高糖对人类肾小球系膜细胞PKC及MMPs/TIMPs的影响

目的：研究体外高糖环境下人类肾小球系膜细胞(NHMC)中PKC激活或使用PKC抑制剂干预后 MMP2,9/TIMP1,2的表达,探讨PKC与MMPs/TIMPs信号转导在糖尿病肾病发生发展中的作用。方法：将NHMC分4组： N组（对照组,5 mmol/L葡萄糖）;H组（高糖组,30 mmol/L葡萄糖）;P组（抑制剂组,30 mmol/L葡萄糖+10-5mol/L白屈菜红碱）;M组(甘露醇组,5 mmol/L葡萄糖+25 mmol/L甘露醇)。分别于上述4种不同成分培养基中进行细胞培养,第24,48,72 h用MTT法测定NHMC增殖;并于培养后第24,48 h收集细胞,抽提mRNA及蛋白质,用ELISA方法测定胞膜、胞核蛋白质PKC活性。用RT-PCR和Western 印迹方法检测MMP2,9, TIMP1,2 mRNA和蛋白质的表达。结果：高糖组细胞膜和胞核部分的PKC活性较对照组明显升高(P＜0.01), MMP2,9, TIMP1,2 mRNA及蛋白质的表达较对照组明显上升(P＜0.01);而MMP-9/TIMP-1, MMP-2/TIMP-2比值较对照组明显下降(P＜0.05)。 高糖加PKC抑制剂白屈菜红碱后,MMP2,9, TIMP1 mRNA及蛋白质表达较对照组明显升高 (P＜0.01),但MMP9/TIMP1, MMP2/TIMP2比值较高糖组明显升高(分别P＜0.05,P<0.01)。PKC活性与MMP-2/TIMP-2及MMP-9/TIMP-1的蛋白质比值均呈负相关(分别r=-0.651,r=-0.702,均P＜0.05)。结论：高糖可刺激人类肾小球系膜细胞PKC活化,在DN中PKC活化与MMP2,9/TIMP1,2的表达水平有密切关系。     

基质金属蛋白酶组织抑制剂1 基因转染对肾小管上皮细胞PTEN表达的影响

目的观察正反义人TIMP-1转染和酶抑制剂干预HKC细胞对PTEN、VEGF/Flk-1的表达的影响,为研究TIMP-1对肾脏
器官衰老的影响机制提供参考。方法将正义和反义人TIMP-1基因转染至人近端肾小管上皮细胞（HKC）,同时用与正义转染
组细胞酶抑制活性相当的MMP-2/MMP-9 抑制剂（MMP-2/MMP-9 Inhibitor Ⅲ, 100 μmol/L）干预24 h,RT-PCR;间接免疫荧
光法检测各组细胞PTEN、VEGF和Flk-1的表达。结果研究显示,与未转染和空载体转染组相比,正义TIMP-1转染组中PTEN
表达上调（P<0.05）,明胶酶活性降低（P<0.05）,VEGF和Flk-1 表达下调（P<0.05）,而反义TIMP-1 转染组则相反（P<0.05）;
MMP-2/MMP-9 inhibitor Ⅲ 100 μmol/L（酶抑制剂组）组PTEN、VEGF和Flk-1 表达与未转染和空载体转染组相比无显著差
异。结论肾脏器官衰老过程中高表达的TIMP-1,通过上调PTEN（非MMP依赖途径）,进而下调VEGF、Flk-1表达,提示PTEN
在TIMP-1 介导肾脏衰老微血管生成障碍中起重要作用,为揭示TIMP-1 参与肾脏器官衰老分子机制提供了新的理论依据。
     

