基于TMT蛋白质组学分析骨疏康胶囊治疗骨质疏松模型大鼠的机制

背景:骨疏康治疗骨质疏松症的具体机制及作用靶点尚未明确,需进一步深入研究。目的:探究骨疏康保护骨质疏松模型大鼠骨代谢的机制,对差异表达蛋白进行生物信息学分析。方法:36只雌性SD大鼠,去势法建立骨质疏松症模型大鼠24只,其中模型组12只,骨疏康组12只;假手术组12只为对照组。造模后,骨疏康组大鼠给予骨疏康灌胃[4.32 g/(kg·d)],1次/d;假手术组和模型组给予等体积生理盐水,1次/d。连续灌胃3个月后,测定大鼠胫骨骨密度;利用TMT-LC-MC/MC联用技术进行骨质疏松模型大鼠腰椎蛋白质组学分析,筛选出差异表达蛋白,对其进行GO、KEGG通路、蛋白互作分析,并构建蛋白质相互作用网络。实验方案经福建省中医药科学院动物实验伦理委员会批准。结果与结论:①筛选出骨疏康组/模型组之间32个上调和49个下调的差异表达蛋白;②GO富集分析表明,他们参与免疫球蛋白受体结合、血管内皮生长因子受体结合等生物过程及核酸模板转录、RNA生物合成等分子功能;③KEGG富集分析表明,骨疏康组与模型组的差异表达蛋白主要参与酪氨酸代谢、乙醇代谢、JAK-STAT等信号通路;④PPI分析表明,骨疏康组和模型组的共同差异蛋白中Mecp2、Aldh3b1、Ryr1、Myoz1位于蛋白质互作网络的节点且与骨代谢关系密切;⑤结果显示,骨疏康可能通过调控差异蛋白及酪氨酸代谢、JAK-STAT等重要信号通路参与保护骨质疏松模型大鼠的骨代谢过程。     

复方丹参滴丸对去卵巢大鼠骨代谢及骨生物力学的影响

目的:研究复方丹参滴丸(DSP)对去卵巢大鼠骨代谢与骨生物力学的影响.方法:切除大鼠双侧卵巢,建屯大鼠原发性骨质疏松模型.予复方丹参滴丸等药物干预90天后,测大鼠血清的钙、磷、锌、镁、铁、雌二醇、骨钙素浓度,测定股骨中钙、磷、锌、镁、铁含量及股骨生物力学指标.结果:与模型组比较,复方丹参滴丸组和尼尔雌醇组大鼠血清钙、磷、骨钙素含量明显减少(P<0.05);股骨中的钙、磷、镁含量明显增加(P<0.05);股骨的最大载荷、最大挠度、最大应力、弹性模量均明显增强(P<0.05),以高剂量复方丹参滴丸组的作用最为明显.结论:复方丹参滴丸可纠正去卵巢大鼠的骨代谢紊乱,维持正常的骨生物力学性能,提示复方丹参滴丸对绝经后骨质疏松症有防治作用.     

大黄素抑制miR-338-3p表达促进骨质疏松性骨折大鼠的愈合

背景:骨质疏松症的特征是低骨量和骨结构的退化,这些情况增加了骨折的风险.大黄素可调节骨代谢且具有强大的抗炎作用,但其具体的作用机制尚不清楚.目的:探讨大黄素对骨质疏松性骨折大鼠愈合的影响及相关作用机制.方法:取53只成年雌性SD大鼠,抽取5只不造模(假手术组),其余48只摘除卵巢建立骨质疏松模型,造模成功后横行切断右侧...     

