MAD1基因在主动脉夹层中的表达及对主动脉平滑肌细胞的影响

收集病变的升主动脉中膜组织标本为主动脉夹层组；收集同期在本院行尸检且无手术史、大血管病变史的升主动脉壁内组织标本18份为对照组；RT-PCR和Western blot检测有丝分裂阻滞缺陷蛋白(MAD1) mRNA和蛋白表达水平。在体外建立MAD1基因高表达人主动脉血管平滑肌细胞(HA-VSMC)模型,检测细胞增殖和凋亡情况以及凋亡相关蛋白。结果显示主动脉夹层组患者主动脉夹层中MAD1 mRNA和蛋白相对表达量明显高于对照组(P<0.05)。随着转染时间的延长,各组细胞增殖水平均逐渐增加,转染48 h、72 h后MAD1过表达组细胞增殖情况低于空白对照组及空载体转染组(P<0.01)。转染48 h后,MAD1过表达组细胞凋亡率明显高于空白对照组及空载体转染组(P<0.01)。MAD1过表达组含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9 mRNA和蛋白相对表达量明显高于空白对照组及空载体转染组(P<0.05)。实验结果表明,MAD1过表达可通过抑制细胞增殖,激活细胞外凋亡途径和细胞内凋亡途径来促进人主动脉平滑肌细胞HA-VSMC细胞凋亡,参与主动脉夹层的发生与发展。     

Fibulin-2调控的TGF-β/Smad信号通路在VSMCs凋亡中的作用

目的:了解腓骨蛋白-2(Fibulin-2,FBLN2)在急性Stanford A型主动脉夹层患者主动脉壁的表达情况并研究FBLN2调控的TGF-β/Smad信号通路在血管平滑肌细胞凋亡中的作用。方法:通过免疫组化染色和Western Blot检测急性Stanford A型主动脉夹层手术切除的主动脉标本FBLN2表达,并以重组FBLN2作用于体外培养的小鼠主动脉血管平滑肌细胞,通过Western Blot检测TGF-β1、Smad2/3和磷酸化Smad2/3的表达改变,同时使用A83-01阻断TGF-β1信号,观察平滑肌细胞凋亡情况。结果:FBLN2在急性Stanford A型主动脉夹层患者主动脉壁中表达显著升高(P<0.01),主要分布在主动脉中层。重组FBLN2可上调小鼠主动脉平滑肌细胞TGF-β1、pSmad2/3的表达(P<0.01),并抑制小鼠主动脉平滑肌细胞的凋亡(P<0.01)。当TGF-β1的作用被A83-01阻断时,重组FBLN2对主动脉平滑肌细胞凋亡的抑制作用显著减弱(P<0.05)。结论:FBLN2在急性Stanford A型主动脉夹层患者主动脉壁中层表达上调,并通过调控TGF-β/Smad信号通路抑制血管平滑肌细胞凋亡。FBLN2有可能参与急性Stanford A型主动脉夹层的发生。     

基于组织芯片技术探讨GLUT10 在主动脉夹层发病机制中的作用

目的 研究主动脉夹层患者的主动脉组织中葡萄糖转运体10(glucose transporter 10,GLUT10)表达水平及意义。方法 选取2018年1～11月于武汉大学人民医院确诊为主动脉夹层的27例患者为夹层组,另选取18例心脏移植患者作为对照组。将以上患者的主动脉标本制作成组织芯片,检测GLUT10在人体主动脉组织中的蛋白表达水平及其相关性;采用载shRNA慢病毒敲低血管平滑肌细胞GLUT10编码基因,检测其周期蛋白、基质金属蛋白酶、细胞骨架蛋白的表达,探讨GLUT10表达下调致主动脉重构的病理机制。结果 在组织芯片的免疫组化染色中发现,夹层组GLUT10的表达水平较对照组正常主动脉明显下调;提取GLUT10敲低后的细胞蛋白进行Western blot法检测发现,GLUT10敲低组的细胞周期蛋白、基质金属蛋白酶的表达水平较对照组明显增高,而细胞骨架蛋白的表达水平明显下降。结论 GLUT10表达下调致血管平滑肌细胞周期紊乱、金属蛋白酶异常表达、细胞骨架蛋白表达下调、主动脉重构,与主动脉夹层的发生、发展密切相关。     

