一氧化氮供体硝普钠对高胆固醇血症兔Oddi括约肌的影响

目的初步研究一氧化氮(NO)供体硝普钠(SNP)对高胆固醇血症兔Oddi括约肌(SO)的作用及可能机制。方法新西兰大耳白兔24只,给予高胆固醇饮食饲喂8周后取SO组织制备成SO肌环,通过等长张力记录方法观察SO肌环初始收缩反应,并观察SNP对SO肌环的舒张作用;分离培养SO细胞,用HE及TUNEL染色观察SNP对SO细胞凋亡的影响。结果 (1)SO肌环初始收缩平均波幅为(0.144±0.004)g,平均收缩频率为(10.8±1.1)次/min;SNP对SO肌环有明显舒张作用,且具有浓度依赖性。(2)SNP处理后的SO细胞HE和TUNEL染色示明显的细胞凋亡征象。结论 NO供体SNP可能通过诱导高胆固醇血症兔SO细胞凋亡显著降低SO张力,其可能为SNP治疗Oddi括约肌功能障碍的机制之一。     

胆管结石患者 Oddi 括约肌中胆囊收缩素受体和一氧化氮合酶及其血中胆囊收缩素和一氧化氮水平的意义

目的 探讨胆管结石患者Oddi括约肌中胆囊收缩素(CCK)受体和一氧化氮合酶(NOS)及其血清中CCK和NO含量的改变及意义.方法 测定41例胆管结石患者和6例对照组血中的CCK和NO水平及Oddi括约肌中CCK受体和NOS含量.结果 胆管结石组血中CCK含量[(38.91±4.85)pmol/L]、NO含量[(40.84±4.74)pmol/L]较对照组[(30.67±1.81)pmol/L]和[(32.81±1.11)pmol/L]明显升高;Oddi括约肌中CCK受体[(67.59±5.87)ng/L]及NOS含量[(457.52±45.40)ng/L]明显低于对照组[(78.99±1.71)ns/L]与[(519.61±11.38)ng/L];血中CCK、NO水平及Oddi括约肌中CCK受体、NOS含量在原发性肝内胆管结石组、胆囊结石伴胆管结石组、原发性胆总管结石组中有所不同.结论 胆管结石患者Oddi括约肌中CCK受体及NOS含量下降导致Oddi括约肌功能下降,进而胆汁淤积,促进胆管结石的形成.     

Bcl-2,Bax和线粒体膜蛋白在一氧化氮供体诱导HL-60细胞凋亡中的改变

本研究探讨外源性一氧化氮 (NO)供体硝普钠 (SNP)对HL 6 0细胞诱导凋亡的可能机制。将HL 6 0细胞与SNP在体外培养 ,用DNA片段原位末端标记法 (TUNEL)测定原位细胞凋亡率 ;用流式细胞仪测定细胞DNA倍体和周期分析及Bcl 2、Bax、线粒体膜蛋白表达率的变化。结果表明 :SNP可诱导HL 6 0细胞凋亡 ,两者之间有明显的量效和时效关系。 1.0mmol/LSNP作用 4 8小时后 ,HL 6 0细胞的凋亡率分别为亚二倍体峰 (4 2 .2± 3.5 ) % ,TUNEL测定凋亡细胞率为 (5 2 .5± 7.6 ) % ,显著高于空白对照组和同浓度的高铁氰化钾 (PFC)组 ;Bax基因蛋白和线粒体膜蛋白 (APO2 .7)表达增加 ,bcl 2基因蛋白表达降低。Bax、Bcl 2和APO2 .7的表达率与SNP两者之间也有明显的量效和时效关系。结论 :外源性一氧化氮供体诱导HL 6 0细胞凋亡过程中 ,线粒体膜蛋白表达显著上调并伴随Bax和Bcl 2蛋白的表达改变。     