金乌骨通胶囊对成骨细胞分泌白细胞介素1，6的影响

背景：课题组以往研究发现,金乌骨通胶囊对绝经后骨质疏松症具有明显的治疗作用,但其具体的机制尚不十分清楚。 目的：观察金乌骨通胶囊含药血清对成骨细胞分泌白细胞介素1,6的影响。 方法：切除雌性SD大鼠双侧卵巢制备去卵巢血清,灌胃给予去卵巢大鼠金乌骨通胶囊制备去卵巢含药血清。取第3代生长状况良好的出生24 h内SD大鼠的成骨细胞,分别加入正常雌性SD大鼠血清、去卵巢血清和去卵巢含药血清培养72 h。 结果与结论：酶联免疫吸附法检测显示,与正常血清组比较,去卵巢血清组成骨细胞白细胞介素1、白细胞介素6的表达明显升高(P < 0.01);与去卵巢血清组比较,去卵巢含药血清组白细胞介素1和白细胞介素6的表达明显降低(P < 0.05),与正常血清组比较,则无明显差异。提示金乌骨通胶囊可能通过抑制成骨细胞骨白细胞介素1和白细胞介素6的表达来实现治防治骨质疏松症的目的。     

山茶籽联合雌二醇对去卵巢大鼠骨组织的影响

目的:了解小剂量山茶籽联合雌二醇对去卵巢大鼠骨组织的影响,为中西医结合治疗Ⅰ型骨质疏松症提供实验依据.方法:6月龄健康雌性大白鼠,分成假手术组(sham),去卵巢模型组(OVX),山茶籽组(Pr),雌二醇组(E2)和小剂量山茶籽醇提取物+雌二醇组(Ts+E2).取左股骨切片观察骨组织,取右股骨测量骨钙、磷和骨密度.结果:卵巢模型组的骨组织明显疏松,骨钙、磷低于Sham组,3个治疗组各时间的骨组织、骨钙、磷和骨密度与Sham组比较差异无统计学意义.小剂量的山茶籽联合雌二醇治疗能使去卵巢大鼠骨组织和骨钙、磷和骨密度恢复正常,与较大剂量的山茶籽组或较大剂量的雌二醇组相比无差异.结论:山茶籽对去卵巢大鼠的骨质疏松症的治疗效果良好;小剂量的雌二醇与山茶籽对去卵巢大鼠的骨质疏松症的治疗效果与单独使用较大剂量的山茶籽或较大剂量的雌二醇相比治疗效果相近.     

金乌骨通胶囊含药血清对成骨细胞骨保护素/核因子κB受体活化因子配体分泌的影响

背景：金乌骨通胶囊对绝经后骨质疏松症具有明显的治疗作用,但其具体的作用机制尚不清楚。 目的：观察金乌骨通胶囊含药血清对成骨细胞骨保护素、细胞核因子κB受体活化因子配体(receptor activator nuclear factor kappa B ligand,RANKL)表达的影响。 方法：切除雌性SD大鼠双侧卵巢制备去卵巢血清,灌胃给予去卵巢大鼠金乌骨通胶囊制备去卵巢含药血清。取第3代生长状况良好的出生24 h内的SD大鼠成骨细胞,正常血清组、去卵巢血清组、去卵巢含药血清组分别加入正常雌性SD大鼠血清、去卵巢血清和去卵巢含药血清培养72 h。采用酶联免疫吸附法检测成骨细胞骨保护素和RANKL的分泌水平。 结果与结论：与正常血清组比较,去卵巢血清组成骨细胞骨保护素的表达明显降低(P < 0.01),而RANKL的表达明显升高(P < 0.05);与去卵巢血清组比较,去卵巢含药血清组成骨细胞骨保护素的表达明显升高(P  < 0.05),RANKL 的表达明显降低(P  < 0.05)。说明金乌骨通胶囊可通过增加成骨细胞骨保护素的表达,抑制RANKL的表达来实现治防治骨质疏松症的目的。     

仙灵骨葆胶囊干预糖尿病模型大鼠的骨代谢

背景:研究发现仙灵骨葆胶囊可改善骨代谢、防治骨质疏松,但是否对糖尿病并发的骨质疏松症具有预防作用或可能的机制却鲜有报道.目的:观察仙灵骨葆胶囊对糖尿病并发骨质疏松症大鼠的骨代谢以及相关成骨标志物因子Wnt3a、β-连环蛋白、骨形态发生蛋白2的影响并探讨其作用机制.方法:将36只雄性健康8周龄SD大鼠腹腔单剂量注射60 ...     