基质金属蛋白酶9及其抑制剂在慢性阻塞性肺疾病发病中的作用

目的　探讨基质金属蛋白酶 9(MMP 9)及其基质金属蛋白酶组织抑制剂 1(TIMP 1)在慢性阻塞性肺疾病 (COPD)发病机制中的作用。方法　选择COPD稳定期组 12例、COPD急性加重期组 12例、COPD急性加重期 +糖皮质激素治疗组 12例和正常对照组 12例患者 ,采用逆转录 聚合酶链的方法测定各组患者外周血单个核细胞中MMP 9和TIMP 1mRNA的表达 ,同时用明胶图谱法测定血浆中MMP 2 ,9的蛋白质水平 ,并分析其与肺功能的关系。结果　 (1)COPD各组MMP 9mRNA表达水平和MMP 9/TIMP 1的比值增加 ,与正常组相比 ,差异具有显著性 (P <0 0 5 ) ,而COPD各组间表达差异无显著性 (P >0 0 5 )。 (2 )COPD各组血浆中MMP 9蛋白水平增加 ,高于正常组 (P <0 0 5 ) ,而COPD各组间蛋白质水平差异无显著性 (P >0 0 5 )。 (3)COPD组中MMP 9mRNA的表达、MMP 9/TIMP 1比值及血浆中MMP 9蛋白质水平与FEV 1 0%占正常预计值呈负相关 (r =- 0 789,P <0 0 5 ;r =- 0 5 3,P <0 0 5 ;r =- 0 6 5 2 ,P <0 0 5 ) ,与RV/TLC %呈正相关 (r =0 375 ,P <0 0 5 ;r =0 4 4 ,P <0 0 5 ;r =0 5 2 9,P <0 0 5 )。结论　MMP 9和MMP 9/TIMP 1比例失衡在COPD的发病机制中起到了一定的作用 ,并与FEV1 0 %占正常预计值、RV/TLC %呈相关性。     

MMP-2、MMP-9及TIMP-1在多囊卵巢综合征病人种植窗口期内膜的表达及其临床意义

目的 检测基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)及组织金属蛋白酶抑制物-1(TIMP-1)在多囊卵巢综合征(PCOS)病人种植窗口期子宫内膜组织中的表达情况,并探讨其临床意义。 方法 选择接受促排卵后治疗的PCOS病人(PCOS组)12例和因男方因素不孕且月经正常前来就诊病人(对照组)15例,检测2组排卵后第7天子宫内膜组织中MMP-9、MMP-2和TIMP-1蛋白表达情况,利用病理图像分析技术,对实验结果进行半定量分析。 结果 MMP-9、MMP-2和TIMP-1在2组子宫内膜组织中均呈阳性表达,在间质细胞和腺上皮细胞的细胞质内均有棕黄色颗粒物沉着,以腺上皮表达为主。PCOS组子宫内膜腺上皮MMP-2、MMP-9及TIMP-1表达均明显低于对照组(P < 0.01),子宫内膜间质MMP-9表达亦低于对照组(P < 0.05)。 结论 MMP-9、MMP-2和TIMP-1在PCOS组病人的种植窗口期子宫内膜中的表达水平较低,这可能是导致PCOS病人采用促排卵治疗后妊娠率低、流产率高的原因之一。     

动脉粥样硬化患者血液中基质金属蛋白酶-9及其抑制物-1的基因表达

目的通过检测动脉粥样硬化（AS）患者血液中基质金属蛋白酶-9（MMP-9）与基质金属蛋白酶抑制物-1（TIMP-1）的基因表达水平,探讨AS发生的分子机制及预测因子。方法 AS患者120例为动脉硬化组,72例正常体检者为对照组。用实时荧光定量PCR（RT-PCR）检测其血液中MMP-9和TIMP-1 mRNA表达水平。结果 MMP-9和TIMP-1的RT-PCR产物序列与GenBank上人MMP-9 mRNA和TIMP-1基因片段完全一致。动脉硬化组的MMP-9基因表达水平高于对照组MMP-9基因表达水平,但差异无统计学意义（P〉0.05）。动脉硬化组的TIMP-1基因表达水平低于对照组TIMP-1基因表达水平,差异有统计学意义（P〈0.05）。MMP-9/TIMP-1基因表达定量比值,动脉硬化组高于对照组,差异有统计学意义（P〈0.05）。结论 AS患者TIMP-1基因表达水平的降低与MMP-9/TIMP-1基因表达定量比值升高可能是AS发生的分子机制之一,二者一起可以作为AS发生的预测因子。     

