阻抑正常骨髓基质SDF-1作用对HL-60细胞生物学性质的影响

目的本研究通过应用抗CXCR4单克隆抗体12G5抑制趋化因子SDF-1的生物活性,观察HL-60细胞生物学性质的变化,探讨SDF-1在维持HL-60细胞生存、增殖中的作用.方法培养HL-60细胞并与正常骨髓基质细胞共培养,采用12G5阻断SDF-1生物作用,孵育2 h后观察对照组及单抗组HL-60细胞在骨髓基质层上的粘附情况,24 h后测定细胞粘附率;2、4、6、8 h应用台盼蓝排染法测定细胞存活率,MTT法检测HL-60细胞活力,流式细胞术观察HL-60细胞增殖周期变化.结果①12G5孵育后24 h,骨髓基质对HL-60的粘附率为(19.1±8.6)%,显著低于对照组.②单抗孵育后HL-60细胞存活率下降,且随单抗孵育时间延长而逐渐下降.③细胞活性下降.④12G5孵育2、6 h后,处于增殖周期中G0/G1期的细胞分别为(54.7±6.37)%,(55.1±7.04)%,而S期的细胞分别为(38.4±4.51)%,(37.1±4.08)%.结论 12G5可改变HL-60细胞的生物学特性,从而在一定程度上抑制白血病细胞的增殖,影响细胞生存.     

抗CXCR4单克隆抗体对与正常骨髓基质细胞共培养的HL-60细胞Bcl-2、PCNA、Fas蛋白表达的影响

目的　目前研究发现 ,骨髓基质细胞分泌的基质衍生因子 1(stromalcellderivedfactor 1,SDF 1)及其受体CXCR4可能参与髓内残留病变的形成。因此 ,本研究着重探讨了阻抑SDF 1活性对与正常骨髓基质细胞共培养的HL 60细胞增殖、生存的影响。方法　培养并共培养HL 60细胞。实验分为两组 ,实验组采用抗CXCR4单克隆抗体 12G5( 2 0ug/ml)阻断SDF 1生物作用 ,孵育 2 4小时后采用免疫组化染色检测HL 60细胞Bcl 2、PCNA、Fas蛋白表达。 结果　免疫组化染色显示 ,实验组中Bcl 2、PCNA及Fas阳性率分别为 ( 15 .7± 4.9) %、( 4 2 .1± 3 .9) %及 ( 3 9.7± 7 5 ) % ,而对照组分别为 ( 3 1.6± 5 .2 ) %、( 67.4± 8.5 ) %和 ( 2 4.1± 6.7) % ,t检验显示 12G5下调HL 60细胞Bcl 2及PCNA蛋白表达 ,上调Fas蛋白表达。结论　 12G5可在一定程度抑制HL 60细胞增殖 ,促进凋亡 ,影响其生存。     

CXCR4 特异性拮抗剂 SDF-1P2G54 的构建及活性研究

对SDF-1进行遗传改造，将其第二位氨基酸由脯氨酸（P）突变为甘氨酸（G），且缺失其C-端α螺旋结构，以获得一种CXCR4特异性拮抗剂SDF-1P2G54。方法 将PCR扩增的SDF-1突变体SDF-1p2g54的基因插入表达载体pET-30a(+)，并转化BL21(DE3)菌株。IPTG诱导表达的重组蛋白SDF-1P2G54在变性条件下采用镍柱亲和层析纯化，并通过梯度稀释和超滤方法得以复性。利用趋化实验鉴定SDF-1P2G54对Jurkat细胞的趋化活性及对SDF-1趋化活性的抑制效应，流式细胞仪检测SDF-1P2G54 诱导 MOLT4 细胞钙内流及细胞表面 CXCR4 内在化的能力。结果 SDF-1P2G54 完全丧失激活 CXCR4、趋化Jurkat细胞跨膜迁移和诱导MOLT4细胞钙内流的能力，却保持了与CXCR4的高亲和性，能有效抑制野生型SDF-1对Jurkat的趋化效应、诱导MOLT4细胞表面CXCR4的快速内在化。结论 SDF-1P2G54是一种新型的CXCR4特异性拮抗剂，具有开发成抑制HIV-1感染和癌细胞转移等重大疾病特效药物的潜在应用价值。     

