人白细胞介素2单克隆抗体的制备

作者采用自行制备ＩＬ─２纯品及免疫ＢＡＬＢ／Ｌ小鼠，将脾细胞与ＮＳ─１细胞融合，获得具有分泌稳定性抗体的高效价杂交瘤细胞株，细胞连续传４２代仍稳定分泌单克隆杭体，该抗体与ＩＬ─２有特异吸附，杂交瘤核型呈双亲染色体特点。连续传代未见变异。     

人脑肌酸激酶单克隆抗体的制备及鉴定

用事故死亡者脑组织中提纯的人脑肌酸激酶（ＣＫ－ＢＢ）对ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠进行免疫，应用杂交瘤技术将免疫小鼠脾细胞分别与２种骨髓瘤细胞（ＮＳ－１，６５３）融合，筛选得到８株能稳定分泌ＩｇＭ抗体的杂交瘤细胞。对分泌抗体经酶联免疫电泳转移试验（Ｗｅｓｔ－Ｂｌｏｔ）进行了鉴定，其中４种抗体能特异地与ＣＫ－ＢＢ的ＳＤＳ－ＰＡＧＥ电泳带结合。提示这些单克隆抗体有可能应用于肌酸激酶的结构功能研究和临床检验中。     

人脑肌酸激酶单克隆抗体的制备及鉴定

用事故死亡者脑组织中提纯的人脑肌酸激酶（ＣＫ－ＢＢ）对ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠进行免疫，应用杂交瘤技术将免疫小鼠脾细胞分别与２种骨髓瘤细胞（ＮＳ－１，６５３）融合，筛选得到８株能稳定分泌ＩｇＭ抗体的杂交瘤细胞。对分泌抗体经酶联免疫电泳转移试验（Ｗｅｓｔ－Ｂｌｏｔ）进行了鉴定，其中４种抗体能特异地与ＣＫ－ＢＢ的ＳＤＳ－ＰＡＧＥ电泳带结合。提示这些单克隆抗体有可能应用于肌酸激酶的结构功能研究和临床检查中。     

抗小鼠Ⅱ—2R单克隆抗体的制备及初步应用

目的：制备抗小鼠白细胞介素２受体（ＩＬ－２Ｒ）单克隆抗体。方法：利用杂交瘤技术获得杂交瘤细胞株，并用细胞ＥＬＩＳＡ方法筛选阳性克隆。结果：得到３株分泌抗小鼠Ⅱ－２ＲＭｃＡｂ的杂交瘤细胞株，其中８Ｃ８对ＣｏｎＡ刺激淋转有抑制作用，且ｓＩＬ－２Ｒ可抑制８Ｃ８与ＩＬ－２Ｒα一细胞的结合。结论：８Ｃ８是抗小鼠ＩＬ－２Ｒ抗体。     

建立分泌抗猪精液抑制素杂交瘤细胞株及其McAb的研究

用猪精液抑制素免疫ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠的脾细胞与ＮＳ－１小鼠髓瘤细胞融合，获得３株分泌抗猪精液抑制素单克隆抗体的杂交瘤细胞株，分别命名为２Ｄ、５Ｄ和６Ｇ，其分泌的抗体均为ＩｇＧ１型，不与大鼠ＬＨ、ＦＳＨ和ＰＲＬ产生交叉反应，杂交瘤细胞染色体平均为８５－１００条。细胞经反复冻存、复苏和传代，仍稳定分泌特异性抗体。     

抗小鼠IL-2R单克隆抗体的制备及初步应用

目的：制备抗小鼠白细胞介素２受体（ＩＬ－２Ｒ）单克隆抗体（ＭｃＡｂ）。方法：利用杂交瘤技术获得杂交瘤细胞株，并用细胞ＥＬＩＳＡ方法筛选阳性克隆。结果：得到３株分泌抗小鼠ＩＬ－２ＲＭｃＡｂ的杂交瘤细胞株，其中８Ｃ８对ＣｏｎＡ刺激淋转有抑制作用，且ｓＩＬ－２Ｒ可抑制８Ｃ８与ＩＬ－２Ｒα阳性细胞的结合。结论：８Ｃ８是抗小鼠ＩＬ－２Ｒα抗体。     