基质金属蛋白酶及其抑制物与子宫内膜异位症关系的研究

目的研究基质金属蛋白酶-2、3（MMP-2,3）、金属蛋白酶组织抑制物-2（TIMP-2）蛋白及其mRNA在正常子宫内膜、子宫内膜异位症（EMS）妇女正位及异位内膜的表达。方法采用免疫组织化学法半定量分析MMP-2、MMP-3、TIMP-2在正常子宫内膜、EMS妇女正位内膜及异位内膜的表达,使用实时荧光PCR法进行MMP-2、MMP-3、TIMP-2的mRNA的定量分析。结果MMP-2、MMP-3在EMS妇女异位内膜组阳性表达高于正常对照（P〈0．05）,TIMP-2在EMS妇女异位内膜组织阳性表达低于正常对照（P〈0．05）,而且MMP-2、MMP-3在异位内膜标本阳性染色范围有向间质浸润的趋势。在不同的组织学周期,MMP-2、MMP-3、TIMP-2的表达情况相似,差异不具有统计学意义。EMS妇女异位内膜的MMP-2、MMP-3、TIMP-2mRNA含量均高于正常对照（P〈0．05）。在不同的组织学周期,正常妇女子宫内膜组的MMP-2mRNA含量、EMS妇女正位内膜组的MMP-3mRNA含量的差异有统计学意义（P〈0．05）。结论EMS妇女的异位内膜具有更高的侵袭性可能与异位内膜MMP-2、MMP-3的过高表达及TIMP-2的低表达有关。     

心房肌基质金属蛋白酶-9和组织金属蛋白酶抑制因子-1表达改变对房颤心房重构机制的研究

目的　探讨心房肌基质金属蛋白酶- 9 (MMP -9)和组织金属蛋白酶抑制因子- 1 (TIMP1)表达水平的改变与慢性房颤心房结构重构的相关关系。方法　选取进行人工瓣膜置换术的风湿性心脏病房颤24例为研究组,风湿性心脏病窦性心律12例为对照组。上述患者术前均进行经胸超声心动图检查,留取相关资料。于手术时取左心耳心肌标本,采用RT -PCR方法检测心房肌中本研究检测慢性房颤患者心房肌中MMP- 9和TIMP- 1的mRNA水平,采用免疫组织化学方法对MMP- 9和TIMP- 1蛋白质表达半定量分析。结果　与对照组比较,风心房颤组左心房内径和右心房内径均显著扩大(P<0 .05~0 .001),心肌中MMP 9mRNA表达水平较对照组升高30 .9% (P<0 .05 );TIMP 1mRNA水平较对照组下调33 .3% (P<0 .05);左心耳心肌组织中MMP 9蛋白质水平增高100% (P<0. 001),TIMP -1蛋白质水平减少36% (P<0 .01)。左心耳心肌组织MMP- 9mRNA水平与房颤持续时间、左心房内径呈显著正相关(P<0. 05~0 .001)。结论　房颤时心房肌组织MMP 9 /TIMP- 1系统相互间的作用失衡对心房壁变薄、心房扩大和几何形状改变具有重要作用,其机制是细胞外基质过度降解。     

