坐骨神经切断后胶质细胞源性神经营养因子mRNA的表达变化

目的探讨大鼠坐骨神经切断后,胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)mRNA在两侧断端的表达变化及其意义。方法采用Trizol一步法提取坐骨神经总RNA,取少量作紫外扫描分析和琼脂糖电泳分析,切断SD大鼠左侧坐骨神经,不同时间、半定量RT-PCR方法,观察两侧断端GDNFmRNA的表达变化。结果坐骨神经切断前,GDNFmRNA在两侧坐骨神经微量表达,为(6.5±1.3)%,坐骨神经切断后远断端表达逐渐增加,伤后1d(7.8±1.9)%,伤后7d(10.3±2.1)%,伤后14d(11.9±2.3)%,伤后28d(12.3±2.4)%,近断端表达逐渐减少,伤后1d(5.8±1.3)%,伤后7d(4.0±1.0)%,伤后14d(3.6±1.1)%,伤后28d(3.1±1.0)%。伤后1d与伤前比较(P>0.05,t=1.193,0.879),伤后7,14,28d与伤前比较(P<0.01,t=3.762,3.565,5.059,4.083,5.164,4.905)。结论GDNF在损伤信号的刺激下表达急剧增加,起到修复神经元的作用,为外源性GDNF治疗脊髓损伤提供了理论基础。     

胶质细胞源性神经营养因子对脊髓前角运动神经元的保护作用

目的：证实胶质源性神经营养因子(glial cell line—derived neurotrophic factor，GDNF)对脊髓前角运动神经元有保护作用。方法：切断SD大鼠一侧坐骨神经建立脊髓前角运动神经元损伤模型，借助单盲端硅胶管系统在损伤神经局部给予GDNF，术后不同时间分别取L5脊髓切片，利用酶组织化学染色方法显示胆碱酯酶和酸性磷酸酶(acid phosphatase，ACP)活性并进行图像分析。结果：坐骨神经切断后第4，9，16及21d，对照组和GDNF组胆碱酯酶活性分别为21．53&;#177;1．54和23．67&;#177;1．08(P&;lt;0．05)，19．82&;#177;1．35和22．87&;#177;1．04(P&;lt;0．01)．22．55&;#177;1．20和25．25&;#177;1．13(P&;lt;0．01)，25．52&;#177;1．43和28．92&;#177;1．37(P&;lt;0．01)：对照组和GDNF组ACP活性(平均灰度)分别为37．49&;#177;1．39和35．40&;#177;1．18(P&;lt;0．05)，40．94&;#177;1．38和38．43&;#177;1．31(P&;lt;0．05)，22．55&;#177;1．20和25．25&;#177;1．13(P&;lt;0．05)．37．15&;#177;1．52和34．68&;#177;1．43(P&;lt;0．05)结论：GDNF对损伤的脊髓前角运动神经元有保护作用。     

胶质细胞源性神经营养因子对脑出血大鼠神经功能的保护作用

目的：研究胶质细胞源性神经营养因子(glial cell line-derived neurotrophic faetor，GDNF)对脑出血大鼠的保护作用，探讨其发生机制。方法：克隆胚胎鼠的GDNF基因，构建pCDNA3-GDNF-GFP质粒，注射于大鼠脑出血部位。选用成年SD大鼠制备脑出血模型，共分9组，每组20只，假手术Ⅰ组，脑出血Ⅰ组，干预Ⅰ组观察大鼠行为学、脑组织含水量、Na^+，K^+离子浓度的变化；假手术Ⅱ组，脑出血Ⅱ组，干预Ⅱ组观察血脑屏障的改变；假手术Ⅲ组，脑出血Ⅲ组。干预Ⅲ组观察组织形态学和GDNF。阳性细胞的表达。结果：出血组和干预组相比，神经缺损评分在出血后24h为8．53&;#177;1．44和8．34&;#177;1．28(P&;gt;0．05)，72h，7d，14d为7．58&;#177;1．08，5．46&;#177;0．74，3．06&;#177;0．43和4．21&;#177;0．76，3．25&;#177;0．52，1．92&;#177;0．26(P&;lt;0．01)。72h，7d时脑组织含水量为(84．26&;#177;0．64)％，(80．38&;#177;0．86)％和(78．26&;#177;0．42)％，(77．51&;#177;0．33)％(P&;lt;0．01)。72h，7d时Na^+，K^+离子浓度两组比较，差异有显著性意义(P&;lt;0．01)。干预组坏死体积较出血组减小，GDNF阳性细胞表达明显增加(P&;lt;0．01)。结论：GDNF能改善出血大鼠行为学，减轻脑水肿，促进神经功能恢复，增加脑组织抗损伤能力，有一定的治疗意义。     

