星形胶质细胞和星形胶质瘤细胞骨架的光镜和电镜观察

目的：观察正常星形胶质细胞和星形胶质瘤细胞系SWO-38的细胞骨架的区别。方法：分别用光镜和电镜观察正常星形胶质细胞和SWO-38的细胞骨架。结果和结论：两种方法都很清晰地显示出微管和微丝。正常星形胶质细胞微管和微丝发达,属丰满型;粗大的张力纤维贯穿细胞全长,接近平行分布,偶见交叉呈“Z”形状。而SWO-38细胞的微管则明显减少,属稀疏型;细胞中仅见少量纤细的张力纤维,多数微丝束形成点状或树根状肌动蛋白小体,微管和微丝呈收缩趋势。     

正常与肿瘤性星形神经胶质细胞细胞间直接通讯的比较

用ＭＴＴ法测定了体外培养的正常星形胶质细胞与恶性ＳＷＯ３８星形胶质瘤细胞的细胞增殖速率，用粘附式细胞仪（ＡＣＡＳ５７０）对２种细胞间隙连接通讯进行测试。结果正常胶质细胞比胶质瘤细胞分化程度高，生长慢（ＯＤ值分别为０．２０１±０．００８和１．０９２±０．０７５，Ｐ〈０．０１），前者间隙连接通讯（１０．０５±８．７２％，ｎ＝２０）显著高于后者（２．８３±５．５％，ｎ＝３８，Ｐ〈０．０５）     

针灸效应学体外实验方法观察星形胶质细胞超微结构

目的 探讨电针治疗大鼠脊髓损伤（spinal cord injury,SCI)血清对离体培养星形胶质细胞超微结构的影响。方法 采用针灸效应学体外实验方法对离体培养星形胶质细胞用透射电镜观察其超微结构的变化。结果 电针治疗组的星形胶质细胞其溶酶体较造模组少,而高尔基复合、内质网、微管、微丝较造模组明显增多。结论 电针可减轻损伤对星形胶质细胞中溶酶体的刺激,增强细胞器的蛋白合成和分泌功能。     

人恶性胶质瘤细胞系CHG-5和SHG-44细胞骨架的比较研究

目的：比较人恶性肿瘤胶质瘤细胞系CHG－5和SHG－44的细胞骨架系统成分,以进一步了解胶质瘤细胞骨架特征与其分化程度的关系。方法：利用免疫荧光细胞化学染色结合激光共聚焦显微镜观察两种细胞系微管、微丝、中间丝的含量及分布,并比较几种常用固定剂和缓冲液对各骨架成分检测的影响。结果：除微管和微丝均被染色外,所有细胞表达Vimentin(波形蛋白）,而只有部分细胞呈胶质纤维酸性蛋白（GFAP）阳性。微管及中间丝在两种细胞胞质中的分布特征基本相似,但两种相细胞微丝的定位、分布及荧光强度有一定差异。Vimentin型中间丝在SHG－44细胞中表达较强,而GFAP在CHG－5细胞中表达较强。丙酮、75％酒精和4％多聚甲醛对微管的固定效果较好;用醛类固定后中间丝（尤其是Vimentin）染色极弱。结论：CHG－5分化程度较SHG－44高,两种细胞系细胞骨架状态的差异可能是二者生物学特性差异的结论基础。     

地塞米松对大鼠星形胶质细胞诱导型一氧化氮合酶活性的影响

目的：探讨地塞米松对内毒素诱导的大鼠星形胶质细胞中诱导型一氧化氮合酶（ｉＮＯＳ）活性的影响。方法：应用Ｇｒｉｅｓｓ法,动态测定内毒素（ＬＰＳ）诱导体外培养的大鼠星形胶质细胞ｉＮＯＳ活性的变化以及地塞米松（ＤＥＸ）对其的影响。结果：细菌ＬＰＳ能够刺激星形胶质细胞ｉＮＯＳ活性的表达,且与ＬＰＳ剂量和作用时间有关,ＤＥＸ对星形胶质细胞ｉＮＯＳ活性表达具有负调节作用,而且与加入ＤＥＸ的间隔时间有关。结论：星形胶质细胞ｉＮＯＳ可能参与中枢神经系统细菌感染的病理过程,而ＤＥＸ能抑制这种损害作用。     

原浆型和纤维型星形胶质细胞的分离、培养和鉴定

目的 从新生鼠皮层中分离、培养并鉴定原浆型星形胶质细胞(protoplasmic astrocyte,PAS)和纤维型星形胶质细胞(fibrous astrocyte,FAS).方法 新生大鼠皮层分离的混合星形胶质细胞,经差速振荡法得到纯化的PAS和FAS;用免疫组化法分别对两种细胞进行鉴定.结果 观察到两种细胞均特异性的标记为阳性.PAS外观扁平似圆盘状,细胞体较大,突起宽而扁,分支少,均匀排列生长;FAS细胞体较小,呈圆形、卵圆形或多角形,突起较多,细长并有分支,呈交错生长.结论 采用差速振荡法体外纯化培养两种AS,方法可行、有效,同时纯度达95%以上.     

