多重耐药鲍曼不动杆菌超广谱β-内酰胺酶基因检测及分布研究

目的:了解本院鲍曼不动杆菌多重耐药现状,指导临床用药;分析多重耐药菌株的超广谱β-内酰胺酶基因存在状况和菌株的亲缘性,揭示鲍曼不动杆菌的耐药机制.方法:自临床分离的鲍曼不动杆菌205株,采用纸片扩散(K-B)法进行药物敏感试验,用PCR方法检测20株多重耐药鲍曼不动杆菌的超广谱β-内酰胺酶基因.用多分子标志分型法,以13种基因为分子标志行检测结果的样本聚类分析,检测菌株的亲源性.结果:205株鲍曼不动杆菌对头孢哌酮/舒巴坦耐药率18%.对其他抗生素耐药率均在80%左右.PCR检测20株多重耐药鲍曼不动杆菌,bla TEM基因阳性率为50%,bla PER基因阳性率70%,bla VEB基因阳性率10%,bla CARB基因阳性率10%,bla GIM基因阳性率5%,bla DHA基因阳性率15%;未检出bla SHV,bla OXA,bla GES,bla SPM,bla VIM,bla IMP,oprD2基因.聚类分析结果提示本院鲍曼不动杆菌存在院内感染传播且存在暴发性流行.结论;分离菌株对多黏菌素全部敏感,对头孢哌酮/舒巴坦敏感性相对较高,对碳青酶烯类抗生素敏感性较低.多重耐药鲍曼不动杆菌携带bla TEM,bla PER,bla VEB,bla CARB,bla GIM,bla DHA等多种超广谱β-内酰胺酶基因.临床应根据药物敏感试验结果合理应用抗生素.     

多重耐药鲍曼不动杆菌表型及耐药基因型的研究

目的对我院临床分离的31株多重耐药鲍曼不动杆菌表型和耐药基因进行分析。方法用纸片扩散法检测鲍曼不动杆菌的药敏结果,用三维试验检测超广谱β-内酰胺酶(ESBL)、头孢菌素酶(AmpC酶),用协同法检测金属β-内酰胺酶(MBL),用聚合酶链反应(PCR)检测耐药基因。结果31株多重耐药鲍曼不动杆菌中,90%对亚胺培南敏感;22%对头孢哌酮-舒巴坦耐药,74%中介;其他抗菌药物的敏感率均在6%以下。2株菌(6%)单产ESBL;93%菌株高产AmpC酶,其中19%菌株同时产ESBL。所有菌株b laTEM、aacA4和gyrA基因均为阳性;96%菌株ampC基因为阳性;2株菌同时携带b laPER和b laOXA-23型基因,另有1株菌b laOXA-23基因阳性。结论同时携带b laTEM、ampC、aacA4和gyrA突变以及b laPER、b laOXA-23等多种耐药基因是鲍曼不动杆菌多重耐药的主要原因。     

儿科临床分离多重耐药鲍曼不动杆菌耐药性和产OXA酶的研究

目的研究儿科临床分离多重耐药鲍曼不动杆菌耐药性和OXA酶基因存在情况。方法收集2010年1—12月北京儿童医院住院患儿中分离多重耐药鲍曼不动杆菌42株。用美国BD公司Phoenix100微生物分析仪,进行菌株鉴定和13种抗菌药物的药敏试验,按照CLSI 2010年推荐标准判断结果。用多重PCR方法检测OXA酶OXA-23、OXA-24、OXA-51和OXA-58 4组基因。PCR产物测序结果通过GenBank进行比对分析,确定其基因型别。结果多重耐药鲍曼不动杆菌42株对亚胺培南和美罗培南耐药率分别为76.2%和78.6%。未发现对多黏菌素耐药的菌株。42株菌中41株(97.6%)扩增出特异性条带,为OXA基因阳性。其中,OXA-51组基因阳性38株(90.4%);OXA-23组基因阳性28株(66.7%);OXA-58组基因阳性2株(4.8%)。未扩增出OXA-24组基因。有27株(64.2%)OXA-51和OXA-23组基因同时阳性。携带OXA-23基因鲍曼不动杆菌均为对碳青霉烯类抗生素耐药的菌株。结论儿科临床分离多重耐药鲍曼不动杆菌的耐药情况严重。以同时产OXA-51和OXA-23型OXA酶为主。OXA-23基因是导致鲍曼不动杆菌对碳青霉烯类抗生素耐药的主要原因。     

