组织检材的PCR性别鉴定研究

作者用引物Ｙ３、Ｙ４通过ＰＣＲ技术对微量陈旧的组织检材进行了扩增，扩增的靶序列位于Ｙ染色体ＤＮＡ特异３．４Ｋｂ重复序列中，产物为４４６ｐｂ。检材是新鲜组织、甲醛固定组织、石蜡包埋组织和ＨＥ染色切片组织。检材的保存时间从凡小时到五年。结果表明：新鲜组织，１０％中性缓冲甲醛固定一年以下的组织和石蜡包埋３年以下的组织均可做为ＰＣＲ性别鉴定的良好检材。     

用Alu－pCR法快速检测人体组织AluDNA

通常，做ＰＣＲ需先从组织中提取ＤＮＡ。本文报道用ＰＣＲ法直接检测人体１８种组织的ＡｌｕＤＮＡ。结果发现：除新鲜组织外，固定包埋的组织也可用作ＰＣＲ分析；扩增产物荧光带的亮度随固定组织的不同而有差异；甲醛固定时间对ＤＮＡ和ＰＣＲ结果有明显影响，而甲醛固定、石蜡包埋后的存放时间对ＰＣＲ扩增结果的影响则不明显。作者认为直接用组织作ＰＣＲ法检测人体组织ＡｌｕＤＮＡ能简化操作步骤，避免外源性ＤＮＡ和核酸酶的污染，以及苯酚与氯仿对人体的伤害，便于推广应用。     

多重聚合酶链反应分析石蜡包埋组织多肿瘤抵制基因探讨

目的：建立一种敏感、特异和快速检测石蜡包埋组织中多肿瘤抑制基因（ＭＴＳ１）的方法。方法：利用改良的ＤＮＡ制备方法,成功的从甲醛固定、石蜡包埋组织中提取ＤＮＡ,同时用建立的多重聚合酶合链反应（ＰＣＲ）进行检测。结果：３０例石蜡包埋的正常组织与新鲜组织提取的ＤＮＡ经ＰＣＲ扩增后,电泳图谱都出现５３６ｂｐ和３１０ｂｐ,即结果相同。结论：轵要提取、纯化得当,石蜡包埋组织在分子生物学研究领域中将有重要应用价     

从石蜡包埋的组织中提取DNA的研究

我们将Ｓｈｉｂａｔａ制备ＤＮＡ的方法加以改进，采用二甲苯脱蜡、酚—氯仿—异戊醇抽提、乙醇沉淀等步骤，成功地从经甲醛固定、石蜡包埋的食管癌组织中提取出ＤＮＡ，用于聚合酶链式反应（ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅｃｈａｉｎｒｅａｃｔｉｏｎ，ＰＣＲ）。结果与从新鲜冷冻组织提取的ＤＮＡ结果相似，解决了分子生物学研究中在短时间内难以得到大量新鲜肿瘤组织标本的难题。     

SIV模型猴石蜡包埋淋巴结组织DNA的提取及病毒基因检查

从取材于３只ＳＩＶ感染治疗猴和４只ＳＩＶ艾滋病模型猴治疗前后的１１份石蜡包埋淋巴结活检组织中提成基因组ＤＮＡ，分别用ＰＣＲ和巢式ＰＣＲ方法检测ＳＩＶ病毒基因，ＰＣＲ共检出１０份阳性，巢式ＰＣＲ检测１１价样品均阳性，而同期采样的猴外周血标本病毒分离仅３份阳性，ＰＣＲ扩增产物的特异性用限制性内切酶酶切反应得到证实。实验说明，从淋巴结组织中检测ＳＩＶ的病毒基因较外周血病毒分离更能真实地反映病毒感染状况，本研究将对全面和正确评价艾滋病药吻和疫苗治疗效果提供帮助。     

PCR 影响因素初探(二) 模板 DNA 质量对 PCR 结果的影响

本文探索了模板ＤＮＡ浓度和质量对ＰＣＲ扩增结果的影响。结果表明模板ＤＮＡ的质和量，特别是其中待扩增的目的基因原始拷贝数量是影响ＰＣＲ反应结果的重要因素。用较高浓度，较完整长度及不含或少含蛋白成分的核酸作模板，并使用更敏感的方法检测ＰＣＲ产物，可避免假阴性反应和提高ＰＣＲ技术的敏感性和特异性。同时，实验结果还证实用新鲜或液氮冻存组织ＤＮＡ作模板，优于石蜡包埋组织。     

用染色的石蜡包埋组织为模板进行PCR扩增

用染色的石蜡包埋组织为模板进行ＰＣＲ扩增刘宝瑞，张学庸（西京医院消化内科）关键词聚合酶链反应；基因诊断；方法；石蜡中图法分类号Ｑ７８１目前，以未染色的石蜡包埋组织为模板已能成功地进行ＰＣＲ［ＧｒｅｅｒＣＥｅｔａｌ．ＡｍＪＣｌｉｎＰｈａｔｈｏｌ，１９９...     