星形胶质细胞在脑内移植中的作用

目的 探讨星形胶质细胞在脑内移植中的作用。方法 应用人胚胎皮南的星形胶质细胞移植于恒河猴脑皮质内,通过免疫组化方法动态观察星形胶质细胞的形态变化。结果 星形胶质细胞在突主组织中可继续发生、分化,其胶质纤维突破起长形成,并与宿主组织呈渐进融合。同时,星形胶质细胞与移植组织中毛细胞血管的形成关系密切,并可能直接参与毛细血管的形成过程。结论 星形胶质细胞移植对于改善缩主脑组织的环境条件,促进其结构功能修     

胶质瘤细胞与星形胶质细胞骨架荧光成像的比较

目的探讨C6胶质瘤细胞与侵袭性相关的骨架构筑特点。方法利用免疫荧光技术对C6胶质瘤细胞及星形胶质细胞的骨架成分进行成像及比较分析,流式细胞仪检测两种细胞F-actin的荧光强度。结果C6胶质瘤细胞的三种骨架成分呈网架结构,以核为中心向外周放射,边界不齐、毛糙,此外,微丝发达密集,中间丝呈高度网络结构。星形胶质细胞三种骨架成分呈网架结构,但细胞边界整齐,微丝稀疏,中间丝发达密集,呈栏栅状排列。C6胶质瘤细胞内F-actin的荧光强度(202.54±11.06)明显强于星形胶质细胞内F-actin的荧光强度(62.64±10.23),P<0.01。结论C6胶质瘤细胞骨架呈网架结构,边界不齐、毛糙,微丝发达密集,中间丝呈高度网络结构,可能均与侵袭性相关的特征结构表现,C6胶质瘤细胞含有丰富的F-actin与侵袭性有关。     

胶质瘤细胞与星形胶质细胞骨架荧光成像比较分析

目的 探讨C6胶质瘤细胞与侵袭性相关的骨架构筑特点。方法 利用免疫荧光技术对C6胶质瘤细胞及星形胶质细胞的骨架成分进行成像及比较分析,流式细胞仪检测两种细胞F-actin的荧光强度。结果 C6胶质瘤细胞的三种骨架成分呈网架结构,以核为中心向外周放射,边界不齐、毛糙,此外,微丝发达密集,中间丝呈高度网络结构。星形胶质细胞三种骨架成分呈网架结构,但细胞边界整齐,微丝稀疏,中间丝发达密集,呈栏栅状排列。C6胶质瘤细胞内F-actin的荧光强度明显强于星形胶质细胞内F-actin的荧光强度,p＜0.01。结论 C6胶质瘤细胞骨架呈网架结构,边界不齐、毛糙,微丝发达密集,中间丝呈高度网络结构,可能均与侵袭性相关的特征结构表现, C6胶质瘤细胞含有丰富的F-actin与侵袭性有关。     

大鼠星形胶质细胞CB1R体内外差异表达

目的探讨大鼠脑在体和培养中星形胶质细胞大麻素Ⅰ型受体(cannabinoid type 1 receptor, CB1R)表达特点。 方法取3月龄大鼠脑海马切片,进行胶质纤维酸性蛋白(GFAP)和CB1R荧光免疫荧光双标染色;同时取刚出生大鼠鼠脑进行原代、传代培养,获取高纯度星形胶质细胞,行GFAP和CB1R免疫荧光双标染色。所有标本在激光共聚焦显微镜下,观察星形胶质细胞CB1R表达状况。 结果大鼠在体海马切片染色显示,CB1R呈点状分布于海马CA1区,尤其以锥体细胞层明显,GFAP标记的星形胶质细胞CB1R呈阴性表达;而培养中的GFAP标记阳性的星形胶质细胞,CB1R呈阳性表达,且主要集中在细胞核周围分布。 结论在体海马和细胞培养中的星形胶质细胞CB1R表达不同,与生理状态比较,细胞培养状态下星形胶质细胞CB1R表达存在明显改变。     