多重耐药鲍曼不动杆菌中OXA碳青霉烯酶基因的研究

目的 调查我院院内分离的多重耐药鲍曼不动杆菌中OXA碳青霉烯酶基因的存在情况,为临床合理使用抗菌药物和控制院内感染的发生提供科学依据.方法 用WalkAway 96 PLUS NC31复合板鉴定菌种,用微量稀释法和K-B纸片扩散法测定菌株的药敏情况,PCR法检测OXA23、OXA24、OXA48、OXA55、OXA58、OXA60、OXA64、OXA66基因在46株院内分离的多重耐药鲍曼不动杆菌中的存在情况,对部分阳性基因进行测序.结果 46株多重耐药鲍曼不动杆菌中,41株(89.1%)OXA23组基因阳性,其余基因检测均阴性.结论 我院院内分离的多重耐药鲍曼不动杆菌对碳青霉烯类抗菌药物耐药的主要原因之一是产OXA23组碳青霉烯酶.     

多重耐药鲍曼不动杆菌携带碳青霉烯类水解酶基因情况的研究

目的 研究浙江省瑞安市人民医院多重耐药鲍曼不动杆菌中金属-内酰胺酶(IMP、VIM)、 KPC酶、 OXA-23型水解酶基因的携带情况,探讨各种碳青霉烯类水解酶在多重耐药鲍曼不动杆菌中的作用。 方法 采用Whonet 5.4 软件分析多重耐药鲍曼不动杆菌的标本类型和病区分布,以及药敏资料;设计特异性引物,用PCR方法扩增IMP、VIM、KPC和OXA-23特异基因,并用琼脂糖电泳分析其产物。 结果 70株多重耐药鲍曼不动杆菌均未检测到IMP、VIM及KPC基因,其中58株亚胺培南耐药菌株均携带OXA-23基因,阳性率为82.86%。 结论 OXA-23型水解酶是造成瑞安市人民医院鲍曼不动杆菌对临床常用碳青霉烯类抗生素耐药的主要原因。     

鲍曼不动杆菌对亚胺培南耐药机制研究

目的了解鲍曼不动杆菌对亚胺培南的耐药性及耐药机制。方法琼脂稀释法对62株鲍曼不动杆菌进行药敏检测,对其中20株亚胺培南耐药的鲍曼不动杆菌进行耐药机制研究。酶三维试验检测ESBLs和AmpC酶,PCR扩增和测序分析检测碳青霉烯酶VIM、IMP、OXA-23和OXA-24,SDS-PAGE方法研究外膜蛋白表达情况,利血平协同抑制试验检测膜外排机制。结果62株鲍曼不动杆菌中,亚胺培南耐药25株,占41%;20株亚胺培南耐药菌中,ESBLs和AmpC酶阳性株分别为10株(50%)和20株(100%),PCR扩增VIM、IMP和OXA-24均阴性;OXA-23基因扩增显示19株(95%)阳性,PCR产物并经序列分析证实为OXA-23;与敏感株相比,部分菌株存在22、29、33kD的外膜蛋白缺失;利血平不能降低亚胺培南对鲍曼不动杆菌的MIC值。结论产OXA-23型β-内酰胺酶是本院鲍曼不动杆菌对亚胺培南耐药的重要原因,产AmpC酶合并外膜蛋白缺失与鲍曼不动杆菌对亚胺培南耐药有密切关系。     

