汉防己甲素抑制矽肺胶原mRNA表达的研究

在制备Ｐｒｏα１（Ｉ），Ｐｒｏα１（ＩＩＩ）胶原ｃＤＮＡ探针的基础上，采用斑点及原位分子杂交技术，观察汉防己甲素对矽组织中Ｉ，ＩＩＩ型胶原基因的ｍＲＮＡ的影响。结果表明染尘２，４个月的矽肺组织中Ｉ，ＩＩＩ型胶原ｍＲＮＡ的含量比正常肺组织明显增加（Ｐ＜０．０５），经汉防己甲素治疗后增高的Ｉ，ＩＩＩ型ｍＲＮＡ含量显著减少（Ｐ＜０．０５）。原位杂交显示，正常肺组织杂交颗粒主要分布于肺泡间隔的成纤维细胞中     

克矽平对矽肺大鼠Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA水平的影响

克矽平（Ｐｏｌｙｖｉｎｙｌｐｙｒｉｄｉｎｅ－Ｎ－ｏｘｉｄｅ，ＰＶＮＯ）是一种较为有效的抗矽肺药物。作者采用编码人Ⅰ、Ⅲ型胶原α１（Ⅰ）及α１（Ⅲ）链的ｃＤＮＡ探针，使用ｃＤＮＡ－ｍＲＮＡ斑点杂交技术，观察了染尘２个月、４个月及经克矽平治疗１、３个月的矽肺大鼠肺组织中Ⅰ、Ⅲ型胶原ｍＲＮＡ水平的改变情况。实验结果表明：大鼠染尘后２、４个月，肺组织中Ⅰ、Ⅲ型胶原ｍＲＮＡ水平较正常鼠肺组织有明显上升（Ｐ＜０．０５），经克矽平治疗后，Ⅰ、Ⅲ型胶原的ｍＲＮＡ水平显著下降。提示：克矽平对矽肺进程中胶原基因表达的增强有抑制作用。     

克矽平时矽肺大鼠Ⅰ,Ⅱ型胶原mRNA水平的影响

克矽平是一种较为有效的抗矽肺药物。作者采用编码人ⅠⅡ型胶原α１（Ⅰ）及α（Ⅲ）链的ｃＤＮＡ探针，使用ｃＤＮＡ－ｍＲＮＡ斑点杂交技术，观察了染尘２个月、４个月及经克矽平治病１、３个月的矽肺大鼠肺组织中Ⅰ、Ⅱ型胶原ｍＲＮＡ水平的改变情况。     

汉防己甲素对矽肺大鼠胶原代谢的作用

从胶原蛋白质水平和ｍＲＮＡ水平分析了汉防己甲素（汉甲）的抗纤维化作用。大鼠染石英尘后肺组织的全肺干重、全肺胶原含量以及血清中Ⅰ型胶原含量均上升，汉甲可以抑制以上各种指标的上升趋势。ｃＤＮＡ－ｍＲＮＡ原位杂交实验从转录水平上进一步证明，汉甲对胶原代谢的影响发生在胶原合成的起始阶段。以上结果对抗矽肺药物联合用药的配伍设计有理论意义     

汉防己甲素及克矽平对小鼠胶原mRNA的影响

汉防己甲素（汉甲）及克矽平（Ｐｏｌｙｖｉｎｙｌｐｙｒｉｄｉｎｅ－Ｎ－Ｏｘｉｄｅ，ＰＶＮＯ）是目前较为有效的两种抗矽肺药物。使用Ⅰ型和Ⅲ型胶原ｃＤＮＡ探针，以原位杂交的方法从胶原ｍＲＮＡ定位和定量的角度，探讨了汉甲及克矽平对矽肺组织中腔原转录的作用。结果表明汉甲及克矽平可抑制由石英粉尘吸入所导致的胶原表达增强。     

汉防已甲素对矽肺大鼠胶原代谢的作用

从胶原蛋白质水平和ｍＲＮＡ水平分析了汉防已甲素（汉甲）的抗纤维化作用。大鼠染石英尘后肺组织的全肺干重，全肺胶原含是到及血清中Ｉ型胶原含量均上升，汉甲可以抑制以上各种指标的上升趋势。ｃＤＮＡ－ｍＲＮＡ原位杂交实验从转录水平上进一步证明，汉甲对胶原低谢的影响发生在胶原合成的起始阶段。以上结果对抗矽肺药物联合用药的配合设计有理论意义。     