长期使用葛根素治疗去卵巢大鼠骨质疏松症对肝结构和功能的影响

随着生活水平的提高,我国人均寿命明显延长,绝经后骨质疏松症(Ⅰ型骨质疏松症)发病率逐年升高,严重影响着中老年妇女的生活质量和身心健康.Ⅰ型骨质疏松症用雌激素替代治疗,虽效果明显,但副作用大,并发症多.寻找治疗效果好,副作用小的药物和治疗方法是研究热点之一.在前期的实验中表明小剂量的雌二醇与葛根素组合治疗去卵巢大鼠骨质疏松症有较好的疗效,其效果与单独使用较大剂量的葛根素或雌二醇相近,因此可减少药物的剂量[1-2].本研究观察长期使用葛根素治疗去卵巢大鼠骨质疏松症对肝功能有无影响,进一步为中西药葛根素与雌激素组合治疗Ⅰ型骨质疏松症提供实验依据.     

雌激素与葛根素组合治疗去卵巢大鼠骨症的最佳剂量

背景：小剂量的葛根素联合雌二醇对去卵巢大鼠骨质疏松症的治疗效果与单独使用较大剂量的葛根素或较大剂量的雌二醇效果相近。 目的：寻找治疗Ⅰ型骨质疏松症最佳的雌二醇和葛根素的剂量搭配。 方法：64只健康雌性大白鼠等分为假手术组、去卵巢模型组、葛根素-50组、雌二醇-200组、葛根素+雌二醇-5,50,100,150组。除假手术组外,其余大鼠均建立去卵巢动物模型。葛根素-50组大鼠皮下注射葛根素50 mg/kg,1次/d;雌二醇-200组大鼠皮下注射雌二醇200 μg/kg,2次/周;葛根素+雌二醇-5,50,100,150组大鼠皮下注射葛根素25 mg/kg,1次/d同时分别注射雌二醇5,50,100,150 μg/kg,2次/周。 结果与结论：去卵巢模型组大鼠骨密度和骨钙、骨磷水平明显低于假手术组(P < 0.05),骨组织呈骨质疏松的病理改变;葛根素和/或雌二醇治疗10,20周后骨密度和骨钙、骨磷水平明显升高(P < 0.05),其中葛根素+雌二醇-100组治疗去卵巢大鼠骨质疏松的效果最为明显,提示葛根素25 mg/kg,1次/d+雌二醇100 μg/kg,2次/周是治疗去卵巢大鼠骨质疏松的最佳搭配剂量。     

低强度振动经雌激素受体α促去卵巢骨质疏松症大鼠成骨细胞的骨形成

为探讨低强度振动是否能经由雌激素受体α(ERα)促进去卵巢骨质疏松症大鼠成骨细胞的骨形成,本研究通过采用实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)技术检测骨形成标志物mRNA表达量的变化,筛选出促进去卵巢骨质疏松症大鼠成骨细胞骨形成的最佳振动参数(45 Hz×0.9 g,g为重力加速度,g=9.8 m/s~2)。随后,对成骨细胞施加45 Hz×0.9 g的低强度振动,采用免疫印迹(Western blot)实验检测骨形成标志物和ERα的表达;并用免疫荧光技术检测ERα的表达与分布。最后采用雌激素受体抑制剂ICI182780,抑制ERα的表达,观察低强度振动下成骨细胞骨形成标志物的变化。结果显示,低强度振动可促进去卵巢骨质疏松症大鼠成骨细胞骨形成标志物和ERα的表达(P 0.05),并使ERα向细胞核内转移;而当抑制ERα的表达后,低强度振动促进成骨细胞骨形成的作用减弱。以上结果说明,低强度振动可通过上调去卵巢骨质疏松症大鼠成骨细胞ERα的表达和促进ERα的胞核转移的方式,增强去卵巢骨质疏松症大鼠成骨细胞的骨形成功能,进而为低强度振动应用于临床绝经后骨质疏松症的防治提供理论依据。     