鲍曼不动杆菌对β-内酰胺类药物耐药机制的研究

目的调查耐药鲍曼不动杆菌β-内酰胺酶基因型流行情况,为医院合理使用抗菌药物提供参考依据。方法用聚合酶链反应（PCR）方法对7株鲍曼不动杆菌的8种相关β-内酰胺酶基因型（TEM、AmpC、VIM、IMP、PER、GES、VEB、SHV）进行检测,并通过琼脂凝胶电泳后进行成像验证。结果 7株鲍曼不动杆菌中blaTEM染色体检测阳性有7株、质粒阳性7株;blaAmpC染色体阳性3株、质粒阳性6株;blaPER染色体阳性4株;其余β-内酰胺酶基因未检出,其中有1株同时携带有3种耐药基因型。结论β-内酰胺类药物耐药基因以TEM型最为常见,其次为ampC型、PER型,其余型未见发现;同一株耐药菌可携带多种耐药基因。     

多重耐药鲍曼不动杆菌表型及耐药基因型的研究

目的 对我院临床分离的31株多重耐药鲍曼不动杆菌表型和耐药基因进行分析。方法 用纸片扩散法检测鲍曼不动杆菌的药敏结果，用三维试验检测超广谱β-内酰胺酶（ESBL）、头孢菌素酶（AmpC酶），用协同法检测金属β-内酰胺酶（MBL），用聚合酶链反应（PCR）检测耐药基因。结果 31株多重耐药鲍曼不动杆菌中，90％对亚胺培南敏感；22％对头孢哌酮-舒巴坦耐药，74％中介；其他抗菌药物的敏感率均在6％以下。2株菌（6％）单产ESBL；93％菌株高产AmpC酶，其中19％菌株同时产ESBL。所有菌株blaTEM、aacA4和gyrA基因均为阳性；96％菌株ampC基因为阳性；2株菌同时携带blaFER和blaOXA-23，型基因，另有1株菌blaOXA-23，基因阳性。结论 同时携带blaTEM、ampC、aacA4和gyrA突变以及blaFEM、blaOA-23等多种耐药基因是鲍曼不动杆菌多重耐药的主要原因。     

绿脓假单胞菌β内酰胺类耐药基因研究

目的 调查湖北襄樊地区绿脓假单胞菌多重耐药菌株中β内酰胺酶编码基因及oprD2基因存在状况。方法 采用PCR方法检测分离自本地区的35株绿脓假单胞菌耐药菌株各种β内酰胺酶编码基因TEM、SHV、OXA、PER、GES、IMP、VIM、质粒型AmpC酶DHA、MIR及OprD2。结果 35株β内酰胺类耐药基因TEM、OXA、质粒型AmpC酶DHA的阳性率分别为51．4％、17．1％、2．9％，OprD2基因缺失率100％，而SHV、PER、GES、IMP、VIM、MIR基因检测均阴性。结论研究表明，携带TEM、OXA、质粒型AmpC酶DHA以及OprD2基因缺失是导致本组绿脓假单胞菌多重耐药菌株对β内酰胺酶类抗生素耐药的重要机制。     

多重耐药鲍曼不动杆菌耐药性及耐药基因检测

目的探讨昆明医科大学附属延安医院多重耐药鲍曼不动杆菌耐药性及耐药基因分布情况,为临床合理使用抗菌药物提供参考。方法收集昆明医科大学附属延安医院94株多重耐药鲍曼不动杆菌并检测其耐药性,提取细菌DNA,用PCR法扩增检测耐药基因。结果94株多重耐药鲍曼不动杆菌对临床常用抗菌药物广泛耐药,对头孢类、青霉素类和碳青霉烯类抗菌药物的耐药率达100.0%;对庆大霉素、妥布霉素、阿米卡星、复方磺胺甲噁唑耐药率均超过90.0%;对头孢哌酮/舒巴坦、左氧氟沙星、米诺环素的耐药率较高,分别为88.3%、87.2%和60.7%;对替加环素保持高度敏感性,未检测出耐药菌株;用PCR方法分别检测鲍曼不动杆菌的OXA-23、TEM耐药基因,结果显示OXA-23基因阳性率为91.5%,TEM基因阳性率为86.2%。产OXA-23型、TEM型耐药基因可能是该院多重耐药鲍曼不动杆菌对β-内酰胺类抗菌药物产生耐药的主要原因。结论通过该研究发现,多重耐药鲍曼不动杆菌对多种抗菌药物广泛耐药,且多数菌株携带OXA-23、TEM基因,其携带耐药基因与耐药表现基本一致,临床上应加强对多重耐药鲍曼不动杆菌的监测,控制并减少耐药菌株的产生。     