SDF-1/CXCR4在恶性胶质瘤细胞体外增殖、迁移及侵袭中的作用

目的探讨趋化因子SDF-1及受体CXCR4在恶性胶质瘤细胞中的增殖、迁移及侵袭的作用,为临床治疗提供依据.方法免疫组化法检测CXCR4在恶性胶质瘤C6细胞中的表达;用MTT法分别检测不同浓度的趋化因子SDF-1促恶性胶质瘤C6细胞体外增殖,并应用CXCR4受体抑制剂AMD3100与SDF-1共培养细胞观察增殖情况及抗CXCR4单克隆抗体在恶性胶质瘤中上述指标的变化.通过细胞迁移实验和细胞侵袭实验评价不同处理组C6细胞的迁移和侵袭能力.结果 CXCR4在恶性胶质瘤C6细胞系表达呈阳性.SDF-1可以促进恶性胶质瘤C6细胞的体外增殖、迁移和侵袭,而抗CXCR4单克隆抗体可以有效抑制其增殖、迁移和侵袭,并呈浓度依赖性.AMD3100可以抑制SDF-1的诱导作用.结论 SDF-1/CXCR4轴在恶性胶质瘤细胞株的体外增殖、迁移及侵袭中的作用,可能与恶性胶质瘤的侵袭和转移有关,为治疗恶性胶质瘤提供新的治疗策略.     

CXCR4特异性拮抗剂SDF-1P2G54的构建及活性评价

目的对SDF-1进行遗传改造,将其第2位氨基酸由脯氨酸(P)突变为甘氨酸(G),且缺失其C-端α螺旋结构,以获得一种CXCR4特异性拮抗剂SDF-1P2G54。方法将PCR扩增的SDF-1突变体SDF-1p2g54的基因插入表达载体pET-30a(+),并转化BL21(DE3)菌株。IPTG诱导表达的重组蛋白SDF-1P2G54在变性条件下采用镍柱亲和层析纯化,并通过梯度稀释和超滤方法得以复性。利用趋化实验鉴定SDF-1P2G54对Jurkat细胞的趋化活性及对SDF-1趋化活性的抑制效应,流式细胞仪检测SDF-1P2G54诱导MOLT4细胞钙内流及细胞表面CXCR4内在化的能力。结果 SDF-1P2G54完全丧失激活CXCR4、趋化Jurkat细胞跨膜迁移和诱导MOLT4细胞钙内流的能力,却保持了与CXCR4的高亲和性,能有效抑制野生型SDF-1对Jurkat的趋化效应、诱导MOLT4细胞表面CXCR4的快速内在化。结论 SDF-1P2G54是一种新型的CXCR4特异性拮抗剂,具有开发成抑制HIV-1感染和癌细胞转移等重大疾病特效药物的潜在应用价值。     

脂氧素A4对Jurkat T细胞游离钙浓度变化及增殖的影响

目的 研究脂氧素A4(LXA4)对Jurkat T细胞内游离钙离子浓度变化及细胞增殖的影响.方法 钙离子荧光探针Fluo-3/AM负载细胞后,用激光共聚焦扫描显微镜动态检测活细胞内游离钙离子浓度的变化;CCK-8试剂盒检测细胞增殖情况,并结合流式细胞仪进行细胞周期分析.结果 ①采用含钙细胞外液时,LXA4降低正常Jurkat T细胞内游离钙离子浓度,而用无钙细胞外液时,细胞内游离钙离子浓度下降不明显;②LXA4呈剂量依赖性抑制钙池操纵钙通道(SOC)激活剂thapsigargin(TG)引起的Jurkat T细胞内游离钙离子浓度的增高,100 nmol/L LXA4也能抑制抗CD3单抗(a-CD3)引起的细胞内钙离子浓度的增高,SOC阻滞剂2-Aminoethoxydiphenylborate(2-APB)能显著抑制TG引起的钙内流;③LXA4呈剂量依赖性抑制a-CD3和抗CD28单抗(a-CD28)诱导的Jurkat T细胞增殖,细胞周期分析发现LXA4阻止JurkatT细胞由G1期进入S期,降低S期细胞比例、细胞增殖指数(PI)和DNA含量.结论 LXA4可能通过抑制Jurkat T细胞钙池操纵的钙通道引起的胞质内游离钙浓度的升高而抑制其增殖.     