尼莫地平对大鼠坐骨神经损伤后脊髓神经元的保护作用

目的：研究尼莫地平对大鼠坐骨神经损伤后脊髓神经元的保护作用。方法：将50只成年SD大鼠，随机分成4组：假手术组(A组，n=5)；坐骨神经切断未干预组(B组，n=15)；生理盐水组(C组，n：15)；尼莫地平组(D组，n=15)。B，C及D3组又按切断右侧坐骨神经后4，9及16d取材时间分为3个时间组，每组5只大鼠，各时间组取大鼠的脊髓L5段．以TUNEL法检测细胞凋亡数，以免疫组化技术检测Bax的表达，苏木精一伊红染色计算脊髓内神经元的数目。结果：坐骨神经损伤后4，9及16d，C组凋亡细胞数目为(8．4&;#177;1．8)，(13．1&;#177;2．1)，(15．4&;#177;1．8)个／前角视野，明显多于D组(2.3&;#177;1．3)，(8．2&;#177;1．7)，(10．1&;#177;2．2)个／前角视野(P&;lt;0．01)；D组神经元存活率为(94．3&;#177;3．1)％。(85．4&;#177;3．1)％，(76，3&;#177;3．2)％，明显高于C组(84．1&;#177;4．5)％。(77．52．9)％，(67．0&;#177;3．5)％，差异有非常显著性意义(P&;lt;0．01)；D组Bax表达(-～+，+～++，+～++)低于c组(+，+～++，+++)；B与C组凋亡细胞数目、神经元存活率及Bax表达差异无显著性意义(P&;gt;0．05)。结论：尼莫地平可以减少坐骨神经损伤后脊髓神经元的凋亡及Bax的表达．因此，对脊髓神经元具有保护作用。     

面神经端侧吻合与端端吻合后神经再生质量的比较

目的：比较面神经损伤后端侧吻合与端端吻合方法效果。方法：在解放军总医院动物中心．用24只新西兰大耳白兔进行实验。左侧上颊神经切断后作端端吻合。右侧上颊神经切断后，远断端与下颊支侧方，外膜开窗处作支间端侧吻合。分别于术后1，2，3个月时作肌电图后取材，作组织学检查。结果：术后1，2个月时，端侧吻合肌电图神经传导速度慢于端端吻合[1个月时(10．6&;#177;2、20)，(15．7&;#177;2．13)m／s．2个月时(14.4&;#177;1.80)．(20．80&;#177;3．10)m／s,P&;lt;0．05]，术后3个月时端侧吻合肌电图神经传导速度与端端吻合差异无显著性意义[(22．8&;#177;2．40)．(23．20&;#177;2．14)m／s，P&;gt;0．05]。术后1，2个月时，端侧吻合有髓神经纤维数少于端端吻合[1个月时(34．16&;#177;4．24)，(44．28&;#177;3．04)个／高倍视野，2个月时(43．64&;#177;3．20)，(52．84&;#177;2．16)个／高倍视野，P&;lt;0．05]，术后3个月时端侧吻合有髓神经纤维数与端端吻合差异无显著性意义[(64．66&;#177;2．48)，(66．12&;#177;1．96)个／高倍视野，P&;gt;0．05]。结论：面神经断伤作端侧吻合后，早期神经再生质量不及端端吻合优良，晚期效果比较接近。     

电针对坐骨神经损伤大鼠背根节胶质源性神经营养因子表达的影响

目的：探讨电针对大鼠坐骨神经损伤后相应背根节神经胶质细胞源性神经营养因子(glial cell line derived neurotrophic factor，GDNF)表达的影响，以探讨电针对周围神经损伤的保护作用。方法：Wistar大鼠45只，5只为正常组，余40只行左侧坐骨神经切断外膜缝合。电针组每天穴位电针20min，模型组不作任何处理。再分4个亚组，每组5例。分别于术后1，2，4和8周处死，取材L6节段损伤侧背根节，免疫组化染色观测GDNF表达，并观察4周时感觉神经电生理。结果：电针组同侧背根节神经元GDNF表达伤后2周达到高峰，积分光密度值为0．699&;#177;0．053，与模型组0．419&;#177;0．093比较有显著意义(P&;lt;0．05)。伤后8周恢复正常对照水平；模型组背根节细胞GDNF表达伤后2周达到高峰保持至8周。相应的感觉神经潜伏期检查8周时电针组(0．56&;#177;0．89)ms，明显短于模型组(0．78&;#177;0．12)ms，且传导速度明显增加，波幅增大。结论：电针促进神经功能的恢复可能是通过增强脊神经节GDNF的表达而实现。     