多重耐药鲍氏不动杆菌的碳青霉烯酶耐药基因的检测

目的了解多重耐药鲍氏不动杆菌的碳青霉烯酶耐药基因的分布情况。方法收集80株多重耐药鲍氏不动杆菌,采用聚合酶链反应（PCR）检测多重耐药鲍氏不动杆菌的碳青霉烯酶耐药基因OXA-23、OXA-24、OXA-51、OXA-58、SIM、IMP、VIM、GIM、SPM。结果 80株多重耐药鲍氏不动杆菌检出耐药基因OXA-23[49（61.3%）]、OXA-51[73（91.3%）]、OXA-58[7（8.8%）]、OXA-24[1（1.3%）]、IMP[17（21.3%）]及VIM[2（2.5%）],未检测出GIM、SIM、SPM基因。结论 IMP、OXA、VIM是多重耐药鲍氏不动杆菌携带的主要基因类型。     

多重PCR方法检测多耐药鲍曼不动杆菌基因型

目的建立一种适于临床微生物实验室快速检测多耐药鲍曼不动杆菌基因的多重PCR方法。方法筛选临床分离鉴定的多耐药鲍曼不动杆菌105株;用热煮沸法提取DNA,采用多重PCR技术,优化反应条件,同时扩增OXA酶基因(blaOXA-23-like,blaOXA-24-like,blaOXA-51-like,blaOXA-58-like)和整合酶基因(intI1,intI2),扩增产物经凝胶成像系统分析。结果105株多耐药鲍曼不动杆菌中,76株是blaOXA-51-like blaOXA-23-like intI1基因型,18株是blaOXA-51-like intI1基因型,10株是blaOXA-51-like blaOXA-23-like基因型,1株是blaOXA-51-like blaOXA-23-like blaOXA-58-like基因型。未检测出携带有blaOXA-24-like和intI2基因的菌株。结论多耐药鲍曼不动杆菌的耐药性及流行趋势与其携带的OXA酶基因和整合酶基因相关。     

院内鲍曼不动杆菌耐药谱分析及相关β-内酰胺酶基因分布情况调查

目的对南京中医药大学附属医院院内分离出来的鲍曼不动杆菌进行各类β-内酰胺酶基因的检测,探讨这些基因的分布特点,研究鲍曼不动杆菌的耐药机制。方法收集2014年1月～12月期间医院内分离的200株鲍曼不动杆菌,最低抑菌浓度(MIC)法测定其对抗生素的敏感性;PCR法检测A类β-内酰胺酶基因SHV,GES,TEM;B类β-内酰胺酶基因VIM,IMP;C类β-内酰胺酶基因AmpC和D类β-内酰胺酶基因OXA-51,OXA-23,OXA-24,OXA-58在菌株中的分布。结果200株鲍曼不动杆菌中116株为多重耐药株,其对常用抗生素的耐药率超过70%;其中52株携带TEM,携带率为26.0％,135株携带SHV,携带率为67.0％,7株检出GES,携带率为3.5%;170株携带VIM-1,携带率为85.0%,12株检出IMP-1,携带率为6.0％;150株携带AmpC,携带率为75.0%;190株携带OXA-51,携带率为95.0%,165株携带OXA-23,携带率为82.5%,2株携带OXA-58,携带率为1.0％,所有菌株未检出OXA-24。结论携带β-内酰胺酶基因是鲍曼不动杆菌的主要耐药机制之一,携带率最高的基因为OXA-51,OXA-23,AmpC,VIM-1和SHV,携带率均超过60％,说明鲍曼不动杆菌的耐药是A,B,C,D四类β-内酰胺酶基因协同作用的结果。     

