以合成肽作抗原的酶联免疫吸附法诊断戊型肝炎病毒感染

建立了用合成多肽抗原测定戊型肝炎病毒（ＨＥＶ）抗体的酶联免疫吸附法。合成多肽Ｅ３３（ｃ）（２μｇ／ｍｌ）、Ｅ１５（Ｍ）（１μｇ／ｍｌ）混合包被，测定了４８份ＨＥＶ抗体阳性血清，阳性符合率为９５．８％。４１份阴性血清均为阴性。此方法灵敏度高、特异性强、简便快速，适合临床应用。     

4种国产戊型肝炎IgG抗体检测试剂的结果比较

目前HEV感染主要依据HEV-IgM和IgG抗体测定判断,因此,同时检测HEV-IgM和HEV-IgG可大大减少HEV感染的漏检率。为此,我们对市场常见的4种国产HEV-IgG试剂作了比较,报道如下。1材料与方法1．1标本来源本院确诊的戊肝病人(美国Genelabs公司提供检测试剂)血清96份;体检正常献血员血清32份及甲型肝炎患者血清2份、乙型肝炎患者血清3份、丙型肝炎患者血清2份作为阴性标本。各型肝炎诊断符合2000年(西安)全国肝病会议诊断标准。     

重组抗原在戊型肝炎病毒感染诊断中的应用

目的探讨重组抗原在戊型肝炎病毒（ＨＥＶ）感染诊断中的应用。方法用ＨＥＶ重组抗原建立酶免疫试验（ＥＩＡ）检测肝病患者和健康人群血清中抗戊型肝炎病毒抗体（抗－ＨＥＶ）。结果５５份用新加坡ＤＢＬ公司抗－ＨＥＶ诊断试剂盒检测为抗－ＨＥＶ阳性的肝炎患者血清中，５３份（９６．４％）用本方法检测也为阳性；４５份ＤＢＬ试剂盒检测为抗－ＨＥＶ阴性的血清中，本法检测有３份为抗－ＨＥＶ阳性。检测甲、乙、丙型肝炎患者血清各３０份，抗－ＨＥＶ阳性率分别为１３．３％（４／３０）、１３．３％（４／３０）和１０．０％（３／３０）。健康人抗－ＨＥＶ阳性率为５．０％（８／１６０）。重组抗原与合成肽抗原混合用于ＥＩＡ，可以检出两种抗原单独阳性的抗－ＨＥＶ。结论以重组抗原为基础的ＥＩＡ特异性强、灵敏度高、快速简便，是戊型肝炎血清学诊断及流行病学调查的一种可靠方法     

重组抗原在戊型肝炎病毒感染诊断中的应用

目的 探讨重组抗原在戊型肝炎病毒（ＨＥＶ）感染诊断中的应用。 方法 用ＨＥＶ重组抗原建立酶免疫试验（ＥＩＡ）检测肝病患者和健康人群血清中抗戊型肝炎病毒抗体（抗－ＨＥＶ）。结果 ５５份用新加坡ＤＢＬ公司抗－ＨＥＶ诊断试剂盒检测为抗－ＨＥＶ阳性的肝炎患者血清中，５３份（９６．４％）用本方法检测也为阳性；４５份ＤＢＬ试剂盒检测为抗－ＨＥＶ阴性的血清中，本法检测有３份为抗－ＨＥＶ阳性。检测甲、乙、丙型肝炎     

以合成肽作抗原的酶联免疫吸附法诊断戊型肝炎病毒感染

建立了用合成多肽抗原测定戊型肝炎病毒（ＨＥＶ）抗体的酶联免疫吸附法。合成多肽Ｅ３３（ｃ）（２μｇ／ｍｌ），Ｅ１５（Ｍ）（１μｇ／ｍｌ）混合包被，测定了４８份ＨＥＶ抗体阳性血清，阳性符合率为９５．８％。４１份阴性血清均为阴性。此方法灵敏度高，，特异中，简便快速，适合临床应用。     