骨髓间充质干细胞旁分泌作用对胰岛素瘤细胞功能的影响

目的探讨骨髓间充质干细胞(BMSCs)旁分泌作用对胰岛素瘤细胞(INS-1)功能的影响。方法体外分离、纯化大鼠BMSCs。应用链脲左菌素(STZ)诱导INS-1损伤、凋亡,建立BMSCs和INS-1共培养体系。本实验设立以下4组:INS-1,BMSCs对照组(CONI、CONB);INS-1损伤对照组(IINS-1);BMSCs与INS-1共培养组(CO-CUL);BMSCs与损伤INS-1共培养组(ICO-CUL)。应用酶联免疫法测各组细胞培养上清液细胞因子,应用流式细胞仪和MTT法分别检测共培养后INS-1细胞的凋亡和增殖。结果原代培养的BMSCs14d左右可达到80%～90%融合,第3代细胞强表达CD44、CD29(99%),不表达CD34、CD45(<1%);ICO-CUL组INS-1分泌胰岛素升至[(10.27±0.95)mU/L]较INS-1损伤对照组[(5.37±0.45)mU/L]明显增加(P<0.01);与CONB组相比,CO-CUL组BMSCs分泌胰岛素样生长因子(IGF-1)由(5.82±0.87)μg/L增至(10.00±1.44)μg/L(P<0.01);ICO-CUL组分泌量[(14.27±0.85)μg/L]比CO-CUL组[(10.00±1.44)μg/L]增加(P<0.01)。MTT法检测ICO-CUL组INS-1的OD值(0.624±0.052)较INS-1损伤组(0.320±0.026)明显升高(P<0.01);流式细胞仪检测ICO-CUL组INS-1早期凋亡比例[(19.0±1.06)%]较ISN-1损伤组[(58.1±3.12)%]明显降低(P<0.01)。结论 BMSCs旁分泌作用可以促进STZ诱导损伤的INS-1细胞增殖,抑制其凋亡;促进INS-1细胞分泌胰岛素;损伤的INS-1细胞可促进BMSCs分泌IGF-1。     

一氧化氮对鼻咽癌CNE-2细胞增殖与凋亡的影响

目的:探讨外源性NO对CNE-2细胞增殖与凋亡的影响。方法:分别用不同浓度NO供体药物硝普钠(sodium nitroprusside,SNP)干预CNE-2细胞,观察细胞形态学变化、检测细胞的抑制率及细胞的凋亡和坏死率。结果:SNP以浓度依赖性方式抑制CNE-2细胞增殖,SNP 100,200,400,600,800,1 600,3 200μmol/L各组细胞抑制率与药物浓度呈正相关;SNP以浓度依赖性方式促进CNE-2细胞凋亡,SNP(1 000μmol/L)组细胞凋亡率较SNP(600μmol/L)组显著增高(P0.05)。结论:外源性NO能抑制CNE-2的增殖,促进CNE-2的凋亡,其抑制效应与NO浓度呈正相关。     

异丙酚对血管紧张素Ⅱ诱导大鼠心肌成纤维细胞增殖的抑制作用及机制

目的探讨不同剂量异丙酚对血管紧张素Ⅱ(angiotensinⅡ, AngⅡ)诱导大鼠心肌成纤维细胞增殖的抑制作用和机制。方法 100只出生1~3 d的Wistar大鼠进行心肌成纤维细胞的分离与培养后,将细胞分为对照组(细胞培养基中加入1 mL含体积分数1%小牛血清的DMEM培养基)、AngⅡ组(细胞培养基中加入1 mL 1.0×10-7 mol/L AngⅡ),AngⅡ+异丙酚0.5 mmol/L组(细胞培养基中加入1 mL 1.0×10-7 mol/L AngⅡ+0.5 mmol/L异丙酚)、AngⅡ+异丙酚1.0 mmol/L组(细胞培养基中加入1 mL 1.0×10-7 mol/L AngⅡ+1.0 mmol/L异丙酚)、AngⅡ+异丙酚1.5 mmol/L组(细胞培养基中加入1 mL 1.0×10-7 mol/L AngⅡ+1.5 mmol/L异丙酚)。采用MTT法检测各组细胞生长抑制率,采用PCR法检测各组细胞α-SMA mRNA相对表达量,采用Western blot法检测各组细胞总蛋白含量。结果培养48 h,AngⅡ组细胞生长抑制率[(14.23±1.17)%]低于对照组[(23.32±2.15)%]、AngⅡ+异丙酚0.5 mmol/L组[(24.19±1.36)%]、AngⅡ+异丙酚1.0 mmol/L组[(29.25±2.30)%]及AngⅡ+异丙酚1.5 mmol/L组[(31.37±2.19)%](P<0.05),AngⅡ+异丙酚1.5 mmol/L组、AngⅡ+异丙酚1.0 mmol/L组、AngⅡ+异丙酚0.5 mmol/L组细胞生长抑制率依次降低(P<0.05);AngⅡ组心肌成纤维细胞α-SMA mRNA相对表达量(2.05±0.23)、总蛋白含量(225.06±18.66)均高于对照组(0.98±0.12、150.65±11.23)、AngⅡ+异丙酚0.5 mmol/L组(1.78±0.25、197.54±11.56)、AngⅡ+异丙酚1.0 mmol/L组(1.50±0.11、182.51±10.14)和AngⅡ+异丙酚1.5 mmol/L组(1.12±0.05、168.26±11.05)(P<0.05),AngⅡ+异丙酚0.5 mmol/L组、AngⅡ+异丙酚1.0 mmol/L组、AngⅡ+异丙酚1.5 mmol/L组及对照组心肌成纤维细胞α-SMA mRNA相对表达量及总蛋白含量依次降低(P<0.05)。结论异丙酚具有抑制AngⅡ诱导的大鼠心肌成纤维细胞增殖的作用,且随剂量增加,抗心肌成纤维的作用逐渐增强。     

