补肾阴、补气、活血中药方对骨髓抑制小鼠脾脏促血小板生成素mRNA、促血小板生成素受体mRNA及转录因子GATA-1 mRNA的影响

目的：进一步研究补肾阴、补气、活血中药方对骨髓抑制小鼠保护的作用机制。方法：使用实时荧光定量RT-PCR检测小鼠脾脏促血小板生成素（thrombopoietin,TPO） mRNA、促血小板生成素受体（c-Mpl）mRNA及转录因子GATA-1 mRNA表达水平。结果：六味地黄汤、补中益气汤均能明显升高骨髓抑制小鼠TPO、c-Mpl及GATA-1 mRNA的表达。复方丹参饮能对小鼠脾脏TPO、c-Mpl及GATA-1 mRNA表达影响不明显。结论：六味地黄汤、补中益气汤均能通过升高骨髓抑制小鼠TPO、c-Mpl及GATA-1 mRNA的表达水平从而促进骨髓抑制小鼠的外周血恢复。     

制首乌总多糖对骨髓抑制贫血小鼠脾脏促红细胞生成素受体和转录因子 GATA-1 mRNA 表达的影响

目的观察制首乌总多糖(PPS)对放、化疗所致骨髓抑制贫血小鼠脾脏促红细胞生成素受体(EpoR)及转录因子GATA-1 mRNA表达的影响,探讨PPS补血作用的分子机制。方法建立骨髓抑制贫血小鼠模型,提取PPS,经ip给药,观察其对骨髓抑制贫血小鼠外周血及脾脏EpoR和GATA-1 mRNA表达的影响。结果PPS能促进骨髓抑制贫血小鼠外周血象恢复,并明显上调脾脏EpoR和GATA-1 mRNA的表达。结论PPS能通过促进EpoR和GATA-1 mRNA的表达,从而促进骨髓抑制贫血小鼠造血功能的恢复。     

制首乌总多糖对骨髓抑制贫血小鼠脾脏促红细胞生成素受体和转录因子GATA- mRNA表达的影响

目的观察制首乌总多糖(PPS)对放、化疗所致骨髓抑制贫血小鼠脾脏促红细胞生成素受体(EpoR)及转录因子GATA- 21mRNA表达的影响, 探讨PPS补血作用的分子机制。方法建立骨髓抑制贫血小鼠模型, 提取PPS, 经ip给药, 观察其对骨髓抑制贫血小鼠外周血及脾脏EpoR和GATA-21mRNA表达的影响。结果PPS能促进骨髓抑制贫血小鼠外周血象恢复, 并明显上调脾脏EpoR和GATA-21mRNA的表达。结论PPS能通过促进EpoR和GATA-21mRNA的表达, 从而促进骨髓抑制贫血小鼠造血功能的恢复。     

补肾、健脾、活血分别对骨髓抑制贫血小鼠造血的影响

目的:观察补肾、健脾、活血法分别对红系血细胞及其造血细胞因子表达的影响,为化疗后骨髓抑制贫血的中医药治疗提供依据。方法:采用全自动血液分析仪检测实验第14、28天骨髓抑制造模小鼠外周血常规检查(RBC,HGB等);使用实时荧光定量RT-PCR检测实验第14天与第28天骨髓抑制造模小鼠脾脏EPO、EPOR mRNA表达水平的变化。结果:六味地黄汤、补中益气汤、复方丹参饮均能显著提高骨髓抑制贫血小鼠RBC、HGB;六味地黄汤组和补中益气汤组EPO、EPOR mRNA表达水平均显著升高,而复方丹参饮组EPO、EPOR mRNA表达水平与模型对照组比较差异无统计学意义。结论:补肾、健脾、活血法对骨髓抑制贫血均有稳定且可靠的提升外周血血象的作用;补肾、健脾法可通过提高EPO、EPOR mRNA的表达水平,促进骨髓造血干细胞的增殖,并促进向红系血细胞分化以升高红系血细胞;而活血法促进造血的机制尚待进一步研究。     