人白细胞介素2基因转移表达及抗乙型肝炎病毒和诱导LAK细胞活性的研究

为了探讨白细胞介素（ＩＬ）－２转基因表达抗乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）的作用，应用逆转录病毒载体ｐＺＩＰＳｖ（Ｘ）－包装细胞系ＰＡ３１７基因转移系统，研究了人ＩＬ－２ｃＤＮＡ转移和表达，以及抗ＨＢＶ和诱导淋巴因子激活的杀伤细胞（ＬＡＫ细胞）的作用。所构建的人ＩＬ－２重组表达载体ｐＺＩＰｈｕＩＬ－２，以ＤＮＡ－磷酸钙共沉淀技术转染ＰＡ３１７细胞，筛选到Ｇ４１８抗性克隆，分泌假病毒颗粒达１０６ＣＦＵ／ｍｌ。以假病毒颗粒感染２．２．１５细胞系及正常人外周血单个核细胞，分泌ＩＬ－２水平可达６ＩＵ／ｍｌ，明显抑制２．２．１５细胞ＨＢｓＡｇ的分泌表达，与１００ＩＵ／ｍｌ重组的ＩＬ－２一样可诱导出相似的ＬＡＫ细胞活性。而不含ＩＬ－２ｃＤＮＡ的ｐＺＩＰＳＶ（Ｘ）的假病毒颗粒则无此作用。提示逆转录病毒载体。包装细胞系可以成功地实现人ＩＬ－２ｃＤＮＡ的转移和低水平的分泌和表达，并可明显抑制２．２．１５细胞分泌ＨＢｓＡｇ及诱导ＬＡＫ细胞活性。     

抗人粒细胞集落刺激因子单克隆抗体的研制

应用杂交瘤技术，用重组人Ｇ－ＣＳＦ（ｒｈＧ－ＣＳＦ）免疫Ｂａｌｂ／ｃ小鼠，然后将其脾脏细胞与小鼠骨髓瘤细胞ＮＳ－１融合，成功地获得了多种能够分泌抗ｒｈＧ－ＣＳＦ单克隆抗体（ＭｃＡｂ）的杂交癌细胞。对其中的２株杂交瘤细胞２Ａ６和２Ｃ２分泌ＭｃＡｂ的研究表明，它们能够特异性地和ｒｈＧ－ＣＳＦ结合，而与重组的人ＧＭ－ＣＳＦ、ＩＬ－ＣＳＦ、ＩＬ－２、ＩＬ－２α和ＴＮＦ细胞因子无交叉反应，为抗Ｇ－ＣＳＦ特异性ＭｃＡｂ。这些杂交瘤细胞经反复冻存和复苏后，仍能稳定地分泌ＭｃＡｂ。     

建立分泌抗猪精液抑制素杂交瘤细胞株及其McAb的研究

用猪精液抑制素免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠的脾细胞与ＮＳ－１小鼠骨髓瘤细胞融合，获得３株分泌抗猪精液抑制素单克隆抗体的杂交瘤细胞株，分别命名为２Ｄ、５Ｄ和６Ｇ，其分泌的抗体均为ＩｇＧ１型，不与大鼠ＬＨ、ＦＳＨ和ＰＲＬ产生交叉反应。杂交瘤细胞染色体平均为８５～１００条。细胞经反复冻存、复苏和传代，仍稳定分泌特异性抗体。     

肝硬化患者外周淋巴细胞IL－2mRNA的表达

白细胞介素－２（ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ－２，ＩＬ－２）在Ｔ淋巴细胞及其它免疫细胞活化、分化和增殖等过程中起着非常重要的作用，我们通过观察肝硬化患者外周血淋巴细胞（ｐｅｒｉｐｈｅｒａｌｂｌｏｏｄｌｙｍ－ｐｈｏｃｙｔｅｓ，ＰＢＬ）ＩＬ－２ｍＲＮＡ的表达，以及ＩＬ－２分泌水平的改变，探讨肝硬化患者淋巴细胞ＩＬ－２分泌不足的机理。实验结果显示，肝硬化患者ＩＬ－２ｍＲＮＡ表达较正常对照明显减弱，表达细胞数未见明显变化；ＰＢＬ转化后ＩＬ－２ｍＲＮＡ表达增强，但肝硬化患者较对照仍有明显差异，ＩＬ－２分泌在肝硬化患者明显低于正常对照；淋巴细胞活化后，肝硬化患者与对照无明显差异。结果表明，许多有害因素通过降低外周血淋巴细胞ＩＬ－２ｍＲＮＡ的表达，影响ＩＬ－２产生、分泌，导致肝硬化患者免疫功能降低。     