慢性阻塞性肺病患者支气管黏膜PPARγ、MMP9和iNOS的表达

目的研究慢性阻塞性肺疾病（COPD）患者支气管黏膜中过氧化物酶增殖物激活受体 γ(PPAR γ)、基质金属蛋白酶 9(MMP 9)和诱生型一氧化氮合酶(iNOS)的表达及与气流阻塞的关系。方法根据吸烟史及肺功能检查将其受试者分为3组：吸烟伴COPD患者18例;吸烟肺功能正常组15例;不吸烟肺功能正常组15例。全部受试者经电子支气管镜取支气管黏膜标本,采用免疫组织化学法检测支气管黏膜中核转录因子PPAR γ、MMP 9和iNOS的表达,并进行相关性分析。结果①免疫组织化学染色结果：核转录因子PPAR γ在吸烟伴COPD组和吸烟肺功能正常组表达明显减少,MMP 9和iNOS在两组表达明显增多,与不吸烟肺功能正常组比较差异均有统计学意义（P＜0.01）;②相关性分析：核转录因子PPAR γ的表达与FEV1%、FEV1/FVC%呈直线正相关（P＜0.01）;MMP 9和iNOS的表达与肺功能指标呈直线负相关（P＜0.01）。COPD患者支气管黏膜中核转录因子PPAR γ的表达与MMP 9和iNOS的表达均呈直线负相关（P＜0.05）。结论COPD患者支气管黏膜中核转录因子PPAR γ表达减少导致气道的抗炎能力下降,气道内炎症细胞及炎症介质增多,导致肺组织损伤及重构,引起和加重COPD患者的气流阻塞。     

慢支咳喘宁对慢性阻塞性肺疾病模型大鼠肺组织MMP-9和TIMP-1表达的影响

目的 观察慢支咳喘宁胶囊对慢性阻塞性肺疾病(COPD)模型大鼠肺组织基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、基质金属蛋白酶组织抑制因子-1(TIMP-1)表达的影响,以探讨慢支咳喘宁胶囊在改善COPD气道重塑中的作用及其机制.方法 将72只SPF级Wistar大鼠随机分为6组,即空白对照组,模型对照组,慢支咳喘宁低、中、高剂...     

Clinical study of inflammatory factors in sputum induced early after lung volume reduction surgery

Background The aim of this study was to prospectively study the changes in neutrophil elastase （NE）, fibroblast growth factor 9 （Fgf9）, matrix metalloproteinase-9 （MMP-9）, tissue inhibitor of metalloproteinase 1 （TIMP-1） in sputum induced during the early period after lung volume reduction surgery （LVRS）. Methods From April to October 2005, ten consecutive patients with chronic obstructive pulmonary disease （COPD） underwent LVRS. Ten non-small cell lung cancer patients （stage II-Illa） received Iobectomy as a control group. The induced sputum was collected from both groups at six different times （two weeks before operation and postoperatively at 1, 2, 4, 6 and 10 days）. The level of NE, Fgf9, MMP-9 and TIMP-1 were measured using enzyme-linked immunosorbent assay. Results The pulmonary function （FEV~%） and arterial blood gases （PaO2 and PaCO2） were significantly different belween the groups. There were no significant differences in age, ejection fraction （EF）, and operation duration, but hemoglobin in the LVRS group was statistically higher than in the controls. At certain times, there were significant differences in NE, MMP-9, TIMP-1 and MMP-9/TIMP-1 （P 〈0.05） but not in Fgf9 between the two groups. The levels of NE and TIMP-1 were maximal at 2 days postoperatively and that of MMP-9 and MMP-9/TIMP-1 at 4 days postoperatively in the LVRS group. In the control group, maximal levels of NE and TIMP-1 occurred at 2 days postoperatively and that of MMP-9 and MMP-9/TIMP-1 at 1 day postoperatively. Ten days after surgery, all values of the control group were not significantly different from the baseline. In the LVRS group, the levels were significantly different from the pre-operative values （P 〈0.05） apart from TIMP-1. Conclusion The levels of NE, MMP-9, TIMP-1 and MMP-9/TIMP-1 of the LVRS group were different from those of the control group. The time course of these chanties may be related to LVRS and the underlying process of COPD.     