补肾、健脾、活血对免疫抑制小鼠脾脏BCL-2、Caspase-9 mRNA的影响

目的:观察补肾、健脾、活血三种不同治法对小鼠脾脏BCL-2、Caspase-9 mRNA表达的影响。方法:将雄性NIH小鼠100只,随机分为补肾组、健脾组、活血组、模型组和正常对照组,每组20只。除正常对照组外,分别予以六味地黄汤、补中益气汤、复方丹参饮和生理盐水灌胃给药,并给予环磷酰胺腹腔注射造模,检测脾脏BCL-2、Caspase-9 mRNA表达水平。结果:免疫抑制小鼠BCL-2表达显著降低且Caspase-9表达显著升高。补肾、健脾、活血三方皆能提高BCL-2 mRNA表达,并抑制Caspase-9 mRNA表达(P<0.05)。结论:以六味地黄汤、补中益气汤、复方丹参饮为代表的补肾、健脾、活血三种不同治法能有效地促进BCL-2表达,并抑制Caspase-9表达,这可能是三种不同治法改善环磷酰胺所致免疫抑制小鼠免疫功能的机制之一。     

促血小板生成素治疗慢性肾衰竭血小板减少临床研究

目的探讨促血小板生成素(TPO)治疗,慢性肾衰竭患者血小板减少的临床疗效和慢性肾衰竭患者TPO水平、TPO与肾功能及血小板的关系。方法将健康人作为对照组,慢性肾衰竭血小板减少患者作为实验组,应用酶标仪测定健康对照组和实验组TPO水平,同时应用血细胞测定仪和全自动生化测定仪检测慢性肾衰竭患者血常规、肾功能和肝功能等。结果慢性肾衰竭患者较正常对照组血清TPO降低(P0.05),慢性肾衰竭患者应用TPO治疗后两周内,血小板明显上升(P<0.01),慢性肾衰竭患者TPO水平与血小板呈正相关,TPO水平与血尿素氮、肌酐呈负相关。结论 TPO治疗慢性肾衰竭血小板减少具有好的疗效,未发现明显副作用。     

补肾生血法对化疗后骨髓抑制小鼠造血生长因子GM-CSF,EPO, TPO mRNA表达的影响

目的探讨补肾生血(BSSX)法对化疗后骨髓抑制小鼠造血生长因子基因表达的影响,明确其改善骨髓抑制的机制。方法 60只雄性昆明小鼠随机分为6组,即空白对照组,模型对照组,阳性对照组,BSSX高、中、低剂组。除空白对照组外,其余组均连续4d每日腹腔注射环磷酰胺(CTX,50 mg·kg~(-1))1次,制备化疗后骨髓抑制模型。造模完成次日,阳性对照组皮下注射重组人粒细胞集落刺激因子(rhG-CSF,30μg·kg~(-1)),BSSX高、中、低剂组分别按16 g·kg~(-1)、8 g·kg~(-1)、4 g·kg~(-1)给予左归丸联合当归补血丸,均每日1次,连续9d。造模前后记录小鼠体重,并观测外周血白细胞计数(WBC)、红细胞计数(RBC)、血红蛋白含量(HGB)、血小板计数(PLT)变化,以评价造模成功与否。用药结束后,采用实时荧光定量PCR检测小鼠骨髓细胞中粒-单细胞集落刺激因子(GM-CSF)、促红细胞生成素(EPO)、血小板生成素(TPO)mRNA表达水平。结果造模前各组小鼠体重、外周血WBC、RBC、HGB、PLT值无明显差异(均P0.05),提示组间具有可比性。造模后注射CTX的小鼠体重、WBC、RBC、HGB明显低于正常小鼠(均P0.01),提示模型复制成功。用药干预9d后,模型对照组小鼠骨髓细胞中GM-CSF、EPO、TPO mRNA表达水平明显低于空白对照组(均P0.01);与模型对照组比较,阳性对照组GM-CSF、EPO mRNA表达水平明显升高(分别P0.01、P0.05),BSSX高剂组GM-CSF、EPO、TPO mRNA表达水平也明显升高(分别P0.01、P0.01、P0.05);在上调GM-CSF、EPO、TPO mRNA表达方面,BSSX高剂组与阳性对照组无明显差异(均P0.05)。结论补肾生血法改善化疗后骨髓抑制的机制与上调骨髓细胞造血生长因子GM-CSF、EPO、TPO mRNA表达有密切关系。     