戊型肝炎诊断抗原的研究进展

戊型肝炎是一种由戊型肝炎病毒（HEV）引起、主要经消化道传播的常见传染病,多呈区域性暴发或散在发病,严重影响发展中国家的人群健康。目前HEV感染的诊断主要依赖于HEV抗体的检测。由于HEV的体外培养受限,作为主要检测试剂的抗原一般都通过基因工程手段来获取。现针对HEV诊断抗原的研究现状进行综述。     

安庆市戊型肝炎病毒感染情况调查分析

目的了解安庆市肝炎患者和非肝炎患者戊型肝炎病毒(HEV)感染状况和特点。方法采用酶联免疫吸附试验(ELISA)对本院2009年4~10月2019例非肝炎患者和2009年1~12月1019例肝炎患者血清进行HEVIgG抗体和IgM抗体检测。结果 2019例非肝炎患者中,抗HEV-IgG阳性377例,阳性率为18.67%,男性和女性的抗HEV-IgG阳性率分别为22.12%和14.52%,男女差异有统计学意义,抗HEV-IgM阳性8例,阳性率为0.4%;1019例肝炎患者中,抗HEV-IgG阳性245例,阳性率为24.04%,男性和女性的抗HEV-IgG阳性率分别为25.35%和21.04%,男女差异无统计学意义,抗HEV-IgM阳性35例,阳性率为3.43%。结论低年龄组HEV感染率和戊型肝炎发病率均很低,40岁以上年龄组HEV感染率和戊型肝炎发病率均较高。     

戊型肝炎研究进展

我国是肝炎大国，随着甲、乙型肝炎疫苗的推广。甲、乙型肝炎在我国的危害得到控制并将逐渐减少，但与此同时，戊肝的危害慢慢凸现，因而成为我国的一个重要公共卫生问题。本文从戊肝的流行病学、动物感染、临床研究、重叠感染、血清抗-HEV流行规律、病毒分子生物学、基因型等多方面探讨了戊型肝炎的危害及研究现状。     

献血者中戊型肝炎抗体的初步调查

<正> 近年来,对戊型肝炎病毒(HEV)感染的重要发现,即黄疸前期和黄疸期存在病毒血症提示,存在粪—口以外的血液传播途径,而且这种传播途径已有回顾性调查为佐证:动物实验同样也证实了这一发现,为此,笔者对上海和河南省南阳县两地的献血者作了血清抗-HEV抗体的初步调查。     

用酶联免疫夹心法测定肝炎患者血清丙型肝炎抗原

目的建立血清中丙肝病毒NS3抗原（HCAg-NS3）的酶免检测方法。方法以特异性强、敏感度高、识别不同HCAg-NS3抗原表位的HCAg-NS3单克隆抗体和高效价的纯化抗-HCV分别作为包被抗体和酶标记抗体，采用夹心ELISA法测定血清中HCAg-NS3抗原。结果优化了酶免疫反应条件；该方法对HCAg-NS3的最低检测限为1—2ng／ml；批内（n=13）及批间（n=3）变异系数（CV）分别为4．51％和5．64％；对52例抗-HCV阳性血清测定HCAg-NS3抗原的检出率为21．2％，对15例HCAg-NS3阳性标本测定HCV RNA的检出率为60％，1350例抗-HCV阴性的其他类型肝炎患者血清标本中，HCAg-NS3检出率为1．7％，50例正常人血清标本的HCAg-NS3抗原测定结果均为阴性。结论该方法敏感性较高，特异性、重复性和稳定性均良好，可以作为早期诊断HCV感染的有效方法。     

