FAS和FASL基因在大鼠胸腺细胞凋亡时的表达及其意义

目的检测FAS和FASL基因在Wistar大鼠胸腺细胞凋亡的表达,探讨细胞凋亡调控基因在大鼠胸腺细胞凋亡时的作用。方法采用原位标记(TUNEL)法检测DNA单链或双链的裂解;应用免疫组织化学染色法,观察不同剂量糖皮质激素诱导的大鼠胸腺细胞凋亡时FAS和FASL基因的表达。结果镜观察地塞米松组TUNEL阳性细胞较多并且分散在皮质各处。免疫组织化学结果表明,正常对照组胸腺内FAS呈低表达,随着地塞米松剂量的增加FAS的表达成递增趋势,地塞米松各组与对照组比较差异有统计学意义(P0.05);正常对照组胸腺内FASL呈高表达,随着地塞米松剂量的增加FASL的表达成递减趋势,地塞米松各组与对照组比较差异有统计学意义(P0.05)。结论促凋亡蛋白FAS和抗凋亡蛋白FASL在糖皮质激素诱导引起的胸腺细胞凋亡调控中起重要作用。     

Protection of growth hormone on apoptosis of murine thymocytes induced by dexamethasone

目的:研究生长激素(GH)对地塞米松(Dex)诱导小鼠胸腺细胞凋亡的作用及机制.方法:建立地塞米松诱导小鼠胸腺细胞凋亡模型,通过观察小鼠胸腺指数的变化、形态学改变,TdT缺口末端标记(TUNEL)及流式细胞仪检测,研究生长激素影响胸腺细胞凋亡情况,并运用免疫组织化学观察生长激素对小鼠胸腺凋亡蛋白Bax和Bcl-2表达的调节.结果:经生长激素处理后,电镜下观察小鼠胸腺细胞凋亡现象明显改善;TUNEL检测和流式细胞仪检测结果显示,胸腺细胞凋亡数量减少;图像分析系统测定光密度值显示,生长激素处理组小鼠胸腺细胞中Bax表达较模型组降低,Bcl-2表达增加.结论:生长激素对地塞米松诱导的小鼠胸腺细胞凋亡具有一定的抑制作用,这种作用可以通过调节凋亡蛋白Bax、Bcl-2的表达等途径实现.     

产单核细胞李斯特菌诱导胸腺细胞凋亡及其基因调控

为研究产单核细胞李斯特菌 (LM )感染对小鼠胸腺细胞凋亡的诱导作用及胸腺细胞凋亡过程中的基因调控 ,小鼠经尾静脉注射LM后 ,以DNA琼脂糖凝胶电泳和流式细胞仪 (FCM )检测细胞凋亡及凋亡细胞的基因产物表达水平。结果表明LM能诱导小鼠胸腺细胞凋亡 ,琼脂糖凝胶电泳分析显示胸腺细胞出现典型的DNA“梯状带” ,FCM分析显示特征性的凋亡峰。胸腺细胞凋亡于LM (5× 10 5CFU )感染后 8h出现 ,48h达高峰。胸腺细胞凋亡百分率随LM感染剂量增加而增高。LM诱导小鼠胸腺细胞凋亡中p5 3、Bax及c myc基因表达产物明显增加 ,而Bcl 2基因表达产物水平无明显改变。提示LM以时间和剂量依赖方式诱导小鼠胸腺细胞凋亡 ,p5 3、Bax及c myc基因在LM诱导小鼠胸腺细胞凋亡的基因调控中起重要作用。     

GITRL在内毒素诱导的Kupffer细胞凋亡中的作用研究

目的:探讨糖皮质激素诱导的肿瘤坏死因子相关蛋白配体(GITRL)在脂多糖(LPS)诱导的Kupffer细胞(KCs)凋亡中的作用。方法:分离BALB/c小鼠的KCs,转染对照siR-NA或者GITRL siRNA 24 h后,分四组培养,分别为对照(Control)组:仅加入培养液;地塞米松(Dex)组:加入Dex10μmol/L;LPS组:加入LPS 1 mg/L;LPS+Dex组:加入LPS 1 mg/L和Dex 10μmol/L。24 h后用免疫细胞化学法检测GITRL蛋白的表达,应用Annexin V/PI双染标记和流式细胞术检测KCs的凋亡率。结果:LPS刺激增加了KCs GITRL的表达(P<0.05),然而地塞米松处理降低了LPS诱导的GITRL表达。LPS刺激诱导了KCs的凋亡,但是沉默GITRL基因或者地塞米松处理抑制了LPS诱导的凋亡(P<0.05)。结论:LPS可以诱导小鼠KCs的凋亡,其作用可能依赖于GITRL信号的转导。     

