H102-BD经鼻腔给药后对双转基因AD小鼠行为学及脑内APP和Aβ蛋白表达的影响

?目的:观察β片层阻断肽H102-BD经鼻腔给药后对PAP双转基因AD小鼠行为学、脑内APP及Aβ蛋白表达的影响。方法:将PAP转基因小鼠随机分为模型组和H102-BD给药组,并设同月龄同背景C57BL/6J小鼠为正常对照组。鼻腔给药4周后行Morris水迷宫实验,利用免疫组织化学方法和Western blot方法测定小鼠脑内APP和Aβ蛋白的表达。结果:（1）Morris水迷宫结果显示鼻腔给予H102-BD后AD模型鼠的空间记忆能力有了明显的提高。（2）免疫组化及Western blot结果显示,H102-BD可显著降低AD模型鼠脑内APP及Aβ蛋白表达。结论:β片层阻断肽H102-BD经鼻腔给药后对AD有一定的治疗作用。     

组胺对β淀粉样蛋白诱导PC12细胞阿尔茨海默病体外模型的保护作用

目的:观察组胺对β淀粉样蛋白1-42(Aβ42)诱导大鼠肾上腺嗜铬瘤(PC12)细胞损伤的改善作用及其相关的受体亚型。方法:运用PC12细胞,采用Aβ42构建阿尔茨海默病体外模型,以形态学和四甲基偶氮唑盐比色法为指标,观察细胞损伤和药物的改善作用。结果:Aβ42浓度依赖性诱导细胞损伤。组胺在10-7、10-6mol/L浓度时能显著改善Aβ42(5μmol/L)作用24h引起的细胞损伤,10-6mol/L保护作用最大。组胺10-6mol/L的保护作用能被组胺H2受体拮抗剂zolantidine,H3受体拮抗剂clobenpropit所逆转,但不能被H1受体拮抗剂苯海拉明所拮抗。结论:组胺能减弱Aβ42诱发的细胞损伤,可能与组胺H2,H3受体有关。     

淀粉样前体蛋白在阿尔茨海默病分子生物学和临床医学中的研究进展

阿尔茨海默病(Alzheimer's disease,AD)是一种常见的老年性痴呆症,主要病理表现有两种,即:细胞内发生神经纤维缠结(neurofibrillary tangles,NFTs)、细胞外产生淀粉样沉积物(俗称老年斑,senile plaques,SP).NFTs的聚集主要是微管Tau蛋白异常高度磷酸化的生成;SP的淀粉样沉积物主要成份是β-淀粉样肽(Aβ,包括Aβ40和Aβ42),由淀粉样前体蛋白(amyloid precursor protein,APP)分解而来,被认为在AD的发病机制中起着十分重要的作用.近年来很多研究都集中在α、β和γ-分泌酶对APP的作用和Aβ生成的影响上,以及家族性AD(FAD)和散发性AD(SAD)的发病原因和进程的研究.本文主要综述了APP的代谢通路与淀粉样物生成对AD发病的假说;早发性和迟发性AD与APP、PS1、PS2和ApoE基因突变的关系,以及目前Aβ疫苗对AD治疗和预防作用的研究进展.     

β片层阻断肽H102对双转基因AD模型小鼠脑内LPL和PPAR-γ表达的影响

目的:通过观察β片层阻断肽H102对PS1/APP双转基因AD模型小鼠学习记忆能力以及脑中LPL及PPAR表达的影响,探究H102对阿尔茨海默病(AD)治疗作用的可能机制。 方法:将AD模型小鼠随机分为模型组和H102治疗组,并将同月龄同背景C57BL/6J小鼠设为正常对照组,H102治疗组小鼠鼻腔给予H102药液,5 μL/d;模型组及正常组小鼠鼻腔给予辅料溶液,5 μL/d。连续给药4周后进行Morris水迷宫测试,检测小鼠学习记忆能力,并应用实时定量荧光PCR（Real-Time PCR）技术、Western Blot技术以及免疫组化法,观察小鼠脑内LPL 和PPAR-γ表达的改变。 结果: Real-Time PCR技术、Western Blot技术以及免疫组化法均显示,与模型组小鼠相比,H102治疗组小鼠脑内LPL和PPAR-γ的表达显著增加(P＜0.05)。 结论:β片层阻断肽H102能够增加AD小鼠脑内LPL的表达,从而进一步促进Aβ的细胞内吞与降解,而在这个过程中,PPAR-γ可能参与其中。     

