抗麻风杆菌酚糖脂1末端三糖的单克隆抗体的制备

将麻风杆菌特异性抗原酚糖脂Ⅰ(phenolic glycolipid I,PGL-I)包被在明尼苏达沙门氏菌(Salmonella minisota)表面,制成免疫原、脾脏内免疫BALB/c鼠,取免疫鼠脾脏制成脾细胞悬液,与Sp2/0细胞按常法融合,选择性培养。凡有克隆生长的,对其上清,用人工合成、含PGL-I末端三糖的人工半合成抗原——NT-O-BSA作ELISA进行筛选。从中选择了一株对PGL-I末端三糖表位特异的单克隆抗体——E_(10)F_1进行了初步鉴定。E_(10)F_1的Ig亚类为IgG3,与大多数抗糖抗体的Ig亚类一致。经ELISA及斑点免疫吸附试验鉴定,E_(10)F_1仅与PGL-I包被的明尼苏达沙门氏菌出现阳性反应,不与明尼苏达沙门氏菌、BSA、BCG、耻垢分枝杆菌和堪萨斯分枝杆菌发生反应。证明单克隆抗体E_(10)F_1所识别的抗原表位为PGL-I分子末端三糖,也是麻风杆菌的特异性抗原表位。文中对制备抗糖的单克隆抗体的实验设计进行了讨论。     

带有HBsAg表位内影像的单克隆抗独特型抗体的建立和鉴定

本文采用鼠单克隆抗-HBs(Ab_1)作抗原免疫同系鼠,取免疫鼠的脾细胞与SP_2/0骨髓瘤细胞融合,经过反复筛选、克隆化获得两株(B_3,C_2)持续分泌单克隆的抗独特型抗体其(Ab_2)。对其中之一B_3作了深入鉴定。B_3的Ig类型为IgG,亚类为IgG_2a。核型分析结果染色体数为106条。通过ELISA抑制试验对B_3进行鉴定,发现B_3一方面能与纯化HBsAg发生阳性的竞争性抑制,另一方面又能与不同来源的抗-HBs发生结合,出现阳性的中和抑制。无论竞争性抑制还是中和抑制,都呈现剂量依赖关系。将B_3Ig免疫同系鼠,经一次免疫后就能诱导出具有抗-HBs活性的抗-抗-独特型抗体(Ab_3)。以上结果表明:B_3株杂交瘤细胞所分泌的单克隆抗独特型抗体是带有HBsAg表位内影像的单克隆抗体。并对B_3Ig的可能应用意义进行了讨论。     

抗乙肝病毒核心抗体的单克隆抗独特型抗体杂交瘤细胞株的建立及鉴定

用单克隆抗体HBc免疫BALB/c小鼠,取脾细胞与Sp2/0骨髓瘤细胞融合,筛选到1C12、2G12两株分泌抗独特型抗体的杂交瘤细胞株,经鉴定属于IgG2a亚类。经ELISA独特型结合试验,抗原—抗体结合抑制试验进行鉴定,证实为抗乙肝病毒核心     

宫颈癌抗独特型单克隆抗体的制备和鉴定

目的：制备宫颈癌抗独特型单克隆抗体并鉴定其抗原模拟特性。 方法和结果： 以识别小鼠和人宫颈癌相关抗原分子共同表位的单克隆抗体AU14-1（Ab1）为免疫原在含免疫反应剂的无血清培养液中致敏小鼠脾细胞，并将其与SP2/0融合，经筛选和克隆化，建成一株能分泌抗独特型单克隆抗体（Ab2）的杂交瘤细胞系。Ab2的抗原模拟特性经ELISA、结合和竞争抑制试验以及免疫组化染色，表明为Ab2β，具有宫颈癌细胞膜表面抗原的“内影像”。 结论： 获得一株具有宫颈癌抗原内影像的抗独特型单克隆抗体。     

一次融合同时获得抗独特型和抗抗独特型单克隆抗体的杂交瘤

本文在研制带有HBsAg表位内影象的单克隆抗独特型抗体的过程中,用抗-HBs单克隆抗体(Ab_1)免疫同系鼠,除筛选分泌Ab_2β的杂交瘤细胞外,还同时设计了筛选分泌Ab_3的杂交瘤。结果在一次免疫,一只免疫鼠的脾脏细胞,一次融合实验中,同时获得了分泌Ab_2β及Ab_3抗体的杂交瘤细胞株。本文报告筛选Ab_3的方法及对Ab_3所作的免疫化学鉴定。结果获得一株分泌Ab_3单克隆抗体的杂交瘤细胞株,命名为M4。证明Ab_3具有Ab_1的特异性。这一结果不仅提示独特型网络的确在同一个体内客观存在,而且也为研制单克隆抗独特型抗体杂交瘤提供了一条简单、经济、事半功倍的经验。     