肝细胞生长因子激活剂的抑制剂-1基因对宫颈癌细胞自噬及凋亡调控的影响

目的探讨肝细胞生长因子激活剂的抑制剂-1(hepatocyte growth factor activator inhibitor-1, HAI-1)基因对宫颈癌细胞自噬及凋亡调控的机制。方法对数生长期HeLa细胞分为转染组和对照组,转染组转染HAI-1质粒,对照组细胞正常培养。采用实时荧光定量PCR法检测2组细胞HAI-1 mRNA表达情况,采用AO染色和流式细胞术检测2组细胞自噬情况,采用ELISA检测2组细胞自噬相关因子LC3-Ⅱ、LC3-Ⅰ和Beclin-1蛋白水平,应用流式细胞仪检测2组细胞凋亡率,采用Western blot法检测细胞Bax和Bcl-2蛋白相对表达量。结果转染组细胞HAI-1 mRNA相对表达量(1.57±0.26)、AO细胞荧光强度(52.14±3.88)、LC3-Ⅱ蛋白[(3.42±0.85)μg/L]、Beclin-1蛋白[(14.69±1.96)μg/L]水平、细胞凋亡率[(86.75±6.42)%]、Bax蛋白相对表达量(1.24±0.13)和Bax/Bcl-2(7.75±0.83)高于对照组[0.48±0.09、5.47±0.32、(1.10±0.22)μg/L、(10.12±0.53)μg/L、(12.64±1.33)%、0.25±0.06、0.17±0.05)](P0.05),LC3-Ⅰ蛋白水平[(0.59±0.11)μg/L]、Bcl-2蛋白相对表达量(0.16±0.04)低于对照组[(3.26±0.82)μg/L、1.47±0.15](P0.05)。结论 HAI-1转染通过增加HeLa细胞中LC3-Ⅱ和Beclin-1蛋白表达,降低LC3-Ⅰ蛋白表达,提高Bax/Bcl-2来调节宫颈癌细胞的自噬和凋亡。     