Aβ42重组多价DNA疫苗的构建及诱导Aβ抗体的产生

目的: 构建β-淀粉样蛋白(Aβ42)的多价重组DNA疫苗,确定是否诱导较高滴度Aβ抗体的产生.方法: PCR法从Tg2576转基因鼠基因组DNA中扩增人Aβ42基因片段;在Aβ42基因的5′端引物延伸连接IgG к轻链信号肽序列;利用GSGGSG linker基因串连两段Aβ42基因片段;将产物克隆入pcDNA3.1表达载体,分别构建pcDNA3.1-Aβ42,一价分泌型pcDNA3.1-sAβ42,二价分泌型pcDNA3.1-s2×Aβ42载体;转染COS-7细胞,免疫印迹检测Aβ42的表达;im接种BALB/c鼠,ELISA法测定抗体效价;免疫组织化学和Aβ42肽抗原的中和实验检测抗体与Tg2576鼠脑切片中的老年斑的结合.结果: 测序证实所构建的pcDNA3.1-Aβ42,pcDNA3.1-sAβ42,pcDNA3.1-s2×Aβ42载体插入序列正确;Western Blotting证实在COS-7细胞中表达相应的蛋白.经6轮,22 wk加强免疫后,pcDNA3.1-Aβ42疫苗不能产生Aβ抗体、pcDNA3.1-sAβ42接种后产生较低的Aβ抗体(<1:1000),pcDNA3.1-s2×Aβ42第1次加强免疫后即产生抗体,抗体滴度随接种次数增多而升高,22 wk时抗体平均滴度达1:5000以上,可以与转基因鼠Tg2576脑切片中的老年斑结合,并能被Aβ42肽抗原特异性中和.结论: 二价分泌型pcDNA3.1-s2×Aβ42疫苗,可在动物体内产生高效价的特异Aβ抗体.     

β-淀粉样肽研究进展

<正> 阿尔采末病(Alzheimer’s disease,AD)是临床上最常见的一种老年期痴呆综合征,它以细胞外老年斑(SPS)、细胞内神经原纤维缠结(NFTS)、神经元大量丢失为主要病理特征。β-淀粉样肽(β-amy-loid precursor Aβ)是老年斑的主要结构物质,且Aβ聚集后对体外培养的神经元具有毒性,Aβ被普遍认为     

低浓度Aβ1-42单体/寡聚体及一氧化碳供体对SN56细胞存活率的影响

目的 观察低浓度Aβ1-42单体/寡聚体对胆碱能SN56细胞存活率的影响以及不同浓度CORM-2的作用.方法 将相同细胞浓度的SN56细胞培养在96-孔细胞培养板中并将细胞分为对照组、Aβ1-42组、Aβ1-42+CORM-2 50μM组及Aβ1-42+CORM-2 100μM组.Aβ1-42组三列细胞分别在10nM、100nM及1μM Aβ1-42单体/寡聚体的环境中培养.Aβ1-42+CORM-2 50μM组和Aβ1-42+CORM-2 100μM组细胞除每孔L分别含50μM及100μM CORM-2外,其余培养条件与Aβ1-42组相同.对照组不加任何处理因素.培养3d后,用MTT法比较不同组别细胞存活率.结果 Aβ1-42组细胞存活率分别为(79.73±0.94)%、(67.99±0.79)%、(60.42 ±0.62)%,随Aβ1-42浓度增加而下降.Aβ1-42+CORM-2 50μM/100μM组细胞存活率分别为(75.15±0.096)%、(63.20±0.17)%、(55.33±0.19)%;(73.20±0.27)%、(64.34±0.11)%、(54.17 ±0.12)%,均低于单纯Aβ1-42组;并且不同CORM-2浓度之间,降低细胞存活率的作用存在差异.结论 低浓度Aβ1-42单体/寡聚体可降低SN56细胞的存活率,并且浓度越高,效果越明显;不同浓度CORM-2均可使SN56细胞的存活率下降,且作用强度存在差异.     

