miR-34a-5p对HaCaT细胞增殖及其靶基因Notch1表达的影响

目的: 检测miR-34a-5p对人角质形成细胞株HaCaT细胞体外增殖及其靶基因Notch1 mRNA表达的影响。方法: HaCaT细胞体外培养,优化转染浓度,分为4组进行转染：miR-34a-5p 模拟物组（minic 组）,阴性对照组（NC组）,miR-34a-5p 抑制物组（inhibitor组）,抑制物阴性对照组（inhibitor NC组）。MTT检测细胞增殖情况; RT-qPCR检测Notch1的mRNA表达情况。结果: 转染后48小时minic 组、inhibitor组细胞增殖活力分别为39.7%和15.7%,minic 组、inhibitor组与NC组（21.3%）相比,差异有统计学意义(Ps<0.05)。HaCaT细胞转染后,minic 组和inhibitor组Notch1表达量分别为2.78±1.30和0.37±0.46,与NC组(1.0±0.06)比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论: miR-34a-5p促进HaCaT细胞体外增殖,机制可能与Notch1 mRNA表达上调有关。     

决银方对HaCaT细胞增殖及细胞周期的影响北大核心CSCD

目的观察决银方对HaCaT细胞增殖及细胞周期的影响。方法用CCK-8法检测1%,2%,5%和10%浓度决银方作用HaCaT细胞后细胞增殖的变化,以相同体积的DMEM作为空白对照;用流式细胞仪检测1%,2%,5%和10%浓度决银方作用HaCaT细胞后细胞周期的变化,以相同体积的DMEM作为空白对照。结果 CCK-8法检测显示5%浓度的决银方作用HaCaT细胞24h,细胞增殖受到明显抑制(P<0.05);流式细胞仪检测显示,5%浓度的决银方作用于HaCaT细胞24h,G_1期细胞比例明显减少(P<0.05)。结论 5%浓度的决银方对HaCaT细胞增殖有明显抑制作用,其主要作用在细胞周期的G_1期。     

艾滋病患者血清中miR-210-5p和miR-296-5p的表达及其与临床病理特征及预后的关系

目的 探讨miR-296-5p、miR-210-5p在艾滋病(AIDS)患者血清中的表达及与临床病理特征及预后的关系。方法 选取2018年8月至2021年8月四川省泸州市人民医院收治的165例AIDS患者作为研究组,同时选取165例健康体检者作为对照组。检测miR-296-5p、miR-210-5p水平;评价miR-210-5p、miR-296-5p水平对AIDS患者预后不良的诊断价值;采用多因素Logistic回归风险模型分析AIDS患者的预后影响因素。结果 miR-210-5p在AIDS患者血清中的表达较对照组升高,miR-296-5p表达较对照组降低,二者表达呈负相关(r=-0.487,P<0.05);预后不良组患者miR-296-5p表达水平低于预后良好组,miR-210-5p水平高于预后良好组,差异具有统计学意义(P<0.05);AIDS患者血清中miR-210-5p、miR-296-5p表达与有无生殖器疱疹、有无淋巴瘤、人类免疫缺陷病毒(HIV)载量有关(P<0.05);受试者工作特征(ROC)曲线结果显示,血清miR-296-5p、miR-210-5p水...     

窄谱中波紫外线对HaCaT细胞增殖及Gadd45α表达的影响北大核心CSCD

目的探讨窄谱中波紫外线（NB-UYB）对HaCaT细胞表达Gadd45α及对细胞增殖、周期的影响。方法分别以100、200、400mJ／cm^2NB-UVB照射HaCaT细胞后,于6、12、24h收集细胞,采用RT-PCR和Western印迹检测Gadd45amRNA和蛋白水平的变化;CCK8法检测照射后对HaCaT细胞增殖的影响;流式细胞术检测照射后对HaCaT细胞周期的影响。结果HaCaT细胞表达Gadd45α,分别经100、200、400mJ／cm^2NB-UVB照射后,Gadd45α mRNA及蛋白表达水平均在6h升高,12h升高明显,24h表达下降,与未照射组比较差异均有统计学意义（P〈0．05）。三个剂量组照射后12h,Gadd45α mRNA相对A值分别为1．4360±0．6551、1．8633±0．0979、1．9266±0．1724,均高于对照组（0．6000±0．1276）（P〈0．05）;Gadd45α蛋白A值分别为0．0773±0．0005、0．1936±0．0015、0．2373±0．0015,较对照组（0．0290±0．0010）增高（P〈0．05）。NB-UVB照射对HaCaT细胞有抑制作用,其抑制增殖作用呈量效及时效关系;三组照射后HaCaT细胞周期发生改变,G2期细胞比例依次为13．53±1．03、17．77±2．25、30．03±4．29,较对照组（9．24±0．97）显著增高（P〈0．05）,细胞周期被阻滞于G2期。结论NB-UVB照射后HaCaT细胞上调Gadd45α表达;Gadd45α可能参与了紫外线照射后HaCaT细胞增殖抑制、周期阻滞过程。     