地塞米松通过抑制GITR/GITRL信号减轻脂多糖诱导的血管内皮细胞凋亡

目的本研究通过观察地塞米松对急性呼吸窘迫综合征(ARDS)小鼠模型肺部炎症反应及GITR/GITRL信号通路的影响,同时初步探讨地塞米松对LPS诱导人血管内皮细胞GITRL表达以及细胞凋亡的作用。方法制作ARDS动物模型后,取小鼠肺组织行常规HE染色,同时行免疫组化染色检测GITR/GITRL信号蛋白,另外行肺泡灌洗并收集灌洗液(bronchoalveolar lavage fluid,BALF)分类计数炎症细胞,ELISA检测BALF中的炎症因子。利用免疫荧光检测人血管内皮细胞GITRL的表达,另外用流式细胞学分析检测凋亡细胞比例。结果地塞米松明显减少模型小鼠BALF中的炎症细胞以及炎症因子,利用免疫组织化学方法检测实验小鼠肺组织中的GITR/GTIRL信号蛋白发现:对照组小鼠肺组织中有少许的炎性细胞表达GITR;ARDS模型模型组小鼠肺组织中可见明显GITR蛋白表达,主要表达于浸润的炎性细胞;地塞米松干预ARDS模型小鼠后肺组织中GITR表达明显减少;对照组小鼠肺组织中GITRL主要表达于血管内皮细胞,其他组织细胞有少量表达;ARDS模型组小鼠肺组织中可见明显GITRL蛋白表达;地塞米松干预ARDS模型小鼠后肺组织中GITRL表达明显减少。利用流式细胞学分析凋亡比例结果显示:IFN-α组血管内皮细胞凋亡细胞比例明显高于正常对照组,地塞米松干预IFN-α诱导的血管内皮细胞凋亡比例较单独IFN-α干预组明显减少。结论地塞米松减轻ARDS肺部炎症可能通过抑制GITR/GITRL信号减轻IFN-α诱导的血管内皮细胞凋亡来实现。     

饮水中二溴乙酸对小鼠免疫功能影响机制的研究

目的 探讨二溴乙酸对小鼠免疫功能影响的机制.方法 清洁级BALB/c小鼠40只,分为四组:即二溴乙酸5、20和50 mg/kg剂量组以及阴性对照.连续灌胃28 d后,检测脾和胸腺细胞因子白细胞介素(IL)-2、IL-4分泌水平,脾和胸腺内细胞凋亡率,以及凋亡相关基因(Fas,Bcl-2,TRAF-2和bax)和蛋白(Fas/FasL)的表达.结果 与阴性对照组相比,二溴乙酸染毒组脾细胞的IL-2分泌水平明显增加(P＜0.01)而胸腺细胞的IL-2分泌水平降低(50 mg/kg剂量组有统计学意义,P＜0.05),脾细胞和胸腺细胞的IL-4的分泌水平明显降低(P＜0.01).脾和胸腺细胞凋亡率明显增加.胸腺和脾内的Fas和TRAF2基因表达显著增加,Fas/FasL的蛋白表达显著增加,具有统计学意义(P均为＜0.05).结论 饮水中二溴乙酸对小鼠免疫器官的损伤是通过Fas/FasL途径诱导细胞凋亡.     