β淀粉样肽40与2型糖尿病下肢大血管病变的相关性研究

目的:初步探讨血清β淀粉样肽40(β-amyloid peptide 40,Aβ40)和2型糖尿病下肢大血管病变有无联系。方法:临床筛选研究对象共155例,其中单纯糖尿病组55例,2型糖尿病合并下肢大血管病变组50例,正常对照组50例,检测血清β淀粉样肽40、血脂、血糖、糖化血红蛋白等生化指标进行对比分析。结果:糖尿病病人β淀粉样肽40高于对照组(P<0.05),糖尿病有并发症组病人β淀粉样肽40高于无并发症组(P<0.05)。结论:β淀粉样肽40水平可能与2型糖尿病下肢大血管病变有联系。     

Aβ42与Aβ42寡聚体的生物学性质比较研究

目的 比较Aβ42和Aβ42寡聚体的细胞毒性.应用原子力显微镜(AFM)观察比较Aβ42和Aβ42寡聚体的聚集状态.方法 应用MTT检测Aβ42和Aβ42寡聚体的细胞毒性;TUNEL法测定Aβ42和Aβ42寡聚体的细胞凋亡作用.制备终浓度为50μmol/L的AB 42寡聚体和Aβ42溶液.在云母片上制作Aβ样品,用原子力显微镜的轻敲模式观察不同时间、温度条件下的Aβ42寡聚体状态,比较Aβ42寡聚体与Aβ42聚集形态的差异.结果 MTT、TUNEL结果 表明Aβ42和Aβ42寡聚体均可降低PCI2细胞的生存率,均有致细胞凋亡作用.10μmol/L Ap 42寡聚体较20μmol/L Aβ42能引起更多细胞凋亡,凋亡率差异有显著性(P<0.05).4℃、48 h内经HFIP作用的Aβ42以单体、寡聚体形式存在;室温、72 h时未经六氟丙醇作用的Aβ42以纤维聚集态存在.结论 Aβ寡聚体是Alzheimer病神经细胞损伤过程中的重要因素.相同浓度Aβ42寡聚体较Aβ42细胞毒性大.Aβ 42寡聚体纤维随时间延长,室温条件下更利于纤维聚集;Aβ42寡聚体与Aβ42相同条件下聚集状态完全不同.利用原子力显微镜可观察不同Aβ的聚集情况,AFM是研究Aβ的有效手段.     

不同聚集形式β-淀粉样肽对人SH-SY5Y细胞发动蛋白Ⅰ和突触素表达的影响

目的探讨不同聚集形式的β-淀粉样肽(Aβ)对人神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y细胞)发动蛋白Ⅰ(DynⅠ)和突触素(Syn)表达的影响。方法制备不同聚集形式的Aβ1～42处理SH-SY5Y细胞,采用蛋白质印迹法检测细胞中DynⅠ及Syn蛋白表达水平;采用免疫组织化学染色方法检测10例阿尔茨海默病(AD)患者及8例老年同龄对照者尸解后脑海马结构中β-淀粉样肽寡聚体(AβOs)表达水平。结果 Aβ单体或Aβ纤丝体处理SH-SY5Y细胞未见DynⅠ及Syn蛋白表达水平显著变化,AβOs处理细胞可见DynⅠ及Syn蛋白表达水平降低(P<0.05);AD患者海马及内嗅区皮质神经元内AβOs的表达显著高于老龄对照者(P<0.05)。结论细胞内表达的AβOs可能是引起AD患者脑中网格蛋白内吞调节蛋白———DynⅠ表达下降及突触丧失的主要Aβ神经毒性形式,该改变可能与AD发病机制中学习记忆能力减退有关。     

