套式PCR及测序方法用于痰标本中结核分枝杆菌rpoB耐药基因突变检测

目的应用套式PCR—DNA测序方法直接检测痰标本中结核分枝杆菌相关的rpoB基因突变，以期建立一种直接检测分枝杆菌耐利福平的快速方法，并评价其临床应用价值。方法采用套武PCR—DNA测序方法直接检测112例活动性肺结核患者和20例非结核性肺部疾病患者痰、标本中结核分枝杆菌rpoB基因突变情况。同份痰标本同时做涂片抗酸染色，罗氏培养及菌型鉴定。结果112例活动性肺结核患者痰标本套式PCR扩增87例呈阳性，产物DNA测序31例有rpoB基因突变。其中分离出耐利福平株的32例痰中29例发生了基因突变，耐药突变率90．6％（29／32），39例菌阴（涂阴培阴）痰中有2例发生突变。分离出对利福平敏感株的37例痰中未发生突变，20例非结核性肺部疾病患者痰标本套式PCR扩增均为阴性，特异性100％。结论套式PCR—DNA测序可望为直接检测临床痰标本中结核分枝杆菌耐利福平的准确、特异、快速的方法。     

四种结核分枝杆菌检测方法的临床应用评价

目的评估涂片、培养、PCR和增菌PCR检测结核分枝杆菌临床应用价值。方法对124例临床确诊的肺结核、可疑结核患者和非结核病人痰标本的涂片、培养、PCR和增菌PCR四种方法的检测结果进行比较。结果涂片、培养、PCR和4及7d的增菌PCR检测31例临床确诊的肺结核病人痰标本阳性率分别为22．5％、32．2％、54．8％、64．5％和87．1％；检测59例临床可疑肺结核病人痰标本阳性率分别为13．6％、18．6％、28．8％、37．3％和52．5％。比较四种方法的阳性检测率有显著性差异（P〈0．05）。检测34例非结核病人痰标本，涂片、培养均为阴性，而PCR和增菌PCR均有1例假阳性，假阳性率2．9％。比较PCR与增菌PCR对茵阳和菌阴病人的痰标本阳性检测率，有显著性差异（P〈0．05），而两种方法的假阳性率相同。结论增菌PCR检测结核分枝杆菌具有很高的敏感性和特异性，可作为结核病的有效辅助诊断方法之一。     

四种结核分枝杆菌检测方法的临床应用评价

目的评估涂片、培养、PCR和增菌PCR检测结核分枝杆菌临床应用价值。方法对124例临床确诊的肺结核、可疑结核患者和非结核病人痰标本的涂片、培养、PCR和增菌PCR四种方法的检测结果进行比较。结果涂片、培养、PCR和4及7d的增菌PCR检测31例临床确诊的肺结核病人痰标本阳性率分别为22.5%、32.2%、54.8%、64.5%和87.1%;检测59例临床可疑肺结核病人痰标本阳性率分别为13.6%、18.6%、28.8%、37.3%和52.5%。比较四种方法的阳性检测率有显著性差异(P<0.05)。检测34例非结核病人痰标本,涂片、培养均为阴性,而PCR和增菌PCR均有1例假阳性,假阳性率2.9%。比较PCR与增菌PCR对菌阳和菌阴病人的痰标本阳性检测率,有显著性差异(P<0.05),而两种方法的假阳性率相同。结论增菌PCR检测结核分枝杆菌具有很高的敏感性和特异性,可作为结核病的有效辅助诊断方法之一。     

四种方法诊断涂阴肺结核的临床应用价值探讨

痰涂片查到抗酸杆菌是确诊肺结核病的重要依据。但是我国有50％～70％的活动性肺结核病例痰涂片检查抗酸杆菌阴性，而这些患者可能也是传染源或发展为新的传染源。由于痰涂片阴性肺结核大多仅以临床症状及X线胸片作诊断，其特异性不高，存在过诊、漏诊等现象。本实验应用噬菌体扩增法（PhaB）及痰培养法检测痰涂片阴性（涂阴）肺结核患者痰标本中结核分枝杆菌，并结合血清结核抗体（LAM—IgG）检测和PPD皮肤试验，探讨其应用于临床诊断的可行性和适用性，报告如下。     