脂质体介al,4—GalT反义寡核苷酸对人脑胶质瘤细胞系SWO—38的作用

目的：研究α1,4半乳糖糖基转移酶（αl,4Gal T）基因反义寡核 （antisense oligonucleotide,ASO)对脑胶质瘤细胞系SWO－38细胞的增值与凋亡的影响和与Fas表达的关系。方法：采用脂质体介导的基因转染方法将αl,4Gal T基因ASO转入SWO－38细胞中。应用RT－PCR检测对αl,4Gal TmRNA表达的影响，克隆形成试验检测对细胞增值的作用，流式细胞术（FCM）和琼脂糖凝胶电泳检测细胞凋亡的发生，FACS地亡相关蛋白Fas表达的变化。结果；脂质体介导的ASO转染后，经RT－PCR检测证实αl,4Gal TmRNA基因的表达下降；克隆形成试验显示细胞生长明显受到抑制（P＜0．01）；DNA电泳图像呈凋亡;FCM,地入αl,4Gal T基因ASO的SWO－38细胞的凋亡明显增加（P＜0．01）；Fas蛋白表达水平明显下降（P＜0．01）。结论：αl,4Gal T基因ASO可诱导脑胶质瘤细胞系SWO－38细胞凋亡发生，其机制可能与fas基因调控有关。     

过氧化物酶体增殖物激活受体γ在胶质瘤中的表达

目的 探讨胶质瘤组织及细胞株中过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)的表达及其意义.方法 应用免疫组化检测40例胶质瘤中PPARγ蛋白的表达;Western blotting检测3株胶质瘤细胞SWO-38、U251和SHG-44中PPARγ及神经胶质酸性蛋白蛋白的表达;RT-PCR检测3株胶质瘤细胞PPARγ mRNA的表达.结果 PPARγ在胶质瘤组织中阳性表达率为37.5%,与肿瘤的分化程度无明显相关性(P=0.154);PPARγ蛋白及mRNA在SWO-38和U251中表达,而SHG-44不表达:神经胶质酸性蛋白则在SHG-44中高表达.结论 PPARγ可能与胶质瘤的发生相关,可为胶质瘤治疗提供新的靶点.     

大鼠星形胶质细胞与C6胶质瘤细胞的蛋白质组学分析

目的探讨星形胶质瘤细胞与星形胶质细胞间的蛋白谱变化。方法选择星形细胞来源的C6胶质瘤细胞和体外培养纯化大鼠皮层的星形胶质细胞进行蛋白组学分析。星形细胞和C6细胞双向凝胶电泳（2-DE）的凝胶图像用PDQuest软件比较,差异蛋白质点进行基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱（MALDI-TOF-MS）和生物信息分析,部分蛋白质的差异表达结果用半定量逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）验证。结果获得了24个有明显表达变化的蛋白点;17个蛋白质得到质谱结果,与星形胶质细胞相比,经生物信息学分析确认的6个蛋白质中,磷酸甘油酸变位酶1、生物转化酶、谷胱甘肽S-转移酶P、钙网织蛋白和膜联蛋白A2在C6细胞中表达量较高,而波形蛋白和肌动蛋白γ-肌动蛋白在C6细胞中表达量较低。磷酸甘油酸变位酶1、膜联蛋白A2和波形蛋白经半定量RT-PCR验证与2-DE结果相符。结论本研究发现的差异表达蛋白质与许多重要的细胞生理活动和功能有密切关系,包括无氧酵解过程、细胞骨架组装、生物转化和信号转导,可能与胶质瘤的生长迅速、浸润迁移和抗药性相关。     

改良鸡胚尿囊膜肿瘤实验动物模型及其生物学行为观察

目的利用鸡胚尿囊膜建立人移植瘤模型并观察其生物学行为和组织学形态已有报道。但是,在实际工作的过程中仍存在不少的问题。因此,通过改良的方法,获得简单,快捷,可重复的动物模型。方法将人胶质瘤SWO-38细胞滴加到鸡胚尿囊膜上,观察影响鸡胚的存活和成瘤的可能因素、移植瘤的生长特性和形态学特征。结果利用改良的方法成功建立胶质瘤鸡胚尿囊膜的模型;肿瘤组织能够诱导血管生成,镜下形态符合恶性胶质瘤的形态学特征。结论该模型简单,快捷,易于建立。便于观察肿瘤组织的生物学行为,可用于抗肿瘤的药物筛选。     