戊型肝炎IgM抗体诊断试剂的临床应用评价

目的评价2种戊型肝炎病毒（HEV）IgM抗体诊断试剂的可靠性。方法用捕获法试剂（E2 IgM）和间接法试剂（GL IgM）对349例临床诊断为急性戊型肝炎及急性非甲~戊型肝炎患者的血清进行HEV IgM检测。同时结合其HEV RNA检测结果作为戊型肝炎的确认标准,以此为依据对2种HEV IgM诊断试剂和以往常用的ELISA试剂的可靠性进行评估。同时检测69例散发性急性肝炎患者血清的HEV IgM及甲型肝炎病毒（HAV）IgM,分析HAV IgM对HEV IgM检测可能造成的干扰。结果E2 IgM试剂的敏感性为98.2%,特异性为100.0%;GL IgM试剂的敏感性仅为60.0%,特异性为91.7%;而传统诊断方法的敏感性为77.9%,特异性仅66.0%,三者差异有统计学意义（P〈0.05）。E2 IgM、GL IgM及传统诊断方法的总符合率分别为99.1%、85.5%和70.5%。HAV IgM有可能导致GL IgM试剂的假阳性。结论E2 IgM试剂是一种良好的戊型肝炎急性诊断试剂,在临床应用中优于GL IgM试剂和传统诊断方法。     

戊型肝炎IgM抗体诊断试剂的临床应用评价

目的评价2种戊型肝炎病毒(HEV)IgM抗体诊断试剂的可靠性。方法用捕获法试剂(E2 IgM)和间接法试剂(GL IgM)对349例临床诊断为急性戊型肝炎及急性非甲~戊型肝炎患者的血清进行HEV IgM检测。同时结合其HEV RNA检测结果作为戊型肝炎的确认标准,以此为依据对2种HEV IgM诊断试剂和以往常用的ELISA试剂的可靠性进行评估。同时检测69例散发性急性肝炎患者血清的HEV IgM及甲型肝炎病毒(HAV)IgM,分析HAV IgM对HEV IgM检测可能造成的干扰。结果E2 IgM试剂的敏感性为98.2%,特异性为100.0%;GL IgM试剂的敏感性仅为60.0%,特异性为91.7%;而传统诊断方法的敏感性为77.9%,特异性仅66.0%,三者差异有统计学意义(P<0.05)。E2 IgM、GL IgM及传统诊断方法的总符合率分别为99.1%、85.5%和70.5%。HAV IgM有可能导致GL IgM试剂的假阳性。结论E2 IgM试剂是一种良好的戊型肝炎急性诊断试剂,在临床应用中优于GL IgM试剂和传统诊断方法。     

检测丙型肝炎病毒F抗体的一种间接ELISA的初步评价

目的评价以丙型肝炎病毒（HCV）F蛋白为包被抗原的间接酶联免疫吸附试验（ELISA）的准确性和可靠性。方法以基因工程重组HCV F抗原包被酶标微孔板,检测HCV感染者血清抗-F滴度,建立阳性判断值,计算HCV感染者血清抗-F阳性率。与某市售HCV ELISA试剂同时检测HCV感染者和非感染者抗-F阳性率,计算该ELISA的敏感性和特异性等技术指标。结果该间接ELISA检测的敏感性为66.7%,特异性为96.7%,正确指数为63.3%,一致率为81.7%,Kappa值为0.63,变异系数（CV）为6.23%。结论该间接ELISA初步评价指标符合准确性和可靠性要求,具有潜在补充检测HCV感染的扩展应用价值。     