罗格列酮对HaCaT细胞增殖及β-连环蛋白、细胞周期蛋白D1表达的影响北大核心CSCD

目的探讨罗格列酮对体外培养的角质形成细胞株HaCaT细胞体外增殖的影响。方法用不同浓度的罗格列酮处理HaCaT细胞,四甲基偶氮唑蓝（MTT）法检测HaCaT细胞增殖活性;蛋白免疫印迹法测定HaCaT细胞B-连环蛋白、细胞周期蛋白D1表达水平。结果不同浓度的罗格列酮对HaCaT细胞体外增殖均具有抑制作用,药物作用48h后对HaCaT细胞体外增殖的抑制率分别为18．9％、23．7％、35．1％、44．6％,与溶媒组相比,差异有统计学意义（P〈0．05）。罗格列酮处理HaCaT细胞后,p-连环蛋白、细胞周期蛋白D1表达明显下调。结论罗格列酮抑制HaCaT细胞的体外增殖的机制可能与B-连环蛋白、细胞周期蛋白D1的表达下调有关。     

中波紫外线对HaCaT细胞核因子-κB和p53表达的影响

目的研究中波紫外线(UVB)对HaCaT细胞核因子-κB(NF-κB)和p53表达的影响。方法以60mJ/cm2的UVB照射HaCaT细胞后8h、16h和24h,采用real time PCR和western blot等技术检测NF-κB和p53的表达情况。结果 1与未处理组相比,UVB照射HaCaT细胞8h、16h和24h后,NF-κB mRNA水平升高程度分别为27%、32%和42%,p53 mRNA水平升高程度分别为13%、20%和28%;2未处理组HaCaT细胞NF-κB和p53蛋白的表达水平分别为0.3989±0.04802和0.3018±0.03605,UVB照射8h、16h和24h后,二者的表达均随时间延长而升高,NF-κB为0.4283±0.0195、0.5976±0.0401和0.8255±0.0214,p53为0.3925±0.0244、0.4595±0.0362和0.5811±0.0482,差异有统计学意义(P0.05)。结论 UVB可致HaCat细胞中NF-κB和p53表达水平升高。     

重楼皂苷Ⅰ对人黑素瘤A375细胞增殖和凋亡的影响北大核心CSCD

目的 研究重楼皂苷Ⅰ对人黑素瘤A375细胞增殖和凋亡的影响及相关机制。方法 采用CCK8法测定0（对照组）、1.5、3.0、6.0 mg/L重楼皂苷Ⅰ对正常人黑素细胞和A375细胞增殖的影响;Hoechst33258荧光染色法观察细胞凋亡形态;流式细胞仪检测A375细胞周期变化及细胞凋亡水平;荧光染料（DCFH？DA）测定A375细胞内活性氧的变化;罗丹明123染色测定线粒体膜电位变化;利用分光光度法检测重楼皂苷Ⅰ处理后的A375细胞内ATP和上清液中乳酸、葡萄糖含量;Western印迹法检测A375细胞内Bcl？2、Bcl？2相关X蛋白（Bax）、活化的半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶3、细胞周期蛋白D1、丙酮酸激酶同工酶2（PKM2）表达。多组均数比较采用单因素方差分析,组间多重比较采用SNK？q检验。结果 在工作浓度内重楼皂苷Ⅰ对正常人黑素细胞增殖无明显影响,但能明显抑制 A375 细胞的增殖（P 〈 0.01）;荧光显微镜下发现,重楼皂苷Ⅰ处理后的 A375 细胞出现明显的凋亡形态。0（对照组）、1.5、3.0、6.0 mg/L重楼皂苷Ⅰ分别处理A375细胞后,随重楼皂苷Ⅰ浓度增加,细胞凋亡率（分别为4.25% ± 1.27%、10.03% ± 1.49%、36.62% ± 1.97%、44.11% ± 2.47%）逐渐升高（F = 665.7,P 〈 0.01）,G0/G1期细胞比例（分别为54.13% ± 2.57%、67.35% ± 3.79%、74.39% ± 3.29%、82.29% ± 3.99%）亦渐增多（F = 71.81,P 〈 0.01）;细胞内活性氧呈明显上升趋势,细胞线粒体膜电位呈明显下降趋势（P 〈 0.01）;细胞内ATP含量下降（P 〈 0.01）,培养液中乳酸含量下降,葡萄糖含量上升（P 〈 0.01）;细胞Bax、cleaved？caspase？3蛋白表达增多,但Cyclin D1、Bcl？2和PKM2蛋白表达下降（P 〈 0.01）。结论 重楼皂苷Ⅰ可能通过激活细胞内活性氧的产生,引起线粒体膜电位下降,诱导A375细胞凋亡,并通过抑制PKM2、细胞周期蛋白D1表达,使细胞阻滞于G0/G1期。     

