环氧合酶-2反义寡核苷酸对宫颈癌Hela细胞顺铂敏感性的影响

目的研究COX-2反义寡核苷酸(AS-ODNs)对宫颈癌Hela细胞顺铂敏感性的影响。方法体外设计、合成针对COX-2的反义寡核苷酸,并转染宫颈癌Hela细胞,应用细胞蛋白印记法(West-blot)测定转染COX-2反义寡核苷酸后Hela细胞COX-2基因蛋白的表达变化,应用四甲基偶氮唑蓝比色法检测(MTT)COX-2反义寡核苷酸转染后Hela细胞对顺铂敏感性的变化。结果转染针对COX-2的反义寡核苷酸后,在24、48和72h,Hela细胞COX-2蛋白的表达水平下降;在转染48h后,Hela细胞对顺铂的半数抑制量从(10.475±1.713)μg/ml提高到(0.194±0.021)μg/ml,Hela细胞对顺铂的敏感性增加了53.88倍。结论COX-2反义寡核苷酸能增加宫颈癌Hela细胞对顺铂的敏感性。     

选择性COX-2抑制剂NS-398对宫颈癌细胞的作用及其作用机制

目的:研究选择性COX-2抑制剂NS-398对宫颈癌细胞的作用及其作用机制,探讨NS-398与卡铂在宫颈癌治疗中的协同作用.方法:用NS-398、卡铂及两者联合作用人宫颈癌Hela细胞,四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法检测NS-398、卡铂及两者联合对宫颈癌细胞增殖的影响,流式细胞仪PI染色法分析NS-398、卡铂处理后宫颈癌细胞凋亡率和细胞周期的改变.结果:NS-398、卡铂对人宫颈癌hela细胞的增殖具有抑制作用.卡铂联合NS-398对人宫颈癌hela细胞的增殖抑制作用显著增加,其联合抑制率近似于NS-398和卡铂单药抑制率之和,也近似于2倍卡铂剂量时的增殖抑制率.流式细胞仪检测发现,与对照组比较,NS-398处理组G1期细胞明显增加,而S期细胞明显减少,两组比较差异有统计学意义(P＜0.05);而卡铂处理组G1期细胞明显减少,S期细胞明显增加,两组比较有统计学意义(P＜0.05).NS-398(200 μmol/L)作用Hela细胞48 h后,流式细胞仪检测发现,NS-398处理组凋亡率为3.43%±0.02%,对照组凋亡率为1.48%±0.03%,两组比较差异无统计学意义(P＞0.05).而卡铂(80 mg/L)处理组凋亡率为9.32%±0.02%,与对照组比较差异有统计学意义(P＜0.05).结论:选择性COX-2抑制剂NS-398对宫颈癌细胞的增殖具有抑制作用.NS-398对宫颈癌细胞的作用可能与凋亡无关.NS-398与卡铂在宫颈癌化疗中具有叠加作用.     

NS-398协同顺铂对人肺腺癌细胞生长影响的机制研究

目的 明确COX-2抑制剂NS-398对顺铂肺腺癌细胞增殖抑制作用的影响,探讨NS-398与顺铂的联合抑制肺腺癌细胞增殖的作用机制.方法 采用MTT比色法检测NS-398和顺铂联合作用对肺腺癌细胞增殖的影响,荧光染色法(吖啶橙和溴化乙啶)和流式细胞法观察肺腺癌细胞凋亡凋亡率和细胞周期的改变,二维聚丙烯酰胺凝胶电泳分离NS-398和顺铂联合作用肺腺癌细胞的蛋白质,质谱分析法(MOL-DI-TOF-MS)和数据库查询鉴定其中部分差异蛋白质.结果 NS-398对顺铂IC50降低的百分率在43.34%～69.61%之间,两药联合作用为轻度协同作用～协同作用;NS-398与顺铂联合组作用24和48 h诱导肺腺癌细胞的凋亡率增高.NS-398与顺铂联合组表达量下调的差异蛋白点为22个,表达量上调蛋白点为2个,只在NS-398与顺铂联合组出现的蛋白点25个,NS-398与顺铂联合组消失的蛋白点17个.选择其中17个表达量下调蛋白点、2个表达量上调蛋白点进行质谱鉴定,所鉴定的差异蛋白质中部分为细胞骨架蛋白,部分为与细胞增殖和凋亡相关的蛋白,部分为细胞代谢途径相关酶.结论 NS-398可以增强顺铂对肺腺癌细胞增殖的抑制作用,两种药物具有协同作用,肺腺癌细胞凋亡作用的增强可能参与了NS-398与顺铂协同抑制肺腺癌细胞增殖的作用机制.热休克蛋白90和磷酸丙糖异构酶可能参与NS-398对顺铂肺腺癌细胞增殖抑制作用的增强.     

