苯并［b］荧蒽对小鼠血脑屏障通透性及紧密连接蛋白表达的影响

目的 探讨苯并［b］荧蒽（Benzo［b］fluoranthene, B［b］F）暴露对小鼠血脑屏障通透性和紧密连接蛋白表达的影响。方法 C57BL/6J小鼠灌胃暴露于不同剂量的苯并［b］荧蒽（20、200、2 000 μg/kg）条件下21天,测定小鼠体重、脑比重变化;使用伊文思蓝染色法（Evans Blue）测定小鼠血脑屏障通透性变化;通过H&E染色检测B［b］F对小鼠脑组织的影响;采用免疫组化检测紧密连接蛋白Occludin和ZO-1的表达。结果 在不同B［b］F暴露剂量下,小鼠体重和脑比重均无显著差异。随着B［b］F暴露剂量的增加,小鼠血脑屏障通透性增加。200 μg/kg和2 000 μg/kg染毒剂量下,海马DG区可见锥体细胞皱缩,细胞染色加深,胞核胞质分界不清。在200 μg/kg和2 000 μg/kg染毒剂量下,B［b］F降低Occludin蛋白表达（P<0.05）,而ZO-1蛋白表达水平差异无统计学意义（P>0.05）。结论 B［b］F能增加小鼠血脑屏障通透性,并降低紧密连接蛋白Occludin表达,具有潜在血脑屏障损伤毒性。     

肠上皮细胞的紧密连接与肠道疾病

紧密连接(TJ)是肠上皮细胞间的主要连接方式,在维持肠上皮细胞极性和调节肠黏膜屏障的通透性中发挥着重要的作用.TJ受损与多种疾病的发生发展相关.现主要就肠上皮细胞TJ的结构、功能、调节途径及其与相关疾病的关系进行综述.     

Occludin蛋白调控机制及临床意义的研究进展

Occludin蛋白是紧密连接上的主要蛋白质之一,其功能状态与多种疾病的发生、发展密切相关。Oc-cludin蛋白在疾病中的作用及调控机制已成为研究热点。以下主要就近年来对occludin蛋白的调控和临床意义的进展作一综述。     

电磁脉冲对大鼠血脑屏障通透性及紧密连接蛋白的影响

目的 研究电磁脉冲(electromagnetic pulse,EMP)辐照对大鼠血脑屏障通透性及血脑屏障紧密连接(tight junction,TJ)相关蚩白的影响.方法 66只健康成年雄性SD大鼠按体重随机分为假辐照组和辐照组.EMP辐照参数为:场强200 kV/m,脉宽7 ns,脉冲次数200,脉冲重复频率1 Hz.辐照后不同时间取材,用白蛋白免疫组织化学方法 观察EMP辐照后血脑屏障通透性的变化,免疫印迹法检测脑组织和脑微血管中TJ蚩白(occludin和ZO-1)的表达情况,免疫荧光方法 观察微血管紧密连接蛋白的分布情况.结果 免疫组织化学结果 显示,辐照后0.5 h即可见有白蛋白漏出的微血管,但数目较少,随辐照后时间延长,有白蛋门漏出的微血管数目逐渐增加,至辐照后3 h达到高峰,辐照后6 h时开始恢复,辐照后12 h基本恢复至对照水平;免疫印迹结果 显示,occludin蛋白水平与对照组相比无明显差异;ZO-1蛋白水平在辐照后1、3 h明显降低,并且免疫荧光结果 显示ZO-1在微血管上的分布亦发生了改变,由辐照前的连续分布变为断续分布.结论 EMP辐照后ZO-1蛋白水平和分布的改变可能是EMP致大鼠血脑屏障通透性增加的分子机制之一.     