抗人B因子单克隆抗体的制备及其特性的初步研究

本文以人B因子免疫BALB/c小鼠的脾细胞与SP2/O骨髓瘤细胞融合,获得六株(A_2、B_2、B_7、C_9、F_9、F_(10))分泌抗人B因子单克隆抗体(单抗)的杂交瘤细胞系。用ELISA检测细胞培养上清和小鼠腹水的特异性抗体效价,分别为10~(-2)—10~(-3)和10~(-4)—10~(-5)。抗原阻断试验结果,说明这些单抗是B因子特异的。经取代试验和ACH_(50)抑制试验,提示B因子具有耐热和不耐热二组抗原决定基。A_2和B_2针对不耐热抗原决定基,能抑制补体旁路途径活化;B_7和C_9针对耐热抗原决定基,不影响补体旁路途径活化;F_9和F_(10)则既能与耐热决定基发生反应,也具有抑制补体旁路活化的功能。用固相抗原竞争抑制试验,分析B因子的抗原表位,发现6株单抗可识别4个抗原决定基。这些单抗对B因子结构与功能的研究,B因子在补体旁路活化过程中与有关补体成分之间的相互关系的研究,都是很有意义的。     

抗PSMA 膜外域单克隆抗体的制备及初步应用

目的:制备抗PSMA膜外域单克隆抗体。方法:应用生物信息技术预测PSMA膜外域多肽抗原片段,原核表达,免疫BALB/c小鼠,通过杂交瘤技术制备抗PSMA膜外域单克隆抗体,亲和层析纯化和Western blot及ELISA鉴定,并用于前列腺癌动物模型放射免疫显像。结果:经软件分析,获得含310aa序列特异性强的膜外域抗原片段,免疫、融合后,经过ELISA筛选获得到3株阳性杂交瘤细胞株(5E6、4A5和4D7),亚型鉴定结果为5E6、4A5为Ig G2a,4D7为Ig G1,腹水型抗体效价均在1∶256 000以上;Western blot结果表明,所制备的单克隆抗体均可与PSMA膜外域抗原特异性结合,竞争抑制ELISA试验显示制备的单抗与重组抗原及标准抗原PSMA能竞争结合。动物模型放射免疫显像结果进一步证实,制备的单克隆抗体在动物体内能与PSMA膜外域抗原特异性结合,并使肿瘤显像。结论:制备的抗PSMA膜外域单克隆抗体能特异性识别PSMA抗原,为前列腺癌的免疫诊断及免疫治疗奠定了基础。     

鼻咽癌抗独特型单克隆抗体的制备和鉴定

本研究用针对鼻咽癌相关抗原的单克隆抗体Fc_1作免疫原,采用常规免疫和杂交瘤方法,制备了一株抗Fc_1V区的独特型的杂交瘤2 A9。双夹心ELISA显示,2A9对Fc_1有较强的亲和力。ELISA结合抑制试验结果显示,2A9能抑制Fc_1对鼻咽癌细     

具有疟原虫CSP内影像的单克隆抗独特型抗体的制备及鉴定

本实验用抗疟原虫子孢子混合单抗MS1—5免疫同系小鼠获得一株抗独特型单克隆抗体(D3)。经竞争抑制ELISA、IFA以及放免中和抑制试验等证实:D3能模拟抗原CSP诱导特异性抗子孢子抗体的产生,使兔抗D3具有抗子孢子的抗体活性。反之,兔抗子孢子抗体又具有抗D3的活性,两者的相互结合既能被异种抗子孢子抗体所中和,又能被抗原所竞争。不仅如此,D3杂交瘤细胞表面的Ig还表现出于孢子抗原决定簇的抗体结合活性。表明D3抗体是一株具有抗原内影像的抗独特型抗体,即Ab2β。     

抗HSPC238单克隆抗体的制备和初步鉴定

目的制备抗HSPC238的单克隆抗体，为HSPC238的功能研究奠定基础。方法以纯化的重组蛋白HSPC238为抗原，免疫BALB／c小鼠，运用杂交瘤技术制备HSPC238单克隆抗体，并用间接ELISA法和Western—blot法对单克隆抗体的特性进行鉴定。结果成功建立两株稳定分泌抗HSPC238的单克隆抗体杂交瘤细胞株，分别命名为E001和E002。ELISA检测抗HSPC238单克隆抗体的腹水效价为1：12800和1：25600。两株单克隆抗体的免疫球蛋白亚类均为IgG1。通过Western—blot实验证实，两株单克隆抗体均能特异性结合真核细胞内源性HSPC238蛋白。结论成功制备了两株效价高、特异性好的抗HSPC238单克隆抗体，制备的抗HSPC238单克隆抗体可用于HSPC238蛋白的鉴定，为HSPC238蛋白的生物学功能研究奠定了基础。     