CXCR4特异性拮抗剂SDF-1P2G54的构建及活性评价

摘要：目的对SDF-1进行遗传改造,将其第2位氨基酸由脯氨酸（P）突变为甘氨酸（G）,且缺失其C-端α螺旋结构,以获得一种
CXCR4特异性拮抗剂SDF-1P2G54。方法将PCR扩增的SDF-1突变体SDF-1p2g54的基因插入表达载体pET-30a(+),并转化
BL21(DE3)菌株。IPTG诱导表达的重组蛋白SDF-1P2G54在变性条件下采用镍柱亲和层析纯化,并通过梯度稀释和超滤方法
得以复性。利用趋化实验鉴定SDF-1P2G54 对Jurkat 细胞的趋化活性及对SDF-1 趋化活性的抑制效应,流式细胞仪检测
SDF-1P2G54 诱导MOLT4 细胞钙内流及细胞表面CXCR4 内在化的能力。结果SDF-1P2G54 完全丧失激活CXCR4、趋化
Jurkat细胞跨膜迁移和诱导MOLT4细胞钙内流的能力,却保持了与CXCR4的高亲和性,能有效抑制野生型SDF-1对Jurkat的
趋化效应、诱导MOLT4细胞表面CXCR4的快速内在化。结论SDF-1P2G54是一种新型的CXCR4特异性拮抗剂,具有开发成
抑制HIV-1感染和癌细胞转移等重大疾病特效药物的潜在应用价值。
     

过表达趋化因子受体4的内皮祖细胞影响血管平滑肌细胞迁移、增殖

目的 研究过表达趋化因子受体4(chemokine receptor 4,CXCR4)的内皮祖细胞(endothelial progenitor cells,EPCs)对血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMCs)迁移、增殖的影响.方法 分离培养并鉴定大鼠骨髓来源EPCs.CXCR4的重组腺病毒感染EPCs后,流式细胞术、实时荧光定量PCR(qRT-PCR)分别检测细胞膜CXCR4受体及mRNA表达,CCK-8法、Transwell法分别检测EPCs增殖活性、迁移能力.建立过表达CXCR4的EPCs与VSMCs非接触共培养模型,Transwell法、CCK-8法检测EPCs对VSMCs的迁移、细胞存活的影响.结果 CXCR4重组腺病毒感染EPCs 48 h后,EPCs细胞膜CXCR4受体和mRNA表达明显增高(P＜0.01),过表达CXCR4对EPCs增殖活性无明显影响,但可增强EPCs定向迁移能力(P＜0.01).共培养模型中,SDF-1α诱导下,CXCR4组VSMCs迁移、细胞存活率明显降低(P＜0.05),无SDF-1α诱导下空白对照组、GFP组及CXCR4组VSMCs的迁移、细胞存活率整体高于SDF-1α诱导下各组(P＜0.05).结论 过表达CXCR4可增强EPCs的迁移能力,在SDF-1/CXCR4调控轴中加强EPCs对VSMCs迁移和增殖的抑制作用,可用于防治血管再狭窄的细胞治疗.     

CXCR4/SDF-1对鼻咽癌细胞增殖与迁移能力的影响

目的 观察鼻咽癌不同恶性程度的细胞中趋化因子受体CXCR4的表达,检测CXCR4/SDF-1反应轴对鼻咽癌细胞的增殖作用,SDF-1对CXCR4阳性肿瘤细胞的趋化作用,探讨CXCR4/SDF-1生物学轴对人鼻咽癌细胞增殖与迁移能力的影响.方法 以鼻咽癌成瘤高转移细胞株5-8F及成瘤不转移细胞株6-10B为研究对象,采用Western blot免疫印迹法检测鼻咽癌细胞株CXCR4蛋白的表达情况,SDF-1及CXCR4阻断剂AMD3100作用于两种细胞后,MTT法检测细胞的增殖能力,体外迂徙实验检测CXCR4/SDF-1反应轴对鼻咽癌细胞的趋化作用.结果 5-8F细胞株CXCR4蛋白的表达明显高于6-10B细胞株;SDF-1能明显增强5-8F细胞增殖与迁移能力,CXCR4阻断剂AMD3100作用后,5-8F细胞增殖与迁移能力明显降低;SDF-1对6-10B细胞的迁移及增殖能力无明显影响.结论 CXCR4/SDF-1生物学轴与鼻咽癌细胞株的增殖与迁移有一定的关系,AMD3100可明显抑制鼻咽癌细胞的增殖与迁移能力.     