SM22α、α-SMA、OPN在人胸主动脉夹层中的表达及血管平滑肌细胞表型的变化

目的:探讨平滑肌22α(SM22α)、平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、骨桥蛋白(OPN)在人胸主动脉夹层中的表达及血管平滑肌细胞(VSMC)表型的变化。方法:收集人胸主动脉夹层(TAD)动脉壁组织和正常人胸主动脉壁组织标本,采用免疫组化方法观察SM22α、α-SMA、OPN的表达。结果:与正常主动脉组相比,TAD组SM22α、α-SMA表达水平显著降低,OPN表达显著增高。结论:TAD主动脉壁VSMC表型由收缩型转变为增殖型为主,从而导致血管壁中膜性状改变,最终导致主动脉夹层病变。     

多囊蛋白-1在急性主动脉夹层发病机制中的作用

目的 探讨多囊蛋白-1(PC-1)在急性主动脉夹层(AD)发病机制中的作用及分子机制。方法 收集2019年10月至2020年1月于郑州大学第一附属医院行主动脉弓置换术的6例急性AD患者的病变主动脉组织标本作为AD组,另选择6例非主动脉疾病的器官捐赠者的正常主动脉组织标本作为对照组。采用Western blot法检测主动脉组织中PC-1、凋亡相关蛋白及磷脂酰肌醇-3-激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt)信号通路相关蛋白的磷酸化位点的表达,SM22α免疫荧光/DNA末端转移酶介导的dUTP缺口末端标记法双标染色法检测主动脉平滑肌细胞(VSMC)凋亡情况。结果 对照组和AD组受试者主动脉组织中PC-1蛋白的相对表达量分别为1.00±0.07和0.72±0.04,AD组受试者主动脉组织中PC-1蛋白的相对表达量显著低于对照组(t=7.614,P<0.01)。对照组和AD组受试者主动脉VSMC凋亡的荧光强度分别为59.03±4.57和71.26±8.25,AD组受试者主动脉VSMC凋亡的荧光强度显著高于对照组(t=3.178,P<0.05)。AD组受试者主动脉组织中cleaved c...     

巨噬细胞ADAM8诱导血管平滑肌细胞去分化

目的研究巨噬细胞去整合素金属蛋白酶8(ADAM8)过表达对血管平滑肌细胞去分化的影响。 方法利用生物信息学筛选小鼠腹主动脉瘤和人胸主动脉夹层差异表达基因。巨噬细胞转染ADAM8过表达质粒,并收集巨噬细胞培养基处理血管平滑肌细胞。qPCR和Western blotting检测细胞ADAM8表达水平；细胞划痕实验、Edu染色实验分别检测血管平滑肌细胞迁移能力和增殖能力。qPCR检测过表达ADAM8的巨噬细胞培养基对血管平滑肌细胞分化标志基因表达水平的影响。 结果ADAM8基因在人胸主动脉夹层和小鼠腹主动脉瘤病变过程中显著上调(P＜0.05),且在脂多糖诱导巨噬细胞炎症反应过程中也显著增加(P＜0.05)。巨噬细胞过表达ADAM8诱导细胞炎症反应和基质金属蛋白酶(MMP)表达,同时过表达ADAM8的巨噬细胞培养基促进血管平滑肌细胞的迁移和增殖能力,但显著抑制血管平滑肌细胞分化标志基因α-actin和α-tropomyosin的表达水平(P＜0.05)。 结论巨噬细胞ADAM8促进炎症因子和MMP表达并诱导血管平滑肌细胞的去分化。     

Transgelin基因在主动脉壁中异常表达对主动脉夹层的影响

目的 检测Transgelin基因在A型主动脉夹层(TAAD)患者主动脉壁中的表达,分析其表达水平与主动脉夹层血管壁直径的相关性,预测Transgelin基因在主动脉夹层发病中的临床诊断价值。方法 2017~2018年于华中科技大学同济医学院附属同济医院采集13例TAAD患者的主动脉壁以及11例无夹层的主动脉壁(源自扩心病/冠心病患者心脏移植受体)作为对照,通过HE和EVG染色进行形态学检测,采用免疫组化、实时荧光定量PCR、以及蛋白质免疫印迹法检测Transgelin在对照和主动脉夹层血管壁中的表达和亚细胞定位情况。结果 Transgelin基因在TAAD患者的主动脉壁中表达显著升高,但其表达水平与升主动脉血管壁直径以及主动脉弓部直径无显著相关性。结论 Transgelin表达上调可能促进主动脉夹层的发生,有望成为预测主动脉夹层发生的生物学标志物。     