β淀粉样蛋白诱导小胶质细胞的炎性上清对神经元凋亡的影响

目的 研究β淀粉样蛋白诱导小胶质细胞的炎性上清对神经元凋亡的影响.方法 用浓度为125 hmol/L的Aβ1-42诱导的小胶质细胞炎性上清干预神经元,检测Bcl-2、Caspase-3、PARP的表达及神经元凋亡的情况.结果 炎性上清液干预组Caspase-3(14.2±1.8)、Bcl-2阳性细胞数(10.6±0.8)明显高于Aβ1-42干预组(2.2±0.6,5.0±0.3)(P＜0.01),吖啶橙免疫荧光结果显示炎性上清液处理组与Aβ1-42直接干预组48 h和72 h凋亡率比较差异有统计学意义(P＜0.05).结论 Aβ1-42诱导小胶质细胞的炎性上清可以通过Caspase-3途径诱导神经元凋亡,小胶质细胞活化引起的慢性炎性过程是Aβ引起神经细胞凋亡的重要条件之一.

Abstract：

Objective To study the effects of neuronal apoptosis under the induction of β-amyloid inflammatory supernatant. Methods The neurons were intervened by β-amyloid-induced inflammatory supernatant at the concentration of Aβ1-42 at 125 nmol/L. And the expressions of Bcl-2, caspase-3, PARP and neuronal apoptosis were detected. Results The caspase-3 ( 14. 2 ± 1.8 ), Bcl-2 ( 10. 6 ± 0. 8 ) positive cells of microglia inflammatory supernatant stimulated group were significantly elevated than the control(2. 2 ± 0. 6,5. 0 ± 0. 3, P ＜ 0. 01 ). Nuclear chromatin was uniform yellow-green fluorescent. And there was significant difference of neuronal apoptosis between microglia inflammatory supernatant group and Aβ1-42directly stimulated group. Conclusion Neuronal apoptosis is induced by caspase-3 in β-amyloid inflammatory supernatant. One of the important causes is chronic inflammatory process of activated microglia by Aβ.     

β-淀粉样肽对原代培养小鼠大脑皮质小胶质细胞形态学及细胞因子表达的影响

目的：研究原代培养的BALB/c小鼠大脑皮质小胶质细胞经β-淀粉样肽1-42（Aβ1-42）刺激后的形态学变化及细胞因子表达情况。方法：小胶质细胞用2次温和胰酶消化法分离,经预处理的Aβ1-42刺激后,相差显微镜观察形态学改变,RT-PCR检测IL-1β、-6基因表达水平。结果：小胶质细胞经Aβ1-42刺激后6 h细胞形态学发生明显改变;刺激24 h后IL-1β、-6基因表达水平明显上调（P〈0.05）。结论：Aβ1-42可明显活化小胶质细胞,并诱导炎性细胞因子的表达。     

Aβ1-42单克隆抗体对阿尔茨海默病大鼠认知能力及脑组织Aβ和ChAT表达的影响

目的:探讨经颅内注射β-淀粉样蛋白(Aβ)142单克隆抗体(mAb)对阿尔茨海默病(AD)大鼠的疗效及机制.方法:30只SD大鼠分3组:AD模型组和治疗组各12只,生理盐水组6只.AD模型组和治疗组于侧脑室注入Aβ1-42蛋白片段建立AD大鼠模型,治疗组大鼠在注射后第14天于侧脑室内注入Aβ1-42 mAb,连用3 d...     