橄榄苦苷对HepG2细胞脂肪变性的作用

目的探讨橄榄苦苷对HepG2细胞脂肪变性的影响。方法人肝癌HepG2细胞株分别用浓度0、0.5、1、1.5、2mmol/L游离脂肪酸(free fatty acid,FFA)培养24h,MTS法测定细胞生存率,尼罗红染色观察细胞内脂滴颗粒堆积情况,ELISA法检测细胞三酰甘油(triacylglycerol,TG)水平,选择1mmol/L FFA进行后续实验。取人肝癌HepG2细胞株随机分为空白组(培养液),FFA组(培养液+1 mmol/L FFA),1μmol/L橄榄苦苷组(培养液+1 mmol/L FFA+1μmol/L橄榄苦苷)、10μmol/L橄榄苦苷组(培养液+1mmol/L FFA+10μmol/L橄榄苦苷)、100μmol/L橄榄苦苷组(培养液+1mmol/L FFA+100μmol/L橄榄苦苷)、1 000μmol/L橄榄苦苷组(培养液+1mmol/L FFA+1 000μmol/L橄榄苦苷),培养24h采用MTS法测定细胞生存率,尼罗红染色观察细胞内脂滴颗粒堆积情况,ELISA法检测细胞TG水平。结果 MTS结果显示,FFA浓度为1.5、2mmol/L时细胞生存率[(66.50±5.83)%、(57.63±11.63)%]低于0mmol/L时(100%)(P0.05),0.5、1mmol/L时细胞生存率[(95.96±3.50)%、(95.49±7.75)%]与0mmol/L比较差异无统计学意义(P0.05);FFA浓度为0.5、1mmol/L时细胞中TG水平[(0.91±0.02)、(0.96±0.04)mmol/L]均高于0 mmol/L[(0.37±0.05)mmol/L](P0.05);1、10、100μmol/L橄榄苦苷组细胞生存率[(96.22±8.05)%、(94.94±4.51)%、(97.10±2.53)%]与空白组(100%)、FFA组[(95.42±9.42)%]比较差异无统计学意义(P0.05);1 000μmol/L橄榄苦苷组细胞生存率[(41.35±4.84)%]明显低于空白组、FFA组(P0.05);10、100μmol/L橄榄苦苷组细胞中TG水平[(0.64±0.07)、(0.57±0.02)mmol/L]低于FFA组[(0.96±0.02)mmol/L](P0.05),1μmol/L橄榄苦苷组细胞中TG水平[(0.92±0.05)mmol/L]与FFA组比较差异无统计学意义(P0.05);显微镜下10、100μmol/L橄榄苦苷组脂肪颗粒较FFA组明显减少。结论 10、100μmol/L橄榄苦苷可减少HepG2细胞内TG生成,防止肝细胞脂肪变性。     

14,15-EET通过线粒体途径减轻烟雾诱导的肺上皮细胞凋亡

目的观察14,15-环氧二十碳三烯酸(14,15-EET)对香烟烟雾提取物(CSE)刺激肺上皮细胞凋亡的影响,并观察14,15-EET对线粒体膜电位、线粒体形态变化的影响,初步探讨其可能的机制。方法培养支气管肺上皮细胞(Beas-2B),实验分为对照组、CSE刺激组(加入5%CSE液)、CSE+14,15-EET组(1 mmol/L 14,15-EET预处理1 h后再加入5%CSE)及CSE+14,15-EET+14,15-环氧二十碳-5(Z)-烯酸(14,15-EEZE)组(1 mmol/L 14,15-EEZE预处理1 h后加入1 mmol/L 14,15-EET孵育1 h,最后加入5%CSE)。采用TUNEL方法检测肺上皮细胞细胞凋亡情况,应用JC-1染色的方法观察线粒体膜电位的变化,用透射电镜观察线粒体超微结构改变,应用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测细胞DRP1及PINK1 mRNA含量变化。结果CSE刺激组较对照组[(23.80±6.54)%vs.(6.20±2.59)%]肺上皮细胞细胞凋亡指数明显增加,CSE+14,15-EET组[(13.00±3.54)%]较CSE刺激组凋亡指数明显降低,而CSE+14,15-EET+14,15-EEZE组[(22.20±7.53)%]较CSE+14,15-EET组细胞凋亡指数明显增加,差异有统计学意义(P<0.05)。CSE刺激组较对照组(2.28±0.54 vs.4.03±0.63)线粒体膜电位降低,CSE+14,15-EET组(3.22±0.20)较CSE刺激组粒体膜电位升高,而CSE+14,15-EET+14,15-EEZE组(2.13±0.27)较CSE+14,15-EET组线粒体膜电位明显降低,差异有统计学意义(P<0.05)。CSE刺激组较对照组(2.09±0.25 vs.1、1.88±0.28 vs.1)DRP1及PINK1 mRNA表达水平明显增加,CSE+14,15-EET组(1.14±0.17、1.11±0.23)较CSE组DRP1及PINK1 mRNA表达水平显著降低,而CSE+14,15-EET+14,15-EEZE组(1.64±0.24、1.75±0.29)较CSE+14,15-EET组DRP1及PINK1 mRNA表达水平明显增加,差异有统计学意义(P<0.05)。结论14,15-EET可能通过线粒体途径减轻CSE诱导的肺上皮细胞凋亡。     