汉防己甲素治疗的矽肺大鼠肺内酸溶性胶原的变化

本研究比较了正常大鼠、矽肺大鼠和汉防己甲素治疗矽肺大鼠肺内酸溶性胶原在含量、羧甲基纤维素柱层析和氨基酸组成等方面的差异。矽肺大鼠肺中总胶原和酸溶性胶原的含量都增高。在酸溶性胶原中出现了与α_1(Ⅰ)不同的α_1(Ⅰ)~b峰,它随肺纤维化的程度而增高。汉甲组的酸溶性胶原中含有大量被降解的胶原片段,包括α_1链的前体。对上述结果作了初步讨论,并试图解释汉甲抑制矽肺纤维化发生的原因。矽肺组织中胶原蛋白大量增加,但人们对其组成特点却了解甚少。不久前,久保等报道了矽肺组织中胶原蛋白的类型。我们对矽肺大鼠肺中胶原的组成也做了一些观察。本文报道对矽肺大鼠,经汉防己甲素(简称汉甲)治疗的矽肺大鼠和正常大鼠肺中酸溶性胶原的含量、类型、羧甲基纤维素柱层析行为及若干组份的氨基酸组成的研究结果。酸溶性胶原是组织中可为稀酸提取的胶原,其主要成份是Ⅰ型胶原[α_1(Ⅰ)]_2α_2,为两种α肽链组成的三链螺旋。期望此项工作能为阐明二氧化矽引起肺纤维化和汉甲抑制矽肺纤维化的机理提供线索。     

川芎嗪治疗肺纤维化机制的探讨

目的：探讨中药川芎嗪治疗肺纤维化对Ⅰ、Ⅲ型前胶原［α１（ Ⅰ） 、α１（ Ⅲ）ｐｒｏｃｏｌｌａｇｅｎ，ＰＣ］ 基因表达的影响。方法：用博莱霉素Ａ５ 复制鼠肺纤维化模型后给予川芎嗪治疗，第２９ 天取肺组织做α１（ Ⅰ） 、α１（ Ⅲ）ＰＣｍ ＲＮＡ 原位杂交检测并进行图像分析定量。结果：川芎嗪治疗后α１（ Ⅰ）ＰＣｍ ＲＮＡ降至正常。结论：川芎嗪可能通过抑制α１（ Ⅰ）ＰＣ ｍＲＮＡ 而起到抗纤维化的作用。川芎嗪治疗肺纤维化患者，临床已取得一定疗效。     

矽肺大鼠血清中抗Ⅰ型与Ⅲ型胶原抗体测定的初步研究

本文采用竞争性酶联免疫吸附法(ELISA)检测了正常大鼠、矽肺大鼠及汉防己甲素-克矽平(简称汉甲-PVNO)联合治疗的矽肺大鼠血清中抗Ⅰ型胶原抗体及抗Ⅲ型胶原抗体的存在及含量。结果表明,大鼠血清中不存在抗Ⅰ型胶原抗体。实验前三周时各组大鼠体内均存在抗Ⅲ型胶原抗体。第四周时。正常鼠血清内不再存在抗Ⅲ型胶原抗体。汉甲-PVNO治疗组大鼠血清中抗Ⅲ型胶原抗体也消失,仅矽肺大鼠血清中有抗Ⅲ型胶原抗体继续存在。     

汉防己甲素对矽肺大鼠肺内脂类含量的影响

本文比较了正常大鼠、矽肺大鼠和汉防己甲素不同时间治疗的矽肺大鼠肺组织、肺冲洗物的湿重和脂类含量的差异。矽肺鼠肺组织、肺冲洗物的湿重和脂类含量均比正常鼠高,肺表面活性物增高显著;汉防己甲素治疗的矽肺大鼠肺组织、肺冲洗物湿重和脂类含量均较矽肺大鼠的低,肺表面活性物减低显著,但仍较正常鼠高。本文对其结果作了讨论,提出肺重肺脂可作为粉尘毒性指标,试图解释肺脂增高与肺纤维化的关系以及汉防己甲素的作用原理。     