NS398逆转溶血磷脂酸拮抗顺铂抑制卵巢癌细胞增殖作用的研究

目的:观察环氧化酶-2(Cyclooxygenase-2,COX-2)抑制剂NS398对溶血磷脂酸(Lysophosphatidic acid,LPA)拮抗顺铂抑制卵巢癌细胞细胞增殖作用的影响,并探讨其可能机制.方法:体外培养人卵巢癌细胞3AO,MTY法检测NS398对LPA拮抗顺铂抑制3AO细胞增殖的影响;流式细胞仪检测细胞周期变化;RT-PCR检测LPA单独或合用NS398对3AO细胞表达COX-2的影响.结果:LPA对顺铂抑制卵巢癌细胞增殖有拮抗作用,并降低G_0/G_1期的细胞比率;联合用NS398后,卵巢癌细胞的生长显著受抑制,同时G_0/G_1期细胞比率上升;RT-PCR结果显示40μmol/L LPA能促进COX-2的表达,而合用NS398后COX-2表达降低.结论:NS398可能通过抑制COX-2表达,实现逆转LPA拮抗顺铂抑制卵巢癌细胞细胞增殖的作用.     

顺铂联合COX-2选择性抑制剂NS-398对食管癌Eca-109细胞增殖和凋亡的影响

目的 体外观察顺铂(diamminedichloroplatinum, DDP)以及DDP联合环氧合酶-2(cyclooxygenase, COX-2)选择性抑制剂NS-398对人食管癌Eca-109细胞增殖和凋亡的影响,比较单独应用DDP与DDP联合NS-398应用于食管癌Eca-109细胞的抗肿瘤效应.方法 CCK-8法检测不同浓度的DDP(1.25、2.50、5.00、10.00、20.00 mg/L)单独作用及DDP联合NS-398(1.00、10.00 μmol/L)作用Eca-109细胞24 h的细胞增殖抑制率.琼脂糖凝胶电泳技术检测DDP(1.25、2.50、5.00 mg/L)单用及联合NS-398(1.00、10.00、80.00 μmol/L)作用Eca-109细胞24 h和48 h的DNA Ladder出现情况.透射电镜观察DDP单用以及联合NS-398作用于Eca-109细胞24 h超微结构的变化.药物未处理组作为对照组.结果 细胞增殖抑制实验表明顺铂、NS-398对Ec-109细胞有剂量依赖性抑制增殖作用(P<0.05).顺铂联合NS-398用药组细胞增殖抑制率明显高于同浓度顺铂单用组,且随添加的NS-398的剂量的增加而增加,DDP联合NS-398用药组对Ec-109细胞的增殖抑制效应和诱导凋亡效应明显高于DDP单药组,二者具有协同效应.结论 与DDP单用相比,添加低剂量NS-398能够增强DDP对Eca-109细胞的增殖抑制效应和诱导凋亡效应.     