促炎细胞因子对肠上皮细胞紧密连接调控的分子机制

促炎细胞因子是由细胞分泌的、具有促进和调节炎性反应作用的小分子多肽,主要有IL-1、IL-6、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、γ-干扰素(IFN-γ)等.炎症性肠病病人血清中促炎细胞因子水平显著增高,并且能引起肠上皮细胞紧密连接的改变.现就促炎细胞因子对肠上皮细胞紧密连接调控的分子机制作一综述,旨在为开展基础研究和临床提供参考.     

黄芪提取物对老年痴呆大鼠基质金属蛋白酶-9和紧密连接蛋白ZO-1表达的影响

目的研究黄芪提取物干预老年痴呆大鼠后,其海马组织中的基质金属蛋白酶-9与紧密连接蛋白(ZO-1)水平的变化。方法 2019年2月1日,制备出患有老年痴呆疾病的大鼠,将研究对象归为正常组、模型组、黄芪提取物组与吡乙酰胺组,各组均有6只。模型组:口服黄芪提取物100 mg/(kg·d),时间为28天,吡乙酰胺组:口服吡乙酰胺430 mg/(kg·d),时间为28天,正常组与模型组同时口服相同剂量的生理盐水。用水迷宫评估大鼠的学习记忆能力的变化;免疫印迹测量海马组织中的基质金属蛋白酶-9、ZO-1的含量。结果和正常组相比,模型组的大脑记忆功能显著下降,基质金属蛋白酶-9的含量(0.555±0.036)增加而ZO-1的含量(0.192±0.020)减少(均P<0.05);口服黄芪提取物以及吡乙酰胺后,其行为能力显著改善,基质金属蛋白酶-9的含量减少(0.335±0.018)而ZO-1的含量(0.291±0.016)增加(均P<0.05)。黄芪提取物组与吡乙酰胺组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论黄芪提取物能改善老年痴呆大鼠的行为能力,其机制为下降基质金属蛋白酶-9的...     

大鼠吸入氯气后肺组织Claudin-3蛋白及其mRNA、Occludin mRNA表达变化

将40只SD雄性大鼠随机分为1个对照组和4个不同浓度的氯气染毒组,染毒10 min,6 h后行血气分析,取右肺中叶组织测湿干重比W/D和上叶组织行病理切片观察,Western blot法检测右肺副叶组织Claudin-3蛋白表达水平,RT-PCR法测右肺下叶组织Claudin-3 mRNA及Occludin mRNA相对表达。与对照组相比,(42.00±3.18)mg/m3及以上浓度氯气染毒组大鼠肺组织Claudin-3蛋白表达水平均有降低,差异有统计学意义(P0.05);且与对照组相比,各染毒组大鼠肺组织Claudin-3 mRNA、Occludin mRNA表达水平也均有降低,差异有统计学意义(P0.05)。提示大鼠吸入氯气后肺组织Claudin-3、Occludin表达减少可能是ALI肺水肿形成的机制之一。     

植物乳酸杆菌对阻塞性黄疸大鼠肝紧密连接蛋白表达的影响

目的: 探讨植物乳酸杆菌(LP)对阻塞性黄疸大鼠肝细胞凋亡和紧密连接(TJ)蛋白表达变化的影响. 方法: 将大鼠随机分为五组,即对照组、胆总管结扎组、胆总管结扎+LP组、内引流组和内引流+LP组,实验持续10 d.给予添加LP组大鼠每天灌胃1010 CFU.用TUNEL法测肝细胞凋亡阳性率;用透射电镜、Western blot、RT-PCR观察TJ超微结构及相关蛋白(Occludin,Claudin-1,Claudin-4,ZO-1)的表达和分布变化. 结果: 大鼠胆总管结扎10 d后肝细胞凋亡增多,口服LP后状况有所缓解.内引流+LP组较阻黄组凋亡降低(P<0.01).大鼠肝细胞TJ破坏非常明显,口服LP后有所改善,内引流+LP组改善显著.内引流+LP组TJ蛋白mRNA及蛋白的表达改善最明显. 结论: 阻塞性黄疸大鼠内引流及口服LP对受损肝有明显地改善作用,肝细胞凋亡阳性率下降,TJ蛋白及mRNA表达明显好转,有效地抑制了阻塞性黄疸大鼠肝屏障的损伤.     