中草药与汉防己甲素对大鼠矽肺转化生长因子-β1信号传导通路的影响

目的探讨芪丹颗粒剂与汉防己甲素治疗大鼠矽肺纤维化的疗效及其对转化生长因子β1（TGF-β1）信号传导通路的影响。方法将40只雄性Wistar大鼠随机分为对照组、模型组、芪丹颗粒剂治疗组（芪丹组）、汉防己甲素治疗组（汉甲组），每组各10只。对照组给予生理盐水（1ml）气管注入，其余各组采用气管注入染尘（50mg／只）造模。芪丹组和汉甲组分别从造模后第30天灌注芪丹颗粒剂（3125mg／kg）和汉防己甲素（22mg／kg），其余各组灌注等体积生理盐水，汉甲组每周给药6d，共给药3个月，其余各组每周给药7d，给药4个月；5个月后处死全部大鼠，计算大鼠肺系数；用碱水解法测定羟脯氨酸含量，用酶联免疫吸附测定法（ELISA）N定肺泡灌洗液中TGF—β1蛋白的表达，用免疫组化（SABC法）方法测定肺组织中TGF—β1、转录因子Smad3、转录因子Smad7蛋白表达；观察肺组织及肾脏病理改变。结果模型组肺组织主要以Ⅲ～Ⅳ级矽结节为主，芪丹组及汉甲组肺组织主要以Ⅱ级矽结节为主；芪丹组、汉甲组的肺系数、羟脯氨酸含量、支气管肺泡灌洗液及肺组织中TGF—β1和肺组织中转录因子Smad3的蛋白表达均低于模型组，差异有统计学意义（P〈0．05）；芪丹组、汉甲组肺组织中转录因子Smad7的蛋白表达（169．5±4．88）、（169．55±4．73）均高于模型组，差异有统计学意义（P〈O．05）；汉甲组大鼠出现肾损伤的病理改变。结论芪丹颗粒剂与汉防己甲素均可促进转录因子Smad7蛋白表达，抑制转录因子Smad3蛋白和TGF—β1蛋白表达，抑制矽肺纤维化的进展，芪丹颗粒剂无肾毒性。     

药物治疗矽肺血清Ⅰ型胶原水平的变化

报道了汉防己甲素（汉甲）、克矽平、抗矽一号（即磷酸羟基喹哌）和柠檬酸铝（柠铝）及其联合用药对矽肺大鼠和矽肺病人血清中Ⅰ型胶原含量的变化。在动物实验中，汉甲及克矽平对胶原代谢的作用较强且效果稳定。抗矽一号及柠铝对染尘时血清胶原含量上升也有抑制作用，但停药后有回升。临床观察也显示汉甲和抗矽一号联合用药可抑制矽肺进程中血清Ⅰ型胶原含量的升高     

矽肺及汉防己甲素治疗的大鼠肺中Ⅰ型胶原的免疫荧光研究

本文采用间接免疫荧光技术研究了矽肺大鼠和汉防己甲素(简称汉甲素)治疗矽肺的大鼠肺中Ⅰ型胶原的变化。Ⅰ型胶原是肺间质的重要成分。在发生矽肺纤维化时,肺泡间隔中的Ⅰ型胶原含量明显地高于正常的肺泡间隔。在矽结节中,可见到发射绿色荧光的Ⅰ型胶原纤维束排列致密,表明Ⅰ型胶原参与了矽肺纤维化。用汉甲素治疗后,矽肺纤维化受到抑制,胶原纤维松解、断裂,互相缠绕,说明汉甲素可减低胶原纤维的聚合程度,并对胶原有一定的降解作用。汉甲素治疗的大鼠矽肺中存在大量大细胞,大细胞胞浆内可见发射绿色荧光的Ⅰ型胶原,可能为大细胞所吞噬从而加速胶原的分解。     

染石英及石棉尘大鼠肺灌洗液SDS-PAGE测定

目的探讨尘肺发病机理。方法采用ＳＤＳ－聚丙烯酰胺凝胶电泳（ＳＤＳ－ＰＡＧＥ）技术对染石英（２５ｍｇ／只）或石棉尘（５ｍｇ／只）大鼠支气管肺泡灌洗液（ＢＡＬＦ）进行了测定,并在光镜下观察天狼星红染色肺组织Ⅰ、Ⅲ型胶原分布情况。结果染石英不同时间大鼠ＢＡＬＦ中存在５条分子量分别为９０,６６,６０,２５,１４ＫＤ的蛋白质条带。染石棉大鼠ＢＡＬＦ仅有一条带,分子量为６６ＫＤ。染石英两周时,大鼠肺组织细胞纤维性结节中即有少量Ⅰ型胶原沉积,２个月时Ⅰ型胶原明显增加、粗大。石棉组３个月时肺间质中有Ⅰ型胶原存在。两组均未见明显Ⅲ型胶原。结论染石英大鼠ＢＡＬＦ中不同分子量蛋白质的出现可能对矽肺的发生有一定的促进作用     

