法测定细胞超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH—Px)、过氧化氢酶(CAT)活性、以及测定其总抗氧化能力(T—AOC)、丙二醛(MDA)水平。结果PCF能提高HaCaT细胞内抗氧化酶SOD，GSH—Px，CAT活性，增强细胞总抗氧化能力并减少脂质过氧化产物MDA的产生。结论PCF能增加细胞内抗氧化酶活性，抑制脂质过氧化反应，具有抗氧化作用。     

扇贝多肽对60Co辐射损伤小鼠的保护作用

采用生物化学方法研讨扇贝多肽(PCF)对小鼠^60Co辐射损伤的保护作用。结果表明，PCF能显著升高^60Co辐射小鼠胸腺系数和脾系数；提高组织匀浆中SOD和GSH—Px活性，降低ROS和MDA含量，同时提高总抗氧化能力，且PCF的作用呈剂量依赖性。提示PCF具有一定的抗辐射作用，这可能与其抗氧化及能提高机体免疫功能有关。     

扇贝多肽对小鼠免疫功能调节的研究

目的探讨扇贝多肽(PCF)对免疫低下小鼠免疫功能的调节作用。方法应用地塞米松(DEX)建立小鼠免疫抑制模型，通过形态学、细胞功能学和流式细胞分析等方法研究PCF腹腔注射对机体免疫功能的影响。结果：PCF腹腔注射能够明显改善DEX所致的免疫低下反应．脾脏白髓组织明显增大，外周血T淋巴细胞数量增多和脾淋巴细胞对ConA诱导的转化能力明显提高。结论PCF腹腔注射对小鼠免疫功能具有一定的正向调节作用，可能主要是通过影响外周成熟的免疫细胞而发挥作用。     

扇贝多肽对淋巴细胞的保护作用和反相液相色谱分析

为进一步研究扇贝多肽对淋马细胞的作用及其成分。采用地塞米松与脾脏和胸腺淋巴细胞共同培养,建立了淋巴细胞免疫抑制实验模型。并利用反人相色谱法对ＰＣＦ进行了分析。结果表明,ＤＥＸ能显著降低脾脏和胸腺淋巴细胞的活性,ＤＥＸ组吸收度值明显降低;而ＰＣＦ不仅能显著地减轻其对免疫细胞的抑制作用,同时还可以促进免疫细胞的活性,使ＤＥＸ＋ＰＣＦ组吸收度值明显增高。相对分子质量为８００～１０００Ｄ的ＰＣＦ经ＲＰＬＣ     

扇贝多肽经由死亡受体和线粒体通路抑制UVB诱导的HaCaT细胞凋亡

目的从凋亡相关分子Fas(CD95)、半胱天冬酶-3(caspase-3)和活性氧(ROS)、细胞色素C的角度,研究扇贝多肽(polypeptide fromChlamys farreri,PCF)抑制UVB引起的人角质HaCaT细胞凋亡的分子机制。方法实验设计为5组:对照组、UVB模型组、UVB+5.69mmol.L-1PCF组、UVB+2.84mmol.L-1PCF组、UVB+1.42mmol·L-1PCF组。应用小干扰RNA(siRNA)干扰UVB辐射的HaCaT细胞的Fas表达;琼脂糖凝胶电泳分析Fas siRNA及ROS清除剂NAC对细胞凋亡的影响;以DCFH-DA为荧光探针,检测细胞内ROS的含量;免疫印迹法检测细胞色素C及用RNAi干扰降低Fas表达后caspase-3的表达。结果干扰Fas后,UVB辐射的HaCaT细胞凋亡受到明显抑制及caspase-3的表达降低;NAC对UVB诱导的HaCaT细胞凋亡有抑制作用;1.42~5.69mmol.L-1剂量范围内的PCF可剂量依赖性抑制UVB引起的ROS的生成及细胞色素C的释放。结论PCF可抑制UVB诱导的HaCaT细胞凋亡,其作用机制与抑制Fas-caspase-3及ROS-细胞色素C通路有关。     

扇贝多肽对60Co辐射损伤的胸腺细胞的影响作用的研究

本文用噻唑盐比色方法探讨在60Co辐射损伤条件下扇贝多肽对胸腺细胞的保护作用.和对60Co辐射损伤的胸腺细胞修复能力的影响.结果表明(1)60C0辐射后胸腺细胞的活性明显下降.(2)先加扇贝多肽后辐射组的胸腺细胞的活性较未加扇贝多肽的辐射组强(P＜0.05),0.25%～4%浓度范围内,胸腺细胞的活性与扇贝多肽的浓度呈正比.当辐射强度加大到9～10GY时,0.5%以下的扇贝多肽保护能力减弱或丧失.(3)先60Co辐射后2h,再加入扇贝多肽孵育,胸腺细胞的活性随扇贝多肽浓度的加大而增强.辐射后7h或19h再加入扇贝多肽,仅在辐射7h后加入2%的扇贝多肽孵育的胸腺细胞的活性较对照组活性强;辐射后19h再加入扇贝多肽组的胸腺细胞的活性均较对照组显著降低(P＜0.05).结果提示提示扇贝多肽具有抵抗60Co辐射对胸腺细胞的损伤作用,并且呈剂量依赖性;而且在一定的时间范围内对受到辐射损伤后的胸腺细胞具有促进其修复的作用.     