MEDI1814将开发用于治疗阿尔茨海默病

阿斯利康和礼来公司宣布共同开发第2种潜在的疾病修饰治疗药MEDI1814(β-淀粉样肽/Aβ42抗体),用来治疗阿尔茨海默病(AD).AD患者脑中β-淀粉样蛋白斑块由脑中所含β-淀粉样肽形成,此为AD的特征之一.而该抗体选择性地与Aβ42结合,其降低β-淀粉样肽水平的作用呈剂量依赖性,因而可减缓AD的进程.该抗体目前正在进行Ⅰ期临床试验.阿斯利康公司副总裁表示,将结合两公司专家的意见,集中进行β-淀粉样蛋白通路项目的研究,揭示该抗体独特的作用机制,为治疗AD提供一条新途径.     

海风藤提取物对激活的小胶质细胞IL-1β和TNF-α表达的影响

目的 研究海风藤提取物对不同聚集状态的β淀粉样蛋白1-42(Aβ1-42)诱导小胶质细胞中炎性因子白细胞介素1β(IL-1β)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)表达的影响.方法 体外培养小鼠小胶质细胞株BV2,制备寡聚体和纤丝状Aβ1-42,应用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测不同浓度的海风藤提取物对BV2细胞活力的影响;BV2细胞分为4个实验组,分别采用寡聚体Aβ1-42、寡聚体Aβ1-42+海风藤提取物、纤丝状Aβ1-42、纤丝状Aβ1-42+海风藤提取物干预48 h,并设空白对照组,应用实时荧光定量PCR测定各组IL-1β和TNF-α的表达水平.结果 海风藤提取物在10～ 80 g/L范围内对细胞活性无影响;实时荧光定量结果显示,4个实验组的小胶质细胞表达IL-1β和TNF-α的水平均高于空白对照组.寡聚体Aβ1-42+海风藤提取物组IL-1β和TNF-α的表达水平低于寡聚体Aβ1-42组,纤丝状Aβ1-42+海风藤提取物组IL-1β和TNF-α的表达水平低于纤丝状Aβ1-42组.结论 炎性指标IL-1β和TNF-α的表达增高证明寡聚体和纤丝状Aβ1-42均能激活小胶质细胞;IL-1β和TNF-α的表达降低,表明海风藤提取物可以抑制寡聚体和纤丝状Aβ1-42对小胶质细胞的激活.     

Beta淀粉样多肽的高分辨结构解析

β淀粉样蛋白(β-amyloid protein,Aβ)在阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease,AD)的发生和发展过程中起着关键作用。Aβ单体在体内会聚集形成各种尺寸和形貌的聚集体,沉淀在神经细胞表面,形成淀粉样斑块,导致神经细胞的功能障碍甚至是死亡。由于Aβ分子及其组装体的组装结构对于理解AD的发生、发展过程以及致病机制都至关重要,研究者们致力于利用X射线衍射、核磁共振谱、电子显微镜、傅立叶变换红外光谱、圆二色谱和扫描隧道显微技术等方法来研究Aβ的分子结构及组装结构。研究表明,Aβ中富含β-折叠链结构,存在由一个或若干个β-转角或环连接的β-折叠链,其中具有代表性的是发卡型的β-折叠链结构。在形成纤维的过程中,相邻β-折叠链之间靠侧链间、主链间的氢键作用形成平行排列的β-片层结构;稳定分子内结构的作用力主要为侧链间的疏水相互作用和带电氨基酸残基间的静电相互作用。Aβ分子结构及组装结构的研究有助于阐明Aβ的聚集、AD的发病机制,对于AD的早期预防、诊断和治疗具有非常重要的意义。     

淀粉样蛋白Aβ1-42在阿尔茨海默病中的意义

目的 :探讨老年人阿尔茨海默病 (Alzheimer’sdisease ,AD)脑脊液淀粉样蛋白Aβ1 - 42 的含量及其意义。方法 :采用ELISA法检测 30例AD ,非AD痴呆患者 2 5例和对照组 2 1例患者脑脊液中Aβ1 - 42 的浓度。结果 :AD患者脑脊液中Aβ1 - 42 水平明显低于非AD痴呆和对照组。结论 :Aβ1 - 42 在AD的发病中起重要作用 ,脑脊液Aβ1 - 42 值对AD的诊断具有一定的临床应用价值     