聚甲基丙烯酸甲酯静电纺丝纳米纤维对大鼠原代星形胶质细胞生长的影响

目的探讨聚甲基丙烯酸甲酯（polymethylmethacrylate, PMMA）电纺纳米纤维的拓扑线索对于大鼠原代星形胶质细胞生
长能力及方式的影响,为脊髓损伤后植入性细胞支架的构建提供前期基础。方法构建具有随机或有序拓扑结构的PMMA电
纺纳米纤维;分离并纯化大鼠原代星形胶质细胞;利用PMMA薄膜作为对照,利用慢病毒技术转染绿色荧光蛋白基因作为显色
手段,分析在星形胶质细胞不同拓扑结构纤维支架上的生长特点。结果随机及有序PMMA电纺纤维均能支持星形胶质细胞
的生长,其拓扑结构能够显著影响星形胶质细胞的生长方式,在有序纤维系统上细胞突起的生长方向能够和基质纤维的延伸方
向保持高度一致;通过绿色荧光蛋白和基质纤维的合成图,发现在两种拓扑结构的纤维系统上,细胞突起均能依附在纤维上向
远处延伸;较之PMMA薄膜,在有序纤维上的星形胶质细胞能生成更长的细胞突起（P<0.01）,而在随机纤维上的细胞则形成更
短的突起（P<0.01）。结论PMMA电纺纳米纤维的拓扑结构能够显著影响大鼠原代星形胶质细胞生长能力及方式,其作为植
入性支架具有减轻脊髓损伤后损伤灶胶质瘢痕形成的潜在价值。
     

N-糖基化抑制反应诱导胶质瘤细胞的早期凋亡

目的研究Ｎ－糖基化抑制对胶质瘤细胞生长状态的影响。方法以依霉素（ｔｕｎｉｃａｍｙｃｉｎ）为Ｎ－糖基化抑制剂,作用于人脑胶质瘤细胞株ＳＷＯ－３８,运用电镜技术及琼脂糖电泳,观察Ｎ－糖基化抑制对胶质瘤细胞生长的影响。结果依霉素作用于ＳＷＯ－３８细胞后,透射电镜下细胞出现线粒体等细胞器增殖,核仁消失,细胞团缩。琼脂糖电泳出现ＤＮＡ梯形条带。结论Ｎ－糖基化抑制可以诱导胶质瘤细胞的早期凋亡。     

大鼠睾丸支持细胞的微丝分布特征

采用TRITC—Phalloidin(鬼笔环肽)特异性染色和透射电镜方法,研究在体和离体培养的SD大鼠睾丸支持细胞的微丝分布规律。结果表明:在体支持细胞内微丝呈束状沿细胞膜下分布。在生精上皮基底部,微丝束聚集呈带状围绕于细胞基底部周缘,各束微丝相互平行;相邻支持细胞两侧膜下的微丝束排列走行基本对称一致。离体培养的支持细胞内微丝排布与细胞生活状态及铺展情况密切相关,在充分铺展细胞中微丝仍呈束状沿细胞膜下排列。证实沿细胞膜下成束排列是支持细胞内微丝分布的基本特征,这一特征对细胞整体形态及血一睾屏障的维持具有重要意义。     

VEGF对大鼠星形胶质细胞的缺氧保护作用及其机制

目的 观察缺氧对体外培养的大鼠星形胶质细胞的影响,探讨外源性血管内皮细胞生长因子（VEGF）对大鼠星形胶质细胞缺氧的保护作用及其可能的机制。方法 体外原代培养大鼠脊髓星形胶质细胞并鉴定（胶质原纤维酸性蛋白GFAP阳性）。星形胶质细胞分别经不同时间的缺氧处理、缺氧处理前加入不同浓度（10～100ng／ml）VEGF处理以及同时加入VEGF受体Flk一1阻断剂SU1498处理后,应用光镜、细胞计数、MTT法、TUNEL标记及免疫组化技术检测星形胶质细胞形态、细胞增殖活性和凋亡、VEGF和Flk-1的表达改变。结果 纯化培养1周的细胞,经鉴定其星形胶质细胞纯度达98％;8～12h缺氧可明显诱导星形胶质细胞活化,表现为细胞胞体变大、胞突变粗、GFAP表达升高,细胞增殖活性降低、凋亡指数增加、VEGF和Flk-1表达增加;缺氧处理前20～24h加入50ng／ml VEGF可使细胞活力明显增强,细胞凋亡指数明显降低,细胞缺氧损伤明显改善;而700ng／ml SU1498可明显阻断或抑制VEGF对星型胶质细胞的缺氧保护作用。结论 缺氧可诱导大鼠星形胶质细胞反应性活化,外源性VEGF可能通过VEGF受体Flk-1发挥对大鼠星形胶质细胞的缺氧保护作用。     

金属硫蛋白与恶性肿瘤关系的研究进展

金属硫蛋白(MTs)是一类小分子量蛋白质,与二价金属有高亲和性,广泛存在于生物界,富含半胱氨酸。近年来,MTs越来越受到医学界的重视,在许多肿瘤组织中都证实有MTs表达的上调,且与肿瘤的关系密切。目前多数学者认为MTs对肿瘤细胞的生长、转移、耐药起促进作用,预示着不良的预后。但也有不同的看法。