痰中结核杆菌的检测方法及临床意义

目的分析比较痰涂片、痰培养及FQ—PCR检测结核杆菌对肺结核的诊断价值。方法痰直接涂片和浓集涂片找抗酸杆菌;痰培养;FQ-PCR检测痰中TB-DNA。结果浓集法较直接法阳性率有大幅提高,培养阳性率较低,FQ—PCR法敏感度高且无假阳性。结论涂片检测结核杆菌提倡用浓集法,FQ—PCR检测痰中TB-DNA可以列入实验诊断的常规项目,涂片、培养及FQ-PCR法可以从不同的方面满足临床需要。     

套式PCR及测序方法用于痰标本中结核分枝杆菌rpoB耐药基因突变检测

目的应用套式PCR-DNA测序方法直接检测痰标本中结核分枝杆菌相关的rpoB基因突变,以期建立一种直接检测分枝杆菌耐利福平的快速方法,并评价其临床应用价值。方法采用套式PCR-DNA测序方法直接检测112例活动性肺结核患者和20例非结核性肺部疾病患者痰标本中结核分枝杆菌rpoB基因突变情况。同份痰标本同时做涂片抗酸染色,罗氏培养及菌型鉴定。结果112例活动性肺结核患者痰标本套式PCR扩增87例呈阳性,产物DNA测序31例有rpoB基因突变,其中分离出耐利福平株的32例痰中29例发生了基因突变,耐药突变率90.6%(29/32),39例菌阴(涂阴培阴)痰中有2例发生突变。分离出对利福平敏感株的37例痰中未发生突变,20例非结核性肺部疾病患者痰标本套式PCR扩增均为阴性,特异性100%。结论套式PCR-DNA测序可望为直接检测临床痰标本中结核分枝杆菌耐利福平的准确、特异、快速的方法。     

应用蛋白芯片技术快速诊断肺结核病的研究

目的评价结核分枝杆菌蛋白芯片在检测临床标本中结核分枝杆菌抗体的应用价值。方法应用结核分枝杆菌蛋白芯片检测117例结核病患者的血清标本、103例肺部其他疾病患者和健康入的血清标本，并与痰涂片镜检法相比较。结果在菌阳肺结核、菌阴肺结核中，结核分枝杆菌抗体芯片检测的阳性率分别是100％（26／26）、49．6％（45／91），在肺部其他疾病患者和健康人中，结核分枝杆菌抗体芯片检测的阴性率是98．1％（101／103）。结论结核分枝杆菌抗体检测蛋白芯片是一种集基因工程技术、芯片技术和免疫学技术的检测一体化的新型结核病快速诊断方法，具有简便、快速、大量、敏感性高和特异性强、检测成本较低的特点，是结核病、尤其是菌阴结核病辅助诊断的有效方法。     

应用磁纳米捕获-PCR技术检测痰液结核分枝杆菌的研究

目的采用磁纳米捕获技术富集痰液中的结核分枝杆菌,以提高PCR检测的灵敏度,快速诊断结核病。方法以普通PCR为对照,采用磁纳米捕获技术富集187份结核和非结核呼吸系统疾病患者痰标本中的结核分枝杆菌,进行PCR检测。结果 152份肺结核患者痰标本41份(27.0%)涂片抗酸染色阳性,72份(47.4%)普通PCR检测阳性,126份(82.9%)磁纳米捕获-PCR检测阳性。35份非结核呼吸系统疾病患者,痰标本中抗酸染色均为阴性,1份普通PCR和磁纳米捕获-PCR检测均阳性,该患者临床诊断肺部感染合并陈旧性肺结核。结论采用磁纳米捕获技术富集痰液中的结核分枝杆菌,可显著提高PCR检测的灵敏度。     