β-淀粉样肽(Ab)对胆碱能神经元钾通道的影响

阿尔茨海默病(AD)的病理特征之一是β-淀粉样肽(Aβ)在脑区的积聚,这些脑区主要是胆碱能神经元集聚区,造成胆碱能神经元的凋亡丢失,引起记忆和认知障碍。这一实验的目的是观察Aβ1-42对大鼠胆碱能神经元钾通道的影响。全细胞膜片钳电压钳模式记录,在酶解分离的基底前脑神经元上进行,结果显示当钳制电压在-30和30 mV范围时,Aβ1-42(10 nM)可抑制全细胞外向钾电流,使用胰淀素受体竞争性拮抗剂AC253(10 nM),可以阻断Aβ1-42的作用,这表明Aβ1-42对中枢神经元细胞膜钾离子通透性的影响,是通过胰淀素受体介导的。     

远志醇提取物改善阿尔茨海默病小鼠病理学的研究

目的探讨远志醇提取物对正常老年小鼠及阿尔茨海默病(AD)小鼠海马区新生神经元的生长、大脑皮层神经元纤维缠结(NFT)、淀粉样纤维弥散性老年斑(SP)病理的影响,并检测其对大脑氧化应激(OS)、β淀粉样蛋白40(Aβ40)、β淀粉样蛋白42(Aβ42)的作用。方法将9月龄小鼠按雌雄分类制作AD小鼠模型,并随机分为正常组和模型组,每组又分为安慰剂组(对照组)和给药组。采用免疫组化(IHC)法,检测齿状回颗粒细胞下层(SGZ)新生神经元生长情况;硫磺素S染色,检测小鼠海马区大脑皮层NFT、SP状况;ELISA检测小鼠大脑8-异构前列腺素、Aβ40、Aβ42水平。结果与正常组比较,模型组SGZ新生神经元生长减慢,海马区大脑皮层的NFT和SP增加明显;治疗组新生神经元生长增速明显,NFT和SP显著降低,雌性小鼠效果更显著;8-异构前列腺素、Aβ40、Aβ42水平降低显著。结论远志醇提取物能促进小鼠大脑皮层神经元生长,减少海马区大脑皮层的NFT和SP,降低大脑氧化应激、Aβ40、Aβ42水平,改善AD病理症状,维护正常神经元功能,是潜在的治疗AD的药物。     

急性脑梗死患者血浆巯基丙酮酸硫基转移酶及β-淀粉样蛋白42的水平及其临床意义

目的 探讨脑梗死(cerebral infarction,CI)患者急性期血浆巯基丙酮酸硫基转移酶(3-mercaptopyruvate sulfurtransferase,3-MST)及β-淀粉样蛋白42(β-amyloid peptide 42,Aβ42)水平及其与脑梗死体积、神经功能缺损程度的关系.方法 抽取52例急性期CI患者及35例健康人血浆标本,采用ELISA检测其3-MST及Aβ42水平,分析2组人群血浆3-MST及Aβ42水平的差异及其与脑梗死的关系.结果 CI患者组血浆3-MST水平较健康对照组水平明显降低[(3.67 ±0.29)vs (4.98 ±0.30)ng/mL,P ＜0.05],CI患者组血浆Aβ42水平较健康对照组水平显著增高[(44.52±2.92)vs (15.77±1.71 pg/mL),P＜0.01].急性CI患者中,血浆3-MST水平随脑梗死体积增大和NIHSS评分增加而降低;血浆Aβ42水平随脑梗死体积增大及NIHSS评分增加而升高.结论 脑梗死患者急性期的血浆3-MST水平明显降低、Aβ42水平显著增高,其变化与脑梗死患者神经功能缺损程度及梗死灶体积有关.