大豆异黄酮对去卵巢大鼠抗氧化及骨形态学影响的研究

目的 研究大豆异黄酮(SI)对去卵巢大鼠抗氧化及骨形态学的影响.方法 70只雌性SD大鼠按血清总胆固醇水平随机分为7组:高脂、雌激素,低、中、高剂量SI干预、假手术及正常对照组.对前5组摘除双侧卵巢后恢复1周开始干预,实验周期为12周,灌胃给药,每周称重1次,分别在去卵巢及处死时(12周)抽取尾静脉血,实验结束后取内脏及骨骼标本,分别测定血清碱性磷酸酶(AKP)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶活性(GSH-Px)及骨密度等指标,共63只大鼠完成实验.结果 SI干预组股骨重量高于高脂与正常对照组,干预可提高AKP、GSH-Px酶活性.高剂量干预对维持大鼠股骨密度的作用与雌激素相似.SI干预可缓解因去卵巢造成的骨丢失.结论 大豆异黄酮对去卵巢大鼠的抗氧化、骨代谢酶活性及骨转化存在一定影响,适量干预能逆转因去势造成的骨密度下降.考虑到植物雌激素与哺乳动物的雌激素受体(ER)结合能力低下,采用SI在临床开展干预的剂量与远期效果尚待进一步研究.     

中药补肾活骨方对去势骨质疏松大鼠骨代谢的影响

背景：中药补肾活骨方可有效防治骨质疏松症,但其具体的药理学机制仍不是很清楚。25-羟基维生素D3和1,25-二羟基维生素D3是调节骨吸收与骨形成的重要的偶联因子。 目的：观察补肾中药对去势骨质疏松大鼠骨密度、骨生物力学、血清及肝肾组织中25-羟基维生素D3和1,25-二羟基维生素D3水平的影响。 方法：健康雌性SD大鼠108只随机等分为假手术组、模型组和治疗组。后2组摘除双侧卵巢,导致雌激素缺失,从而诱导骨质疏松症模型。治疗组大鼠造模后以中药补肾活骨方2 mL灌胃,2次/d。 结果与结论：与模型组相比,治疗组股骨头骨密度明显提高(P < 0.05),最大应力和最大负荷指数明显增强(P < 0.05),血液、肝脏和肾脏组织中25-羟基维生素D3和1,25 二羟基维生素D3水平明显提高(P < 0.05);且接近于假手术组(P < 0.05)。提示补肾中药在雌激素缺失早期即可在分子水平上调节25-羟基维生素D3和1,25-二羟基维生素D3的表达水平,激活骨代谢提高骨密度增强骨质量达到预防骨质疏松的作用。关键词：补肾活骨方;1,25-二羟基维生素D3;骨密度;骨生物力学;骨质疏松症;骨代谢 doi:10.3969/j.issn.1673-8225.2012.15.006 中图分类号: R318  文献标识码: A       

雌二醇对铅中毒模型大鼠骨组织及骨代谢指标不能产生影响

背景：关于铅中毒能否引起骨质疏松症及雌激素对其治疗是否有效尚无共识。 目的：观察雌二醇对去卵巢大鼠和铅中毒大鼠所致骨质疏松症的治疗效果。 方法：雌性大白鼠100只等分成正常对照组、去卵巢模型组、染铅模型组、雌二醇+去卵巢组和雌二醇+染铅模型组。建模后1周雌二醇+去卵巢组和雌二醇+染铅模型组皮下注射雌二醇(100 μg/kg),2次/1周,连续12周。 结果与结论：在去卵巢模型组和铅中毒组中骨钙、骨磷、血钙及血磷均出现降低(P < 0.01),血碱性磷酸酶升高(P < 0.01),骨组织形态呈现骨质疏松的病理改变。雌二醇+去卵巢组的骨代谢生化指标血钙、磷、和碱性磷酸酶和骨组织形态均恢复正常,而雌二醇+铅中毒组的骨代谢生化指标和骨组织形态呈现骨质疏松未出现明显改善迹象。铅中毒组和雌二醇+铅中毒组的骨铅和血铅明显高于正常对照组(P < 0.01)。说明铅中毒可引起骨质疏松的病理改变,雌二醇对去卵巢大鼠的骨质疏松症有良好治疗效果,而对铅中毒所致的骨质疏松症无明显疗效。     