联合用药治疗实验性矽肺的研究

经动物实验及临床试用证实，克矽平、磷酸羟基哌喹、柠檬酸铝和汉防己甲素具有保护巨噬细胞、抑制矽性胶原化的作用。为探讨提高疗效、降低毒副反应，现提出不同或相同作用机制的药物联合用药治疗矽肺的设想。选用克矽平（气管注入）与汉防己甲素（口服）、柠檬酸铝（肌注）与磷酸羟基哌喹（口服）和汉防己甲素与磷酸羟基哌喹配合用药。联合用药组一种药物的剂量为各单独用药组的１／２，观察预防性治疗（３０～９０天）、病后治疗（９０～１８０天）及停药（９０天）后再治疗（９０天）对大鼠实验性矽肺的疗效。实验结果表明：在选用剂量条件下，各联合用药组，无论是预防性治疗还是病后治疗均表现出药效的相加作用——其疗效相当于或优于各相应单独用药组。停药后各组病变有不同程度的进展，联合用药组进展较缓；再给药后联合用药各组对病变恶化的控制作用优于相应的单独用药组。联合用药治疗矽肺的方案值得进一步讨论并推广应用     

化纤散结丸联合汉防己甲素治疗矽肺叁期临床疗效观察

将2019年1月至2020年12月在我院住院的129例矽肺叁期肺纤维化患者随机分成两组，在对症支持治疗的基础上，对照组给予汉防己甲素、观察组给予化纤散结丸联合汉防己甲素治疗，疗程均为6个月。结果显示，观察组患者咳嗽、胸闷、气短临床症状改善以及肺通气功能、血气分析、6 min步行试验（6 MWT）均优于对照组。提示化纤散结丸联合汉防己甲素治疗矽肺肺纤维化临床疗效良好，值得临床推广使用。     

汉防己甲素对胶原直接作用的体外研究

本文研究了汉防己甲素(简称汉甲素)对胶原蛋白的直接作用。将汉甲素与Ⅰ型胶原(1:1)在酸性条件或中性条件下共同保温24小时后,部分胶原与汉甲素结合产生沉淀。进一步用SDS-PAGE电泳法和Sepharose-6B分子筛层析法观察经汉甲素作用后上清液中胶原分子量的改变,发现Ⅰ型胶原的γ、β聚集体及α链均被解聚并分解,产生小分子肽链。证明汉甲素可以与胶原等大分子蛋白质结合,并将其分解。这可能是汉甲素减缓矽肺纤维化进程的原因之一。在小剂量汉甲素作用下(1mg汉甲素:167mgⅠ型胶原),胶原未受到明显降解。     

矽肺及汉防己甲素治疗的大鼠肺中——Ⅲ型胶原的免疫荧光研究

本文采用间接免疫荧光技术研究了矽肺大鼠和汉防已甲素(简称汉甲素)治疗矽肺的大鼠肺中Ⅲ型胶原的变化。Ⅲ型胶原分布于肺泡间隔中,在发生矽肺纤维化时,肺泡间隔中Ⅲ型胶原含量高于正常肺泡间隔,但增长程度低于Ⅰ型胶原。Ⅲ型胶原是矽肺胶原纤维组分之一,在胶原纤维之间也有分布。汉甲素治疗后,矽肺纤维化受到抑制。大细胞由矽结节外周向矽结节中心浸润,并吞噬降解Ⅲ型胶原,证明汉甲素有促进胶原分解代谢的作用。     

汉防己甲素与其他药物合用对大鼠实验性矽肺的疗效观察

<正> 我们以前的实验证明汉防己甲素(Tetrandrine)对实验性矽肺的疗效是明显的。但是在每天给20mg/kg的有效剂量灌胃给药六个月后,实验大鼠出现毒副反应。为了降低汉防己甲素的毒性,保持其疗效,我们采用汉防己甲素与其他药物联合用药的方法。本实验主要观察汉防己甲素分别与抗矽14或梯络龙(Tilorone)的联合用药及单用汉防己甲素,治疗大鼠实验性矽肺疗效之间的区别,进一步阐明联合用药的优点,为临     

矽肺大鼠和病人肺组织中Ⅰ型与Ⅲ型胶原纤维的分布及相对含量的研究

免疫酶标法用于观察肺组织中胶原的分布。显微分光光度法用于研究大鼠与矽肺病人的纤维化组织中Ⅰ型与Ⅲ型胶原的相对含量。染色中应用大鼠及人的抗Ⅰ型与Ⅲ型胶原多克隆抗体。Ⅰ型胶原分布于正常肺泡间隔及间质中。Ⅲ型胶原也在相同的部位存在。在由石英所致的大鼠纤维化肺组织中,Ⅰ型与Ⅲ型胶原在极度扩展的间质中聚集。Ⅲ型胶原是早期纤维化肺中主要增生的胶原。Ⅰ型胶原是纤维化后期主要增生的胶原。在矽肺病人肺组织中也见到同样的现象。染电焊烟尘的大鼠肺,直至180天以前,Ⅲ型胶原为主要积聚的胶原,而在180天以后,Ⅰ型胶原的增加才占优势。