抑癌基因DKK3对皮肤恶性黑素瘤细胞增殖和凋亡的影响北大核心CSCD

目的 探讨DKK3 在人皮肤恶性黑素瘤细胞及组织中的表达及其对黑素瘤细胞A375增殖与凋亡的影响。方法 通过反转录（RT）？PCR及实时定量PCR分析DKK3 mRNA在人恶性黑素瘤细胞系HM、A375、WM451、WM35、SK？MEL？1、Hs？695T和MDA？MB？435s及38例原发性黑素瘤、4例转移性黑素瘤和20例色素痣组织中的相对表达。分别转染恶性黑素瘤A375细胞pcDNA3.1（＋）？Flag？DKK3 质粒（实验组）和pcDNA3.1（＋）？Flag？Vector 质粒（对照组）,RT？PCR 验证 DKK3 的过表达;通过CCK8法和平板克隆实验分析 DKK3 对A375细胞增殖的影响,流式细胞仪分析 DKK3对A375细胞凋亡的影响,Western印迹检测A375细胞周期和凋亡相关蛋白的表达。结果 DKK3 mRNA 在WM35细胞系表达下调,HM、A375、WM451、SK？MEL？1和Hs？695T细胞系表达缺失,MDA？MB？435s细胞高表达。与色素痣相比,DKK3 mRNA在人恶性黑素瘤组织表达降低（P 〈 0.001）。与对照组A375细胞相比 （100%）,实验组A375细胞克隆形成效率明显受到抑制（23.22% ± 3.55%）;同时转染后24、48、72 h细胞活性受到明显抑制（均P 〈 0.05）。流式细胞仪检测发现,与对照组A375细胞（G1期,25.38% ± 2.92%）相比,实验组A375细胞明显阻滞于G1期（48.68% ± 3.92%,P 〈 0.001）,细胞凋亡率明显升高（P 〈 0.001）。与对照组A375细胞相比,实验组周期凋亡相关蛋白p21、Bax、活化的parp和 活化的Caspase？3表达升高,细胞周期蛋白D1和Bcl2表达降低（均P 〈 0.001）。结论 DKK3在人皮肤恶性黑素瘤组织中表达下调,可能作为潜在的抑癌基因参与皮肤恶性黑素瘤的进展。     

甘草次酸对银屑病患者角质形成细胞增殖、凋亡及miR-21表达的影响

目的 初步探讨甘草次酸对银屑病患者角质形成细胞增殖、凋亡的影响以及可能的作用机制。方法 体外原代培养银屑病患者角质形成细胞,将传代2 ~ 3次后的角质形成细胞分为对照组和药物处理组,药物处理组加入甘草次酸,使其终浓度分别为1、2、4、8和10 mg/L,对照组不加甘草次酸。作用24 ~ 72 h后,MTS法检测甘草次酸对角质形成细胞增殖的影响;流式细胞仪检测不同浓度甘草次酸处理24 h后,角质形成细胞凋亡的变化;实时荧光定量PCR检测甘草次酸对银屑病患者角质形成细胞miR-21表达的影响。结果 1 ~ 10 mg/L甘草次酸作用角质形成细胞24 ~ 72 h后,随着甘草次酸作用时间延长和浓度增加,细胞增殖率逐渐下降。1、2、4、8和10 mg/L甘草次酸作用24 h后,角质形成细胞凋亡率分别上升至（9.64 ± 0.86）%、（25.24 ± 2.93）%、（27.68 ± 3.70）%、（35.55 ± 4.23）%、（38.89 ± 2.31）%;两两比较显示,除1 mg/L甘草次酸组外,其他各组与对照组（10.09 ± 0.69）%相比,差异均有统计学意义（均P < 0.01）。1、2、4 mg/L甘草次酸处理角质形成细胞24 h后,miR-21表达水平（2-ΔΔCt）分别为0.24 ± 0.04、0.22 ± 0.07、0.17 ± 0.05,与对照组0.92 ± 0.12相比,差异有统计学意义（F = 213.10,P < 0.05）。2 mg/L甘草次酸作用18、24、48 h后,miR-21基因表达水平分别为0.55 ± 0.02、0.22 ± 0.06、0.15 ± 0.06,总体呈下降趋势,与对照组（0.98 ± 0.02）相比,差异有统计学意义（F = 238.10,P < 0.05）。结论 甘草次酸可抑制银屑病患者角质形成细胞的增殖,促进其凋亡,其机制可能与下调miR-21表达有关。     