临床分离广泛耐药鲍曼不动杆菌同源性分析及常见耐药基因检测

目的了解上海市同仁医院临床分离广泛耐药鲍曼不动杆菌的基因同源性及耐药机制,为广泛耐药鲍曼不动杆菌感染的防治提供依据。方法采用肠杆菌科基因间重复序列聚合酶链反应(ERIC-PCR)对临床分离的28株广泛耐药鲍曼不动杆菌进行分子生物学分型,采用PCR方法检测9种常见β内酰胺酶基因:blaKPC、blaIMP、blaVIM、blaNDM-1、blaOXA-23、blaOXA-24、blaOXA-48、blaOXA-51和blaOXA-58;膜孔蛋白基因CarO;插入序列ISAba1;以及ISAba1-OXA23、ISAba1-OXA58的连锁检测。结果 28株临床分离的广泛耐药鲍曼不动杆菌大多来自危重患者呼吸道标本,ERIC-PCR基因分型提示为同一来源克隆株;所有菌株均携带blaOXA-23、blaOXA-51基因,未检测出B类β内酰胺酶基因,以及blaOXA-24、blaOXA-48、blaOXA-58等基因;膜孔蛋白基因CarO和插入序列ISAba1检测均为阳性,ISAba1-OXA23、ISAba1-OXA58连锁检测均未扩增到预期条带。结论研究期间临床分离广泛耐药鲍曼不动杆菌为同一克隆株,且携带相同耐药基因,提示存在克隆传播。     

鲍曼不动杆菌对β-内酰胺类抗生素的耐药性及耐药基因型研究

目的了解临床分离的鲍曼不动杆菌对β-内酰胺类药物耐药性以及与β-内酰胺酶耐药基因的关系。方法采用K-B纸片扩散法检测20株鲍曼不动杆菌的耐药状况，用聚合酶链反应（PCR）方法检测6种β-内酰胺酶耐药基因（blaTEM、blaVIM、blaOXA-23 、blaSHV、 blaADC、 blaIMP）并加以分析。结果20株鲍曼不动杆菌对头孢菌素类高度耐药，对碳青霉烯类大多敏感。所有菌株均检出blaTEM、blaADC基因，有18株携带blaVIM基因，其余基因均为阴性。结论同时携带blaTEM、blaADC和blaVIM基因是本院鲍曼不动杆菌对β-内酰胺酶类抗菌药耐药的主要原因。     

耐亚胺培南鲍曼不动杆菌耐药表型和碳青霉烯酶基因型分析

目的检测广州市第一人民医院20株耐亚胺培南鲍曼不动杆菌的耐药性,研究并分型其碳青霉烯酶基因。方法用法国生物梅里埃公司VITEK2全自动细菌鉴定仪进行菌株鉴定和药敏试验,用6种碳青霉烯酶特异性基因引物进行PCR扩增和基因型的测序分析,并通过网上GenBank进行比对以确定编码酶基因的类型。结果 20株鲍曼不动杆菌对哌拉西林-他唑巴坦、左氧氟沙星和阿米卡星的耐药率分别为85%、50%和25%。对其他所测抗菌药的耐药率均在90%以上。扩增结果显示17株(85%)细菌携带碳青霉烯酶OXA-23基因,16株(80%)携带OXA-51基因,1株(5%)携带OXA 58基因。OXA-24、VIM、IMP基因引物PCR扩增均为阴性,随机抽取OXA-23基因阳性株进行双向测序后在网上GenBank比对与OXA-23标准株99%同源,OXA-51基因阳性株与OXA-66标准株99%同源,OXA-58基因阳性株与OXA-58标准株99%同源。结论我院耐碳青霉烯类抗生素的鲍曼不动杆菌呈现出多重耐药现象,对阿米卡星的耐药率最低,OXA-23型碳青霉烯酶基因检出率最高,OXA-23/OXA-51类基因占60%,应引起临床高度重视,防止在医院内广泛传播。     