生长发育期氯化镧暴露对大鼠海马紧密连接蛋白表达影响

目的 探讨氯化镧（LaCl₃）暴露对仔鼠海马紧密连接蛋白表达和基因转录水平影响。方法 将40只Wistar孕鼠随机分为对照组（蒸馏水）和0.25%、0.50%、1.00%（w/v）氯化镧组,从仔鼠出生起孕鼠通过饮水染毒LaCl₃,断乳后仔鼠继续饮用原浓度LaCl₃溶液1个月;采用Western blot法检测仔鼠海马claudin-5、occludin和紧密连接蛋白-1（ZO-1）蛋白表达,real-time PCR法检测仔鼠海马Cldn5、Ocln和Tjp1 mRNA表达。结果 与对照组比较,0.50%和1.00%氯化镧组仔鼠海马claudin-5蛋白表达水平[分别为（0.059±0.007）、（0.041±0.003）]与occludin蛋白表达水平[分别为（0.085±0.004）、（0.067±0.004）]均明显降低（P<0.05）;1.00%氯化镧组仔鼠海马Cldn5、Ocln和Tjp1 mRNA表达水平分别为（0.743±0.026）、（0.900±0.119）、（0.931±0.100）,与对照组比较,1.00%氯化镧组仔鼠海马Cldn5 mRNA表达下降（P<0.05）。结论 生长发育期暴露氯化镧可下调仔鼠海马claudin-5和occludin表达,导致血脑屏障紧密连接受损。     

肿瘤坏死因子和干扰素对肠上皮紧密连接的破坏作用

目的:了解肿瘤坏死因子(TNF-α)和干扰素(IFN-γ)对上皮细胞功能的作用,研究TNF-α和IFN-γ与上皮细胞屏障功能的关系. 方法:T84细胞株用加有5%胎牛血清的DMEM/F-12 混合培养液培养.实验分为四组:即对照组、TNF-α处理组、IFN-γ处理组和TNF-α与IFN-γ联合处理组.TNF-α处理组和IFN-γ处理组细胞分别用加有10 ng/mL TNF-α和100 U/mL IFN-γ的培养液处理72 h.各细胞因子联合处理组用100 U/mL IFN-γ处理19 h后,再加入10 ng/mL TNF-α.用EVOM电压电阻仪测定细胞跨膜电阻抗(TER)变化,用透射电镜观察细胞紧密连接的形态改变. 结果:IFN-γ单独处理48 h后,TER降低至78.06%,培养至72 h降低为59.31%.在单一TNF-α作用下,24 h后TER值逐渐降低,72 h 降低至56.82%.与对照细胞相比,TNF-α和IFN-γ联合处理的T84细胞株TER值显著降低,72 h TER值为20.88%,表明细胞紧密连接的结构破坏. 结论:TNF-α和IFN-γ损伤T84细胞株的紧密连接屏障功能,两者具有协同作用.     

致病菌调控肠道上皮紧密连接的分子机制研究

肠道上皮紧密连接(TJ)是构成肠道屏障功能的重要结构基础,在调节肠黏膜通透性和维持上皮细胞极性中发挥着重要作用.目前,对TJ结构蛋白的研究已取得一定进展,但在病理状态下,TJ相关的调控机制仍未阐明.该文作者就常见肠道致病菌对TJ蛋白的分子调控机制及其他影响因素作一综述,旨在为完善肠屏障概念提供帮助.     