PRC技术鉴定毛发,陈旧血痕的性别

本文作者用ＰＣＲ技术对３例保存３年半的血痕及新鲜毛发标本进行性别鉴定，其方法是从陈旧血痕及新鲜毛发标本中提取ＤＮＡ，用蛋白酶Ｋ进行消化，然后用两组引起Ｙ１．１与Ｙ１．２和Ａｕｌ９．１、Ａｕｌ９．２及国产ＦＤ耐热ＤＮＡ聚合酶进行聚合酶链反应扩增ＤＮＡ，电泳分析Ｙ及Ａｕｌ重复序列，从而判断血痕及毛发性别。     

改良一步法从甲醛固定-石蜡包埋组织中提取RNA

作者利用自行改良的一步法(异硫氰酸胍方法),从甲醛固定石蜡包埋组织提取ＲＮＡ并获得成功,现报道如下。一、材料与方法1组织材料及细胞:35例胆囊组织石蜡包埋标本在手术中切下后常规10%甲醛固定2～10ｈ,石蜡包埋。标本在常温下已保存1～7年。ＫＢＶ1细胞株是人类Ｈｅｌａ细胞的子代细胞。从ＫＢＶ1细胞抽提的ＲＮＡ用作逆转录聚合酶链式反应(ＲＴＰＣＲ)实验的对照组。2.从石蜡包埋组织中分离ＲＮＡ:实验过程从一步法[1]中改良得来。根据蜡块中组织块的大小取40～100μｍ组织切片。经脱蜡、离心和梯度乙醇清洗后获取组织。组织干燥后加入0.…     

PCR对SSCP检测p53基因杂合性缺失的影响

对比观察了常规ＰＣＲ及半巢式ＰＣＲ对ＳＳＣＰ检测乳腺用ｐ５３基因杂合性缺失的影响。结果显示，半巢式ＰＣＲ能将石蜡包埋组织ｐ５３基因第４外显子ＤＮＡ片段ＰＣＲ扩增成功率由８２．５％提高到１００％，但应用半巢式ＰＣＲ产物对１３例杂合子病人ＳＳＣＰ分析显示，乳腺癌组织ｐ５３基因杂合性缺失由常规ＰＣＲ─ＳＳＣＰ检出阳性６例降低至１例。本研究结果表明，半巢式ＰＣＲ虽能提高ＰＣＲ的敏感性，但由于乳腺癌组织往往混杂有一些正常组织成分，二次ＰＣＲ扩增增加了正常组织ＤＮＡ对肿瘤组织ＤＮＡ的影响，因而不适用于乳腺癌ｐ５３基因杂合性缺失的研究。     

福尔马林固定石蜡包埋组织DNA提取方法对PCR的影响

目的：比较多种福尔马林固定石蜡包埋组织ＤＮＡ提取方法对ＰＣＲ的影响,探讨临床组织病理标本理想的ＤＮＡ提取方法及ＰＣＲ应用。方法：采用５种不同的ＤＮＡ提取方法应用ＰＣＲ技术进行了比较。结果：Ｔｗｅｅｎ ２０,ＮＰ ４０加蛋白酶Ｋ法和亚氨基二乙酸法处理标本时ＰＣＲ结果较为理想。结论：合适的福尔马林固定石蜡包埋组织ＤＮＡ提取方法可应用ＰＣＲ进行ＤＮＡ水平的相应的研究。     

福尔马林固定石蜡包埋组织DNA提取方法对PCR的影响

目的：比较多种福尔马林固定石蜡包埋组织ＤＮＡ提取方法对ＰＣＲ的影响,探讨临床组织病理标本理想的ＤＮＡ提取方法及ＰＣＲ应用。方法：采用５种不同的ＤＮＡ提取方法应用ＰＣＲ技术进行了比较。结果：Ｔｗｅｅｎ－２０,ＮＰ－４０加蛋白酶Ｋ法和亚氨基二酸法处理标本时ＰＣＲ结果较为理想。结论：合适的福尔马林固定石蜡包埋ＤＮＡ提取方法可应用ＰＣＲ进行ＤＮＡ水平的相应的研究。     

用聚合酶链反应检测喉鳞癌细胞内人乳头状瘤病毒DNA

用聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术检测喉鳞状细胞癌患者的经福尔马林固定、石蜡包埋的组织标本２８例。从石蜡包埋的癌组织提取的人乳头状瘤病毒ＤＮＡ（ＨＰＶＤＮＡｓ）用ＨＰＶ－１６，１８试剂盒进行ＰＣＲ扩增。其中５例（１８％）扩增阳性。声带癌ＨＰＶ－１６，１８的阳性率较其它部位的高（占阳性８０％）。结果提示：ＨＰＶ－１６，１８的感染在喉癌的发生中起到一定的作用。声门区的喉鳞癌与宫颈癌的发生类似，与ＨＰＶ－１６，１８的感染有密切的联系。     

聚合酶链反应实验中使用石蜡包埋材料的一点体会

聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术是近年发展起来的一种快速、特定的ＤＮＡ片断体外扩增技术，为单克隆测序技术的一种。此法操作简单，能在普通实验室完成。我们经１年多的摸索，就ＰＣＲ实验中遇到的有关石蜡包埋组织中ＤＮＡ提取和扩增的一些问题及解决方法归纳如下。ａ．在...     

