仙桃草促进骨折愈合机制探讨

目的：通过VEGF （血管内皮生长因子）信号传导通路探讨仙桃草促进骨折愈合的机制。方法：复制新西兰兔骨折模型64只,双盲随机分成仙桃草治疗组和生理盐水对照组,分别以仙桃草汤及生理盐水灌胃。第0天、7天、14天及21天每组各处置8只动物,Elisa方法检测骨痂组织中VEGF表达。结果：与对照组比较,治疗组第7、14天VEGF的表达增强,差异具有统计学意义（P＜0.05）;VEGF的表达第7天达到峰值,之后表达逐渐减弱。结论：骨折早期,仙桃草能够促进VEGF的表达,达到促进骨折愈合的效果。     

补肾活血汤对SD大鼠骨折愈合过程中结缔组织生长因子表达的影响

目的:探讨补肾活血法对SD大鼠骨折愈合过程中结缔组织生长因子表达的影响。方法:清洁级SD大鼠40只,6月龄,随机分为对照组(A组)及补肾活血汤组(B组),建立骨折模型。A组大鼠灌胃蒸馏水,B组大鼠灌胃补肾活血汤溶液,灌胃给药容积为10 m L/kg。造模后第3、7、14、21天,每组随机选取5只大鼠,切取骨痂标本,采用RT-PCR法和Western-blot法分别检测结缔组织生长因子(CTGF)的m RNA和蛋白质的表达。结果:结果显示,A组术后3天、7天及14天的CTGF m RNA和蛋白的表达逐渐增强,至21天表达下降,与术后14天比较,差异有统计学意义(P0.05)。术后3天,B组CTGF m RNA和蛋白无表达,术后7天、14天及21天,B组的CTGF m RNA和蛋白的表达逐渐增强,术后21天与术后14天比较,差异有统计学意义(P0.05)。术后21天,B组较A组的CTGF m RNA和蛋白的表达均显著升高,差异有统计学意义(P0.05)。结论:补肾活血能够促进骨折愈合过程中结缔组织生长因子蛋白和m RNA表达,从而促进骨折愈合。     

参七虫草方通过抑制促血管生成因子表达改善大鼠肺组织纤维化实验研究

目的:观察参七虫草方对特发性肺纤维化(IPF)大鼠肺组织缺氧诱导因子(HIF-1α)、血管内皮生长因子(VEGF)、促进磷酸肌3激酶(PI3K)、AKT mRNA的影响。方法:SPF级SD大鼠128只随机分为四组,空白组、模型组、氯沙坦组、参七虫草组,各32只。采用一次性气管滴注博来霉素的方法建立IPF大鼠模型,常规法检测四组大鼠的第7、14、21、28天体重; HE、Masson染色观察四组大鼠的第7、14、21、28天肺组织病理变化; RT-PCR检测各组大鼠肺组织第7、14、21、28天HIF-1α、VEGF、PI3K、AKT mRNA的表达水平。结果:模型组、氯沙坦组及参七虫草组大鼠在镜下均有不同程度的炎性浸润、胶原纤维沉积; 模型组、氯沙坦组及参七虫草组第7、14、21、28天肺组织VEGF、HIF-1α高表达,PI3K、AKT mRNA、 HIF-1α、VEGF、PI3K、AKT mRNA表达水平均显著高于空白组(P<0.05),且随时间推进,差异越显著; 在相同时间点,氯沙坦组及参七虫草组HIF-1α、VEGF、PI3K、AKT mRNA表达水平显著低于模型组(P<0.05),氯沙坦组与参七虫草组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论:参七虫草方可通过抑制大鼠HIF-1α、VEGF、PI3K、AKT mRNA等促血管生成因子的生成而发挥抗纤维化作用。     