人参抑制小鼠胸腺细胞凋亡的实验研究

用大肠杆菌脂多糖（ＬＰＳ）所致小鼠胸腺细胞凋亡模型和琼脂糖凝胶电泳、流式细胞术及免疫组织化学等方法，研究不同浓度高丽人参水提取物体内对小鼠胸腺细胞的影响。结果表明，每只小鼠腹腔注射１０￣２０ｍｇ人参提取物可防止ＬＰＳ所致小鼠体重及胸腺减重，提高胸腺细胞存活力，抑制胸腺细胞ＤＮＡ降解和促凋亡蛋白Ｂａｘ的过量表达，免疫组织化学研究结果在蛋白水平上初步解释了人参抑制小鼠胸腺细胞凋亡的作用机制。     

地塞米松诱导小鼠胸腺凋亡的形态学及组织化学研究

地塞米松诱导小鼠胸腺凋亡的形态学及组织化学研究陈英杰孙品伟朱小辉（北京医科大学组织学与胚胎学系）采用半薄切片技术研究小鼠胸腺内细胞凋亡。对ＢＡＬＢ／ｃ小鼠腹腔内注射地塞米松诱发胸腺细胞凋亡，制成凋亡模型。于注射后１、７、１５、１９、３０ｈ取材，常规电...     

低剂量电离辐射诱导小鼠睾丸生精细胞凋亡及P53基因和蛋白表达

目的:研究低剂量电离辐射对小鼠睾丸生精细胞凋亡及 P53 基因和蛋白表达的影响。方法:应用密度梯度离心法分离不同种类生精细胞, 流式细胞术检测其细胞凋亡, 免疫组化法观察生精细胞P53蛋白表达, 原位杂交法观察其 P53 mRNA水平。结果:0.025-0.2 Gy X射线全身照射后, 生精细胞凋亡具有明显的细胞种类规律性。在较低剂量照射(0.025和0.05 Gy)时, 以精原细胞凋亡为主, 随照射剂量增加(0.075-0.2 Gy)逐渐累及精母细胞, 并且前者凋亡率明显高于后者, 很少累及精子细胞和精子。P53蛋白表达主要见于精原细胞和精母细胞, 并且前者阳性率高于后者, 随照射剂量增加, 其阳性率逐渐升高, 而精子细胞和精子阳性率较低; P53 mRNA表达在较低剂量照射(0.025 Gy)时, 主要以精母细胞和精子细胞为主, 随剂量增加(0.05-0.2 Gy)逐渐累及精原细胞。精原细胞和精母细胞 P53 mRNA表达呈明显的剂量依赖性关系, 但精子细胞表现不明显。结论:低剂量电离辐射可选择性诱导小鼠睾丸生精细胞凋亡, 具有明显的剂量和时程效应关系。提示, 这种选择性诱导凋亡调控机制可能与 P53 基因和蛋白表达相关联。     

西兰花多肽组分II诱导神经胶质瘤细胞凋亡的作用及其机制研究

 目的：探讨西兰花多肽组分II诱导胶质瘤细胞凋亡的作用及机制。方法：培养人神经胶质瘤SHG-44细胞,将其分为对照组以及3、10、30和100 mg/L西兰花多肽组分II组,MTT法检测西兰花多肽组分II作用后细胞活力的变化;Annexin V/PI 检测细胞的凋亡率;倒置显微镜观察西兰花多肽组分II诱导细胞凋亡的形态学变化;免疫细胞化学和Western blotting法检测西兰花多肽组分II作用后Bax、Bcl-2蛋白表达,Western blotting法检测caspase-3蛋白表达。结果：西兰花多肽组分II作用SHG-44细胞24 h 、48 h和72 h时均可以降低细胞活力,作用呈时间-剂量依赖性。Annexin V/PI 检测细胞凋亡率发现,各用药组细胞凋亡率随着药物剂量的增加而显著升高。倒置显微镜下观察,西兰花多肽组分II作用SHG-44细胞72 h后,各用药组细胞的密度随药物浓度升高而明显降低,并可见到明显的凋亡小体。细胞免疫组织化学和Western blotting结果显示,药物作用SHG-44细胞72 h后,与对照组比较,细胞Bax蛋白表达呈上升趋势,Bcl-2蛋白表达呈下降趋势,各用药组Bax/Bcl-2比值均明显增加（P<0.05或P<0.01）;Western blotting检测caspase-3蛋白发现,各药物组caspase-3蛋白表达量均增加,与空白对照组比较,30和100 mg/L西兰花多肽组分II组差异有统计学意义（P<0.01）。结论：西兰花多肽组分II可提高神经胶质瘤细胞中Bax/Bcl-2蛋白的比值,促进caspase-3蛋白活化,从而诱导肿瘤细胞凋亡。     