电针足三里穴对严重腹腔感染大鼠胸腺细胞凋亡的保护作用

目的 探讨电针足三里穴对腹腔感染大鼠胸腺细胞凋亡的影响及机制.方法 将40只SD大鼠随机均分成正常对照组、模型组、非经非穴组、足三里组.采用盲肠结扎穿孔(CLP)致腹腔感染动物模型,用流式细胞仪以膜联蛋白-碘化丙啶(Annexin V-PI)双染色法及光镜、透射电镜下观察CLP致腹腔感染后36 h胸腺细胞的凋亡情况,并观察血浆皮质酮浓度和胸腺细胞中Bcl-2蛋白含量的变化.结果 CLP致腹腔感染可导致胸腺细胞凋亡增多,模型组[(44.7±3.3)%]、非经非穴组[(42.7±3.0)%]、足三里组[(32.6±3.3)%]胸腺细胞凋亡率显著高于正常对照组[(21.2±2.3)%,P均<0.05];而足三里组胸腺细胞凋亡率显著低于模型组和非经非穴组(P均<0.05);电镜和光镜下观察胸腺细胞凋亡呈典型的形态学特征.模型组((353.1±75.8)μg/L]、非经非穴组((370.7±81.0)/μg/L]、足三里组((348.6±77.9)μg/L]血浆皮质酮浓度显著高于正常对照组[(161.25±46.5)μg/L,P均<0.05];足三里组与模型组和非经非穴组比较差异无统计学意义(P均0.05).模型组(71.2±5.6)、非经非穴组(73.5±5.9)、足三里组(82.4±6.8)胸腺细胞中Bcl-2蛋白含量显著低于正常对照组(95.3±6.3,P均<0.05),而足三里组胸腺细胞中Bcl-2蛋白含量相对值显著高于模型组和非经非穴组(P均<0.05).结论 电针足三里穴可以减轻CLP致腹腔感染大鼠胸腺细胞凋亡,其机制可能与提高胸腺细胞中Bcl-2蛋白含量有关.     

乙酰半胱氨酸对人肺成纤维细胞增殖及胶原合成的影响

目的 研究乙酰半胱氨酸(NAC)对人肺成纤维细胞(HLF)增殖、凋亡和胶原合成的影响.方法 分离培养HLF,经不同浓度NAC(5、10、20、40 mmol/L)处理后,四氮甲基偶氮唑蓝(MTT)检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞凋亡、细胞周期,RT-PCR检测Ⅰ型前胶原mRNA表达的变化.结果 ①5、10、20、40 mmol/L的NAC对HLF细胞生长均有明显抑制作用,且呈剂量依赖性.②5、10、20、40 mmol/L的NAC作用24 h后,细胞凋亡率分别为(34.38±5.80)%、(37.72±3.10)%、(44.05±4.52)%和(59.18±5.24)%,均明显高于对照组[(3.92±1.24)%],差异有统计学意义(P均<0.01).③10、20、40 mmol/L的NAC能够引起G0/G1期细胞比例明显升高,S期比例明显降低,差异有统计学意义(P均<0.01).④5、10、20及40 mmol/L的NAC处理组HLF Ⅰ型前胶原mRNA表达均明显低于对照组,差异有统计学意义(P均<0.01).结论 NAC可直接抑制成纤维细胞增殖、诱导其发生凋亡,并降低其胶原合成.     