消肿止痛合剂对大鼠骨折愈合中VEGF表达的影响

目的：探讨大鼠骨折修复过程中骨痂组织中血管内皮细胞生长因子（VEGF）表达的变化及消肿止痛合剂对其的影响。方法：取5-6周龄SD大鼠30只,制作股骨中段闭合骨折模型,随机分为实验组和对照组各15只,实验组每12小时予消肿止痛合剂16mL／（kg·d）,对照组不予药物治疗。分别在骨折后第2、4、7、10、21天每组各处死3只大鼠,取骨折周围软组织及骨痂,观察骨折部位骨痂形成情况,通过组织切片免疫组织化学染色,观察骨折修复中不同时期软骨细胞变化及骨痂中VEGF的表达。结果：VEGF的表达在2组动物骨折后第4天开始出现差异,第10天差异最大,第21天差异缩小,实验组中VEGF的表达信号强于对照组。结论：骨折愈合过程中软骨及骨性骨痂中均有VEGF表达,表明VEGF参与骨折愈合,消肿止痛合剂能提高VEGF的表达,利于骨折修复。     

缺血再灌注损伤大鼠脑组织细胞因子VEGF mRNA的变化及通心络对其的影响

目的探讨血管内皮生长因子（VEGF）mRNA在大鼠缺血/再灌注损伤（MCAO）脑组织的表达情况及通心络对其的影响。方法采用MCAO模型并予通心络灌胃,应用反转录集合酶链式反应（RT-PCR）检测缺血再灌注损伤后5d、7d、14d、21d、30d神经干细胞增殖分化相关细胞因子VEGF mRNA的变化。结果缺血再灌注模型组VEGF mRNA在不同时间段均有表达,VEGF mRNA在造模后第3天开始表达增强,第5天表达最高;给予通心络处理后第3天缺血侧VEGF mRNA开始表达增强,5d、7d、14d、21d、30d时PCR表达灰度值均高于缺血对照组。结论缺血/再灌注损伤大鼠脑组织细胞因子VEGF mRNA表达增强,通心络胶囊可强化此反应,进而可能诱导神经干细胞增殖。     

复元活血汤对骨折早期血管内皮生长细胞因子活性的影响

目的探讨复元活血汤对骨折早期局部血管内皮增长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)表达的影响。方法 60只雄性SD大鼠建立开放骨折髓内固定动物模型,分复元活血汤组、生理盐水组。分别在3,5,7,14,21 d取骨折区组织,通过RT-PCR方法进行半定量分析VEGF的表达。结果 VEGF在3 d时表达开始增强:试验组3 d时VEGF表达较生理盐水组弱(P>0.05),5,7,14,21 d复元活血汤组表达较生理盐水组强(P<0.05);5,7 d VEGF表达到峰值(P<0.01)。结论骨折早期复元活血汤促进VEGF表达增强。     

麝香对颅骨骨缺损模型大鼠骨组织转化生长因子β、血管内皮生长因子mRNA表达的影响

目的探讨麝香促进骨缺损愈合的可能作用机制。方法 300只SD大鼠以颅骨钻制备颅骨骨缺损模型,造模后随机分为模型组和实验组,每组150只。两组再按照给药时间分为第7、14、28天3个时间点,每个时间点50只。实验组大鼠每天灌服天然麝香4.2 mg/100 g,模型组每天灌服等量的生理盐水,均每日灌胃1次。分别于灌胃第7、14、28天采用实时荧光定量PCR法检测两组大鼠骨缺损处组织中转化生长因子β(TGF-β)和血管内皮生长因子(VEGF)mRNA水平。结果与模型组同时间点比较,实验组第7、28天TGF-βmRNA及第28天VEGF mRNA表达显著升高(P0.05);实验组第28天TGF-β、VEGF mRNA表达明显高于本组第14天(P0.05)。结论麝香可有效促使大鼠颅骨骨缺损区的愈合,其机制可能与升高缺损处骨组织TGF-β、VEGF mRNA表达有关。     