IL—2和IL—3基因共转染白血病细胞的体内外生物学特性

目的：研究细胞介素２（ＩＬ－２）、白细胞介素３（ＩＬ－３）基因共转染瘤苗的体现人外生物学特性。方法：用ＩＬ－２重组腺病毒（Ａｄ－ＩＬ－２）、ＩＬ－３重组腺病毒（Ａｄ－ＩＬ－３）转染ＦＢＬ－３红白血病细胞株，观察其体外增殖能力及体内致瘤性的变化。结果：ＩＬ－１、ＩＬ－３共转染的ＦＢＬ－３细胞１周内能较稳定地分泌ＩＬ－２和ＩＬ－３，体外增殖能力无明显变化，但体内致瘤性明显下降，ＩＬ－２、ＩＬ－３共转染     

黄曲霉毒素B1单克隆抗体的制备和鉴定

以自由合成的黄曲霉毒素Ｂ１－人血清白蛋白（ＡＦＴＢ１－ＨＳＡ）偶联物免疫ＢＡＬＢ／ｃ鼠，应用杂交瘤技术，建立了两株能持续分泌抗ＡＦＴＢ１单克隆抗体（ＡＦＴＢ１ＭｃＡｂ）的杂交瘤细胞株，命名为１Ｂ５和２Ｆ１，接种ＢＡＬＢ／ｃ鼠腹腔均能诱产生含特异性抗体的腹水。     

人胰磷脂酶A2纯化及单克隆抗体的制备

为建立磷脂酶Ａ２免疫检测法，纯化ＰＩ２Ａ２，将胰组织匀浆加热、离心去除沉积，上清过ＣＭ－ｓｅｐｈａｄｅｘＣ－２５ｓｙｇｇ，ｎｈ ｗｙｓ ｅ ＰＬＡ２的部分，纯化ＰＬＡ２样品经ＳＤＳ－ＦＡＤＥ电 一条区带。纯分的ＰＬＡ２作为抗原免疫ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠，抗体产生后与骨髓瘤细胞融合，在ＰＧＥ－４０００促融下，融合为杂交瘤细胞株经ＥＬＩＳＡ法鉴定筛选出分泌抗ＰＬＡ２的细胞株，扩大培养后将杂交瘤细胞注射小鼠腹     

抗人成骨肉瘤杂交瘤细胞系的建立及单克隆抗体特性

目的：建立抗人成骨肉瘤单克隆抗体杂交瘤并对杂交瘤细胞及抗体特性进行研究。方法 利用我室自建成骨肉瘤细胞系（ＯＳ－９６０７）免疫ＢＡＬＢ／c小鼠，取其脾细胞与骨髓 瘤细胞Ｓp２／０两便，经筛选和克隆化，制备杂交瘤细胞系，用免疫组化ＡＢＣ方法研究交瘤细胞分泌的单克隆抗体特性。结果：制得２株能持续、稳定分汔抗体的杂交瘤细胞系。其中６Ｅ７和５Ｄ３株杂交瘤细胞经过１００d连续培养，背地里克隆抗体６Ｅ７mＡb和５     

人IL－4抗肿瘤的实验研究

在ＭＬＲ中，ＩＬ－４诱导的特异ＣＴＬ的杀伤活性强于ＩＬ－２，但ＩＬ－２对ＣＴＬ的促增殖作用强于ＩＬ－４。用人急性淋巴细胞白血病细胞株ＴＢＬ－Ｅ在裸鼠建立了人的实体瘤模型。用人ＩＬ－４十人ｒＩＬ－２联合诱导的人ＬＡＫ细胞注入荷瘤裸鼠，同时输注细胞因子。结果显示ＩＬ－２组疗效好于ＩＬ－４组，ＩＬ－２＋ＩＬ－４组疗效和ＩＬ－２相似，但可延长肿瘤形成的时间。     

人IL—4抗肿瘤的实验研究

在ＭＬＲ中，ＩＬ－４诱导的特异ＣＴＬ的杀伤活性强于ＩＬ－２，但ＩＬ－２对ＣＴＬ的促增殖作用强于ＩＬ－４。用人急性淋巴细胞白血病细胞株ＴＢＬ－Ｅ在裸鼠建立了人的实体瘤模型。用人ＩＬ－４十人ｒＩＬ－２联合诱导的人ＬＡＫ细胞注入荷瘤裸鼠，同时输注细胞因子。结果显示ＩＬ－２组疗效好于ＩＬ－４组，ＩＬ－２＋ＩＬ－４组疗效和ＩＬ－２相似，但可延长肿瘤形成的时间。     