肠上皮细胞紧密连接的生物学功能及在肠屏障中的作用

紧密连接是肠上皮细胞间的主要连接方式,对维持上皮细胞极性及调节肠屏障的通透性发挥着重要的作用.因此,维持肠上皮的完整性对于保护肠道屏障功能、防止细菌内毒素及毒性大分子物质进入体内具有重要意义.作者就紧密连接在肠上皮中的生物学功能、分子调控机制及影响因素作一综述,旨在为改善肠屏障功能提供有益的帮助.     

肠上皮细胞紧密连接的结构及功能研究进展

紧密连接(TJ)是维持肠黏膜上皮细胞间机械屏障的重要结构基础.除Claudin蛋白、occludin蛋白、ZO-1等重要组成蛋白外,目前已有40多种TJ相关蛋白分子陆续被发现.研究表明,TJ结构不但具有调节细胞间物质转运和维持上皮极性的功能,而且其相关蛋白分子还参与细胞增殖分化、肿瘤抑制、基因转录等过程的信息传递和调控.本文作者就TJ蛋白分子的最新发现及其功能作一综述,旨在了解TJ在肠道屏障功能中的作用.     

Regulation of tight junction permeability by intestinal bacteria and dietary components

The human intestinal epithelium is formed by a single layer of epithelial cells that separates the intestinal lumen from the underlying lamina propria. The space between these cells is sealed by tight junctions (TJ), which regulate the permeability of the intestinal barrier. TJ are complex protein structures comprised of transmembrane proteins, which interact with the actin cytoskeleton via plaque proteins. Signaling pathways involved in the assembly, disassembly, and maintenance of TJ are controlled by a number of signaling molecules, such as protein kinase C, mitogen-activated protein kinases, myosin light chain kinase, and Rho GTPases. The intestinal barrier is a complex environment exposed to many dietary components and many commensal bacteria. Studies have shown that the intestinal bacteria target various intracellular pathways, change the expression and distribution of TJ proteins, and thereby regulate intestinal barrier function. The presence of some commensal and probiotic strains leads to an increase in TJ proteins at the cell boundaries and in some cases prevents or reverses the adverse effects of pathogens. Various dietary components are also known to regulate epithelial permeability by modifying expression and localization of TJ proteins.     

缺血性脑卒中对犬肠屏障功能的影响

目的 研究缺血性脑卒中对犬肠黏膜屏障功能的影响以及细胞凋亡和紧密连接蛋白在其中的可能机制.方法 杂犬20只,按随机数字表法分为梗死组和假手术组,每组10只.梗死组采用双硅柱置入法制作缺血性脑卒中模型,假手术组动物不置入栓子,其他同梗死组.光镜下观察肠黏膜形态;免疫组织化学法分析肠黏膜紧密连接蛋白闭锁蛋白和闭锁小带蛋白1的表达;采用TdT介导的dUTP缺口末端标记技术检测肠上皮细胞凋亡.结果 梗死组动物均形成脑梗死.和假手术组相比,梗死组紧密连接蛋白闭锁蛋白和闭锁小带蛋白1表达均明显降低(闭锁蛋白平均光密度值:0.20±0.01比0.22±0.01,P=0.007;闭锁小带蛋白1平均光密度值:0.20±0.01比0.22±0.02,P=0.008);梗死组凋亡指数明显增高(29.04 ±3.79比6.44±1.24,P=0.002);闭锁蛋白与闭锁小带蛋白1呈正相关(R=0.71,P=0.02);凋亡指数与闭锁蛋白和闭锁小带蛋白1均呈负相关(R=-0.91,P=0.00;R=-0.77,P=0.01).光镜下梗死组存在小肠病理损伤,假手术组小肠结构正常.结论 缺血性脑卒中时,肠道屏障功能发生损害.紧密连接蛋白闭锁蛋白和闭锁小带蛋白1表达降低,从而导致紧密连接破坏.肠黏膜细胞凋亡上调是肠屏障障碍的细胞学基础,凋亡是缺血性脑卒中时肠上皮细胞死亡的重要形式.     