早期应用疏风清热合剂调节急性相蛋白和VEGF促进骨折愈合的实验研究

目的研究不同时间段骨折处X线摄片评分和C反应蛋白(CRP)、纤维蛋白原(FIB)及血管内皮细胞生长因子(VEGF)在血液中的表达情况,探讨早期应用疏风清热合剂促进骨折愈合的机制。方法建立家兔双侧桡骨骨折模型,将造模成功后的33只家兔按随机数字表法分为模型对照组、生理盐水组和疏风清热合剂组,每组11只,另设空白对照组11只。疏风清热合剂组和生理盐水组于造模后10天内分别给予疏风清热合剂[10 mL/(kg·d)]和等体积的生理盐水灌胃。造模后第28、42天检测双侧桡骨进行X线摄片,第1、3、7、14天检测血液中CRP、FIB表达,第7、14、28天检测血液中VEGF表达情况。结果(1)与模型对照组比较,疏风清热合剂组第28、42天骨折部位X线评分较高(P0.01),且高于生理盐水组(P0.05)。(2)与本组造模后第3天比较,模型对照组、生理盐水和疏风清热合剂组第7天CRP、FIB均表达较低(P0.05)。与空白对照组比较,模型对照组第1、3、7天血浆CRP、FIB表达水平均升高(P0.01);与模型对照组比较,疏风清热合剂组第3、7天时间点CRP、FIB表达降低(P0.05,P0.01);与生理盐水组比较,疏风清热合剂组在第3、7天时间点CRP、FIB表达降低(P0.01)。(3)与本组造模后第14天比较,模型对照组、生理盐水和疏风清热合剂组第7、28天VEGF表达降低(P0.05,P0.01)。与空白对照组比较,模型对照组第7、14、28天VEGF表达均升高(P0.01);与模型对照组比较,疏风清热合剂组第7、14、28天VEGF表达较高(P0.01),且高于生理盐水组(P0.01)。结论早期应用疏风清热合剂可以促进新西兰家兔桡骨骨折的愈合,其作用机制可能是通过降低急性相蛋白CRP、FIB表达以及促进血液中VEGF的高表达实现。     

护胃散对急进高原大鼠胃黏膜VEGF和bFGF mRNA表达的影响

目的探讨护胃散治疗急进高原胃黏膜损伤的可能作用机制。方法 350只Wistar大鼠随机分为北京组、西宁组、玛多空白组、玛多阳性对照组和护胃散高、中、低剂量组,每组50只。除北京组外,余300只大鼠空运至西宁市,玛多空白组、玛多阳性对照组和护胃散高、中、低剂量组当日继续由汽车运至玛多县。北京组、西宁组、玛多空白组灌服生理盐水2 ml,玛多阳性对照组给予荆花胃康胶丸2.4 g/(kg·d),护胃散低、中、高剂量组分别给予护胃散2.6、5.2、10.4 g/(kg·d),共计7天。各组分别于实验第1、2、3、5、7天处死10只大鼠,取胃黏膜组织进行病理观察,同时测定胃黏膜血管内皮生长因子(VEGF)和碱性成纤维生长因子(bFGF)mRNA表达。结果玛多空白组大鼠胃黏膜表面散在出血点、糜烂或浅表溃疡,局部黏膜有缺损改变;护胃散高剂量组黏膜下血管淤血、炎性渗出等较玛多空白组有较大改善。与玛多空白组同时间比较,护胃散中、高剂量组在第3、5天有不同程度的VEGF、bFGF mRNA表达升高,且护胃散高剂量组在第2、3天VEGF mRNA表达升高优于玛多阳性对照组(P0.05或P0.01)。结论护胃散可提高急进高原大鼠胃黏膜中VEGF及bFGF mRNA的表达,从而促进急进高原胃黏膜损伤的修复。     

当归四逆汤对糖尿病大鼠坐骨神经miR-210、HIF-1α和VEGF表达的影响

目的:探讨当归四逆汤对糖尿病大鼠坐骨神经miR-210、HIF-1α和VEGF表达的影响。方法:30只SD大鼠分为空白对照组和观察组,观察组采用1%链脲佐菌素50 mg/kg诱导生成糖尿病大鼠模型,造模成功的观察组大鼠17只按随机数字表法分为糖尿病模型组和中药预防组。MP组灌服当归四逆汤(12 mL/kg/d),其余组灌服生理盐水,12周结束后,检测3组大鼠空腹血糖、光热刺激痛阈时间及坐骨神经传导速度,并取坐骨神经检测miR-210、HIF-1αmRNA水平及VEGF表达。结果:12周后与BC组比较,DM组空腹血糖、光热刺激痛阈时间明显升高,坐骨神经传导速度、miR-210、HIF-1αmRNA及VEGF表达明显降低,差异有统计学意义。与DM组比较,MP组大鼠光热刺激痛阈时间明显降低,坐骨神经传导速度、miR-210、HIF-1αmRNA及VEGF表达明显增高,差异有统计学意义。结论:早期预防性应用当归四逆汤可改善糖尿病周围神经病变,其机制可能与上调神经组织miR-210、HIF-1αmRNA及VEGF表达有关。     