睫状神经营养因子对外周神经损伤后运动神经元的保护作用

目的：研究睫状神经营养因子对大鼠坐骨神经损伤后运动神经的保护作用。方法：取成年SD大鼠27只，摸球法随机分为对照组、睫状神经营养因子(CNTF)组和生理盐水(NS)组。将大鼠右侧坐骨神经于梨状肌下缘0．5cm处锐性切断，硅胶管套接神经，将CNTF和生理盐水(NS)分别加入管中。于术后3，6，12，24d取L4-6脊髓作TUNEL标记检测，切片作苏木精-伊红染色计算脊髓内神经元的数目。结果：与对照组相比，CNTF组的神经元数目有明显的改善，其脊髓运动神经元计数3，6，12，24d分别为(83．3&;#177;1．2)％，(85．1&;#177;1．3)％，(85．6&;#177;1．2)％，(82．4&;#177;1．5)％(P&;lt;0．05，t=0．328)，TUNEL标记运动神经元个数3，6，12，24d分别为(3．1&;#177;1．2)％，(8．8&;#177;1．5)％，(5．6&;#177;1．1)％，(4．5&;#177;1．7)％(P&;lt;0．05，t=0．614)。结论：CNTF通过抑制运动神经元的凋亡对周围神经损伤后脊髓前角运动神经元损害具有保护作用。     

电针对坐骨神经损伤大鼠脊髓生长相关蛋白-43mRNA表达的影响

目的：探讨电针对坐骨神经损伤大鼠的脊髓中神经生长相关蛋白-43(GAP-43)mRNA表达的影响。方法：60只Wistar大鼠制成坐骨神经损伤模型，经电针穴位刺激治疗后，用原位杂交技术观察坐骨神经相应脊髓节段GAP-43mRNA的表达。结果：电针组第1天阳性细胞数增多(23．5&;#177;4．1)个／mm^2，3d达高峰(46．8&;#177;6．8)个／mm^2，14d后明显减少(9．7&;#177;3．6)个／mm^2，28d后基本未见阳性细胞存在(1．O&;#177;1．2)个／mm^2；模型组第1天(16．3&;#177;2．9)个／mm^2至第7天(20．1&;#177;2．5)个／mm^2持续阳性细胞数增多，14d略减少(19．1&;#177;3．2)个／mm^2，28d后仍可见阳性细胞存在(8．5&;#177;2．O)个／mm^2。与电针组比较差异有显著性意义(t=2．36～4．25，P&;lt;O．05)。结论：穴位电针能增强并缩短GAP-43mRNA表达时间，有利于突触重建。     

兴奋性氨基酸受体对大鼠坐骨神经切断后脊髓神经细胞的影响

目的 通过建立神经再生室模型观察α—氨基—3—羧基—5—甲基—4，异噁唑丙酸(AMPA)受体对大鼠坐骨神经损伤后L3-6脊髓神经细胞凋亡及凋亡相关蛋白表达的影响。方法 雄性SD大鼠，随机分为4组：AMPA组，6—氰—7—硝基喹喔啉—2，3—二酮(CNQX)组，细胞内液组以及正常对照组，前3组手术切断右侧坐骨神经并用硅胶管套接，分别向套管内注入AMPA，CNQX，细胞内液5μl，术后1，2，4周应用TUNEL及免疫组化技术检测L3-6脊髓神经细胞凋亡及凋亡相关蛋白Bel-2、Bax表达的情况。结果 (1)不同时间段凋亡细胞检测结果：CNQX组[(4．9&;#177;0．8)％，(14．1&;#177;2．6)％，(4．4&;#177;0．6)％]，明显低于细胞内液组[(9．4&;#177;1．7)％，(19．3&;#177;1．7)％，(6．6&;#177;0．6)％]，AMPA组[(14．4&;#177;1．6)％，(25．7&;#177;1．3)％．(9．1&;#177;0．9)％]则高于细胞内液组，t=3．7-5．7．P均&;lt;0．01。(2)不同时闻段Bcl-2的表达：GNQX组[(13．1&;#177;2．3)％，(22．9&;#177;2．4)％．(10．3&;#177;2．7)％]高于细胞内液组[(9．0&;#177;1．9)％,(17．4&;#177;1．2)％，(7．7&;#177;1．7)％1，相反AMPA组[(5．04-0．9)％，(11．84-2．8)％，(4．54-1．1)％]则低于细胞内藏组，t=l.8—4．4，P&;lt;0．05—0．01。(3)不同时同段Bax的表达：CNQX组[(4．24-0．9)％，(12．54-1．3)％，(3．94-0．5)％]低于细胞内藏组[(7．94-3．0)％，(16．84-1．5)％，(6．94-1．6)％]。而AMPA组[(11．84-2．0)％，(21．84-1．8)％，(10．54-1．8)％]则高于细胞内藏组，t=2．4—4．8，P&;lt;0．05—0．0l。结论 套管内注射AMPA受体拮抗剂CNQX，能有效增加脊髓神经元凋亡抑制蛋白Bcl-2的表达、降低促凋亡蛋白Bax的表达，从而减轻坐骨神经切断后脊髓神经细胞凋亡，保护脊髓神经元；而其激动剂AMPA则相反。     