半胱氨酸蛋白酶在EPA和DHA抑制HL-60细胞增殖中的作用

目的探讨ω3多不饱和脂肪酸抑制HL60细胞增殖与半胱氨酸蛋白酶(caspases)之间的关系。方法用6.0×10-5mol/L二十碳五烯酸或二十二碳六烯酸处理HL60细胞,运用MTT比色法、流式细胞仪分析ω3脂肪酸对HL60细胞增殖能力和凋亡的影响,RTPCR和免疫印迹技术分析细胞caspase3、caspase8基因的表达变化,激酶活性分析检测caspase8活性。并观察caspases特异性抑制剂对ω3脂肪酸引起的HL60细胞生长抑制的拮抗作用。结果HL60细胞经ω3多不饱和脂肪酸处理后,细胞增殖能力减弱,G0/G1期细胞增多,S期细胞减少,并检测到约6%的凋亡率,caspase3、caspase8基因表达增加,caspase8活性升高。caspases抑制剂可以部分拮抗ω3脂肪酸对HL60细胞的增殖抑制作用。结论ω3脂肪酸可以抑制HL60细胞增殖,并诱导细胞凋亡,而上调caspases的表达和/或活性可能在此过程中发挥重要作用。     

阻断SDF-1／CXCR4轴对多发性骨髓瘤细胞株耐药性的影响

目的探讨阻断SDF-1／CXCR4轴后多发性骨髓瘤细胞株耐药性的影响及机制。方法将耐药细胞株RPM18226／DOX和RPM18226／LP与骨髓基质细胞共培养,实验组同时加入抗CXCR4抗体12G5,未加入抗体者为对照组,测定培养细胞的上清液中的SDF-1α、IL-6、VEGF浓度。进行细胞-基质粘附试验测定实验组和对照组骨髓瘤细胞与基质细胞的粘附性;MTT比色法测定实验组和对照组对阿霉素或马法兰的敏感性。结果实验组中SDF-1α、IL-6、VEGF浓度均略高于对照组,但差异元统计学意义（P〉0．05）。实验组骨髓瘤细胞对基质细胞粘附率低于对照组,差异有统计学意义（P〈0．05）。药物敏感性检测显示实验组骨髓瘤细胞对阿霉素或马法兰敏感性高于对照组。结论阻断SDF-1／CXCR4轴后可以部分逆转多发性骨髓瘤细胞株对化疗药物的耐药性,其机制与细胞因子无关,可能与下调骨髓瘤细胞与基质细胞的粘附性有关。     

急性白血病骨髓基质细胞对HL-60细胞增殖、分化的影响

目的 为探讨急性白血病骨髓基质对HL-60细胞的影响。方法 骨髓基质与白血病细胞共培养，采用MTT检测基质对白血病细胞的粘附，流式细胞仪检测粘附的HL-60细胞周期，非特异性酯酶及过氧化物酶染色观察白血病细胞分化及绘制白血病细胞生长曲线。结果 白血病骨髓基质对HL-60细胞的粘附率及粘附的白血病细胞处于G0／G1期比例均明显高于正常骨髓基质；正常骨髓基质对HL-60细胞的生长抑制作用及诱导分化作用均明显强于白血病基质。结论 急性白血病骨髓基质对HL-60细胞的增殖、分化作用均存在异常。     

苦参碱对急性白血病早幼粒细胞 HL-60的抑制细胞增殖与诱导凋亡作用

目的：探讨苦参碱对急性白血病早幼粒细胞 HL-60的抑制细胞增殖与诱导凋亡作用。方法：以早幼粒急性白血病细胞系（HL-60细胞）为实验对象,采用体外培养技术,试验检测不同浓度苦参碱对HL-60细胞活力、细胞周期以及细胞凋亡的作用。结果：随着苦参碱浓度（12.5~50μg/ ml）的增加,苦参碱对 HL-60细胞增殖的作用不断增强;苦参碱处理72 h 后的 HL-60细胞与空白对照组比较,G0/ G1期细胞明显增多,S 期细胞明显减少,但比较差异无统计学意义（P〉0.05）;细胞凋亡率均明显高于空白对照组（P〈0.01）。结论：苦参碱对于急性白血病早幼粒细胞 HL-60的增殖具有明显的抑制作用,并能促进其凋亡。     

反义hTERT体外抑制白血病细胞增殖的研究

目的研究反义hTERT基因对白血病细胞体外增殖的抑制作用。方法体外通过SuperFect将已构建好的正、反义hTERT真核表达载体转染HL60白血病细胞,再经过G418及PCR筛选鉴定分别转入了正、反义hTERT载体的抗性克隆细胞HL60-s和HL60-as。随后运用实时荧光定量RT-PCR技术及TRAP-银染法对各组细胞内源性hTERT mRNA的表达情况及端粒酶的活性进行检测。同时还采用MTT法、双层软琼脂克隆形成试验、流式细胞术观察和分析反义hTERT对白血病细胞体外生长增殖活力的影响及是否能诱导瘤细胞的凋亡。结果与空白对照、正义hTERT组相比,反义hTERT能显著地降低HL60细胞内源性hTERT mRNA的表达(P<0.01)和下调端粒酶活性。当各组细胞传至第25代后,与HL60、HL60-s比较,HL60-as细胞的生长速度和集落形成能力明显地减慢和降低,同时伴有凋亡率的显著增加。结论反义hTERT在体外能抑制白血病细胞的生长增殖能力,其潜在、广谱的抗肿瘤作用的分子生物学机制可能是首先通过抑制和下调hTERT表达(端粒酶活性)而最终引发瘤细胞衰亡的途径来实现的。     