Bcl-2 family gene expression during severe hyperoxia induced lung injury

Exposure of the lung to severe hyperoxia induces terminal transferase dUTP end-labeling (TUNEL) indicative of DNA damage or apoptosis and increases expression of the tumor suppressor p53 and of members of the Bcl-2 gene family. Because cell survival and apoptosis are regulated, in part, by the relative abundance of proteins of the Bcl-2 family, we hypothesized that lung cells dying during exposure would show increased expression of pro-apoptotic members, such as Bax, whereas surviving cells would have increased expression of anti-apoptotic members, such as Bcl-X(L). The hypothesis is tested in the current study by determining which Bcl-2 genes are regulated by hyperoxia, with specific focus on correlating expression of Bax and Bcl-X(L) with morphologic evidence of apoptosis or necrosis. Adult mice exposed to greater than 95% oxygen concentrations for 48 to 88 hours had increased whole-lung mRNA levels of Bax and Bcl-X(L), no change in Bak, Bad, or Bcl-2, and decreased levels of Bcl-w and Bfl-1. In situ hybridization revealed that hyperoxia induced Bax and Bcl-X(L) mRNA in uniform and overlapping patterns of expression throughout terminal bronchioles and parenchyma, coinciding with TUNEL staining. Electron microscopy and DNA electrophoresis, however, suggested relatively little classical apoptosis. Unexpectedly, Western analysis demonstrated increased Bcl-X(L), but not Bax, protein in response to hyperoxia. Bax and Bfl-1 were not altered by hyperoxia in p53 null mice; however, oxygen toxicity was not lessened by p53 deficiency. These findings suggest that oxygen-induced lung injury does not depend on the relative expression of these Bcl-2 members.     

Transient receptor potential vanilloid 1 activation induces autophagy in thymocytes through ROS-regulated AMPK and Atg4C pathways

Autophagy is a highly conserved process involved in lymphocyte development and differentiation. Herein, we demonstrated for the first time that triggering of TRPV1 by the specific agonist CPS induces autophagy in mouse thymocytes. TRPV1-dependent autophagy required [Ca(2+)](i) and ROS generation, resulting in AMPK activation. CPS specifically increased Atg4C mRNA expression and induced oxidation of Atg4C protein by ROS generation. TRPV1-triggered autophagy was Atg6/Beclin-1-dependent, as demonstrated by the use of Beclin-1(+/-) transgenic mice, and involved ROS- and AMPK-mediated up-regulation of Beclin-1 expression. Autophagy is activated as a prosurvival process, as its inhibition triggered apoptosis of thymocytes: this effect was accompanied by down-regulation of Atg4C, Bcl-X(L), and Irgm1 mRNA expression, decreased Bcl-X(L) and Beclin-1 protein levels, and caspase-3 activation, suggesting the existence of a molecular interplay between autophagic and apoptotic programs. TRPV1 activation by CPS altered the expression of CD4 and CD8α antigens, inducing the development of DP(dull). Interestingly, we found that CPS induces autophagy of DP(dull) cells, and inhibition of CPS-induced autophagy by the 3-MA autophagic inhibitor induces apoptosis of DP(dull) cells, suggesting the presence of an interplay between autophagic survival and apoptotic cell death. Overall, our findings suggest that DP(dull) cells constitute a distinct thymocyte subpopulation involved in the homeostatic control of cellularity and in the responses to chemical stress signals during thymocyte maturation, via regulating autophagy and apoptosis in a TRPV1-dependent manner.     

大花红天素对脑微血管内皮细胞凋亡的双相调节作用及机制(英文)

目的：研究中药红景天的有效成分-大花红天素对小鼠脑微血管内皮细胞凋亡的作用及机制。 方法： 观察不同剂量的大花红天素(25 mg/L, 100 mg/L)对体外培养的小鼠脑微血管内皮细胞(bEnd.3株)凋亡的影响。细胞凋亡分别用流式细胞术、免疫细胞化学ABC法(Fas/Bcl-2)及Western blotting(caspase-3)测定。 结果： 与对照组比，在bEnd.3细胞中含药浓度25 mg/L组凋亡明显抑制(P<0.05)，而100 mg/L组凋亡明显加剧(P<0.05)。凋亡抑制组Fas免疫细胞化学染色比对照组弱，阳性细胞明显减少(P<0.05)；而Bcl-2染色比对照组强，阳性细胞明显增加(P<0.05)，caspase-3表达明显抑制(P<0.05)。凋亡加剧组中(100 mg/L)变化相反。 结论： 大花红天素对bEnd.3细胞凋亡有双相调节作用，其机制与Fas/Bcl-2蛋白表达及caspase-3激活的变化有关。     