痢疾杆菌脂多糖抗独特型(AId)单克隆抗体的制备和鉴定

以抗宋内志贺氏痢疾杆菌(Shigella sonnei)脂多糖单克隆抗体(Ab1)为抗原,免疫同系BALB/c小鼠和异系DBA小鼠,以其脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞株融合,得到16株能稳定分泌抗独特型单克隆抗体(Ab2)的杂交瘤细胞株,对其中5株抗体进行了血清学、免疫化原和免疫生物学鉴定,证明其中2株(AC1和BH8)为内影像抗独特型单克隆抗体(Ab2β)。它们能够模拟宋内菌脂、多糖抗原位点,使动物产生功能类似Ab1的抗体(Ab3),为进一步研究其作为疫苗的可行性打下了基础。     

一对高亲和力抗人肌钙蛋白Ⅰ单克隆抗体的制备及鉴定

目的 获取抗人肌钙蛋白Ⅰ（cTnI）的单克隆抗体（McAb）.方法 以人cTnI作为抗原,免疫Balb/c小鼠,通过杂交瘤技术制备了抗人cTnI高亲和力、高特异性单克隆抗体.随后采用间接ELISA法测定抗血清效价,用protein G亲和纯化法纯化抗体,抗原竞争ELISA法鉴定抗体亲和力,SDS-PAGE法鉴定纯度,Western blotting鉴定抗cTnI单克隆抗体的特异性,竞争ELISA法分析抗原结合位点.结果 筛选出9株稳定分泌抗cTnI的单抗杂交瘤细胞株,其中A3、A9两株免疫球蛋白亚类均为IgG2a,分泌的抗体纯度高,与CK-MB、cTnT无交叉反应,效价均为：1：1024000,亲和力分别为4.21×10^8mol/L、1.07×10^8mol/L,抗原结合位点不同.结论 成功制备出了一对高亲和力、高特异性抗人cTnI单克隆抗体.     

抗人心肌单克隆抗体的制备及其生物学特性的初步研究

本文以人心肌抗原免疫BALB/c小鼠脾细胞与SP2/0小鼠骨髓瘤细胞融合,获2株(2F_1和1F_6)分泌抗人心肌单克隆抗体的杂交瘤细胞系。免疫印迹试验证明,细胞培养上清及小鼠腹水中的特异性抗体均能与分子量为55KD蛋白带结合。抗原阻断试验结果,证明获得的两株单抗是人心肌抗原特异的。染色体数分别为102条和96条。1F_6和2F_1的Ig亚类型均为IgG_1。间接免疫荧光呈肌束膜型,ABC免疫组化显示肌束膜和肌原型(胞浆)。     

抗人心肌肌球蛋白轻链单克隆抗体的制备及鉴定

用常规方法免疫得到的抗人心肌肌球蛋白轻链(CM-LC)的抗血清,常与骨骼肌及平滑肌肌球蛋白轻链有较强的交叉反应。单克隆抗体因系特异地识别CM-LC上的单一抗原决定簇,因而能克服这一困难。我们应用淋巴细胞杂交瘤技术已经得到四株分泌抗人CM-LC单克隆抗体的杂交瘤细胞株,并对其中三株(1G_6、2B_4、2F_6)进行了克隆。它们与人骨骼肌及平滑肌肌球蛋自轻链的交叉反应分别为2F_6 28.6％及15.6％;2B_4 45％及81％;1G_6对二者的交叉反应均为81％。2F_6属小鼠IgG亚类IgG_3;2B_4及1G_6则均为IgG_1。     

抗人肝再生增强因子单克隆抗体的研制

目的　利用纯化的重组人肝再生增强因子(hALR)制备抗hALR的单克隆抗体,建立hALR的检测方法。方法 采用杂交瘤技术制备单克隆抗体,经ELISA和免疫印迹证明其特异性。结果获得了4株分泌抗hALR特异性抗体的杂交瘤 细胞系;无血清培养液效价为1×10-2,腹水效价为1×10-5;亚类鉴定表明2株单克隆抗体为IgGl,另2株为IgG2b;免疫印迹 显示抗体结合抗原的分子量与hALR相符,为特异性抗hALR抗体。结论通过杂交瘤技术,获得了抗hALR的单克隆抗体 为以后的工作奠定了基础。     