当归红芪合剂超滤膜提取物对ECV-304细胞血管内皮生长因子mRNA表达的影响

目的探讨当归红芪合剂超滤膜提取物对人脐静脉内皮细胞(ECV-304)血管内皮生长因子(VEGF)mRNA表达的影响。方法以体外培养的ECV-304细胞为模型,采用四氮唑蓝比色法(MTT法)测定细胞增殖,半定量反转录-聚合酶链反应法检测ECV-304细胞VEGFmRNA表达的变化。结果当归红芪合剂超滤膜提取物对ECV-304细胞有促增殖的作用,与对照组比较差异有统计学意义(P0.05);当归红芪合剂超滤膜提取物能够诱导VEGFmRNA的表达,其作用与剂量呈正相关。结论当归红芪合剂超滤膜提取物对ECV-304细胞的促增殖作用机制是通过诱导ECV-304细胞VEGFmRNA表达实现的。     

益气活血法对脑出血大鼠脑内VEGF及其受体Flt-1和Flk-1 mRNA表达的影响

目的观察益气活血对脑出血大鼠脑内损伤区血管内皮生长因子（VEGF）mRNA及其受体Flt—1 mRNA和Flk—1 mRNA表达的影响，探讨益气活血法的作用机制。方法通过立体定位向脑内苍白球注入Ⅶ型胶原酶0．5U建立脑出血模型。SD大鼠随机分为正常组、假手术组、模型组、益气活血组、益气组、活血组，分别灌服益气活血法代表方补阳还五汤全方及其益气组分、活血组分药物（剂量为临床70kg成人用量的3倍），运用逆转录聚合酶链式反应（RT—PCR）检测正常组及其它各组于造模术后1、4、7、14、21、28d各时间点VEGFmRNA、Flt—1 mRNA和Flk—1 mRNA的动态变化。结果正常组及假手术组不同时间点VEGFmR．NA、Flt—1 mRNA和Flk—1 mRNA均未见明显表达；模型组VEGFmRNA、Flt-1 mRNA和Flk—1 mRNA在脑出血后1d即开始表达，21d达到高峰，然后逐渐减弱；益气活血组VEGFmRNA、Flt—1 mRNA和Flk—1 mRNA表达在7～21d明显高于其他各组，VEGFmRNA和Flk—1 mRNA表达在术后14d达高峰，Flt—1 mRNA在术后21d达高峰。结论益气活血法能促进脑出血大鼠脑内VEGFmRNA、Flt—1 mRNA和Flk—1 mRNA的表达而调整血管新生过程，可能是其促进组织修复的机制之一。     

安心颗粒诱导血管新生VEGF、HIF、eNOSmRNA表达途径的研究

目的探讨心肌梗死大鼠心肌VEGF、HIF、eNOS mRNA的表达及安心颗粒的干预作用。方法：将90只清洁级健康雌性SD大鼠随机分为假手术组、模型对照组、麝香保心丸组（80mg·kg-1·d-1）、安心颗粒小剂量组（0．4g·kg-1·d-1）、安心颗粒中剂量组（0．8g·kg-1·d-1）、安心颗粒大剂量组（1．6g-kg-1·d-1）,结扎冠状动脉左前降支,制备急性心肌缺血模型。用药组每天上午8时灌胃给药,假手术组和模型对照组予等量生理盐水灌胃（用药剂量分别按动物体表面积换算）,每天1次,分笼饲养,自由饮食。6周后处死大鼠,取梗死区心肌组织总mRNA,用RT-PCR的方法检测心肌HIlF-1、VEGF、eNOS mRNA的表达。结果：与模型对照组比较,安心颗粒各剂量组与麝香保心丸组心肌组织中HIF-1、VEGF、eNOS mRNA的表达明显升高（P〈0.05）;麝香保心丸组与安·心颗粒各剂量组相比,心肌组织中HIF-1、VEGF、eNOSmRNA的表达无明显差异（P〉0.05）。结论：安心颗粒通过诱导心肌HIF-1、VEGF、eNOS mRNA的表达,促进血管的新生,对缺血性心肌的血管重生有着重要作用。     