姜黄素逆转P—gp介导卵巢癌多药耐药机制的研究

目的探讨姜黄素对P糖蛋白（P—gP）介导的卵巢癌多药耐药的逆转作用及其可能机制。方法采用二苯基溴化四氮唑蓝（MTT）法检测人卵巢癌癌细胞株加药后的增殖,碘化丙啶（PI）染色法检测细胞凋亡率,western blot法检测P—Akt和P-gP的表达量。结果姜黄素合用顺铂处理细胞（OVCAR-3／DDP细胞株）48h,顺铂的浓度在0．05—5μg／ml时,加入姜黄素25μmol／L,耐药细胞生存率下降明显（P〈0．05）,尤以顺铂0．25μg／ml和姜黄素25μmol／L作用时耐药细胞生存率下降最明显。单用顺铂组细胞的凋亡率为（13．2±2．5）％,采用在顺铂基础上联合使用姜黄素后细胞凋亡率为（21．8±3．5）％,与单独使用顺铂相比,顺铂与姜黄素联合使用诱导细胞凋亡的作用显著增强（P〈0．05）。与单用顺铂0．25μg/ml相比,联合使用姜黄素后p-Akt和P-gP的表达量明显降低（P〈0．05）,2组间Akt的表达量差异无统计学意义（P〉0．05）。结论姜黄素不增加顺铂对OVCAR-3细胞毒性作用;对于OVCAR-3／DDP细胞株,姜黄素明显增加顺铂细胞毒性;姜黄素明显抑制了p-Akt和P—gP蛋白的表达。姜黄素可能通过抑制Akt信号通路降低P—gP的表达进而逆转多药耐药。     

MiR-26b增强顺铂对宫颈癌细胞株Hela的杀伤活性研究

目的观察micro RNA-26b(mi R-26b)联合顺铂对宫颈癌细胞的杀伤效果,并探讨其作用机制。方法荧光定量PCR方法检测人正常宫颈上皮细胞系CRL-2614及宫颈癌细胞系Hela、SiHa和C-33a的mi R-26b表达水平。MTT法检测顺铂单独治疗及联合mi R-26b治疗对宫颈癌细胞系Hela的杀伤活性。利用生物信息学及Western blot方法验证mi R-26b是否调节Hela细胞Mcl-1表达。构建Mcl-1真核表达载体,MTT法检测Mcl-1表达载体转染对mi R-26b联合顺铂杀伤Hela细胞疗效的影响。结果宫颈癌细胞系mi R-26b表达水平:Hela细胞为(0.21±0.04),Si Ha细胞为(0.42±0.03),C-33a细胞为(0.33±0.03),显著低于正常宫颈上皮细胞系CRL-2614的(1.00±0.05)(P0.05)。mi R-26b联合1μmol/L顺铂治疗组对Hela细胞的杀伤活性[细胞活力抑制率为(52.6±6.9)%]显著高于1μmol/L顺铂单治疗组[细胞活力抑制率为(6.7±3.5)%]。mi R-26b转染后,Hela细胞Mcl-1蛋白表达水平下降。mi R-26b联合1μmol/L顺铂在Mcl-1表达载体转染后对Hela细胞的杀伤活性[细胞活力抑制率为(19.6±6.7)%]显著低于未转染Mcl-1表达载体的mi R-26b联合1μmol/L顺铂组[细胞活力抑制率为(55.7±7.6)%]。结论 Mi R-26b通过靶向于Mcl-1增强顺铂对宫颈癌细胞系Hela的杀伤活性。     

顺铂诱导宫颈癌HeLa细胞凋亡及对FHIT,Ki67和Bax表达的影响

目的研究顺铂对人宫颈癌HeLa细胞生长的作用以及对FHIT,Bax,Ki67表达的影响,初步探讨其作用机制。方法采用MTT法测定1μg／ml,5μg／ml,10μg／ml,15μg／ml的顺铂对Helm细胞增殖的影响;流式细胞仪检测1μg／ml,5μg／ml,10μg／ml顺铂作用24h后的细胞凋亡情况;免疫细胞化学法测定用药前后FHIT,Bax,Ki67在宫颈癌HeLa细胞上的表达。结果MTT比色法表明顺铂抑制体外培养的HeLa细胞生长并且呈时效和量效关系（P〈0．05）;流式细胞术测细胞凋亡率显示不同浓度顺铂作用于HeLa细胞24h后,各组细胞亚G1峰与对照组相比差异有统计学意义（P〈0．05）;免疫组化法结果显示顺铂可以使FHIT和Bax的表达上调,而Ki67的表达则下调（P〈0．05）。结论顺铂对宫颈癌HeLa细胞体外生长具有明显抑制作用,能通过促进FHIT和Bax的表达,抑制Ki67的表达来诱导肿瘤细胞凋亡。     