二甲双胍对转化生长因子β1诱导黑素瘤1205Lu细胞上皮-间质转化及侵袭的影响

目的 探讨二甲双胍在转化生长因子β1 (TGF-β1)诱导下,对黑素瘤1205Lu细胞上皮-间质转化(EMT)过程及侵袭的影响.方法 体外培养1205Lu细胞,分3组处理:空白对照组、TGF-β1(5 ng/ml)组、TGF-β1(5 ng/ml)+二甲双胍(1 mmol/L)组.处理48 h后,显微镜下观察各组细胞形态变化并采集照片.Transwell侵袭实验检测细胞侵袭能力,采用蛋白质印迹法和实时荧光定量RT-PCR技术分别测定细胞内N-钙黏蛋白及基质金属蛋白酶9(MMP-9)在蛋白质和mRNA水平上的表达,通过单因素方差分析及LSD-t法对结果进行统计学分析.结果 与空白对照组相比,TGF-β 1诱导1205Lu细胞向成纤维细胞样形态转变(同上皮-间质转化样改变),联合二甲双胍可逆转上述形态改变.3组穿膜细胞数为空白对照组194.1±8.295、TGF-β1组412.2±13.427、TGF-β1+二甲双胍组175.3±8.693.N钙黏蛋白水平3组分别为0.603±0.029、1.963±0.016、0.207±0.009,mRNA水平3组分别为1.000±0.000、6.678±0.043、1.035±0.015.MMP-9蛋白水平3组分别为0.575±0.009、1.243±0.027、0.629±0.008,mRNA水平3组分别为1.000±0.000、5.351±0.604、0.930±0.130.结果经方差分析显示,3组差异有统计学意义(P＜0.05).结论 二甲双胍可显著抑制TGF-p1诱导的黑素瘤1205Lu细胞EMT样形态改变、细胞侵袭及N钙黏蛋白、MMP-9在蛋白和mRNA水平上的表达.     

miR-532-3p对子宫内膜异位症基质细胞增殖、侵袭和AKT3表达的影响

目的 探究子宫内膜异位症(EM)组织中miR-532-3p的表达及其对子宫内膜异位症基质细胞(ESCs)增殖、侵袭和AKT3表达的影响机制.方法 选取2019年11月至2020年3月在廊坊市人民医院行腹腔镜及刮宫术的10例EM患者的异位子宫内膜组织和10例非EM患者的正常子宫内膜组织作为研究对象.从EM患者的异位子宫内...     

犀地凉血方对银屑病模型小鼠LncRNA NEAT1、miR-485-5p、STAT3表达及相关炎症因子水平的影响

目的 探讨犀地凉血方治疗银屑病的机制。方法 将30只BALB/C小鼠随机分为对照组、模型组、甲氨蝶呤组及犀地凉血方低、中、高剂量组，每组5只。对照组小鼠背部脱毛区外涂凡士林，而其余各组小鼠则外涂咪喹莫特(IMQ)乳膏造模，并于造模当天给药干预。采用PASI评分对小鼠皮损情况进行评价，HE染色观察皮损病理形态学特征，IHC检测皮损组织中STAT3蛋白表达情况，qPCR及Western blot分别检测皮损组织中LncRNA NEAT1、miR-485-5p、STAT3基因及蛋白表达情况，ELISA法检测外周血中IL-17A、TNF-α、IL-22水平。结果 模型组小鼠出现典型的银屑病样皮损及相应的组织病理学改变，而犀地凉血方各剂量组能明显减轻小鼠皮损处红斑、鳞屑及浸润程度，降低PASI评分，并减轻表皮增生、角化过度及淋巴细胞浸润等。与对照组相比，模型组小鼠皮损组织中LncRNA NEAT1、STAT3高表达而miR-485-5p低表达；犀地凉血方各剂量组中LncRNA NEAT1、STAT3表达降低，miR-485-5p表达升高。与对照组相比，模型组小鼠外周血中IL-17A、TNF-α、...     