芍药软肝方对荷肝癌H_（22）小鼠肿瘤组织TGF-β_1 RⅡ、NF-κB、VEGF表达的影响

目的：观察芍药软肝方对小鼠H22肝癌肿瘤组织TGF-β1RⅡ、NF-κB、VEGF基因表达的影响。方法：ICR荷H22肝癌小鼠50只,随机分生理盐水对照组,芍药软肝方低、中、高剂量组,环磷酰胺组,停药次日处死小鼠,取皮下肿瘤组织。采用荧光定量RT-PCR法测定芍药软肝方对小鼠H22肝癌组织TGF-β1RⅡ、NF-κB、VEGF基因的表达。结果：芍药软肝方能上调小鼠H22肝癌组织TGF-β1RⅡ表达水平,以中剂量组最明显,与生理盐水组相比有显著性差异（P〈0.01）。芍药软肝方各给药组均能明显下调荷H22肝癌实体瘤小鼠肿瘤组织中NF-κB的表达水平,与生理盐水组相比均有显著性差异（P〈0.01）。芍药软肝方中、高剂量组能明显降低ICR小鼠H22肝癌肿瘤组织中VEGF的表达水平,以高剂量组最明显,中、高剂量组与生理盐水组均有显著差异（P〈0.01）。结论：芍药软肝方抑瘤作用的机理可能是通过下调荷瘤小鼠肿瘤组织NF-κB、VEGF表达,并上调TGF-β1RⅡ的表达水平,从而抑制肿瘤组织新生血管生成,抑制肿瘤细胞增殖,实现其抗肿瘤作用。     

痔血宁合剂对湿热下注证痔病患者纤维降解和血管增生调控的影响

目的:探讨痔血宁合剂对湿热下注证痔病患者纤维降解和血管增生调控的影响。方法:40例患者随机分为两组,服痔血宁合剂患者纳入痔血宁组,未服中药者设为对照组,取两组患者术后痔组织标本,分别采用Weigert染色观察弹性纤维含量,免疫组化法观察MVD、IV型胶原表达,免疫荧光定量法、Western Blot法检测MMP-9、VEGF mRNA及其蛋白的表达。结果:两组弹性纤维含量无统计学差异(P>0.05),MVD个数、IV型胶原表达有显著性差异(P<0.05);与对照组相比,痔血宁组MMP-9、VEGF mRNA及蛋白的表达明显降低(P<0.01)。结论:痔血宁合剂可降低痔组织中MMP-9、VEGF蛋白含量和表达,抑制新生血管形成,延缓痔支持结构退行性变化。     

红景天苷对百草枯中毒大鼠肺组织Toll样受体4-和核转录因子-κB表达的影响

目的：研究红景天苷（SDS）对百草枯（PQ）中毒大鼠肺组织Toll样受体4和核转录因子KB（TLR4-NF—KB）mRNA表达的影响。方法：将120只SD大鼠随机分为生理盐水（NS）对照组、PQ模型组和SDS干预组（低、中、高剂量）,每组24只。采用一次性腹腔注射PQ溶液的方法,制备PQ中毒ALI模型,PQ溶液20mg/kg。PQ模型组和SDS干预组注射PQ溶液,NS对照组腹腔注射等容积NS。染毒1h后,SDS干预组腹腔注射SDS,低、中、高剂量分别为1、5和10mg／kg,Ns对照组、PQ模型组腹腔注射等容生理盐水,每24h注射1次。分别在染毒后6h、24h、48h和72h麻醉处死大鼠,测定肺湿／干重比,测定肺组织中肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、血清中白介素-6（IL-6）含量,检测TLR4和NF—κB的mRNA表达情况。结果：与NS组相比,各时间点PQ模型组肺湿／干重比明显增加（P〈0．01）,肺组织TLR4和NF—KB的mRNA表达水平明显提高（P〈0．01）,肺组织中TNF-α、血清中IL-6含量显著增加（P〈0．01）;而在SDS干预组中,与PQ模型组相比,中、高剂量组各时间点的肺湿／干重比明显减少（P〈0．05）,中、高剂量组在染毒后24、48、72h肺组织TLR4和NF—κB的mRNA表达水平明显减少（P〈0．05）,各剂量组TNF—α的水平于染毒后各时间点均有显著降低（P〈0．05）。高剂量组血清IL-6水平于染毒后6、24、48、72h明显减低（P〈0．05）。结论：TLR4-NF—κB通路参与了PQ中毒大鼠肺损伤的早期病理生理过程,SDS能抑制TLR4-NF—κB活化,减轻PQ中毒大鼠肺损伤。     