血糖波动对2型糖尿病合并肺癌患者化疗效果的影响

目的分析2型糖尿病合并肺癌患者血糖波动对化疗的影响。方法 80例2型糖尿病合并肺癌患者,根据日内平均血糖波动幅度(mean amplitude of plasma glucose excursion,MAGE)是否高于3.9mmol/L将患者分为正常波动组42例和高波动组38例。观察并比较2组肿瘤标志物、炎症因子水平及不良反应发生情况。结果高波动组MAGE[(5.75±1.28)mmol/L]、日间血糖平均绝对差[(1.45±0.64)mmol/L]、变异系数(1.68±0.73)、最大血糖波动幅度[(6.58±2.34)mmol/L]、空腹血糖[(7.26±1.52)mmol/L]和餐后2h血糖水平[(9.89±2.63)mmol/L]高于正常波动组[(3.79±1.03)mmol/L、(1.13±0.38)mmol/L、1.25±0.79、(4.11±1.52)mmol/L、(6.28±1.07)mmol/L、(7.68±1.65)mmol/L],差异均有统计学意义(P<0.05),高波动组患者癌胚抗原[(16.15±1.34)mg/L]、神经元特异性烯醇化酶[(18.92±4.32)mg/L]、细胞角蛋白19片段[(7.34±2.28)mg/L]、糖类抗原19-9[(77.26±6.67)u/mL]、糖类抗原153[(51.18±5.73)u/mL]、糖类抗原125[(85.19±7.16)u/mL]和鳞状上皮细胞癌抗原[(4.57±1.39)μg/L]、白细胞介素-6[(28.79±6.23)mg/L]、高敏C-反应蛋白[(23.46±3.42)mg/L]、肿瘤坏死因子-α[(56.57±7.56)ng/L]水平高于正常波动组[(12.62±2.32)mg/L、(16.39±3.63)mg/L、(5.27±1.47)mg/L、(55.41±5.21)u/mL、(43.25±5.54)u/mL、(62.23±6.43)u/mL、(2.46±0.75)μg/L、(17.22±3.51)mg/L、(11.64±3.25)mg/L、(39.75±5.64)ng/L](P<0.05),高波动组静脉炎(31.58%),消化道反应(31.58%),口腔溃疡(26.32%),肝、肾功能损害(44.74%)等化疗不良反应发生率高于正常波动组(7.14%、11.90%、4.76%、14.29%)(P<0.05)。结论 2型糖尿病合并肺癌患者高幅度的血糖波动不利于肿瘤标志物水平和炎症细胞因子水平的控制,且可增加化疗不良反应发生率。     

葡萄糖腹膜透析液诱导间皮细胞凋亡的体外研究

[目的]了解葡萄糖腹膜透析液(PDS)对体外培养人腹膜间皮细胞凋亡的影响.[方法]通过向培养液中添加1.5%葡萄糖腹膜透析液,观察细胞caspase-3活性变化,应用Annexin V/PI双染色流式细胞仪方法以及TUNEL方法观察腹膜间皮细胞凋亡的情况.[结果]PDS组细胞caspase-3活性较对照组明显上升Annexin V-FITC/PI双标记结果显示PDS组细胞凋亡率为(46.8士14.2)%,显著高于对照组的(9.04士4.86)%(P＜0.05).TUNEL结果显示PDS组细胞凋亡明显高于对照组.[结论]葡萄糖腹膜透析液可以明显诱导腹膜间皮细胞细胞凋亡的发生.     

PI3K/Akt信号通路对人结肠癌HT-29细胞增殖的影响

目的探讨PI3K/Akt信号通路在人结肠癌HT-29细胞增殖中的作用。方法人结肠癌HT-29细胞分为结肠癌组和抑制剂组,癌旁正常细胞株为对照组,均取对数生长期细胞进行实验。结肠癌组和对照组应用培养基+等量生理盐水进行培养,抑制剂组应用培养基+PI3K/Akt信号通抑制剂LY294002 10μL进行培养。MTT法检测3组培养24、48、72h时细胞增殖情况,Western blot法检测3组PI3K、Akt、磷酸化Akt、P-糖蛋白表达,流式细胞仪检测3组细胞周期及凋亡情况。结果培养24、48、72h,对照组和抑制剂组细胞吸光度值均小于结肠癌组(P0.05),对照组与抑制剂组比较差异无统计学意义(P0.05);培养24h,对照组和抑制剂组PI3K、Akt、磷酸化Akt和P-糖蛋白表达均低于结肠癌组(P0.05),对照组与抑制剂组比较差异无统计学意义(P0.05);流式细胞仪检测结果显示,结肠癌组G_1期细胞比率[(62.54±5.15)%]、细胞凋亡率[(45.18±6.76)%]均高于对照组[(39.47±3.84)%、(10.98±0.62)%]和抑制剂组[(37.18±2.03)%、(9.31±0.41)%](P0.05),G_2/M期细胞比率[(11.34±2.06)%]低于对照组[(29.32±3.77)%]和抑制剂组[(28.71±2.35)%](P0.05),S期细胞比率[(26.75±2.46)%]与对照组[(29.81±3.18)%]和抑制剂组[(30.44±2.87)%]比较差异均无统计学意义(P0.05);抑制剂组G_1期、G_2/M期、S期细胞比率及细胞凋亡率与对照组比较差异均无统计学意义(P0.05)。结论 PI3K/Akt信号通路可抑制人结肠癌HT-29细胞增殖,其机制可能与抑制其转导通路下游P-糖蛋白表达、使细胞周期阻滞于G_1期有关。     