切断周围神经后局部嗅鞘细胞移植对脊髓及神经节内神经元的作用

目的：观察周围神经切断后局部嗅鞘细胞移植对大鼠脊髓及神经节内神经元的作用，为嗅鞘细胞移植治疗周围神经损伤提供实验依据。 方法：实验于2005—08／2006—01在西安交通大学医学院动物实验中心完成。选用健康成年SD大鼠55只，随机数字表法分为3组：对照组25只．实验组25只、空白组5只。①对照组与实验组大鼠在坐骨切迹处游离坐骨神经的各分支，在远端切断，在半腱肌内侧肌膜上切口，将坐骨神经近断端的各游离分支包埋进肌肉，神经外膜与肌膜缝合固定，实验组在缝合口两侧2mm处肌肉中各注射1&;#215;10^9L^-1的嗅鞘细胞0．1mL，对照组注射细胞培养液DMEM。空白组仅暴露坐骨神经而不进行切断。②术后1，2，3，7和14d，分批处死对照组和实验组大鼠，每次5只，空白组于14d后处死，分别进行病理及TUNEL法观察神经元的改变。 结果：实验共选用大鼠55只，全部进入结果分析。①坐骨神经损伤后各组不同时间点苏木精-伊红染色观察伤侧前角运动神经元存活率变化：术后7，14d，实验组大鼠脊髓前角运动神经元的形态改变与对照组相似，但变性数目明显少于对照组，存活神经元数目明显多于对照组（P〈0．01）。②坐骨神经切断后各组坐骨神经损伤侧前角运动神经元凋亡指数变化：在术后第3，7，14天，对照组明显多于实验组[（21&;#177;1．1）％，（1．2&;#177;0．8）％；（3．1&;#177;1．1）％，（1．4&;#177;0．6）％；（6．1&;#177;1．8）％，（4．1&;#177;1.3）％，P〈0．05]。③坐骨神经切断后各组坐骨神经损伤侧神经节神经元凋亡指数变化：7，14d时，实验组的神经节内的感觉神经元凋亡阳性细胞要较对照组少[（2．1&;#177;0.32）％，（4．4&;#177;0．56）％；（4．3&;#177;1．8）％，（6．7&;#177;2．5）％，P〈0．05]。 结论：在周围神经损伤后脊髓及神经节内神经元有凋亡发生，嗅鞘细胞移植对神经元凋亡有保护作用。     