肺鳞癌中MMP-2,MMP-9,TIMP-1的表达及与预后的关系

目的 :研究肺鳞癌中基质金属蛋白酶 (MMP 2 ,MMP 9) ,金属蛋白酶组织抑制剂 (TIMP 1)的表达及其与临床病理特征、淋巴结转移和预后的关系。方法 :免疫组织化学S P法进行检测。结果 :MMP 2 ,MMP 9,TIMP 1在肺鳞癌中的表达率分别为 72 .5 %、5 5 %和 72 .5 %。表达强度与淋巴结转移显著相关 (P <0 .0 1,P<0 .0 1,P <0 .0 5 ) ,与术后平均生存期显著相关 (P<0 .0 5 )。与年龄、性别、组织学类型、分化程度无关。结论 :淋巴结转移是影响肺癌病人预后的指标。     

低氧应激对人肝癌细胞AFP、VEGF、TIMP-1、MMP-9表达的影响

目的 探讨低氧应激对人肝癌细胞(HepG-2细胞)甲胎蛋白(AFP)、血管内皮生长因子(VEGF)、金属蛋白酶组织抑制剂(TIMP)-1、基质金属蛋白酶(MMP)-9表达的影响.方法 低氧(5% O2、5% CO2、90% N2)和常氧培养HepG-2细胞.逆转录-多聚酶链式反应技术测定HepG-2细胞AFP、VEGF、TIMP-1、MMP-9 mRNA的表达.酶联免疫吸附法测定HepG-2细胞培养上清VEGF、TIMP-1、MMP-9蛋白含量,放射免疫测定法测定HepG-2细胞培养上清AFP蛋白含量.结果 低氧组AFP、VEGF、MMP-9mRNA和蛋白表达量显著高于常氧组;TIMP-1 mRNA和蛋白表达量显著低于常氧组(P＜0.01).结论 低氧应激上调人HepG-2细胞AFP、VEGF、MMP-9基因表达,下调TIMP -1基因表达.     

妊娠早中期尿中MMP-9和TIMP-1蛋白与妊高征初筛

目的　探讨孕妇妊娠早中期尿液基质金属蛋白酶 9(MMP 9)和组织金属蛋白酶抑制剂 1(TIMP 1)蛋白表达与妊高征发生的关系。方法　用免疫印迹法技术随机检测了 12例正常未孕育龄妇女尿中和 88例孕妇妊娠早中期尿中的MMP 9及TIMP 1蛋白 ,将 88例孕妇按妊高征发生与否分为妊高征组 14例和非妊高征组 74例。结果　①MMP 9在妊高征组和非妊高征组早期阳性表达率分别为 2 1.4 3%和 5 1.35 % ,两者之间有显著性差异 (χ2 =4 .2 4 ,P <0 .0 5 ) ;在中期 ,阳性表达率分别为 14 .2 9%和 4 4 .5 9% ,两者间亦有显著性差异 (χ2 =4 .5 2 ,P <0 .0 5 )。②TIMP 1在妊高征组和非妊高征组早期 ,阳性表达率分别为 7.14 %和 12 .16 % ;在中期 ,阳性表达率分别为 14 .2 9%和 2 0 .2 7% ,两组间均无显著性差异 (P >0 .0 5 )。结论　尿中MMP 9的表达有可能成为妊高征早期诊断的一个有效而无创的初筛指标     

基质金属蛋白酶及其组织抑制物在子痫前期患者胎盘中的基因表达

目的研究子痫前期患者胎盘组织中基质金属蛋白酶(MMP-9、MMP-2)及其组织抑制物(TIMP-1、TIMP-2)基因mRNA表达,探讨其与子痫前期发病、进展的关系.方法采用半定量RT-PCR方法对30例正常晚期妊娠和50例子痫前期患者(包括24例轻度和26例重度)胎盘组织中MMP-2、MMP-9、TIMP-1和TIMP-2的mRNA水平进行检测.结果子痫前期组胎盘组织的MMP-9基因表达水平显著下降(P＜0.01),重度子痫前期组MMP-9基因表达水平尤低(0.07±0.05).尽管随病情的加重MMP-2mRNA水平呈现逐渐下降趋势,但没有统计学差异(P＞0.05).子痫前期组胎盘组织中的TIMP-1mRNA水平明显高于正常晚期妊娠者(P＜0.01),重度子痫前期组更高(1.49±0.21).子痫前期组胎盘组织TIMP-2mRNA表达显著降低(1.14±0.36),P＜0.01),并有随病情加重逐渐下降的趋势.结论随子痫前期患者病情的加重,胎盘组织的促浸润基因(MMP-2和MMP-9)表达水平降低,抑侵润基因(TIMP-1)的表达水平升高.子痫前期患者浸润相关基因的表达水平与子痫前期病情密切相关.     