γ干扰素释放试验在肺结核和非结核分枝杆菌肺病鉴别诊断中的应用价值

目的 探讨结核分枝杆菌特异性γ干扰素释放试验（interferon gamma release assays,IGRAs）在鉴别诊断肺结核和非结核分枝杆菌（non-tuberculous mycobacteria,NTM）肺病中的应用价值.方法 选择深圳市第三人民医院2011年1月至2013年5月334例收住于肺科住院部感染了分枝杆菌的肺病患者.采用反向斑点杂交技术对334例分枝杆菌感染的肺病患者痰培养分离的分枝杆菌进行菌种鉴定;采用IGRAs测定患者外周血结核分枝杆菌抗原特异性γ干扰素（IFN-γ）应答;采用结核分枝杆菌特异性荧光定量PCR技术检测痰标本中结核分枝杆菌DNA.结果 在334例分枝杆菌感染的患者中,240例的菌株为结核分枝杆菌,94例为NTM; 240例肺结核患者中痰结核分枝杆菌DNA PCR检测阳性率为74.58％（179/240）,IGRAs检测阳性率为77.08％（185/240）;94例NTM肺病患者中,结核分枝杆菌DNA PCR检测阳性率为10.64％（10/94）,IGRAs检测阳性率为20.21％（19/94）.结核分枝杆菌DNA PCR和IGRAs检测鉴别诊断肺结核和NTM肺病的敏感度分别为74.58％（179/240）、77.08％（185/240）,特异度分别为89.36％（84/94）、79.79％（75/94）;两种方法联合检测肺结核的敏感度为%.75％（225/240）、特异度为77.66％（73/94）.结论 IGRAs对于鉴别肺结核和NTM肺病具有较好的应用价值,联合应用结核分枝杆菌DNA PCR和IGRAs可以显著增加鉴别诊断的准确性,对于早期抗结核药物的选择具有重要的指导意义.     

实时荧光核酸恒温放大检测（SAT）法对肺结核诊断价值的研究

目的 检测实时荧光核酸恒温放大检测（SAT）法对结核病诊断的作用。 方法 收集172例疑似肺结核患者的痰液标本2份/例,1份进行涂涂片金-胺染色,另一份进行罗氏培养基培养与菌种鉴定及SAT法检测结核分枝杆菌,如SAT法和培养结果不符合则使用痰荧光定量PCR法（FQ-PCR)进行复核。 结果 172例入组患者中有156例根据临床及实验室结果确诊为肺结核病。如果以Mtb培养鉴定结果和荧光PCR结果作为判定金标准,SAT检测的敏感度和特异度分别为97.8%（89/91）和97.5%（79/81）。如以临床诊断为标准,SAT诊断结核的敏感度为58.3%（91/156）,特异度为100.0％（16/16）。对于痰菌阳性肺结核患者,SAT 阳性率为84.9%（79/93）;对于痰菌阴性患者,SAT的阳性率为19.0%（12/63）。 结论 SAT法可以作为临床对结核病的辅助诊断方法。     

痰液标本结核分支杆菌RNA恒温扩增检测及临床应用

目的探讨实时荧光核酸恒温扩增检测法（SAT）在肺结核患者实验诊断中的应用。方法设计特异性引物和探针,建立并优化SAT检测体系,对131例临床确诊并接受治疗的肺结核患者、73例非结核性肺部感染者痰液标本中的结核分支杆菌（TB）RNA进行检测,并与PCR法检测TB DNA,痰培养法、痰涂片抗酸染色法检测TB的结果进行比较。结果 131例肺结核患者痰液标本中,SAT对TB检出率为52.67%,高于痰培养法（39.69%,P=0.035）和痰涂片抗酸染色法（35.11%,P=0.004）;以PCR法为参考标准,SAT的灵敏度、特异度、阳性预测值、阴性预测值依次是95.38%、90.91%、91.18%、95.24%。结论 SAT检测痰液标本中TB RNA灵敏度高,特异性强,操作简便、快速,具有临床推广应用价值。     