血管内皮生长因子在卵巢切除大鼠骨折愈合骨痂中的表达

背景:血管内皮生长因子在骨折愈合过程中起着重要作用,研究发现去卵巢大鼠影响骨折愈合,但其作用机制尚未明确。目的:观察去卵巢大鼠股骨骨折愈合中骨痂组织学变化以及血管内皮生长因子的表达与分布,探讨骨质疏松对大鼠骨折修复的影响与血管内皮生长因子对其的作用。方法:取12周龄雌性Sprague-Dawley大鼠20只,随机分成假手术组和去卵巢组。制造股骨骨折模型,于术后4周处死,各组截取大鼠右侧股骨标本后行计算机X射线摄像仪摄片观察骨折愈合情况,并应用双能X射线骨密度仪测量右股骨骨密度,苏木精-伊红染色观察骨痂生长情况及其组织形态,免疫组织化学染色测定血管内皮生长因子表达。结果与结论:骨折后4周,去卵巢组形成的骨痂中含有的软骨骨痂比例高与假手术组。去卵巢组中表达血管内皮生长因子的成骨细胞数目少于假手术组。提示骨质疏松大鼠骨折愈合形成的骨痂质量较差,血管内皮生长因子在成骨细胞中的表达减少是骨质疏松骨折愈合质量下降的可能因素之一。     

骨髓间充质干细胞线粒体损伤影响其成骨分化的潜能

背景:骨质疏松症的发生与细胞抗氧化系统的损伤密切相关,而线粒体是细胞内能量代谢和氧化应激发生的主要部位.线粒体的损伤对于骨髓间充质干细胞的成骨分化有何影响及其具体机制尚未明确,有待进一步探索.目的:探讨高水平的氧化应激对线粒体功能及其抗氧化能力的影响,以及线粒体损伤对于骨髓间充质干细胞成骨分化潜能的影响.方法:通过卵巢...     

补肾活血方药对去睾大鼠血清性腺激素及IL-6水平的影响

老年男性骨质疏松症已日益引起社会的关注 ,其发病率也逐年增高 ,而雄激素减少是老年男性骨质疏松的重要发病原因之一[1 ] 。既往的研究表明 ,补肾活血方药—骨康防治老年性骨质疏松症疗效显著 ,为进一步探讨中药骨康防治老年性骨质疏松症的作用机制 ,本实验观察补肾活血方药—骨康对去睾大鼠血清睾酮 (Ｔ)、雌二醇 (Ｅ2 )、黄体生成素 (ＬＨ)、卵胞生成素 (ＦＳＨ)、白细胞介素 - 6(ＩＬ - 6)水平变化的影响。材料和方法一、动物 :选用 8月龄雄性ＳＤ大鼠 ,体重 2 80～ 30 0ｇ,由广东省卫生厅实验动物中心提供。二、药物及试剂 :补肾活血中…     

中等强度跑台运动对去卵巢大鼠股骨头骨松质结构的影响

目的:观察中等强度跑台运动对去卵巢大鼠股骨头骨松质结构的影响,探讨运动对绝经期妇女骨质疏松的预防作用。方法:SD大鼠随机分为假手术组、去卵巢手术组、雌激素对照组和运动组。假手术组进行模拟手术不切除卵巢,其余各组行双侧卵巢切除术。手术2周后开始为期8周的干预治疗。雌激素对照组用尼尔雌醇治疗,运动组按要求进行运动。治疗结束后取股骨头骨松质进行树脂包埋及体视显微观察并进行骨组织形态计量学分析。结果:运动组的骨小梁面积、骨小梁厚度、骨小梁数量明显高于去卵巢手术组,骨小梁分离度、骨小梁游离末端数显著低于去卵巢手术组。结论:中等强度运动可以抑制去卵巢导致的大鼠股骨头骨松质骨量的丢失,确保其骨结构的维持,保证其正常的骨强度。     