不同浓度雌二醇对骨髓基质细胞分化过程中Cbfa1和PPAR-γ2 mRNA表达的影响

背量：绝经后骨质疏松的病理生理机制尚未完全阐明，研究表明骨丢失与雌激素缺乏相关，后者可导致多种细胞因子生成增加，继而引起成骨细胞和破骨细胞生成增多。骨吸收增强。雌二醇能否改变骨髓基质细胞分化过程中Cbfa1和PPAR-γ2 mRNA的表达进而影响其向成骨细胞分化尚不清楚。目的：研究骨髓基质细胞在向成骨细胞分化的介质中，17β-雌二醇对其核结合因子a1(Cbfa1)及过氧化物酶增殖活化受体γ2(PPAR-γ2)mRNA表达的影响，探讨雌二醇对成骨细胞生成的作用。设计：非随机对照研究。地点和对象：所有实验均在成都军区总医院检验科和成都百奥生物技术有限公司完成，分离骨髓基质细胞所需大鼠由成都中医药大学实验动物研究中心提供。干预：1，25(OH)2D3和地塞米松诱导大鼠骨髓基质细胞向成骨细胞分化，用不同浓度[(O-1)&;#215;10^-6mol／L]雌二醇对细胞分化过程进行干预。主要观察指标：应用半定量RT-PCR及Northern blot技术，观察不同浓度雌二醇对骨髓基质细胞分化过程中Cbfa1及PPAR-γ2 mRNA表达的影响。结果：雌二醇能明显抑制骨髓基质细胞分化过程中Cbfa1 mRNA的表达，雌二醇浓度为[(O-1)&;#215;10^-6mol／L]时，Cbfa1 mRNA的表达量从(25．0&;#177;3．3)％降至(19．8&;#177;2．2)％(t=2．62，P&;lt;0．05)，(14．5&;#177;1．3)％(t=5．92,P&;lt;0．01)和(6．5&;#177;1．9)％(t=9．72，P&;lt;0．01)；雌二醇能明显促进骨髓基质细胞在分化介质中PPAR-γ2 mRNA的表达，在上述雌二醇浓度时。PPAR-γ2 mRNA的表达从(1．75&;#177;0．5)％增至(9．5&;#177;2．1)％(t=7．18，P&;lt;0．01)和(19．3&;#177;3．0)％(t=11．5，P&;lt;0．01)；Northern blot结果显示随着雌二醇浓度的增加，Cbfa1 mRNA的表达量从4．42&;#177;0．39降至1．88&;#177;0．16(t=12．0，P&;lt;0．01)和1．19&;#177;0．11(t=15．8，P&;lt;0．01)；PPAR-γ2 mRNA的表达量从1．31&;#177;0．12增至2．81&;#177;0．22(t=10．5,P&;lt;0．01)和4．02&;#177;0．36(t=14．2，P&;lt;0．01)。细胞ALP活性明显受雌二醇的抑制，在上述雌二醇浓度时ALP的活性从(42．6&;#177;2．5)降至(3．6&;#177;0．7)U／g蛋白(t=29，P&;lt;0．01)。Ⅰ型胶原含量均随雌二醇浓度增加而降低。结论：雌二醇抑制体外培养的骨髓基质细胞向成骨细胞分化而促进其向脂肪细胞分化。     

雌二醇对骨形态发生蛋白受体表达的影响

目的：研究骨髓基质细胞向成骨细胞分化过程中，雌二醇对其骨形态发生蛋白受体(BMPR)IA，IB mRNA表达的影响，探讨雌二醇对成骨细胞生成的作用，试阐明绝经后高转换骨代谢始动环节的可能机制。方法：SD大鼠骨髓基质细胞在生长培养基中传代培养后，用1，25(OH)2D3和地塞米松(DEX)诱导骨髓基质细胞向成骨细胞分化，17β-雌二醇(E2)处理培养细胞，观察E2对骨髓基质细胞分化过程中骨形态发生蛋白受体IA、IB mRNA、碱性磷酸酶(ALP)活性和Ⅰ型胶原合成的影响，β-actin作内对照半定量RT-PCR分析骨形态发生蛋白受体IA，IB mRNA的表达，以α-磷酸奈酚为底物，测定细胞碱性磷酸酶的活性，Van Gieson染色法显示Ⅰ型腔原的含量。结果：E2能明显抑制骨髓基质细胞分化过程中BMPR-IA mRNA的表达，且呈剂量依赖性，随E2浓度增加(0～1&;#215;10^3nmol／L)BMPR-IA mRNA从(27．0&;#177;3．4)％降至(17．0&;#177;1．8)％(t=5．2，P&;lt;0．01)和(9．3&;#177;1．6)％(t=9．2，P&;lt;0．01)；BMPR-IB mRNA随E2浓度增加而增加，从(2．0&;#177;0．8)％增至(4．8&;#177;1．5)％(t=3．3，P&;lt;0．05)和(17．2&;#177;2．2)％(t=13，P&;lt;0．01)。Northernblot结果显示在上述E2浓度时BMPR-IA mRNA的表达从4．21&;#177;0．36降至1．24&;#177;0．10(t=18．2，P&;lt;0．01)；BMPR-IB mRNA的表达从1．72&;#177;0．11增至3．73&;#177;0．31(t=12．2，P&;lt;0．01)。ALP活性随E2浓度增加而降低，从(42．6&;#177;2．5)U／g蛋白降至(17．9&;#177;2．0)U／g蛋白(t=15，P&;lt;0．01)，(10．8&;#177;1．5)U／g蛋白（t=22，P&;lt;0．01)和(3．6&;#177;0．7)U原蛋白(t=30，P&;lt;0．01)；细胞I型胶原的含量随E2浓度增加而减少。VanGieson染色由鲜红、淡红到黄色，红色越深，表明胶原越多。绪论：E2能明显抑制骨髓基质细胞分化过程中BMPR-IA mRNA的表达，降低ALP的活性和Ⅰ型胶原含量，增加BMPR-IB mRNA的表达)。     