痰结核分枝杆菌DNA检测诊断肺结核的临床意义

目的评估痰结核分枝杆菌DNA检测诊断肺结核的可行性及临床意义。方法回顾性分析2016年5月—12月在我科住院的经痰结核分枝杆菌培养确诊的136例肺结核患者的临床资料,比较痰涂片找抗酸杆菌和痰结核分枝杆菌DNA检测2种方法的检出率。结果 136例确诊的肺结核患者中,痰涂片阳性的有64例(47.06%),痰结核分枝杆菌DNA检测阳性的88例(64.71%),痰结核分枝杆菌DNA检测阳性率明显高于痰涂片找抗酸杆菌(P0.05)。72例痰涂片阴性患者中痰结核分枝杆菌DNA检测阳性29例,占痰涂片阴性肺结核患者比例的40.28%。结论痰结核分枝杆菌DNA检测优于痰涂片找抗酸杆菌,能够辅助涂阳肺结核的诊断,并提高涂阴肺结核的诊断水平,是一种快速、敏感的病原学诊断方法。     

四种方法诊断涂阴肺结核的临床应用价值探讨

痰涂片查到抗酸杆菌是确诊肺结核病的重要依据。但是我国有50%～70%的活动性肺结核病例痰涂片检查抗酸杆菌阴性,而这些患者可能也是传染源或发展为新的传染源^[1]。由于痰涂片阴性肺结核大多仅以临床症状及X线胸片作诊断,其特异性不高,存在过诊、漏诊等现象。本实验应用噬菌体扩增法（PhaB）及痰培养法检测痰涂片阴性（涂阴）肺结核患者痰标本中结核分枝杆菌,并结合血清结核抗体（LAM-IgG）检测和PPD皮肤试验,探讨其应用于临床诊断的可行性和适用性,报告如下。     

SAT技术与荧光定量PCR在痰涂片阴性肺结核诊断中的价值研究

目的通过采用RNA恒温扩增实时检测技术(SAT-TB)与荧光定量PCR(FQ-PCR)两种不同类型的方法检测痰涂片阴性肺结核患者的肺泡灌洗液(BALF)标本,探讨两种检测方法的临床价值。方法采集2015年3月-2017年3月本院收治的疑似肺结核,且至少3次痰涂片结果为阴性的患者共1050例,其中531例肺结核为观察组,519例其他肺部疾病患者为对照组。以临床诊断为金标准,计算SAT-TB、FQ-PCR、结核分枝杆菌快速培养、抗酸杆菌染色等检测方式的各类评价指标,并进行比较。结果菌阴肺结核肺泡灌洗液抗酸杆菌染色、结核分枝杆菌快速培养、SAT-TB、FQ-PCR单独检测与SAT-TB联合FQ-PCR检测单阳、双阳的准确性分别为12. 99%、21. 28%、56. 69%、54. 24%、62. 52%、42. 37%,SAT-TB、FQ-PCR与SAT-TB联合FQ-PCR检测的诊断价值均具有统计学意义(P 0. 05);对痰涂片阴性的肺结核患者的肺泡灌洗液(BALF)诊断有价值,单阳 SAT-TB FQ-PCR双阳结核分枝杆菌快速培养抗酸杆菌染色。结论与细菌学检测方法比较,SAT-TB、FQ-PCR检测具有快速、敏感等优势,能显著缩短确诊时间,提高诊断的准确率,给痰涂阴性肺结核患者提供了有效的诊断手段和依据,值得临床推广应用。     