温湿度对高通量酶联免疫吸附实验测定丙型肝炎病毒抗体结果的影响

目的探讨实验室温湿度对高通量酶联免疫吸附实验(ELISA)测定丙型肝炎病毒抗体(HCV-Ab)标准品结果的影响。 方法利用艾德康全自动酶免仪(ELISA 1100型),恒温24℃、不同相对湿度(%RH)(30%RH、40%RH,50%RH、60%RH、70%RH、80%RH、90%RH)条件下及湿度50%RH、不同温度(16℃、18℃、20℃、22℃、24℃、26℃、28℃、30℃、32℃、34℃、36℃、38℃、40℃)条件下,分别对HCV-Ab标准品进行测定。 结果在排除湿度影响的情况,在温度16℃～36℃条件下进行实验显示,HCV-Ab的S/CO值(分别为3.93±0.09,4.43±0.15,5.16±0.11,6.00±0.17,6.43±0.12,7.43±0.10,7.84±0.15,7.97±0.47,8.24±0.29,8.64±0.61,9.24±0.43)之间差异有统计学意义(F＝620.08,P＝0.000),且标准品S/CO值均随着温度升高而逐渐升高,HCV-Ab标准品的ELISA结果与温度呈正相关(r＝0.97)。36℃和38℃之间S/CO值(9.24±0.43,9.29±0.30)差异无统计学意义(t＝0.52,P>0.05),而38℃和40℃之间的S/CO值(9.29±0.30,8.65±0.77)差异有统计学意义(t＝8.17,P<0.05)。而在排除温度影响的情况,不同湿度(30%RH、40%RH,50%RH、60%RH、70%RH、80%RH、90%RH)间S/CO值结果(分别为7.20±0.18,7.09±0.32,5.83±0.27,5.38±0.24,3.91±0.28,3.27±0.49,3.04±0.85)差异有统计学意义(F＝985.64,P＝0.000),且标准品S/CO值随着湿度升高而逐渐降低,HCV-Ab标准品ELISA结果与湿度呈负相关(r＝－0.98)。 结论不同的温湿度对高通量ELISA检测结果有着重要影响,尽量选择温度不超过36℃和湿度较低的环境进行高通量的ELISA测定,综合考虑推荐全自动酶免仪工作温度范围控制在18℃～25℃之间,湿度控制在35%RH～50%RH之间。     

与α-烯醇化酶相关的抗内皮细胞抗体ELISA的建立及临床初步应用

目的建立与α-烯醇化酶（ENOI）相关的抗内皮细胞抗体（AECA）的酶联免疫吸附试验（ELISA）,并探讨ENOI-AECA与自身免疫性疾病的关系。方法人工合成获得人ENOI基因编码序列并克隆该片段构建pUC57-ENOI重组质粒,再将重组质粒亚克隆入原核表达载体pET28（a）,回收酶切产物并经T4DNA连接酶连接,获得的重组表达质粒pET28（a）-ENOI,在大肠埃希菌BL21（DE3）中诱导表达蛋白,Ni NTA亲和层析纯化重组ENOI蛋白。以纯化的重组蛋白为包被抗原,并对ELISA反应条件进行优化,初步建立检测ENOI-AECAELISA并作分析性能评价。用建立的方法分别检测健康人及系统性红斑狼疮（SLE）、类风湿性关节炎（RA）患者血清中的ENOI-AECA。结果获得了相对分子质量为47 000的高纯度人ENOI重组蛋白。ELISA抗原最佳包被浓度为5μg/mL,血清最佳稀释倍数为1∶50。以免疫印迹法为参照,所建方法的敏感性和特异性分别为76.0%和90.2%。SLE和RA患者血清中ENOI-AECA的阳性率分别为23.1%和57.1%;RA组ENOI-AECA阳性率与健康对照组比较,差异有统计学意义（P=0.000）。结论以人ENOI重组蛋白为抗原建立的检测ENOI-AECA的ELISA有较高的敏感性和特异性,可用于ENOI-AECA的检测。ENOI-AECA阳性提示患者可能患有自身免疫性血管炎。     

相邻三县区丙型肝炎病毒感染状况分析

目的：通过分析观察相邻三县区（沾化县、利津县及河口区）研究对象血清丙型肝炎病毒（HCV）抗体的检测结果,了解丙型肝炎感染状况,为该地区临床防治工作提供依据。方法：对26558例就诊患者和健康体检者进行抗HCV检测,抗HCV检测采用酶联免疫吸附法（ELISA）。结果：检出抗HCV阳性者752例,阳性率为2.83%,其中男性为3.10%、女性为2.42%,男性显著高于女性（P＜0.01）。各年龄组中,以老年组阳性率最高（3.38%）。752例抗HCV阳性者既往有手术史（251例,33.38%）、血液透析史（137例,18.22%）及输血或血制品史（61例,8.11%）的人群为本地区的高危人群,173例（23.01%）感染HCV者原因不明。结论：该地区HCV的感染率较高,既往有手术史、血液透析史及输血或血制品史的人群为高危人群,原因不明的隐性感染者的发生率较高。     