海洛因、麻黄素对小鼠仔鼠下丘脑、海马组织结构及胆碱乙酰基转移酶活性的影响

目的 探讨海洛因和麻黄素对仔鼠下丘脑、海马组织结构及胆碱乙酰基转移酶(ChAT)活性的影响,观察Bax蛋白和角质细胞生长因子(KGF)在下丘脑、海马的表达。 方法 108只昆明小鼠仔鼠,采用递增剂量连续腹腔注射海洛因和麻黄素,利用吉姆萨染色及免疫组织化学方法观察下丘脑和海马凋亡细胞的变化及Bax蛋白和KGF的表达,利用比色法检测下丘脑和海马ChAT活性的变化。 结果 仔鼠注射海洛因、麻黄素5d、10d、15d、20d,下丘脑和海马凋亡细胞及Bax蛋白和KGF阳性表达细胞的数量均高于对照组,ChAT的活性低于对照组,差异显著或极显著(P<0.05或P<0.01);海洛因组仔鼠下丘脑和海马的上述4项指标与麻黄素组相比,差异显著或极显著(P<0.05或P<0.01)。随着海洛因和麻黄素剂量的递增,仔鼠下丘脑和海马凋亡细胞及Bax蛋白和KGF阳性表达细胞的数量呈增多趋势。 结论 海洛因和麻黄素影响仔鼠下丘脑和海马的组织结构及ChAT活性,其机制可能与下丘脑和海马组织的细胞凋亡有一定相关性。     

Stretch-induced alveolar type II cell apoptosis: role of endogenous bradykinin and PI3K-Akt signaling

Apoptosis of alveolar type II (ATII) cells in response to high-amplitude mechanical stretch represents an important mechanism of ventilation-induced lung injury. Previously, it was demonstrated in an in vitro model that stretch-induced ATII cell apoptosis was prevented by angiotensin-converting enzyme (ACE) inhibitors. This study investigates the mechanism by which ACE inhibitors prevent stretch-induced apoptosis and elucidates the role of bradykinin as an endogenous anti-apoptotic factor. Rat ATII cells cultured on flexible membranes were subjected to cyclic stretch (40 cycles/min; 30% increase in surface area) and compared with static controls. Angiotensinogen, the bradykinin precursor T-kininogen, and bradykinin receptor expression were measured by RT-PCR; Angiotensin II and phosphoinositol 3 OH-kinase (PI3K) activity (as phospho-Akt) were measured by enzyme-linked immunosorbent assay; and Bcl-2 and Bcl-X(L) were measured by Western blot. Stretch did not influence angiotensinogen expression or induce angiotensin II generation. The angiotensin II receptor antagonist saralasin did not prevent stretch-induced apoptosis, whereas ACE inhibitors did. Stretch reduced ATII cell bradykinin release (T-kininogen expression and bradykinin supernatant concentration), and subsequently led to reduced PI3K activity and decreased concentrations of the anti-apoptotic proteins Bcl-2/Bcl-X(L). Bradykinin substitution or addition of keratinocyte or hepatocyte growth factor prevented stretch-induced decrease in PI3K activity and Bcl-2/Bcl-X(L) and reduced stretch-induced apoptosis. Mechanical stretch impairs a constitutively expressed, autocrine anti-apoptotic ATII cell survival signal involving bradykinin-mediated stimulation of the PI3K-Akt-Bcl-2/Bcl-X(L) pathway. Restoration of this pathway prevents stretch-induced apoptosis. This may be beneficial when mechanical ventilation cannot completely avoid alveolar overdistension to maintain oxygenation.     