二代测序技术检测临床痰标本中结核分枝杆菌的初步评价CSCD

目的:评价二代测序(NGS)技术对临床痰标本中结核分枝杆菌的检测效能。方法:采用前瞻性研究方法,选取北京市疾病预防控制中心(北京结核病控制研究与防治所)2021年8—10月接诊的49例疑似肺结核患者痰标本,同时进行抗酸杆菌涂片镜检(简称“涂片”)、分枝杆菌培养(包含罗氏培养和MGIT 960液体培养;简称“培养”)、GeneXpert MTB/RIF(简称“Xpert”)和NGS技术检测结核分枝杆菌,比较4种方法检测不同分类患者阳性率差异,并以最终临床诊断为参照标准,评价4种检测方法的检测效能。结果:49例疑似肺结核患者中,最终肺结核诊断者40例(包括病原学确诊患者25例、病原学阴性临床诊断患者15例),非肺结核患者9例(包括肺炎6例,非结核分枝杆菌感染、慢性阻塞性肺疾病和哮喘各1例)。NGS技术检测49例疑似肺结核患者的阳性率[69.4%(34/49)]明显高于涂片[44.9%(22/49)]、培养[51.0%(25/49)]和Xpert[49.0%(24/49)],差异均有统计学意义(χ^(2)=17.614、17.018、20.753,P值均=0.000);检测病原学阴性肺结核患者的阳性检出率为46.7%(7/15)。以临床诊断结果为参照标准,涂片、培养、Xpert、NGS技术对49例疑似患者痰标本的检测敏感度分别为55.0%(22/40)、60.0%(24/40)、60.0%(24/40)、80.0%(32/40),特异度分别为9/9、8/9、9/9、7/9,一致率分别为63.3%(31/49)、65.3%(32/49)、67.3%(33/49)、79.6%(39/49),Kappa值分别为0.310、0.297、0.355、0.459。结论:以临床诊断为参考标准,NGS技术检测的敏感度最高,与临床诊断的一致性也最高,能够快速、高效检测痰标本中的结核分枝杆菌,可早期辅助诊断疑似肺结核患者。     

二代测序技术检测临床痰标本中结核分枝杆菌的初步评价

目的 评价二代测序(NGS)技术对临床痰标本中结核分枝杆菌的检测效能。方法采用前瞻性研究方法,选取北京市疾病预防控制中心(北京结核病控制研究与防治所)2021年8—10月接诊的49例疑似肺结核患者痰标本,同时进行抗酸杆菌涂片镜检(简称“涂片”)、分枝杆菌培养(包含罗氏培养和MGIT 960液体培养;简称“培养”)、GeneXpert MTB/RIF(简称“Xpert”)和NGS技术检测结核分枝杆菌,比较4种方法检测不同分类患者阳性率差异,并以最终临床诊断为参照标准,评价4种检测方法的检测效能。结果49例疑似肺结核患者中,最终肺结核诊断者40例(包括病原学确诊患者25例、病原学阴性临床诊断患者15例),非肺结核患者9例(包括肺炎6例,非结核分枝杆菌感染、慢性阻塞性肺疾病和哮喘各1例)。NGS技术检测49例疑似肺结核患者的阳性率[69.4%(34/49)]明显高于涂片[44.9%(22/49)]、培养[51.0%(25/49)]和Xpert[49.0%(24/49)],差异均有统计学意义(χ²=17.614、17.018、20.753,P值均=0.000);检测病原学阴性肺结核患者的阳性检出率为46.7%(7/15)。 以临床诊断结果为参照标准,涂片、培养、Xpert、NGS技术对49例疑似患者痰标本的检测敏感度分别为55.0%(22/40)、60.0%(24/40)、60.0%(24/40)、80.0%(32/40),特异度分别为9/9、8/9、9/9、7/9,一致率分别为63.3%(31/49)、65.3%(32/49)、67.3%(33/49)、79.6%(39/49),Kappa值分别为0.310、0.297、0.355、0.459。结论以临床诊断为参考标准,NGS技术检测的敏感度最高,与临床诊断的一致性也最高,能够快速、高效检测痰标本中的结核分枝杆菌,可早期辅助诊断疑似肺结核患者。     