精液中一氧化氮含量与精子凋亡关系的初探

目的研究精液中一氧化氮(NO)含量对精子凋亡的影响及其与男性不育之间的相关性,寻找治疗男性不育的有效途径。方法依据世界卫生组织(WHO)标准进行精液常规检测。应用硝酸还原酶法测定不育组和对照组精液中NO的含量。应用末端脱氧核苷酸转移酶(TdT)介导的原位末端标记(TUNEL)法检测精子凋亡情况,观察不育组精子凋亡的形态结构改变,统计2组间精子凋亡率。结果不育组精液中NO含量[(58.37±14.14)μmol/L]高于对照组[(35.20±8.23)μmol/L](P<0.01);对照组精子凋亡率为9.67%±2.54%,低于不育组精子凋亡率33.98%±10.54%(P<0.01)。将不育组分为弱精组、少精组和畸形精子组,以畸形精子组NO含量最高,凋亡率也为最高,弱精组及少精组次之。结论不育组高浓度NO和精子凋亡率呈正相关,随着NO浓度增高,精子凋亡率增加。精液中高浓度NO可能是男性生育力下降的原因之一。     

JNJ-7706621对阿霉素耐药乳腺癌细胞生长的抑制作用研究

目的研究JNJ-7706621对人阿霉素耐药MCF-7/ADR乳腺癌细胞生长的作用。方法采用MTT试验检测JNJ-7706621对MCF-7/ADR耐药细胞生长的影响;采用TUNEL染色试验分析JNJ-7706621对MCF-7/ADR耐药细胞凋亡的激活作用;Caspase酶活性检测分析JNJ-7706621处理后,MCF-7/ADR细胞中Caspase-8、Caspase-9活化程度;应用流式细胞周期分析检测JNJ-7706621对MCF-7/ADR耐药细胞周期的影响。结果 JNJ-7706621能有效抑制阿霉素耐药细胞MCF-7/ADR的生长,并呈现明显的浓度依赖性,作用48 h的IC50仅为0.83μmol/L。2μmol/L JNJ-7706621作用24 h后,TUNEL染色阳性的MCF-7/ADR细胞比率较对照组显著升高,差异具有统计学意义(P0.05);MCF-7/ADR细胞中Caspase-8、-9酶活性均显著升高,差异亦具有统计学意义(P0.05)。在1μmol/L JNJ-7706621作用24 h后,G2/M期细胞比率由对照(7.1±1.3)%升高至(23.8±3.1)%,差异具有统计学意义(P0.05)。结论 JNJ-7706621能同时激活内外源性凋亡途径,诱导MCF-7/ADR细胞凋亡的发生,并将MCF-7/ADR细胞周期阻滞在G2/M期,从而对阿霉素耐药MCF-7/ADR细胞的生长发挥有效抑制作用。     

阿托伐他汀对冠心病患者血管内皮功能及氧化还原态的影响

目的 探讨阿托伐他汀对冠心病患者调脂作用及对血管内皮功能、氧化还原态的影响.方法 选择来我院心内科住院的冠心病患者116例,随机分为阿托伐他汀组(58例)和普罗布考组(58例),分别测定2组患者治疗8周前后总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白(LDL-C)、一氧化氮(NO)、内皮素-1(ET-1)、还原型谷胱甘肽(GSH)和氧化型谷胱甘肽(GSSG),并根据Nernst方程计算GSH/GSSG氧化还原电位.结果 治疗8周后,阿托伐他汀组TC[(5.68±1.47)mmol/L比(3.94±1.36)mmol/L,t=3.915 ]、LDL-C[(3.43±1.36)mmol/L比(2.28±1.11)mmol/L,t=4.160]和TG[(1.73±0.66)mmol/L比(1.45±0.59)mmol/L,t=2.187]显著减低(P<0.01,<0.05);普罗布考组TC[(5.73±1.52)mmol/L比(4.15±1.29)mmol/L,t=3.760]和LDL-C[(3.47±1.35)mmol/L比(2.56±1.06)mmol/L,t=4.035]显著减低(P均<0.01).阿托伐他汀组ET-1明显降低[(154.43±63.06)ng/L比(121.71±59.11)ng/L,t=2.168],NO[(48.41±16.53)μmol/L比(64.40±18.86)μmol/L,t=3.725]及NO/ET-1[(0.31±0.16)比(0.53±0.19),t=2.187]比值明显升高(P<0.01,<0.05);阿托伐他汀组GSH[(284.23±38.23)μmol/L比(321.27±56.47)μmol/L,t=3.894]、GSH/GSSG比值[(8.24±1.18)比(10.06±1.70),t=4.168]显著升高(P均<0.01),GSSG[(34.51±1.74)μmol/L比(31.92±1.59)μmol/L,t=2.325]及GSH/GSSG氧化还原电位[(-135.83±1.34)mV比(-142.61±1.39)mV,t=3.687]显著减低(P均<0.05).结论 对冠心病患者,阿托伐他汀和普罗布考均可有效调脂,但仅阿托伐他汀对血管内皮功能有一定的保护作用,且可使氧化还原态向还原方向偏移.     