运动训练对周围神经损伤大白鼠神经功能恢复的影响

目的：研究在周围神经损伤的动物模型上，运动训练对神经功能恢复的影响。方法：实验在延边医学院附属医院中心实验室完成。用60只Wistar雄性大白鼠，分离出坐骨神经，在胫神经和腓神经分支前的部位用止血钳压迫制造坐骨神经损伤模型，实验动物分为3组，利用动物用电动跑步机调节运动负荷量进行运动训练，第1实验组(n=20)在15&;#176;顷斜度和12m／min的速度下运动，第2实验组(n=20)在30&;#176;斜度和24m／rain的运动速度下运动，另一组(n=20)为对照组。两实验组在神经损伤后第2周开始行25min／d，共3周的运动训练，分别测定倾斜台上维持姿势的最大角度，坐骨神经功能指数(SFI)行动学检查及神经传导速度。结果：在倾斜台上能保持原有姿势的最大角度，两实验组(85．0&;#177;1．0)&;#176;，(85．1&;#177;1．3)&;#176;均比对照组(75．8&;#177;2．2)&;#176;增高(P&;lt;0．05)，但两实验组之间差异无显著性意义(P&;gt;0．05)。第2实验组的SFI值(-14．1&;#177;1．3)％比第1实验组的SFI值(-19．1&;#177;1．0)％减少(P&;lt;0．05)。两实验组的潜伏期(119．6&;#177;8．1)％。(118．7&;#177;3．6)％均比对照组(167．2&;#177;5．8)％缩短(P&;lt;0．05)，但两组间无差异，损伤后的第4周第2实验组的波幅(50．6&;#177;1．9)％比另一实验组(45．7&;#177;2．2)％增高(P&;lt;0．01)。结论：坐骨神经受损伤大白鼠进行运动训练能促进其运动功能的恢复。在神经再生时期，随着运动负荷量的增加可加速其运动功能的恢复。     

实验性糖尿病大鼠胰岛素样生长因子—1基因表达异常与神经电生理及外周神经病变

目的：探讨糖尿病时肝组织胰岛素样生长因子-1(IGF-1)基因表达的异常及其与糖尿病外周神经病变的关系。方法：分离解剖出右侧坐骨神经，测定诱发电位出现的波幅(amplitude of eyoked potentials，AEP)、感觉及运动神经传导速度(sensoxy／motor nerve conduction velocity，SNCV／MNCV)，用四氧嘧啶诱发糖尿病SD大鼠模型。48只糖尿病大鼠按经(胰岛素)控制后血糖水平分成3组：ID—1，2,3组，16只正常大鼠用作对照组。反转录一多聚酶链扩增反应半定量分析坐骨神经IGF-1 mRNA含量；酶联免疫吸附法分析组织IGF-1肽含量；诱发肌电图测定坐骨神经电生理指标；观察坐骨神经形态学改变。结果：病程早期(2周，2个月)，正常对照组、ID-2组大鼠肝组织IGF-1 mRNA含量(1．15&;#177;0．090，0．79&;#177;0．048，P&;lt;0．001；1．17&;#177;0．069，0．53&;#177;0．023，P&;lt;0．001)、肽含量均下降[(196．66&;#177;14．9)，(128．2&;#177;11．25)μg／g，P&;lt;0．001；(196．66&;#177;14．9)，(74．43&;#177;5．33)μg/g，P&;lt;0．001]出现在相应糖尿病组大鼠坐骨神经电生理指标异常之前，程度均随糖尿病控制状态而异，且随病程进一步逐渐下降[IGF—1 mRNA(0．71&;#177;0．024)～(0．47&;#177;0．021)；IGF-1肽(114．35&;#177;8．09)～(64．58&;#177;3．89)μg／g,P&;lt;0．001]。血清IGF-1呈一致性下降(r=0．99，P&;lt;0．001)。其变化与坐骨神经功能改变(感觉神经：r=0．54,P&;lt;0．05，运动神经：r=0．49,P&;lt;0．05)、组织形态异常关系密切(神经纤维密度r=0．68，P&;lt;0．05)，血糖正常糖尿病组大鼠与正常对照组间上述指标差异无显著性意义。结论：糖尿病早期即出现肝组织IGF-1基因表达下降，程度依糖尿病严重状态而异并随疾病进程加重，血清IGF-1水平相应地出现变化，提示肝组织为血循环IGF—1的主要来源。这种表达异常可能导致外周神经病变发生和发展。     