A型主动脉夹层组织Beclin1及微管相关蛋白1轻链3的表达及意义

目的 探讨自噬相关蛋白Beclin1及微管相关蛋白1轻链3(LC3)在A型主动脉夹层组织中的表达及意义。方法 选取因A型主动脉夹层(AD)而于我院行手术治疗患者术中切除的主动脉壁组织标本20例作为AD组,以尸检者的正常胸主动脉(NA)壁组织标本10例作为对照。采用免疫组化染色及蛋白质印迹技术检测血管组织中Beclin1及LC3蛋白的定位及表达差异。结果 A型主动脉夹层主动脉壁组织中Beclin1及LC3蛋白主要定位表达于血管平滑肌细胞,且含量高于正常对照组织(P<0.05)。结论 A型主动脉夹层主动脉壁中血管平滑肌细胞的自噬活性明显增强,可能与疾病的发生发展相关。     

线粒体氧化应激相关蛋白酶PRDX3在主动脉夹层中的表达及其意义

目的 探讨主动脉夹层(AD)患者体内过氧化还原酶3的表达及其意义。方法 选取2018年8月~2019年4月于武汉大学人民医院确诊为StanfordⅠ型主动脉夹层患者为AD组,另选接受心脏移植患者作为对照组。通过Western blot法和免疫组化染色检测主动脉夹层患者与正常对照组主动脉组织中PRDX3的表达差异;构建人主动脉血管平滑肌细胞(HASMC)氧化应激模型,提取细胞蛋白后使用Western blot法检测实验组与对照组的PRDX3表达差异;用0.3%β-异氨基丙腈酯(BAPN)构建SD大鼠主动脉夹层动物模型,取两组大鼠主动脉组织做石蜡包埋,标本切片后处理步骤及检测指标同人体标本。结果 人体标本中Western blot法与免疫组化染色均发现,AD组PRDX3的表达较对照组正常主动脉明显增高;动物实验中免疫组化染色发现,AD组大鼠主动脉组织表达PRDX3显著增高;细胞实验中Western blot法结果显示随着H₂O₂浓度的升高PRDX3的表达也随之升高。结论 PRDX3与线粒体氧化应激水平升高密切相关,PRDX3的升高说明在主动脉夹层中线粒体氧化应激水平升高。PRDX3表达的上调可能与夹层的发生、发展密切相关,给主动脉夹层的治疗提供新的靶点。     

雌激素受体在夹层主动脉中的表达及意义

目的:观察雌激素受体在夹层主动脉中的表达情况,探讨其在主动脉夹层发病过程中的作用及可能机制。方法:维多利亚蓝染色,免疫组织化学染色分别观察正常与夹层主动脉的组织病理学改变及雌激素受体的表达,Western blot分析正常与夹层主动脉中雌激素受体、结缔组织生长因子(CTGF)、基质金属蛋白酶2(MMP-2)和基质金属蛋白酶9(MMP-9)的蛋白表达,分析雌激素受体表达与CTGF、MMP-2、MMP-9表达的关系。结果:夹层主动脉中弹力纤维断裂,胶原沉积增多,两者排列疏松、紊乱,比例失调,正常主动脉未见异常。雌激素受体在正常与夹层主动脉均有表达,但夹层主动脉中雌激素受体β蛋白表达降低(P<0.01),而CTGF、MMP-2与MMP-9蛋白表达升高(P<0.05)。雌激素受体β与CTGF、MMP-2、MMP-9表达显著相关(P<0.05),CTGF与MMP-9表达显著相关(P<0.05)。结论:主动脉壁中雌激素受体β下调可能通过CTGF表达升高及促进MMP-9分泌,引起细胞外基质重构,增加主动脉夹层的易感性。     

Contribution of protein kinase C to passively sensitized human airway smooth muscle cells proliferation