NS398对宫颈癌Hela细胞bcl-2表达的影响

目的 探讨NS398对宫颈癌Hela细胞生长及bcl-2基因和蛋白表达的影响.方法 用不同浓度的NS398(0、25、50、75和100μmol/L)处理宫颈癌Hela细胞不同时间,采用MTT比色法分析细胞生长抑制卒.用不同浓度NS398处理Hela细胞24h,RT-PCR检测COX-2和bcl-2 mRNA表达的变化,Western blot检测COX-2和bcl-2蛋白表达的变化.结果 随着NS398浓度及处理时间的增加.宫颈癌Hela细胞生长抑制率升高;随着NS398剂量的增加,COX-2和bcl-2 mRNA及蛋白的表达水平逐渐减少.结论 NS398可呈剂量和时间依赖性抑制Hela细胞的生长,呈浓度依赖性减少COX-2和bcl-2 mRNA及蛋白的表达.NS398可能通过抑制COX-2和bcl-2的表达,抑制宫颈癌Hela细胞的生长.     

环氧合酶-2选择性抑制剂对乳腺癌细胞株生长及凋亡的影响

目的观察环氧合酶-2(COX-2)的特异性抑制剂NS-398对乳腺癌MCF-7细胞的生长抑制和凋亡作用,及其对阿霉素(ADM)诱导的MCF-7细胞凋亡作用的影响。方法应用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法分析NS-398对MCF-7细胞的生长抑制作用,进一步用NS-398和ADM单独及联合作用于MCF-7细胞,流式细胞术检测细胞的凋亡,免疫印迹法检测凋亡相关蛋白Bcl-2、Pax的表达。结果40μg／ml的NS-398就可抑制MCF-7细胞生长、诱导其凋亡,下调Bcl-2蛋白表达;和ADM联用凋亡率显著增高。结论NS-398可抑制MCF-7细胞生长、诱导其凋亡,并且和阿霉素有协同作用,其诱导凋亡与Bcl-2表达下调有关。     

选择性COX-2抑制剂NS-398对宫颈癌细胞增殖和凋亡的影响

目的研究选择性COX-2抑制剂NS-398对宫颈癌细胞增殖和凋亡的影响。方法不同浓度NS-398处理体外培养的人宫颈癌细胞系Hela细胞后，采用噻唑蓝（MTT）法检测处理48h、72h后hela细胞的增殖活性，流式细胞仪测定细胞周期和细胞凋亡。结果50、100、200umol／LNS-398处理hela细胞48h，72h后，细胞增殖明显受到抑制，呈时间和剂量依赖性特点。200umol／LNS-398处理hela细胞48h后，流式细胞仪细胞周期分析表明，NS-398处理组G1期细胞明显增加，S期细胞明显减少。而细胞凋亡指数无明显变化。结论体外实验表明，NS-398能有效抑制宫颈癌细胞生长，其机制可能与其阻滞细胞周期有关。     

Experimental Studies on Cyclooxygenase-2 Inhibitor Induced Cervical Cancer Hela Cell Apoptosis and Its Molecular Mechanism

Objective To investigate the Hela cells growth inhibition and apoptosis possible molecular mechanisms. Methods Hela cells were treated with various concentrations (100 μmol/L,200 μmol/L, 300 μmol/L,400 μmol/L) of NS-398 (selective for COX-2 inhibition). Cell growth was measured by MTT (Thiazolyl blue). Apoptosis was detected by double staining flow cytometry (FCM). Levels of PGE2 were measured by radioimmunoassay. The expres- sions of COX-2 protein were also examined by Western blot analysis. Results After treated with different concentrations of NS-398, the growth of Hela cells was suppressed significantly in a dose-and time-dependent manner (P<0.01). The NS-398 can induce apoptosis with the apoptosis rates at 8.53%-43.46% by FCM in a dose-dependent manner. The release of PGE2 was reduced in Hela cells with the values of 69.26 ± 2.13, 47.46 ± 2.18, 28.15 ± 1.64 and 17.01 ± 1.12, respectively, there was significant difference compared with control group (83.78 ± 1.11) (P<0.01). The NS-398 could inhibit the activity and expression of COX-2 in a dose- dependent manner and down-regulated the expression of COX-2 protein greatly. Conclusion NS-398 could inhibit the proliferation and increase apoptosis in human Hela cells. These effects may be depended on the inhibition of the expression of COX-2 and PGE2 by NS-398.     