淫羊藿总黄酮调控Wnt/β-catenin信号通路对去卵巢大鼠抗骨质疏松作用研究

目的 通过淫羊藿总黄酮(TFE)对去卵巢大鼠骨组织Wnt/β-catenin信号通路及腰椎骨和股骨生物力学性能影响研究,探讨TFE对去卵巢大鼠抗骨质疏松的可能机制.方法 选用40只90天龄的SPF级SD雌性大白鼠,随机分为4组:对照组、去卵巢组(OVX)组、去卵巢+己烯雌酚(DES)组、去卵巢+淫羊藿总黄酮(TFE)组.实验持续12周后处死全部大鼠,取腰椎骨、股骨分别测量生物力学参数及骨密度.免疫蛋白印迹法检测各组大鼠胫骨骨皮质区p-GSK3-β(thr9)、RANKL、OPG、β-catenin蛋白表达水平.结果 与对照组比较,OVX组大鼠股骨、腰椎骨的生物力学性能及骨密度下降(P＜0.05);DES组、TFE组股骨和腰椎骨的生物力学性能和骨密度较去卵巢OVX组明显改善(P＜0.05);两治疗组的组间差异无统计学意义(P＞0.05).免疫蛋白印迹法提示去卵巢大鼠分别加用TFE、DES治疗后,胫骨蛋白β-catenin、OPG表达上调,p-GSK3-β(thr9)、RANKL表达下调.结论 淫羊藿总黄酮能够改善去卵巢大鼠的骨生物力学性能,上调Wnt/β-catenin信号通路,从而改善骨质疏松.     

短程与长程去卵巢大鼠骨计量学的实验研究

目的:探讨3月龄SD大鼠去卵巢短程和长程骨量的变化,以指导临床用药。方法:30只3月龄SD雌性大鼠,随机分为基础对照组、年龄对照(30天和90天)组、去卵巢(30天和90天)组,切除双侧卵巢建立骨质疏松症模型,实验结束,取胫骨近端行不脱钙骨制片进行骨组织形态计量学分析。结果:实验30天去卵巢大鼠与年龄对照,骨形成的参数值(荧光标记周长百分率、骨矿化沉积率、骨形成率)和骨吸收的参数值(破骨细胞数目)都明显增加。但骨吸收大于骨形成,造成骨量丢失(骨小梁面积百分率明显减少),骨结构变差(骨小梁数目减少,分离度增加),90天去卵巢大鼠组与对照组比较,荧光标记周长百分率减少,骨矿化沉积率增加,破骨细胞数目显著增加,骨吸收增强,骨质丢失,出现骨质疏松。结论:30天去卵巢大鼠呈骨高转化,但90天去卵巢大鼠表现为骨形成参数有下降趋势,同时骨吸收增加,骨量丢失,造成骨质疏松。     

补肾中药血清对成骨细胞中骨形态发生蛋白2、7活性的影响

背景：课题组拟以骨形态发生蛋白作为研究靶点来认识肾虚骨质疏松症的病理机制。 目的：体外观察补肾中药血清对SD大鼠成骨细胞中骨形态发生蛋白2、7活性的影响。 方法：采用多次胶原酶消化法体外培养获取新生SD大鼠颅盖骨的成骨细胞;随机将28只SD大鼠分为4组,分别灌胃补肾益精壮骨中药、补中益气颗粒剂和骨疏康颗粒,正常组不灌胃。干预8 d后,通过血清药理学方法使用各组大鼠血清培养成骨细胞48 h。 结果与结论：与正常组相比,补肾组和骨疏康组成骨细胞骨形态发生蛋白2、7表达水平明显增加(P < 0.01),补脾组成骨细胞骨形态发生蛋白2、7表达水平降低(P < 0.01)。结果表明补肾中药对成骨细胞保持自身功能、维持骨密度的作用上发挥重要的作用,成骨细胞中骨形态发生蛋白2、7可能有促进成骨细胞分化、增殖的功能。