桂哌齐特对脑梗死患者血清MMP-9和TIMP-1的影响

目的研究桂哌齐特对脑梗死患者血清基质金属蛋白酶9及金属蛋白酶组织抑制因子1的影响,并研究其作用机制。方法我院收治的40例脑梗死患者被随机分为两组,分别在治疗前和治疗后第24天检测患者血清MMP-9和TIMP-1浓度的变化。结果治疗后24 d,观察组与对照组的MMP-9均较前有下降(P<0.05),且观察组的的浓度低于对照组(P<0.05);两组的TIMP-1比较观察组升高的程度大于对照组组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论桂哌齐特对脑梗死有一定的治疗作用,其机制可能为降低血清MMP-9的浓度,或通过调节TIMP-1来降低MMP-9的水平。     

基质金属蛋白酶在慢性粒细胞白血病患者中的表达及其临床意义

目的 检测慢性粒细胞白血病(CML)患者骨髓单个核细胞基质金属蛋白酶(MMP-2、MMP-9、MMP-14)及其抑制剂(TIMP-1、TIMP-2)基因表达情况.方法 收集CML患者及正常成人的骨髓,分离单个核细胞,抽提RNA后进行RT-PCR得到cDNA,利用所合成的引物进行相应基因的扩增.结果 在12例正常成人骨髓单个核细胞基因中皆有MMP-9、TIMP-1的表达,6例表达TIMP-2,而MMP-2和MMP-14的表达皆为阴性;30例CML患者皆有MMP-9、TIMP-I的表达,其中26例有TIMP-2的表达,11例表达MMP-2和MMP-14;而11例表达MMP-2的患者中,3例已发生急变,6例处于加速期.结论 MMP-2与MMP-14的表达在骨髓单个核细胞中具有一致性,两者的出现与慢性粒细胞白血病进展相关.     

肝细胞生长因子对ADPKD囊肿衬里上皮细胞合成细胞外基质、基质金属蛋白酶及其抑制剂的作用

目的；观察重组人肝细胞生长因子（rhHGF)对常染色体显性遗传性多囊肾病（ADPKD)囊肿衬里上皮细胞合成细胞外项质（ECM），基质金属蛋白酶及其抑制剂的作用。方法：采用放免法测定细胞合成层粘连蛋白（LN）和Ⅲ型前胶原氨基末端肽（PⅢNP），采用ELISA法检测细胞合成Ⅳ型胶原(ColⅣ），采用RT－PCR方法测定细胞表达转化生长因子β1（TGFβ1），基质金属蛋白酶2（MMP－2），金属蛋白酶组织抑制剂1（TIMP－1），金属蛋白酶组织抑制剂2（TIMP－2）mRNA的情况，用蛋白质印迹方法检测细胞上清液中MMP－2蛋白表达，明胶酶谱法检测MMP－2活性。结果：rhHGF及rhHGF 抗TGFβ1抗体组ADPKD囊肿衬里上皮细胞合成LN，ColⅣ显著增多，但两组比较无显著差异。对照组，rhHGF组，rhHGF 抗HGF抗体组及rhHGF 抗TGFβ1抗体组各间合成PⅢNP值均无显著差异。对照组，rhHGF组，rhHGF＋抗HGF抗体组各组比较TGFβ1mRNA表达无显著差异。与对照比较，rhHGF显著上调细胞MMP－2 mRNA和细胞上清液中MMP－2蛋白表达及MMP－2活性，显著下调细胞TIMP－1，TIMP－2 mRNA表达。结论：HGF促进了ADPKD囊肿衬里上皮细胞合成LN和ColⅣ，增加MMP－2表达，抑制TIMP－1，TIMP－2的表达。这些改变可能参与了ADPKD囊肿的发生及发展。