Airwaysmoothmuscleproliferationplaysanimportantroleinairwayremodelinginasthma Itisanimportantpathophysiologicalbasisofirreversibleairwayobstructionandpersistentairwayhyperresponsiveness Itiscrucialtostudytheintracellularsignaltransductionpathwayintheairwaysmoothmusclecells (ASMCs)proliferationinordertounderstandthemechanismofasthmaanddeveloppotentialtherapiesforairwayremodelinginasthma 1,2BecauseASMCsfromasthmaticpatientsaredifficulttoacquire,manyresearchersabroadhaveadoptedthetechniquekno…     

胃促生长素对人主动脉平滑肌细胞增殖及线粒体融合蛋白2表达的影响

目的 通过体外培养人主动脉平滑肌细胞(HASMCs),研究胃促生长素(ghrelin)对血管平滑肌细胞(VSMC)增殖及线粒体融合蛋白2(Mfn-2)表达的影响.方法 体外培养HASMCs,第4～6代细胞用于试验.给予不同浓度(10-9、10-8、10-7、10-6、10-5 mol/L)的ghrelin 或10-6 mol/L ghrelin不同时间(0、6、12、18、24 h)处理,用四甲基偶氮唑蓝比色(MMT)法观察其对HASMC增殖的影响.RT-PCR,Western blot方法检测不同处理方法对Mfn-2表达的影响.结果 10-7～10-5 mol/L的ghrelin可明显抑制HASMC增殖,浓度为10-6 mol/L抑制作用最为明显(P<0.01).ghrelin在6～24 h内均能明显抑制HASMC增殖,在24 h达最高峰(P<0.01).10-6 mol/L ghrelin能明显上调Mfn-2 mRNA和蛋白的表达(P<0.01).10-6 mol/L ghrelin在18 h上调Mfn-2 mRNA和蛋白表达的作用最为明显(P<0.01).结论 ghrelin可能通过上调Mfn-2的表达来抑制HASMC增殖.     

Stanford A型主动脉夹层及升主动脉瘤样扩张血管组织结构的特点

 目的 观察正常升主动脉者、升主动脉瘤样扩张者及Stanford A型主动脉夹层分离（Stanford type A aortic dissection,TAAD）患者升主动脉血管组织结构特点,为探讨Stanford A型主动脉夹层分离的发生机制奠定结构基础。方法 收集34例升主动脉血管组织标本,其中TAAD 16例,升主动脉瘤样扩张10例,心脏移植供体心脏正常升主动脉8例。采用HE染色法、弹力和胶原纤维复染法及TUNEL法对升主动脉血管组织的结构特点进行研究。结果 HE染色与弹力和胶原纤维复染示正常升主动脉者与升主动脉瘤样扩张患者升主动脉结构相似,具有完整的血管结构即内膜、中层和外膜,但是瘤样扩张者血管弹力纤维变细甚至缺失,肌肉成分增生,靠近内膜处病变较重,靠近外膜处形态相对正常;TAAD患者升主动脉大体标本可见夹层撕裂破口的位置,光镜下可见弹力纤维变细、减少、断裂,大量的炎性细胞浸润及血细胞成分。TUNEL结果显示,TAAD升主动脉血管组织可见大量的细胞核呈棕褐色及固缩的凋亡细胞,升主动脉瘤样扩张及正常升主动脉中未见明显的细胞凋亡。结论 TAAD患者升主动脉血管组织中弹力纤维及胶原纤维稀疏、减少、断裂,结构紊乱,血管组织中细胞凋亡明显增加。     

Stanford A型主动脉夹层差异表达基因生物学通路分析

 目的  通过对急性Stanford A型主动脉夹层患者主动脉组织差异表达基因的通路分析,探讨主动脉夹层的发病机制。方法  应用人类全基因组表达谱微阵列芯片检测急性Stanford A型主动脉夹层患者与器官捐献者主动脉组织的基因表达,GenomeStudio Gene Expression Module v1.0软件进行数据结果分析。采用荧光定量real time PCR验证芯片结果。以KEGG数据库对差异表达基因进行通路分析。结果  筛选出差异表达基因数1 309个,real-time PCR验证结果与芯片检测结果一致。通路分析发现两组之间黏着斑通路的基因表达发生显著变化,同时血管平滑肌收缩通路和肌动蛋白细胞骨架调节通路的基因表达也有显著差异。结论  差异基因通过黏着斑通路、血管平滑肌收缩通路和肌动蛋白细胞骨架调节通路相互作用,可能在急性Stanford A型主动脉夹层的发病机制中发挥了重要作用。     