叶酸拮抗同型半胱氨酸诱导的内皮细胞凋亡的作用机制

目的： 明确同型半胱氨酸（Hcy）对内皮细胞凋亡的影响以及叶酸的拮抗作用，阐明Bax和Bcl-2在同型半胱氨酸诱导内皮细胞凋亡及叶酸拮抗中的作用。方法: 用不同浓度的Hcy处理内皮细胞后，应用末端转移标记技术（TUNEL）以及Annexin V/PI染色加流式细胞术了解细胞凋亡状态，免疫组化方法检测Bax、Bcl-2的表达。结果: Hcy能促进细胞凋亡，叶酸具有拮抗作用。Hcy能促进细胞Bax、Bcl-2的表达，上调Bax/Bcl-2比值，叶酸能减少细胞表达Bax及Bcl-2，下调Bax/Bcl-2比值。结论: Bax、Bcl-2参与了Hcy诱导内皮细胞凋亡以及叶酸拮抗作用的过程。     

致死剂量的γ线照射后小鼠胸腺淋巴细胞的凋亡规律及与bax、bcl-2和Bcl-XL表达的关系

目的：观察致死剂量γ线照射后小鼠胸腺淋巴细胞凋亡特征及与Bax、Bcl-2和Bcl-XL蛋白和mRNA表达的关系，为急性重度以上放射病的治疗提供依据。方法：清洁级C57小鼠250只，随机分为0、6、9、12、15和20 Gy6个剂量组.经γ线全身1次照射后，于照射后1～28d和3～12个月，活杀取胸腺和外周血，用原位末端标记(TUNEL)和麦格-姬姆萨(MGG)染色检测胸腺淋巴细胞的凋亡：用原位杂交和碱性磷酸酶免疫组化染色法，检测Bax、Bcl-2和Bcl-XL mRNA和其蛋白的表达。结果.(1)各剂量组小鼠外周血白细胞在照射后6h，出现一过性的升高，以后迅速下降.6Gy照射后7d降至最低，至照射后28d基本恢复到正常水平：(2)不同剂量的γ线照射后24h，胸腺淋巴细胞的凋亡率迅速升高；在6～12Gy范围内与照射的剂量呈正比，≥15Gy照射后变化不明显。(3)6Gy照射后24h，胸腺淋巴细胞的凋亡率达高峰，而后开始降低；但直至照射后6个月和12个月，凋亡率仍明显高于对照组。(4)6Gy照射后3h，胸腺淋巴细胞中Bax蛋白的表达即出现增加，至24h达峰值，显示出时效关系；而Bcl-2蛋白于照射后3h即明显下降，24h降至最低；Bcl-XL蛋白也在照射后24h降至最低。bax和bel-2 mRNA的检测与蛋白水平的检测一致。结论：经6～12 Gy照射后，淋巴细胞的凋亡与照射剂量成正比，≥15 Gy照射后凋亡率下降，提示≤12 Gy照射后胸腺淋巴细胞的凋亡是其死亡的主要方式。促凋亡蛋白Bax表达的增加及抗凋亡蛋白Bcl-XL表达的下降，与照射剂量和淋巴细胞的凋亡率呈现较好的对应关系，提示它们在致死剂量的照射所致胸腺淋巴细胞凋亡的调控中起着重要作用。     

中和IL－17对博莱霉素诱导的肺纤维化小鼠肺组织Bax／Bcl－2表达的影响

目的：研究中和IL－17 A对博莱霉素（ bleomycin, BLM）诱导的肺纤维化小鼠肺组织Bax／Bcl－2表达的影响。方法将小鼠分别分成生理盐水组、 BLM组、 IL－17 A抗体组和IL－17 A抗体对照组,各30只,利用HE染色、 Masson三色胶原纤维染色检测小鼠肺组织纤维化程度,免疫组化方法检测小鼠肺组织Bax／Bcl－2的表达。结果从生理盐水组、到IL－17 A抗体组、再到BLM组和IL－17 A抗体对照组,小鼠肺组织肺泡炎症程度、肺泡壁的增厚情况以及肺泡壁的纤维化程度逐渐加重,差异有显著性意义（P＜0．01）; BLM组和IL－17 A抗体对照组间无明显差异（P＞0．05）。4组间Bax蛋白、 Bcl－2蛋白的表达也逐渐加重,差异均有统计学意义（ P＜0．01和P＜0．05）。 BLM组与抗体对照组间Bax、 Bcl－2的表达均无显著差异（P＞0．05）。结论 BLM可通过IL－17 A来诱导肺纤维化的形成,肺纤维化时肺实质细胞凋亡增多,而中和IL－17 A可通过调节Bax／Bcl－2的表达来抑制肺组织气道上皮的凋亡、达到抑制肺纤维化的目的。