新生大鼠缺氧缺血性脑损伤时血红素氧化酶-1mRNA及其蛋白的表达

探讨新生大鼠缺氧缺血性脑损伤(hypoxic-ischemia brain damage。HIBD)后海马区血红素氧化酶-1(heine oxygenase-1，HO-1)mRNA和蛋白表达的变化及作用。方法：7d龄sD仔鼠72只，完全随机分为HIBD组和假手术对照组。用原位杂交及免疫组化观测两组在不同时间点海马区HO-1mRNA及蛋白阳性细胞数量的变化。结果：HIBD组右侧海马HO-1mRNA表达4h开始升高(42．8&;#177;6．1，t=25，P&;lt;0．05)，12h达高峰(85．7&;#177;6．4)，48h开始略有下降(67．7&;#177;6．1)，72h后(52．3&;#177;5．2)仍高于对照组(25．0&;#177;5．1，t=9．2，P&;lt;0．01)。HO-1蛋白的表达与HO-1 mRNA表达变化规律相一致。结论：HO-l mRNA及其蛋白表达的增加在新生大鼠缺氧缺血性脑损伤的发病机制中有重要作用。     

大鼠坐骨神经离断后功能和超微病理变化

目的 应用神经营养因子(NGF)观察大鼠坐骨神经离断再吻合后运动功能和病理变化，验证外周神经损伤后的NGF对神经元存活及再生的促进作用。方法 采用大鼠右侧坐骨神经在梨状肌下缘10mm处完全切断．将两断端用10-0无损伤缝线，缝合神经外膜对称缝合4针，实验分为NGF组和生理盐水对照组。损伤后，每日给肌注NGF(5mg／L共20μl)和生理盐水(20μl)。结果 诱发电位判断运动电位(MEP)损伤后30d观察．治疗组(5．8&;#177;1．7)ms，对照组(17．5&;#177;24)ms，治疗组比生理盐水对照组潜伏期缩短(P&;lt;0．05，t=43．5)。感觉电位(SEP)损伤后30d观察，治疗组(9．4&;#177;2．8)ms,对照组(19．1&;#177;2．7)ms，治疗组比对照组潜伏期缩短(P&;lt;0．05，t=5．1)。光镜观察髓鞘肿胀变性，炎细胞浸润再生纤维增多。电镜：损伤组脱髓鞘变化轴浆基质变性，线粒体肿胀较重，治疗组比对照组病理变化程度减轻，但仍有脱髓鞘和结构排列紊乱等变化。结论 NGF可促进神经膜细胞增殖分化，为神经再生提供有效的微环境。     

预先电刺激小脑顶核对缺血心肌神经生长因子基因表达的影响

目的：观察预先电刺激小脑顶核对心肌梗死大鼠心脏神经生长因子mRNA表达的影响。方法：实验于2003—03／06在重庆医科大学附属第一医院心血管疾病研究所完成。选用Wistar大鼠98只。将其中90只随机分为3组，每组30只：①心肌梗死组。结扎左冠状动脉前降支。②电刺激小脑顶核组，预先电刺激小脑顶核1h再予以左冠状动脉前降支结扎。③毁损小脑顶核组，毁损小脑顶核5d后电刺激小脑顶核1h，再行左冠状动脉前降支结扎。又分左冠状动脉前降支结扎后1。7，21d3个时间点，各10只。另设假手术组(n=8)。各组于相应时间点处死大鼠后，取心肌梗死区和非梗死区组织标本，用反转录一聚合酶链反应技术检测标本神经生长因子mRNA表达。结果：去除死亡、心肌未梗死、小脑顶核电刺激或毁损失败的大鼠。最终54只大鼠资料完整。心肌梗死组、电刺激小脑顶核组、毁损小脑顶核组、假手术组分别为13。20，13，8只。①结扎左冠状动脉前降支后1，7，21d，梗死区神经生长因子mRNA表达量：心肌梗死组明显低于假手术组(q=10．047，13．869。7．044，P&;lt;0．01)；电刺激小脑顶核组明显高于心肌梗死组(0．42&;#177;0．07，0．46&;#177;0．07，0．51&;#177;0．08；0．26&;#177;0．08。0．19&;#177;0．06．0．36&;#177;0．07，q=5．358，9．888，4．822，P&;lt;0．01)；毁损小脑顶核组与心肌梗死组比较无明显差异(P&;gt;0．05)。②心肌非梗死区1，7，21d神经生长因子mRNA表达：心肌梗死组均明显低于假手术组和电刺激小脑顶核组(0．36&;#177;0．07，0．30&;#177;0．07，0．36&;#177;0．07；0，56&;#177;0．07。0．56&;#177;0．07．0．56&;#177;0．07；0．49&;#177;0．09，0．46&;#177;0．08，0．59&;#177;0．09，q：4．099～8．947，P&;lt;0．01)；毁损小脑顶核组神经生长因子mRNA的表达量与心肌梗死组比较无明显差异(P&;gt;0．05)。结论：大鼠心肌梗死后梗死区与非梗死区神经生长因子mRNA表达下调，电刺激小脑顶核可上调神经生长因子mRNA表达，起到神经保护作用。     