二甲双胍+炔雌醇环丙孕酮治疗多囊卵巢综合征不孕症的效果及对患者排卵率和妊娠率的影响评价

目的验证二甲双胍+炔雌醇环丙孕酮治疗多囊卵巢综合征不孕症的效果及对患者排卵率和妊娠率的影响。方法选取2016年12月至2017年12月陵水县人民医院诊治的60例多囊卵巢综合征不孕症患者为研究对象,将其随机平均分为观察组和对照组,每组30例患者。观察组患者采取二甲双胍+炔雌醇环丙孕酮治疗方式,对照组患者采取炔雌醇环丙孕酮治疗方式,对两组患者的治疗成效和患者排卵率、妊娠率等指标进行观察对比。结果经过治疗后,两组患者的体质指数(BMI)、体重、促黄体生成素(LH)、雌二醇(E2)、睾酮(T)、空腹胰岛素(IN)等指标均有明显改善,而观察组患者效果明显优于对照组患者,其差异均具有统计学意义(均P0.05);两组患者促卵泡刺激素(FSH)差异无统计学意义(P0.05);观察组患者的妊娠率、排卵率和月经恢复正常率均显著优于对照组,其差异具有统计学意义(P0.05);此外,观察组患者的并发症发生率为10.0%,对照组患者的并发症发生率为46.7%,其差异具有统计学意义(P0.05)。结论对多囊卵巢综合征不孕症患者采取二甲双胍+炔雌醇环丙孕酮治疗方式,可以有效降低并发症的发生率,改善患者病情,临床疗效明显,具有一定安全性,值得进一步推广应用。     

肿瘤坏死因子-α、白介素-6和干扰素γ对HaCaT细胞表达CD68抗原的影响北大核心CSCD

目的研究肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白介素-6（IL-6）和干扰素γ（IFN-γ）以及细菌脂多糖（LPs）对CD68抗原在角质形成细胞株HaCaT细胞中表达的影响。方法RPMI1640培养液培养的HaCaT细胞随机分成自然增殖孔（无刺激组）、IFN一1刺激孔（组）、TNF-α刺激孔（组）、LPS刺激孔（组）、IL-6刺激孔（组）。培养24h后收集细胞,采用流式细胞仪、免疫组化和RT-PCR方法检测TNF-α、IL-6、IFN-γ和LPS作用HaCaT细胞后CD68表达情况。结果与无刺激组比较,不同刺激因素可使HaCaT细胞CD68阳性细胞数增多,但以TNF-α和IL-6的作用较强（t值为3．60和3．93,P值均〈0．01）,IFN-γ和LPS的作用稍弱（t值为2．38和2．52,P值均〈0．05）。只有IL-6可以使HaCaT细胞CD68阳性细胞平均荧光强度增强（t值为8．34,P值〈0．01）。在IFN-γ和TNF-α、IL-6作用HaCaT细胞24h后均有CD68表达于胞质和胞膜,并且以TNF-α和IL-6作用较强。TNF-α和IL-6作用HaCaT细胞24h后可见CD68mRNA表达明显增强（t值为4．34和7．52,P值均〈0．01）,IFN-γ作用后出现较弱表达（t=2．81,P〈0．05）。结论在IL6、TNF-α、IFN-γ和LPS的作用下HaCaT细胞CD68表达增强。     

犀地凉血方通过LncRNA NEAT1/miR-485-5p/STAT3调控网络对HaCaT细胞增殖、凋亡影响的研究

目的探讨犀地凉血方对HaCaT细胞LncRNA NEAT1/miR-485-5p/STAT3调控网络及细胞增殖、凋亡的影响。方法以IL-17诱导的HaCaT细胞为研究对象, 通过qPCR、Western印迹法检测LncRNA NEAT1、miR-485-5p、STAT3 mRNA和蛋白在HaCaT细胞和正常人表皮角质形成细胞(NHEK细胞)中的表达。采用荧光原位杂交技术(FISH)观察LncRNA NEAT1、miR-485-5p在HaCaT细胞中的表达;采用双萤光素酶报告基因实验验证LncRNA NEAT1、miR-485-5p、STAT3之间的靶向调控关系。犀地凉血方煎煮取汁给予大鼠灌胃后采集含药血清, 以含药血清干预和/或LncRNA-NEAT1过表达载体转染HaCaT细胞, 将HaCaT细胞分对照组、过表达LncRNA NEAT1组、犀地凉血方组、犀地凉血方+过表达LncRNA NEAT1组, 采用qPCR、Western印迹法、流式细胞仪、CCK8等实验技术分别检测LncRNA NEAT1、miR-485-5p、STAT3表达及细胞增殖、凋亡情况。采用独立样本t检验、单因素方...