人胸主动脉血液脉动流的三维数值分析

目的:探讨在正常生理脉动流条件下人体胸主动脉内血液流动速度、血管壁面压力和壁面剪应力的分布,为阐明主动脉夹层的发病机制提供理论依据.方法:运用计算流体力学方法和血流动力学的基本原理,对正常人的胸主动脉内血液脉动流进行三维数值模拟.结果:计算获得了正常人的胸主动脉内血液流动在心动周期不同时刻的壁面压力、壁面剪应力、速度和流线分布.收缩期的血管壁面压力比舒张期的血管壁面压力具有更大的量值和变化幅度;在整个收缩期过程中,外侧壁的压力明显地高于内侧壁的压力;主动脉弓和降主动脉的交界处存在明显的压力降.主动脉弓外侧壁的壁面剪应力比主动脉弓内侧壁的壁面剪应力要小很多;主动脉弓内侧壁的壁面剪应力比主动脉弓外侧壁的壁面剪应力具有更大的量值和变化幅度,呈现出周期性的交变应力.结论:血管壁面压力可能与主动脉夹层的发生有关.     

sunitinib对人气道平滑肌细胞增殖、迁移和ERK磷酸化的影响

目的:探讨sunitinib对血小板源性生长因子(platelet-derived growthfactor,PDGF)-BB刺激的人气道平滑肌细胞(human airway smooth muscle cells,HASMCs)增殖和迁移的影响,及其对细胞外信号调节激酶(extracellular signal re...     

乙酰肝素酶在腹主动脉瘤发病中的作用

目的 了解乙酰肝素酶在腹主动脉瘤（AAA）发病中的作用,探讨AAA新的发病机制。方法 选取20例人体肾下AAA、5例正常腹主动脉（NA）及5例原发性肝细胞癌（HCC）组织标本,采用Northern杂交、免疫组织化学及计算机图像分析技术,检测乙酰肝素酶及其底物硫酸乙酰肝素酶蛋白多糖（HSPG）的表达以及微血管增生水平。结果 AAA组织乙酰肝素酶水平明显高于NA（P＜0．01）,而相当于HCC（P＞0．05）;HSPG表达则与之相反,与乙酰肝素酶水平及微血管密度均呈显著负相关。乙酰肝素酶与HSPG在腹主动脉（瘤）均以内外膜分布为主。结论 乙酰肝素酶在基质水平参与腹主动脉结构损伤与重构,促进AAA形成。     

紫草素抑制人气道平滑肌细胞的增殖

目的 研究紫草素对体外培养的人气道平滑肌细胞(HASMCs)增殖的影响.方法 组织块贴壁法原代培养传至4～8代的HASMCs,经40、20、10、5、2、1、0.5 ?mol/L及0 ?mol/L(对照组)的紫草素分别作用12、24、48 h后,应用MTS法测定紫草素对HASMCs的细胞增殖的影响;经40、20、10、5 ?mol/L及0 ?mol／L(对照组)的紫草素分别作用24 h后,应用流式细胞术分析紫草素对细胞周期的影响;经20 ?mol/L及0 ?mol/L(对照组)的紫草素分别作用24 h后,应用SP免疫细胞化学法检测紫草素对增殖细胞核抗原(PCNA)表达的影响.结果 (1)与对照组相比,20 ?mol/L和40 ?mol/L的紫草素均可有效抑制细胞增殖(均P<0.05),以48 h最为显著(抑制率分别为30.1％与42.9％),但两者之间无显著性差异(P0.05).(2)20 ?mol/L及40 ?mol/L的紫草素均可显著提高G0/G1期比例(P<0.05),阻滞细胞周期进程,但两者之间无显著性差异(P0.05).(3)20 ?mol/L的紫草素可显著下调PCNA的表达(P<0.01).结论 紫草素对HASMCs具有明确的抗增殖作用.