胶质细胞源性神经营养因子在坐骨神经切断后的表达变化

目的探讨大鼠坐骨神经切断后胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)mRNA在远侧断端的表达变化及其意义.方法切断SD大鼠左侧坐骨神经,不同时间、半定量RT-PCR方法,观察远侧断端GDNFmRNA的表达变化.结果GDNFmRNA在坐骨神经切断前微量表达,坐骨神经切断后远断端表达逐渐增加(1、7、14、28d分别增加20%、60%、85%、90%).结论坐骨神经切断导致“胞体-轴突-靶器官”轴中断,使靶组织产生GDNF聚集于坐骨神经远断端,表现为GDNFmRNA高表达.     

碱性成纤维生长因子的表达对大鼠视神经损伤修复的意义

目的：观察碱性成纤维生长因子(hFGF)在视神经中的表达及在视神经损伤后的反应和作用。方法：健康Wistar大鼠20只，雌雄不拘，按处理方式随机分为3组，视神经钳夹伤8只(A组)，假伤对照组8只(B组)，正常对照4只(C组)。采用大鼠球后视神经钳夹伤模型，利用免疫组化法和计算机图像分析技术，于术后1，3，7，14d检测视神经hFGF的表达。结果：损伤后胶质细胞排列紊乱，胞体增大。视神经损伤后(1，3，7，14d)bFGF阳性细胞表面积密度(％)分别为2．20&;#177;0．L8，2．18&;#177;0．17，2．29&;#177;0．45，2．32&;#177;0．37，与假伤组(1．52&;#177;0．33，1．51&;#177;0．37，1．50&;#177;0．42，1．48&;#177;0．32)和对照组(1．49&;#177;0．29，1．50土0．30，1．49&;#177;0．35，1．51&;#177;0．29)比较，差异有显著性意义(t=3．037—4．158，3．531—4．182，P(0．05)。结论：视神经损伤提高bFGF在视神经中的表达，对视神经损伤的修复具有积极的作用。     

大鼠坐骨神经损伤性疼痛的行为观察和背根神经节中生长相关蛋白表达的变化

目的：观测坐骨神经损伤对大鼠行为的改变，以及运用免疫组化技术观察大鼠坐骨神经损伤对相应背根神经节中生长相关蛋白表达的影响，探讨生长相关蛋白与神经损伤所致的自发性疼痛的关系。 方法：实验于2004-04／2005-04在汕头大学医学院第二附属医院外科和病理实验室完成。250只Wistar大鼠随机分成3组：神经切断组120只、神经压榨组120只、正常对照组10只；神经切断组，神经压榨组按存活时间不同再各分为3，7，14，21，30，60d6个亚组，每个亚组20只。用自噬评分方法观察大鼠神经损伤后的行为改变；并处死取材L5节段损伤侧背根神经节用免疫组化方法研究生长相关蛋白表达的变化。 结果：250只大鼠全部进入结果分析。①自噬评分：神经损伤后，神经切断各亚组自噬发生率均比神经压榨各亚组高，程度也较重。神经切断60d组自噬平均分为2．1，而神经压榨60d组仅为0．7分。②生长相关蛋白表达：神经切断组背根神经节生长相关蛋白免疫阳性标志平均吸光度表达伤后7d达高峰（0．614&;#177;0．004），持续到伤后60d仍有高表达（0.515&;#177;0．004）；而神经压榨组伤后14d才达高峰（0．583&;#177;0．006），伤后21d即有所下降（0．563&;#177;0．008），伤后60d基本回复到正常水平（0．231&;#177;0．003）；正常对照组背根神经节仅有少量表达（0．225&;#177;0．005）。神经损伤后神经切断组、神经压榨组生长相关蛋白的表达与正常对照组比较差异有显著性意义（t=14．726，t=4．074，P≤0．05）；神经切断组、神经压榨组伤后的表达差异也存在显著性意义（t=3．357，P≤0．05）。 结论：不同的坐骨神经损伤方法所致的大鼠自噬程度和生长相关蛋白表达变化不同，提示神经源性疼痛的发生可能与神经的可塑性有关。