HepG2细胞系载脂蛋白B表达的调控研究

探讨白细胞介素－１１（ＩＬ－１１）及乙醇对人肝肿瘤细胞系（ＨｅｐＧ２）载脂蛋白Ｂ（ａｐｏＢ）ｍＲＮＡ表达及蛋白分泌的作用。培养ＨｅｐＧ２细胞，分组加入不同深度ＩＬ－１１进行浓度试验，收集培养液及细胞。用火箭电泳法及Ｎｏｒｔｈｅｒｎ ｂｌｏｔ分别检测训ａｐｏＢ含量及ＨｅｐＧ２细胞ａｐｏＢ ｍＲＮＡ的表达。ＩＬ０１１及乙醇抑制试验按同法分组进行。结果ＩＬ－１１能抑制ＨｅｐＧ２细胞ａｐｏＢ表达与分泌，且     

哮喘患者肺泡巨噬细胞血栓素 A_2 前列环素、肿瘤坏死因子α、白介素 8、10 的释放及药物调节

测定２６例哮喘患者血浆及支气管肺泡灌洗液（ＢＡＬＦ）ＴＸＢ２、６－ｋｅｔｏ－ＰＧＦ１α、ＴＮＦα、ＩＬ－８、ＩＬ－１０的水平，并对其肺泡巨噬细胞（ＡＭ）进行加药培养。结果显示，哮喘患者血浆、ＢＡＬＦ中ＴＸＢ２、ＴＮＦα、ＩＬ－８水平明显高于正常人，６－ｋｅｔｏ－ＰＧＦ１α与正常人无差异，ＢＡＬＦ中ＩＬ－１０水平低于正常人。患者ＢＡＬＦ中ＴＸＢ２、ＴＮＦα水平与其ＦＥＶ１、Ｖ５０呈负相关。ＡＭ加入不同的药物培养后，与空白组比较，抗原组ＴＸＢ２、ＴＮＦα的释放增加；治疗浓度氨茶碱组ＴＮＦα释放下降，ＩＬ－１０的释放增强；地塞米松组ＴＸＢ２、ＴＮＦα的释放下降。ＩＬ－１０的释放增强；红霉素组ＴＮＦα、ＩＬ－８的释放下降。提示ＴＸＢ２、ＴＮＦα、ＩＬ－８在哮喘发病中起重要促炎作用，ＩＬ－１０起抗炎作用，氨茶碱、地塞米松、红霉素具有抑制巨噬细胞分泌促炎因子的作用，而抗原具有激发ＡＭ分泌促炎因子的作用。     

分泌抗人IgG单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立

应用人ＩｇＧ免疫ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠脾脏与ＳＰ２／０小鼠骨髓瘤细胞在ＰＥＧ作用下融合，经３次克隆化后获得五株抗人ＩｇＧ单克隆抗体的杂交瘤细胞，用被动血凝法和ＥＬＩＳＡ检测培养上清滴度为２￣４，用琼脂双扩散法证明此单克隆抗体只与人ＩｇＧ发生反应，产生透明沉淀线。经ＩｇＧ亚类血清鉴定，其单克隆抗体均属ＩｇＧ－Ｇ１亚类抗体。五株杂交瘤细胞在液氮保存数月，经反复复苏培养，不改变其分泌抗体的性能。     

可溶性白细胞介素－2受体在体外对白细胞介素－2介导免疫反应的抑制

用酶联免疫吸附法￣３Ｈ－ＴｄＲ掺入法探讨了可溶性白细胞介素－２受体（Ｓｏｌｕｂｌｅｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ２ｒｅｃｅｐｔｏｒ，ｓＩＬ－２Ｒ）与ｒＩＬ－２的结合特性以及ｓＩＬ－２Ｒ对ＩＬ－２依赖性ＣＴＬＬ－２细胞、ＰＨＡ激活的正常人外周血淋巴细胞增殖反应的作用，结果显示ｓＩＬ－２Ｒ保持了与ｒＩＬ－２结合的特性。在体外ｓＩＬ－２Ｒ对ＰＨＡ诱导正常人ＰＢＬ增殖以及ＣＴＬＬ－２细胞、ＰＨＡ－ＰＢＬ对ＩＬ－２依赖性增殖均有明显的抑制作用，尤其高浓度的ｓＩＬ－２Ｒ抑制作用更为突出。