痢疾杆菌脂多糖抗独特型（AId）单克隆抗体的制备和鉴定

以抗宋内志贺氏痢疾杆菌脂多糖单克隆抗体为抗，免疫同系ＢＡＬＢ／ｃ小鼠和异系ＤＢＡ小鼠，以其脾细胞与ＳＰ２／０骨髓瘤细胞株融合，得到１６株能稳定分泌抗独特型单克隆抗体的杂交瘤细胞株，对其中５株抗体进行了血清学、免疫化原和免疫生物学鉴定，证明其中２株为内影像抗独特型单克隆抗体。它们能够模拟宋内菌脂多糖抗原位点，使动物产生功能类似Ａｂ１的抗体，为进一步研究其作为疫苗的可行性打下了基础。     

豚鼠气单胞菌抗独特型单克隆抗体的制备和初步鉴定

目的:制备豚鼠气单胞菌(Aeromonascaviae)抗独特型单克隆抗体(AIdmAb)并进行鉴定。方法:以具有中和作用的抗豚鼠气单胞菌mAb1F1免疫BALB/c小鼠,采用常规杂交瘤技术制备豚鼠气单胞菌AIdmAb。用ELISA法对mAb的效价及其模拟豚鼠气单胞菌的特性进行鉴定。结果:获得4株能稳定分泌豚鼠气单胞菌AIdmAb的杂交瘤细胞株,分别命名为1E12、4F6、6G6、7C1。经测定杂交瘤细胞腹水mAb效价为10-3～10-4。竞争抑制实验结果表明4株AIdmAb均能不同程度地抑制豚鼠气单胞菌与兔抗豚鼠气单胞菌多克隆抗体的结合。制备杂交瘤细胞腹水的BALB/c小鼠血清均能与豚鼠气单胞菌反应,其效价为1∶50～1∶800。结论:成功地制备了豚鼠气单胞菌抗独特型mAb的杂交瘤细胞株,为该菌的抗独特型疫苗制备研究奠定了基础。     

具有抗—HBs结合活性的单克隆抗—抗独特型抗体的制备和鉴定

B_3为我室建立的带有HBsAg表位内影像的单克隆抗独特型抗体(mAb_2)。本文采用脾脏内和尾静脉内注射途径,用B_3免疫BALB/c鼠,获得了具有抗-HBs结合活性的同系单克隆抗-抗独特型抗体(mAb_3)3B_8株。这一结论基于以下两点观察:(1)3B_8能与纯化的HBsAg结合。纯化的HBsAg或抗-HBs均能以剂量依赖形式抑制这一结合;(2)3B_8能以剂量依赖形式抑制抗-HBs与B_3的结合。小鼠在从未接触HBsAg的情况下,单独用B_3免疫,获得了具有抗-HBs结合活性的单克隆抗-抗独特型抗体3B_8,进一步证明我室过去建立的mAb_2B_3株,确实带有HBsAg表位内影像。     

抗抗CD3 ScFv单克隆抗体的制备及鉴定

目的：制备抗抗CD3 ScFv单克隆抗体并研究其生物活性.方法：分离纯化后的抗CD3 ScFv蛋白免疫BALB/c小鼠,采用传统杂交瘤技术制备抗抗CD3 ScFv单克隆抗体;采用ELISA和Western blot鉴定其亚类和抗原结合特异性;采用FACS测定抗抗CD3 ScFv单克隆抗体对Jurkat细胞特异活性.结果：成功筛选出一株能稳定分泌抗抗CD3 ScFv单克隆抗体的杂交瘤细胞株（10B7）,其分泌的抗体亚类为IgG1.该抗抗CD3 ScFv单克隆抗体直标后可特异性结合抗CD3 ScFv蛋白和抗CD3抗体.结论：文中所研制的抗抗CD3 ScFv单克隆抗体具有与抗CD3抗体、抗CD3 ScFv蛋白特异结合的活性,在肿瘤导向治疗中抗CD3/抗肿瘤双特异抗体的亲和层析纯化、药代动力学监测等方面具有广泛的应用前景.     

抗RAET1G2单克隆抗体的研制和初步鉴定

目的:制备鼠源抗RAET1G2单克隆抗体,并对其特异性进行鉴定。方法:以原核表达的RAET1G2蛋白为抗原免疫BALB/c小鼠,运用B淋巴细胞杂交瘤技术制备抗RAET1G2单克隆抗体;用免疫双扩散方法鉴定Ig亚类;Western blot鉴定单克隆抗体的特异性。结果:获得了4株可分泌特异性抗RAET1G2抗体的杂交瘤细胞株7A11、9C6、10F9和12F8,Ig亚类均为IgG1。结论:制备的杂交瘤细胞株能稳定分泌特异性的抗RAET1G2抗体,并且所分泌的单克隆抗体都能识别天然的RAET1G蛋白,为进一步研究游离性的RAETlG2分子与肿瘤进展的关系以及分析各种肿瘤细胞表面的RAET1G表达情况创造了条件。