Apoptin对宫颈癌Hela细胞放疗增敏作用实验研究

目的探讨Apoptin增加宫颈癌Hela细胞的敏感性及作用机制。方法应用脂质体转染方法将表达Apoptin的重组载体pEGFP—Apoptin转染入人宫颈癌Hela细胞。其中转染pEGFP-Apopti为实验组,转染pEGFP—C2组为阳性对照组,未转染组为阴性对照组。上述各组经射线干预后利用平板克隆形成实验、流式细胞术、MTT及蛋白印迹western—blot等方法分别检测细胞凋亡、周期及相关蛋白表达水平。结果pEGFP—Apoptin在人宫颈癌Hela细胞中稳定表达。Apoptin可增加宫颈癌Hela细胞对放射线的敏感性,Apoptin可使p21、p27的表达量上调,使Rad50及Ku80的表达量下调,而对XLF的表达量则无影响。结论Apoptin可增加宫颈癌Hela细胞的放疗敏感性,其机制可能与细胞周期阻滞及同源与非同源重组修复相关蛋白的表达水平改变有关。     

选择性环氧化酶-2抑制剂NS-398抗结肠癌机制及对5-氟尿嘧啶化疗的辅助作用

目的 研究选择性环氧化酶-2(COX-2)抑制剂NS-398的抗结肠癌作用机制及其在5-氟尿嘧啶(5-Fu)化疗中的辅助作用。方法 (1)用逆转录-聚合酶链反应(RT—PCR)检测结肠癌HT-29、SW480细胞COX-2 mRNA表达后,将NS-398作用于两株细胞,用ELISA法测定前列腺素E2(PGE2)水平。(2)将NS-398、5-Fu、NS-398 5-Fu分别作用于两株细胞,24、48和72h后用MTT法检测细胞增殖状态。以流式细胞技术观察药物对细胞凋亡的影响。结果 (1)HT-29细胞中COX-2 mRNA呈高表达,NS-398作用后PGE2表达水平明显降低;SW480细胞中COX-2 mRNA表达呈阴性,NS-398作用后PGE2水平无明显变化。(2)NS-398、5-Fu呈剂量依赖性方式抑制结肠癌细胞增殖,诱导其凋亡;NS-398 5-Fu抗增殖的作用较单一用药时更明显,而凋亡诱导作用与单一用药差异无显著意义。结论 选择性COX-2抑制剂NS-398具有抗结肠癌作用;NS-398抗结肠癌作用可能不依赖于COX-2和PGE2的表达水平;NS-398与5-Fu具有协同的抗增殖作用。     

选择性环氧合酶-2抑制剂NS-398对食管癌细胞株EC9706的生长抑制作用

目的:探讨NS-398对人食管癌细胞株EC9706的生长抑制作用。方法:采用3H-TdR掺入法检测不同浓度(0、10、20、50、100μmol/L)和作用24、48、72、96h的NS-398对细胞的增殖抑制效应;采用流式细胞术(FCM)及DNA片段分析法检测NS-398诱导的细胞凋亡情况。结果:EC9706经不同浓度的NS-398处理后,实验组3H-TdR掺入量明显减少,具有时间和剂量依赖关系,与对照组比较差异显著(P<0.05或P<0.001)。FCM检测发现实验组在G1期前出现亚倍体凋亡峰,细胞凋亡率达(45.23±1.08)%,并出现典型的细胞凋亡梯带;而对照组无凋亡峰出现,细胞凋亡率为(2.14±0.28)%,两组比较有显著性差异(P<0.001)。结论:NS398对食管癌细胞株EC9706细胞具有增殖抑制作用和诱导细胞凋亡作用。     