七味白术散对相关肠道病原体感染HT-29细胞IP-10表达的影响

目的观察七味白术散对轮状病毒（HRV）、柯萨奇B3病毒（Cox B3）感染HT-29细胞干扰素诱导蛋白-10（IP-10）表达的影响。方法：将HT-29细胞株分别随机设成正常组、模型组、七味白术散组、病毒唑组,于37℃、5％C02条件下培养48h,收获培养物。采用RT-PcR技术测定IP-10mRNA的表达情况。结果：两种肠道病原体感染HT-29细胞后,与正常组比较,模型组IP-10mRNA的表达明显升高（P〈0．05）;与模型组比较,七味白术散组和病毒唑组的IP-10rIlRNA表达明显降低（P〈n 05）：七味白术散组表达值低于病毒唑组（P〈0．05）。结论：七味白术散能下调HRV、COX B3感染HT-29细胞的IP-10的表达。     

丹参酮对脊髓缺血再灌注损伤HIF1-1α和VEGF的作用及机制

目的:从组织形态学观察丹参酮对脊髓缺血再灌注损伤的作用;探讨丹参酮对脊髓缺血再灌注损伤血管内皮生长因子和HIF-1α的作用及机制?椒?1.脊髓缺血再灌注损伤模型建立与鉴定后,将120只大鼠随机分为丹参酮组(A组)、对照组(B组)和假手术组(C组),每组40只。造模成功后,A组术前30min腹腔注射丹参酮注射液,B组术前30min腹腔注射等量的生理盐水,C组,麻醉和手术操作同上,不阻断腹主动脉即终止手术,逐层缝合。室温下自然苏醒。上述大鼠缺血30min后分为再灌注0.5h、1h、4h、8h、12h,共5个时间点,每组每个时间点8只。取各组大鼠的脊髓组织,随机抽取大鼠2只,切取脊髓标本。制备成光学显微镜观察标本,运用光镜观察各组脊髓组织病理改变。2.采用RT-PCR检测脊髓组织中VEGFmRNA和HIF-1α的表达?峁?1.脊髓组织病理改变显示:丹参酮组神经细胞肿胀程度、核仁萎缩程度等均损害表现较对照组轻。2.脊髓缺血再灌注损伤0.5～4h,3组之间VEGFmRNA表达比较差异无统计学意义,脊髓缺血损伤8～12h,VEGFmRNA表达呈时间依赖性升高,8h和12h,丹参酮与对照组相比差异有统计学意义(P0.05)。3.对照组和丹参酮组,脊髓缺血再灌注损伤0.5～1h,HIF-1αmRNA表达呈时间依赖性下降,丹参酮组明显低于对照组,差异有统计学意义,随后不再下降。结论:丹参酮注射液可能通过促进血管内皮生长因子表达,减少HIF-1α的表达,改善脊髓缺血再灌注损伤组织局部缺氧环境,对减轻脊髓缺血再灌注损伤起到积极的防治作用。     

当归炮制后新产生成分的分离和结构鉴定

目的：分离和鉴定当归炮制后新产生的化学成分。方法：对当归炮制品乙醇提取物的乙酸乙酯萃取部分用柱色谱、制备液相和重结晶等分离手段进行分离和纯化,根据化合物的理化性质和波谱数据鉴定其结构。结果：分离得到3个化合物,鉴定为5-羟甲基糠醛（Ⅰ）、香草酸（Ⅱ）和烟酸（Ⅲ）。结论：5-羟甲基糠醛是炮制后产生的新化合物之一,为首次从当归炮制品中分离得到。