三种国产抗-HCV酶联免疫诊断试剂检测结果与电化学发光法比较

目的探讨A、B和C三种不同国产酶联免疫吸附试验（ELISA）试剂检测丙型肝炎病毒抗体（抗-HCV）结果的差异性,并将检测结果与电化学发光法检测结果进行比较。方法随机挑选临床检测样本94例。所有样本再使用B、C和Roche电化学发光法试剂盒进行检测。ELISA试剂都使用各自的试剂盒S/CO值进行阴阳性判断,电化学发光检测结果判断以仪器的COI作为判断标准,结果〉1为检测有反应性。结果 A、B、C和电化学发光检测的阳性率分别为84.04%（79/94）、35.11%（33/94）、25.53%（24/94）和39.36%（37/94）,A试剂显著高于电化学发光法,而C试剂显著低于电化学发光法。A、B、C和电化学发光检测的结果一致性分别为55.32%（52/94）、95.74%（90/94）和86.17%（81/94）。将A试剂盒检测的结果分为阴性组（〈1）、弱阳性组（1~8）、阳性组（〉8）三个组,阴性和阳性组四种试剂检测结果符合率较好,而弱阳性组符合率较低。结论 3种国产试剂对阴性和阳性标本与Roche电化学发光法检测符合率很高,弱阳性标本符合率则存在差异,对于弱阳性标本建议使用确诊试验。     

ROC曲线对ELISA检测丙型肝炎抗体阳性判断值的确定和分析

目的采用受试者工作特征(ROC)曲线确定和分析2种不同酶免分析系统酶联免疫吸附试验(ELISA)检测丙型肝炎抗体(抗HCV)的阳性判断值(Cut-off)。方法收集202份血清,用重组免疫印迹法(RIBA)确认抗HCV,同时采用国产addcare ELISA 1100全自动酶免分析系统(简称addcare ELISA 1100)和进口TECAN+FAME组合的酶免分析系统(简称TECAN+FAME酶免系统)检测抗HCV,对吸光度(A)值绘制ROC曲线,得出ELISA检测抗HCV在本实验室的最佳Cut-off值。结果以RIBA结果为金标准,ROC曲线分析结果显示,addcare ELISA 1100检测抗HCV的最佳Cut-off值为0.448,敏感性为99.3%,特异性为96.7%,约登指数为0.960,ROC曲线下面积为0.998,TECAN+FAME酶免系统检测抗HCV的最佳Cut-off值为0.406,敏感性为99.3%,特异性为96.7%,约登指数为0.960,ROC曲线下面积为0.998。结论采用ROC曲线分析得到两种不同酶免分析系统ELISA检测抗HCV的Cut-off值分别为0.448和0.406,检测抗HCV的"灰区"分别设定为0.140~0.448和0.140~0.406,均可优化检测性能。     

化学法交联人-人抗体用于抗甲型肝炎病毒IgM抗体检测质控品的研究

生部临床检验中心发放的抗-HAV IgM质控品相当,S/CO值分别为2.96、3.12,能够作为抗-HAV IgM检测的阳性质控.该嵌合抗体在4℃及-20℃条件下均能稳定保存至少6周.IgG、IgM及交联剂不影响嵌合抗体的阳性检测结果,且该嵌合抗体与抗-HBc IgM、抗-HEV IgM检测不存在交叉反应.使用临床上常见的检测试剂盒检测结果均为阴性.结论 通过化学交联的方法成功构建了人-人嵌合抗体,可用作为抗-HAV IgM检测质控物.