一株同时产OXA—23型碳青霉烯水解酶的PER—1型超广谱β—内酰胺酶的鲍曼不动杆菌

目的：分析多重耐药鳗曼不动杆菌对β-内酰胺耐药的原因及其耐药基因的转移方式，方法：用等电聚焦电泳试验和三维试验分析多重耐药鲍曼不动杆菌所产β-内酰胺酶，并进行初步分类，用聚合酶链反应（PCR）扩增和产物测序方法确认β-内酰胺酶基因，用PCR扩增整合子全可变区和质粒接合实验来判定其耐药基因的转移方式。结果：该临床菌株超广谱β-内酰胺酶，经分子生物学方法证实有blaPER-1基因，同时还有blaOXA-23基因和aacA4基因。结论：发现一株 OXA－23型碳青霉烯酶和可转移的PER－1型超广谱β-内酰胺酶的鲍曼不动杆菌，blaPER-1基因位于质粒上。     

鲍曼不动杆菌的耐药性及β-内酰胺酶耐药基因的研究

目的了解临床分离的鲍曼不动杆菌耐药性及β-内酰胺酶耐药基因的存在类型。方法用美国BD公司Phoenix-100型全自动细菌鉴定药敏系统鉴定细菌及做药敏试验,用聚合酶链反应（PCR）方法检测5种常见β-内酰胺酶耐药基因。采用随机引物PCR扩增对菌株进行分型。结果 50株鲍曼不动杆菌对多粘菌素B全部敏感,,而对其余18种抗生素耐药率为52%-100%,其中24株为泛耐药菌株,共分为8种基因型,B型菌株为主要的流行株,所有菌株均检出TEM-1基因,46株检出AmpC基因,31株检出0XA-24基因、21株检出0XA-23基因,7株检出IMP基因。结论临床分离的鲍曼不动杆菌主要以引起危重病人的呼吸道感染为主,对18种临床常用抗生素耐药率高,对头孢菌素类高度耐药并且存在克隆传播,同时携带多种耐药基因是本院鲍曼不动杆菌对β-内酰胺酶类抗菌药物耐药的主要原因。     

鲍曼不动杆菌耐药表型及碳青霉烯酶OXA基因分析

目的 检测鲍曼不动杆菌耐药表型及碳青霉烯酶OXA基因型.方法 用VITEK32鉴定出174株不动杆菌,用K-B纸片检测抗生素的耐药性,用琼脂稀释法测定抗生素的最小抑菌浓度(MIC),用多重PCR方法测定碳青霉烯酶OXA23类,OXA24类,OXA51类和OXA58类基因.结果 检出鲍曼不动杆菌146株(83.91%),耐亚胺培南的鲍曼不动杆菌46株(31.50%).鲍曼不动杆菌呈现出多重耐药性,亚胺培南、奈替米星、左氧氟沙星、头孢吡肟和哌拉西林/他唑巴坦的敏感率分别为70.69%,48.85%,44.83%,43.68%,44.83%.亚胺培南的MIC值为16～64μg/ml;耐亚胺培南鲍曼不动杆菌OXA基因主要为OXA23类,检出率为82.61%,且以OXA23/OXA51类基因为主(60.87%),检出OXA23/OXA58类1株,未测得OXA24类.结论 鲍曼不动杆菌呈现出多重耐药性,以OXA23/OXA51型碳青霉烯酶为主.     

多重耐药鲍曼不动杆菌中β内酰胺酶基因的检测

目的调查多重耐药鲍曼不动杆菌中8内酰胺类耐药基因的流行状况。方法收集2012年8月至2013年2月江苏大学附属医院和镇江市第一人民医院住院患者标本中分离得到的多重耐药鲍曼不动杆菌菌株。应用K—B纸片扩散法检测多重耐药鲍曼不动杆菌对抗菌药物的敏感性。应用PCR法检测口内酰胺类耐药基因。结果47株多重耐药鲍曼不动杆菌除对头孢哌酮-舒巴坦,米诺环素和氨苄西林-舒巴坦的耐药率相对较低外,对其他抗菌药物的耐药率均较高。β内酰胺类耐药基因TEM、ADC、OXA-23和0XA51的阳性率分别为91．5％（43株）、93．6％（44株）、93．6％（44株）和95．7％（45株）。结论多重耐药鲍曼不动杆菌对8内酰胺类抗生素耐药可能与8内酰胺类耐药基因的表达相关。