参仙合剂防治小鼠血小板减少症的实验研究

目的：观察中药参仙合剂对环磷酰胺所致小鼠血小板减少症的疗效及对血小板生成素、骨髓巨核细胞数的影响。方法：将昆明种小鼠随机分为6组,每组8只,即正常组、模型组、阳性对照组、参仙合剂低剂量、中剂量、高剂量组。参仙合剂各组先予灌胃给药5天,然后除正常组外各组均予环磷酰胺腹腔注射造模,阳性对照组皮下注射重组人白细胞介素－11（rh LI－11）200μg／kg,参仙合剂各组继续灌胃给药,连续6天。定期检测血常规,并于实验第12天检测各组小鼠骨髓巨核细胞数、血清及骨髓上清液中血小板生成素（TPO）浓度。结果：与正常组相比,造模后各组PLT减少、MPV升高,参仙合剂各组PLT高于模型组,参仙合剂中剂量、高剂量组MPV高于模型组（P〈0．05或P〈0．01）。参仙合剂各组与阳性对照组人血清及骨髓上清中TPO浓度显著高于模型组（P〈0．01）,且TPO水平与参仙合剂剂量有关;中剂量、高剂量组、阳性对照组骨髓巨核细胞数高于模型组。结论：参仙合剂能促进小鼠血小板生成,并且可以升高TPO水平．对环磷酰胺所致小鼠血小板减少症有预防和治疗作用。     

四物汤对小鼠血清促红细胞生成素及其基因表达影响的实验研究

目的 探讨四物汤对环磷酰胺所致贫血小鼠血清促红细胞生成素(EPO)及肾EPO mRNA表达的影响.方法 用环磷酰胺腹腔注射建立小鼠贫血模型,同时给小鼠灌服四物汤,ELISA方法检测小鼠血清EPO的含量;Trizol试剂提取肾组织总RNA,反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测肾组织EPO mRNA表达情况(β-actin为内对照标准).结果 四物汤能显著升高小鼠血清EPO水平,明显促进肾组织EPO mRNA的表达.结论 四物汤能抑制环磷酰胺所致的小鼠贫血,其作用机制可能是通过促进肾组织EPO mRNA的表达,使肾脏合成EPO增多,从而促进红系细胞生长.     

重组人促血小板生成素对化疗所致血小板减少症的防治效果

目的:观察重组人促血小板生成素防治化疗所致血小板减少症的临床疗效。方法:选取40例首次化疗后出现血小板减少症患者,分别于第2、3周期化疗开始前及化疗结束后,给予重组人促血小板生成素预防性治疗,观察第2、3周期化疗后血小板计数减少情况。结果:与第1周期化疗后比较,第2、3周期化疗后血小板计数最低平均值明显升高;恢复后血小板计数最高平均值明显升高;血小板计数恢复正常时间缩短,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:应用重组人促血小板生成素防治首次化疗后出现血小板减少症患者,疗效良好。     

比较含黄芪和含红芪的补中益气汤对小鼠免疫功能的影响

目的 探讨黄芪和红芪在补中益气汤提高免疫功能作用过程中的可替性.方法 取正常昆明种小鼠40只,随机分为对照组、模型组、含黄芪组和含红芪组,每组10只.腹腔注射环磷酰胺制备免疫功能低下的小鼠模型.含黄芪组和含红芪组分别给予含黄芪和红芪的补中益气汤20ml/kg,连续14d,对照组和模型组给予等量生理盐水.测定各组小鼠胸腺、脾脏质量并计算小鼠胸腺指数、脾脏指数;检测巨噬细胞吞噬功能、血清溶血素水平、T淋巴细胞增殖能力、自然杀伤细胞(NK)杀伤活性及白细胞介素4(IL-4)含量. 结果 与模型组相比,含黄芪组和含红芪组均可提高免疫抑制小鼠胸腺指数、脾脏指数、巨噬细胞吞噬指数、溶血素水平、T细胞增殖能力、NK细胞活性、IL-4水平(P＜0.05或P＜0.01).除含红芪组提高T细胞增殖能力作用强于含黄芪组外,其余免疫指标两组间比较差异无统计学意义(P＞0.05).结论 在提高免疫功能方面,补中益气汤中红芪和黄芪是可以相互替换的.     