扇贝多肽对UVB辐射诱导HaCat细胞凋亡的抑制作用及其机制

目的建立中波紫外线对体外培养的HaCat细胞辐射损伤病理模型,探讨扇贝多肽(PCF)对HaCat细胞辐射损伤的保护作用及机制。方法将培养的HaCat细胞分组并给予相应的药物,经UVB照射后,琼脂糖凝胶电泳观察各组的DNA ladder;流式细胞仪检测细胞内Caspase-3的含量;Western-blot检测ERKs,JNKs和p38的水平。结果PCF能减少UVB所致的HaCat细胞DNA片段的出现,减少UVB诱导的HaCat细胞内的Caspase-3的含量,还能提高ERKs的水平,但降低JNKs及p38的水平。结论PCF能抑制UVB辐射诱导的细胞凋亡,对UVB辐射损伤的细胞具有保护作用。其作用机制可能是通过调节MAPKs的信号通路和Caspase级联实现。     

扇贝多肽在中波紫外线诱导的HaCaT细胞凋亡中对p38MAPK-HSP27通路的影响

目的从p38MAPK-HSP27通路方面研究扇贝多肽(polypeptide from Chlamys farreri,PCF)抑制中波紫外线(UVB)诱导的HaCaT细胞凋亡的作用机制。方法复制UVB诱导的HaCaT细胞凋亡模型;实验设计为6组:对照组、UVB模型组、UVB+5.69mmol.L-1维生素C阳性对照组、UVB+5.69mmol.L-1PCF组、UVB+2.84mmol.L-1PCF组、UVB+1.42mmol.L-1PCF组。PCF预处理30min,荧光染色(Hoechst33258)结合琼脂糖凝胶电泳分析PCF在p38抑制剂(SB203580)存在和不存在两种条件下对UVB诱导的HaCaT细胞凋亡的影响;蛋白质印迹法检测p38MAPK、HSP27的表达及磷酸化水平的改变,同时分析HSP27在细胞内定位的改变。结果PCF可明显抑制UVB诱导的HaCaT细胞凋亡;PCF在1.42~5.69mmol.L-1范围内,可剂量依赖性抑制p38MAPK和HSP27的磷酸化水平,并抑制HSP27由胞质向胞核中的移位。结论PCF通过阻断p38MAPK-HSP27通路来抑制UVB诱导的HaCaT细胞凋亡,其作用机制与抑制p38MAPK的活化从而阻止HSP27的磷酸化及其细胞内移位有关。     

Molecular mechanisms of polypeptide from Chlamys farreri protecting HaCaT cells from apoptosis induced by UVA plus UVB

Aim： To investigate the mechanism of polypeptide from Chlamysfarreri （PCF） protecting HaCaT cells from apoptosis induced by UVA plus UVB in vitro. Methods： An apoptotic model of UV irradiation-induced HaCaT cells was established. The 3-（4,5-dimethyl-2-thiazolyl）-2,5-diphenyl-2H-tetrazolium bromide assay, agarose gel electrophoresis, biochemical methods, and Western blotting were employed in the study. Results： PCF inhibited the UV irradiation-induced apoptosis of HaCaT cells. PCF strongly reduced the intracellular reactive oxygen species level, enhanced activities of superoxide dismutase and glutathione per- oxidase and increased the total anti-oxidative capacity in HaCaT cells following UV irradiation. Furthermore, we found that PCF could inhibit the phosphorylation of c-Jun amino-terminal kinase and the activity of caspase-3 in a concentration- dependent manner. Conclusion： PCF protected HaCaT cells from apoptosis induced by UVA plus UVB, mainly through decreasing the intracellular ROS level and increasing the activities of anti-oxidative enzymes to block the ROS-JNK-caspase-3-apoptosis signaling pathway.     

扇贝多肽经由EGFR-CDK-4通路抑制UVA诱导的HaCaT细胞凋亡

目的建立8J.cm-2紫外线A(UVA)辐射损伤永生化的人角质形成细胞株(HaCaT)细胞的病理模型,经由信号通路的表皮生长因子受体(EGFR),磷脂酰肌醇-3激酶(AKT),细胞周期蛋白(CyclinD1)至周期蛋白依赖激酶4(CDK-4)角度研究扇贝多肽(Polypeptide from Chlamys farreri,PCF)抑制UVA诱导HaCaT细胞凋亡的分子机制。方法采用琼脂糖凝胶电泳检测细胞凋亡;RT-PCR和DNA测序法检测胞内表皮生长因子受体EGFR的mRNA表达及基因变化;蛋白印迹法检测AKT,p-AKT,CyclinD1及CDK-4的蛋白表达水平。结果EGFR抑制剂AG1478和AKT抑制剂PHZ1023均可阻断UVA引起的细胞凋亡;1.42～5.68mmol.L-1范围内的PCF可抑制UVA辐射后细胞内EGFR的表达量。预先加入AG1478和PHZ1023则分别抑制UVA引起的AKT及CyclinD1,CDK-4蛋白水平的表达。结论PCF可以通过阻断EGFR-CDK-4通路来抑制UVA诱导的HaCaT细胞凋亡。     

扇贝多肽对紫外线B辐射人真皮成纤维细胞线粒体的保护作用

目的:研究扇贝多肽(PCF)对中波紫外线(UVB)辐射人真皮成纤维细胞线粒体的影响。方法:检测丙二醛(MDA)含量以及细胞内抗氧化酶(SOD、GSH-PX)的活性;流式细胞术测定线粒体膜电位;透射电镜观察细胞超微结构的变化。结果:UVB(1.176×10~(-4)J·cm~(-2))导致真皮成纤维细胞线粒体损伤,PCF(0.25％-1％)剂量依赖性地减轻UVB对线粒体的损伤;而且,PCF也可剂量依赖性地维持线粒体膜电位的相对稳定,PCF能够减少MDA的生成量,提高SOD及GSH-PX的活性,PCF各组与UVB模型组相比差异有显著性(P<0.05,P<0.01)。结论:PCF保护成纤维细胞的线粒体免受UVB的损伤。