氨基葡萄糖硫酸盐抑制白血病细胞HL60增殖并诱导其分化

目的:研究氨基葡萄糖硫酸盐(GS)对白血病细胞HL60的增殖和分化的影响. 方法:采用台盼蓝活细胞计数法检测不同浓度的GS对HL60细胞增殖的影响;细胞化学染色法观察药物作用后细胞形态的变化;流式细胞仪检测药物对HL60细胞周期的影响及细胞表面分化抗原CD11b,CD14,CD13和CD33表达的影响. 结果:GS能明显抑制HL60的增殖;经5 mmol/L GS处理5 d后,HL60细胞体积缩小,核浆比例降低,核仁减少甚至消失,核染色质趋向致密,核形态扭曲折叠或分叶;5 mmol/L GS处理48 h后, G1期细胞由37.8%增加至47.9%,S期由46.8%减低至40.6%,G2期峰轻度减低, 未发现亚二倍体峰. 经1 mmol/L,5 mmol/L GS分别处理120 h后,CD11b和CD14的表达分别由2.3%,0.5%升高至23.0%,11.9%和15.8%, 4.3%,CD33及CD13的表达未见明显变化. 结论:GS能抑制白血病细胞HL60的增殖,并诱导其向成熟单核、粒细胞分化.     

白血病干细胞与SDF-1/CXCR4生物学轴关系的研究进展

急性髓细胞性白血病是造血干细胞克隆性增殖的肿瘤性疾病,其发病机制至今仍不十分清楚,而且髓外浸润和侵袭仍是导致复发和病人死亡的重要原因之一。因此,有关急性白血病发生、发展和髓外浸润的机制和相应的治疗学研究成为当今血液学研究的重点和难点之一。已有的研究表明,基质细胞衍生因子1(SDF-1)及其特异性受体CXCR4所组成的SDF-1/CXCR4轴可通过改变白血病骨髓造血微环境,在白血病细胞的增殖、耐药、浸润中发挥一定的作用。本文重点探讨SDF-1/CXCR4轴在白血病干细胞迁移与归巢中的作用。     

端粒酶反义RNA对人髓性白血病细胞系HL-60的作用

目的 探讨抗端粒酶在急性白血病治疗中的意义。方法 用脂质体介导法将pBBS212-hTR(反义端粒酶RNA真核表达载体）导入人髓性白血病细胞系HL-60中,采用TRAP法测定端粒酶活性,细胞生长动力学检测,电镜,DNA片段分析等方法观察其对HL-60细胞的端粒酶活性、细胞增殖及细胞凋亡影响。结果 端粒酶反义RNA能显抑制HL-60细胞的端粒酶活性,抑制HL-60细胞的增殖并促进其凋亡。结论 以端粒酶反义RNA抑制端粒酶活性是治疗白血病的潜在途径。     

Experimental study on induction of apoptosis of leukemic cells by Boswellia carterii Birdw extractive]

The purpose of the study was to investigate the apoptosis of leukemic cells induced by Boswellia Carterii Birdw(BCB). The target leukemia cell line HL60 and bone marrow leukemic cells from 30 acute non-lymphocytic leukemic(ANLL) patients (3 M1 11 M2a 10 M3 1 M4a 5 M5b) were studied. Apoptosis was detected by morphological observation, DNA electrophoresis, percentage of DNA fragmentation test and flow cytometric cell cycle analysis. It is concluded that BCB can induce apoptosis in ANLL cells and HL60 cells.     

FOXO3a转录因子对自血病HL60细胞增殖和凋亡的影响研究

目的:研究转录因子FOXO3a对急性粒细胞白血病HL60细胞株增殖、凋亡的影响及可能的分子机制.方法:将FOXO3a表达质粒pcDNA3.1-FOXO3a及空载对照质粒pcDNA3.1分别经阳离子脂质体介导转染HL60细胞,用G418筛选出FOXO3a稳定表达细胞株.台盼蓝拒染法和MTT法检测HL60细胞增殖,流式细胞...