反义miR-21抑制宫颈鳞状细胞癌CaSki细胞系生长体外研究

目的探讨敲低miR-21表达对宫颈鳞状细胞癌细胞系CaSki增殖活性与凋亡的影响。方法实时荧光定量RT-PCR法检测正常宫颈组织、CaSki细胞转染前后miR-21的表达水平,采用MTT法、流式细胞术等技术检测转染后CaSki细胞增殖活性与凋亡的变化。结果 miR-21在CaSki细胞中表达水平为正常宫颈组织的3.25倍。CaSki细胞中转染反义miR-21(AS-miR-21)可显著抑制其表达。转染后24h、48h、72h、96h,MTT检测提示10nmol与20nmolAS-miR-21转染组中细胞增殖率较对照组明显降低(P<0.05),自48h抑制作用显现,且随着转染浓度增加,抑制作用增强,呈现剂量依赖性。细胞周期检测结果显示AS-miR-21转染组的G0/G1期细胞明显增多,S期细胞减少(P<0.05)。AnnexinⅤ联合PI技术检测细胞凋亡,结果显示AS-miR-21转染组早期凋亡细胞率[(23.40±2.16)%]明显高于空白对照组[(5.1±2.16)%]、阴性对照组[(6.87±0.55)%](P=0.000)。结论 AS-miR-21转染可敲低CaSki细胞中miR-21表达,并有效抑制细胞增殖活性,促进细胞凋亡。     

汉黄芩素对肝癌细胞SMMC-7721增殖、迁移及侵袭的影响

目的探讨汉黄芩素对肝癌细胞SMMC-7721增殖、迁移及侵袭能力的影响。方法肝癌细胞SMMC-7721分为5μmol/L汉黄芩素组、10μmol/L汉黄芩素组、20μmol/L汉黄芩素组和空白对照组。5、10、20μmol/L汉黄芩素组分别加入5、10、20μmol/L汉黄芩素进行处理,空白对照组不进行任何处理。处理48h后,采用MTT法检测各组细胞增殖率,采用TUNEL法检测各组细胞凋亡率,采用划痕试验检测各组细胞划痕愈合率,采用Transwell侵袭试验检测各组侵袭细胞数,并进行比较。结果处理48h后,20μmol/L汉黄芩素组细胞增殖率[(46.8±4.5)%]、划痕愈合率[(38.3±2.1)%]和侵袭细胞数[(16±7)个]明显低于5μmol/L汉黄芩素组[(93.5±2.3)%、(73.3±4.6)%、(24±2)个]、10μmol/L汉黄芩素组[(58.3±6.2)%、(47.8±3.6)%、(19±5)个]和空白对照组[100.0%、100.0%、(29±8)个],10μmol/L汉黄芩素组低于5μmol/L汉黄芩素组和空白对照组,5μmol/L汉黄芩素组低于空白对照组,差异均有统计学意义(P0.05);20μmol/L汉黄芩素组细胞凋亡率[(27.3±3.6)%]明显高于5μmol/L汉黄芩素组[(8.8±5.3)%]、10μmol/L汉黄芩素组[(16.1±3.7)%]和空白对照组[(4.6±2.1)%],10μmol/L汉黄芩素组高于5μmol/L汉黄芩素组和空白对照组,5μmol/L汉黄芩素组高于空白对照组,差异均有统计学意义(P0.05)。结论汉黄芩素可抑制肝癌细胞的增殖、迁移及侵袭能力,诱导其凋亡。