耐GeneXpert MTB/RIF检测技术在肺结核诊断及利福平耐药分析中的应用研究

[摘要]?目的?探讨GeneXpert MTB/RIF检测技术在肺结核诊断中的应用价值。方法?以2020年7月—2021年6月在天门市第一人民医院治疗的疑似肺结核患者107例作为研究对象，所有患者均留取痰标本，进行痰涂片、痰培养、GeneXpert MTB/RIF检测、比例法药敏试验。以培养法和比例法药敏结果为金标准，计算GeneXpert MTB/RIF检测结核分枝杆菌（Mycobacterium tuberculosis，MTB）及其对于利福平耐药性检测的灵敏度、特异度、与金标准的的一致率。结果?107例疑似肺结核患者中，痰涂片阳性39例（36.45%），涂片阴性68例（63.55%）。以痰培养结果为金标准，GeneXpert MTB/RIF检测TBM的灵敏度为85.42%（41/48），特异度为88.14%（52/59）。GeneXpert MTB/RIF与痰培养诊断一致率为86.92%（93/107）；进一步分析，GeneXpert MTB/RIF检测痰涂片阳性患者MTB的灵敏度为97.22%（35/36），特异度为33.33%（1/3），检测涂片阴性患者MTB的灵敏度为50.00%（6/12），特异度为91.07%（51/56）。以比例法药敏结果为金标准，确认痰培养阳性36例患者中利福平耐药有4例（11.11%），敏感的有32例（88.89%）；GeneXpert MTB/RIF检测痰培养阳性患者利福平耐药的灵敏度为75.00%（3/4），特异度为93.75%（30/32）。GeneXpert MTB/RIF与比例法药敏试验一致率为91.67%。结论?GeneXpert MTB/RIF检测技术对于肺结核诊断以及利福平的耐药分析具有重要实用价值，可以作为金标准。     

聚合酶链反应在肺结核诊断上的临床应用

聚合酶链反应在肺结核诊断上的临床应用赵新芳，欧阳杰，张成军，赵学信，马英红，何恩泉采用聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术检测临床标本中的结核菌，并同涂片和培养法比较，以评价ＰＣＲ在肺结核诊断上的应用价值。临床标本收集：１７８份肺结核和３３份非结核肺部疾病痰标...     

荧光PCR探针熔解曲线技术检测痰标本结核分枝杆菌利福平耐药性的研究

目的:评价荧光PCR探针熔解曲线(fluorescent polymerase chain reaction probe melting curve, MeltPro)技术检测肺结核患者痰标本中结核分枝杆菌耐药性的临床应用价值。方法:收集2021年5月至2022年5月北京市疾病预防控制中心结核病门诊收治的GeneXpert MTB/RIF检测阳性的初治肺结核患者的痰标本,对每份标本同时进行涂片镜检、分枝杆菌分离培养、MeltPro技术利福平耐药性检测。分析痰标本荷菌量对MeltPro技术耐药性检测结果的影响;培养阳性菌株行利福平比例法药物敏感性试验(简称“药敏试验”),比较比例法药敏试验、GeneXpert MTB/RIF和MeltPro技术检测利福平耐药率的差异;并以培养阳性菌株利福平比例法药敏试验结果为参考标准,评价MeltPro技术耐药性检测的效能。结果:研究共收集结核分枝杆菌阳性合格痰标本158份(例),经分枝杆菌分离培养获得阳性菌株130株。MeltPro技术检测痰标本结核分枝杆菌利福平耐药的成功率为79.1%(125/158),且随着痰涂片结果等级的升高,检测成功率由“阴性...     

聚合酶链反应技术检测咽拭子标本中结核菌DNA的评价

为探讨聚合酶链反应（PCR）检测咽拭子标本中结核菌在诊断肺部疾病的价值。应用PCR法检测肺结核患者50例，非肺结核患者55例及100例正常健康人咽拭子标本中结核菌和咽拭子涂片找抗酸杆菌，并与痰涂片检查作比较。肺结核组、非肺结核组及正常健康人咽拭子PCR阳性率分别为60％、3O．9％及10％，涂片为6％、0％和0％。结核组及非结核组痰PCR阳，牲率为54％和10．9％，涂片为26％和0％。结果表明PCR检测咽拭子标本结核菌DNA是肺结核病早期诊断和鉴别诊断的一种有价值的检测手段。但应注意假阳性或假阴性出现的可能。