PCR技术检测孕妇外周血中胎儿细胞的研究

根据Ｙ染色体序列特点，含有Ｙ染色体特异重复ＤＮＡ族（ＤＹＺ１）８００～５０００拷贝、新设计一对引物Ｙ３、Ｙ４经聚合酶链反应（ＰＣＲ）扩增该序列的特定片段，来检测孕妇血中胎儿细胞。作者用此方法扩增各妊娠早、中、晚孕妇外周血标本粗提ＤＮＡ，检测男性胎儿细胞，与相应的绒毛、羊水及娩出胎儿性别相比较，符合率分别为９３％、１００％、８７．５％。本研究为无创伤性产前诊断提供了新的途径。     

喉不典型增生和喉癌的P53基因PCR—SSCP的研究及临床应用

目的：探讨Ｐ５３基因突变在喉癌发生中的作用及石蜡包埋组织在分子生物学研究中的价值。方法：应用ＰＣＲ－ＳＳＣＰ对１９例喉癌和３４例不典型增生的石蜡包埋组织进行了Ｐ５３基因的研究，应用４种方法从石蜡组织中提取ＤＮＡ，通过银染方法显示ＤＮＡ突变带，结果：１９例喉癌中有５例突变（Ｅ４－０，Ｅ５－１，Ｅ６－２，Ｅ７－１，Ｅ８，９－１），其突变率为７．０％，在３４例不典型增生中有３例发生突变（Ｅ４－０，Ｅ５－     

用聚合酶链反应检测宫颈癌组织中人巨细胞病毒DNA相关序列

为建立检测人巨细胞病毒感染的ＰＣＲ方法并探讨ＨＣＭＶ与宫颈癌的关系，从石蜡包埋和活检宫颈癌组织中提取ＤＮＡ，用聚合酶链反应体外扩增ＨＣＭＶＥｃｏＲＩＤ片段上一段长１５２ｂｐ的核酸序列，再用地高辛末端转移标记法标记和扩增片段互补的ＨＣＭＶ寡核苷酸探讨，用该探针证实扩增片段的特异性。     

PCR-RFLP技术在甲醛固定石蜡包埋组织中的应用

目的:探讨mtDNA分析技术在甲醛固定石蜡包埋组织中的应用.方法:应用限制酶RsaI和MnlI消化mtDNA D-LOOP区(HVI16106-16297)PCR扩增产物,聚丙烯凝胶电泳进行RFLP分型的方法,对随机个体血液样品150例.正常组织10例和甲醛固定石蜡包埋组织5例进行检验.结果:在150例随机个体中,Rs...     

喉不典型增生和喉癌的P_(53)基因PCR-SSCP的研究及临床应用

目的：探求Ｐ５３基因突变在喉癌发生中的作用及石蜡包埋组织在分子生物学研究中的价值。方法：应用ＰＣＲ－ＳＳＣＰ方法对１９例喉癌和３４例不典型增生的石蜡包埋组织进行Ｐ５３基因的研究，应用４种方法从石蜡组织中提取ＤＮＡ，通过银染方法显示ＤＮＡ突变带。结果：１９例喉癌中有５例发生突变（Ｅ４－０，Ｅ５－１，Ｅ６－２，Ｅ７－１，Ｅ８，９－１），其突变率为７．０％；在３４例不典型增生中有３例发生突变（Ｅ４－０，Ｅ５－１，Ｅ６－１，Ｅ７－０，Ｅ８，９－１）其突变率为４．０％。结论：表明Ｐ５３基因突变可能是喉癌发生的始动因素。ＰＣＲ－ＳＳＣＰ方法可以做为喉不典型增生定性诊断和喉癌早期诊断的指标。     

单细胞PCR对种植前胚胎的性别鉴定

目的：用单一胚细胞进行人类种植前胚 性别鉴定。方法：巢式ＰＣＲ技术同时扩增单个活细胞Ｙ染色体上的ＳＲＹ序列及位于７号染色体上的ＺＰ３基因阳性，８个显示ＺＰ３基因阳性而ＳＲＹ阴性。结论选择ＳＲＹ和ＺＰ３基因引物对单个细胞进行巢式ＰＣＲ扩增是种植前胚胎性别鉴定的一种可靠的方法。