NS-398对结肠癌细胞系HT-29放射增敏作用的观察

目的：研究COX-2抑制剂NS-398对结肠癌细胞系HT-29的放射增敏作用及其相关放射增敏机制。方法：25μmol/L NS-398预处理HT-29细胞24h后给不同剂量X线照射,以克隆形成实验检测NS-398放射增敏作用。DNA凝胶电泳、流式细胞仪检测细胞凋亡。分光光度法测定Caspase3、8、9活性。结果：25μmol/L NS-398对HT-29细胞有放射增敏作用,由Dq、D0计算放射增敏比(SER)分别为1.36、1.27。NS-398可以增强HT-29细胞的放射诱导凋亡敏感性,DNA凝胶实验中观察到典型的DNA“Ladder”。与照射组比较,NS-398预处理组细胞凋亡指数及Caspase3、8、9活性均增高（P＜0.05）,且Caspase3、9活性增高更为明显。结论：COX-2抑制剂NS-398在HT-29细胞中具有放射增敏作用,诱导细胞凋亡是其放射增敏的重要机制之一。     

环氧合酶2抑制剂NS-398对人肝癌细胞SMMC-7721增殖与凋亡的影响

目的：分析环氧合酶2(COX-2)抑制剂NS-398对人肝癌细胞SMMC-7721形态、细胞周期、增殖和凋亡等的影响,探讨NS-398影响肿瘤细胞生长的机制。方法：应用不同浓度NS-398（25、50、75、100和150 μmol/L）分别作用于SMMC-7721细胞（24、48和72 h）,并设正常对照组,观察各组SMMC-7721细胞形态学,流式细胞术分析各组细胞周期变化和细胞凋亡率,MTT方法分析各组肝癌细胞生长抑制率。结果：随着NS-398浓度和作用时间的增加,细胞逐渐不能贴壁生长,部分漂浮于培养液中,培养液浑浊。与正常对照组比较,不同浓度NS-398组SMMC-7721细胞G0/G1期比例降低、G2/M期比例增高。正常对照组SMMC-7721细胞无凋亡峰,50 μmol/L NS-398组SMMC-7721细胞作用24 h后可见凋亡峰出现,作用72 h后细胞凋亡水平增高明显。NS-398各组细胞生长抑制率呈浓度和时间依赖性升高。结论：COX-2抑制剂NS-398能够抑制肝癌细胞SMMC-7721的增殖,并诱导细胞凋亡,该过程具有明显的时间和剂量依赖性。     

3种常用抗癌药物对宫颈癌Hela细胞和肿瘤干细胞抑制作用研究

目的:探讨3种常用抗肿瘤药物对宫颈癌Hela细胞和Hela肿瘤干细胞的抑制率。方法:采用无血清悬浮培养法从宫颈癌Hela细胞中分离出Hela肿瘤干细胞,鉴定后研究丝裂霉素、顺铂和紫杉醇等3种抗癌药物对Hela细胞和Hela肿瘤干细胞的抑制率并进行比较。结果:不同质量浓度的3种抗肿瘤药物对肿瘤细胞和肿瘤干细胞均有抑制作用,且呈剂量依赖性(r=0.944,P<0.05)。在最高终浓度40 mg/L时,丝裂霉素对肿瘤细胞和肿瘤干细胞的抑制率分别为(88.75±2.59)%和(38.95±5.37)%;顺铂的抑制率分别为(92.28±1.57)%和(52.68±3.55)%;紫杉醇的抑制率分别为(75.22±0.99)%和(36.71±2.42)%。结论:3种药物对肿瘤干细胞的抑制率均明显低于肿瘤细胞的抑制率(P<0.05);比较发现对于肿瘤细胞和肿瘤干细胞,顺铂抑制率均最高,其次是丝裂霉素,紫杉醇的抑制率最低(P<0.05),说明宫颈癌肿瘤干细胞对目前常用的3种治疗药物有不同程度的耐受。