鱼油脂肪乳对肠外营养大鼠小肠黏膜紧密连接形态结构的影响

目的:探讨鱼油脂肪乳剂(富含ω-3多不饱和脂肪酸)对肠外营养(PN)大鼠肠上皮细胞紧密连接(TJ)形态和紧密连接蛋白occludin表达的影响。方法:将大鼠随机分为四组,即对照组(正常喂食),PN(禁食5d行PN支持)组,小剂量鱼油治疗(1 ml/kg鱼油静脉注射+PN)组和大剂量鱼油治疗(2 ml/kg鱼油静脉注射+PN)组。观察大鼠术后小肠黏膜上皮细胞TJ形态,以及紧密连接蛋白occludin的表达分布。结果:PN组大鼠治疗5 d后肠上皮细胞TJ结构部分缺失、间隙增宽;大剂量鱼油治疗组TJ形态基本完整,小剂量鱼油治疗组TJ部分缺失。各组occludin蛋白总量无明显差异。提取脂筏组分,发现与对照组比,三个实验组脂筏区域中occludin蛋白表达均明显减少,但大剂量鱼油治疗组较PN组明显升高(P<0.01)。结论:长期PN可导致TJ结构的缺失,脂筏区域紧密连接蛋白occludin表达减少。大剂量鱼油脂肪乳剂可维持occludin蛋白在脂筏区域的表达,保护小肠黏膜细胞TJ的结构和功能。     

肠上皮细胞紧密连接基因及信号调控的研究进展

肠道屏障功能对于临床多种疾病的发生发展发挥着重要的作用,紧密连接结构对维持肠道屏障功能及调控细胞分化具有重要作用,细胞通过与周边细胞和胞外基质相互作用调节紧密连接蛋白的基因表达,进一步影响细胞的屏障功能、细胞增殖、细胞极性和细胞凋亡等。紧密连接作为一种重要的细胞连接,其调节与一些信号转导通路有关,包括经典的环磷酸腺苷．蛋白激酶A-cAMP反应元件结合蛋白通路、三磷酸肌醇通路、丝裂原活化蛋白激酶通路、磷脂酰肌醇-3-激酶通路及特殊的闭锁小带蛋白1相关核酸连接蛋白通路、细胞周期蛋白、磷酸化和甲基化调控途径等,其基因及蛋白质表达的调控较复杂。紧密连接蛋白表达及调控紊乱与临床疾病的发生密切相关,如屏障破坏、顽固性感染、消化系统疾病、肿瘤。本文主要综述紧密连接蛋白如何参与基因表达、相关基因的调控,及其参与基因表达和细胞分化的自身调节相关机制。     

BBI阻断LPS对肠道上皮细胞间紧密连接蛋白的抑制作用

目的探讨大豆来源的蛋白酶抑制剂(BBI)是否能阻断脂多糖(LPS)对肠道上皮细胞间紧密连接蛋白的下调作用及其机制。方法用CCK8试剂盒检测LPS和BBI对HT-29细胞的毒性作用。用BBI预处理HT-29细胞6 h,再用LPS刺激,分别用实时荧光定量PCR和蛋白质印迹法(Western Blot)检测细胞紧密连接蛋白(ZO-1,Occludin)、TLR4及MyDD8的表达;通过Western Blot检测NF-κB的激活。结果LPS 1 000 ng/mL和BBI1 000μg/mL对HT-29细胞均无毒性作用。LPS可显著地上调HT-29细胞TLR4表达,且上调作用具有时间与剂量效应;能明显下调紧密连接蛋白的表达,其下调作用与LPS浓度成正比;能明显激活NF-κB,且具有剂量效应;LPS对HT-29细胞的这种作用可被BBI显著地抑制。结论通过抑制LPS诱导的肠道上皮细胞TLR4的表达和NF-κB的活化,BBI能显著地阻断LPS对肠道上皮细胞间紧密连接蛋白的抑制作用。