补肾健脾法对氢化可的松诱发的脾肾虚证小鼠肾上腺功能的影响

目的研究补肾健脾法对氢化可的松诱发的脾肾虚证小鼠肾上腺功能的影响。方法将60只ICR小鼠随机分为正常对照组、氢化可的松组、四君子汤组[12.75 g(生药)/kg]、六味地黄汤组[12.5 g(生药)/kg]、桂附地黄汤组[13.5 g(生药)/kg],连续灌胃给药氢化可的松(1.65 mg/kg)14 d建立药源性证候模型;各中药复方组在灌胃氢化可的松的同时及停止氢化可的松灌胃后7 d,每日分别灌胃给药3个中药复方。每日称定小鼠体质量;在第14、21天,运用小鼠辨证论治实验方法学观测小鼠四诊指标;在第15、22天,计算脾脏、胸腺指数,ELISA检测血清皮质酮、促肾上腺皮质激素、肾上腺素和去甲肾上腺素水平,采用实时荧光定量PCR技术检测Star、Cyp11a1、Cyp21a1、Cyp11b1、Cyp11b2、Dbh、Ddc、Pnmt、Th mRNA表达,Western blot检测LDLR、SRBI、Star蛋白表达。结果氢化可的松干预后,小鼠体质量,抓力,尾部最低温度,脾脏、胸腺指数,血清皮质酮、促肾上腺皮质激素水平显著下降(P<0.05,P<0.01);显著抑制相关肾上腺类固醇激素合成酶(Star、Cyp11a1、Cyp21a1、Cyp11b1)mRNA表达(P<0.05,P<0.01),并抑制胆固醇转化为肾上腺类固醇激素过程中相关蛋白(LDLR、SRBI、StAR)表达。与氢化可的松组比较,桂附地黄汤组显著增加小鼠抓力(P<0.01),四君子汤组、六味地黄汤组和桂附地黄汤组显著升高血清皮质酮均水平(P<0.01),四君子汤组、桂附地黄汤组明显抑制Star、Cyp11a1、Cyp21a1、Cyp11b1 mRNA表达(P<0.05,P<0.01),3个复方组能改善LDLR、SRBI、StAR蛋白下降。结论桂附地黄汤对小鼠阳虚证候有所改善,3个中药复方对小鼠阴虚证候疗效不显著。3个中药复方对氢化可的松诱发的肾上腺皮质功能抑制均有缓解作用。     

补中益气汤和补阳还五汤对大鼠前列腺增生影响的实验研究

目的:观察补中益气汤和补阳还五汤对大鼠前列腺增生的影响,为临床治疗前列腺增生证提供依据。方法:取SD雄性2月龄大鼠40只,随机分组,应用去势大鼠皮下注射丙酸睾丸酮诱导前列腺增生,观察正常对照组、模型组、补中益气汤组、补阳还五汤组大鼠前列腺的湿重、前列腺指数、酸性磷酸酶(ACP)和前列腺特异性酸性磷酸酶(PAP)的变化以及前列腺形态学改变。结果:补中益气汤组与补阳还五汤组大鼠前列腺的湿重、前列腺指数和血清酸性磷酸酶均显著低于模型组(P<0.01);补中益气汤对大鼠前列腺的湿重、前列腺指数和血清酸性磷酸酶的影响比补阳还五汤明显(P<0.05)。结论:补中益气汤和补阳还五汤均可明显抑制大鼠前列腺增生,抑制大鼠血清酸性磷酸酶水平升高,其中补中益气汤的作用比补阳还五汤的作用更加明显。临床上可以充分利用补中益气汤治疗良性前列腺增生症。     

六味地黄汤对5/6肾切除大鼠肾间质纤维化的影响

目的观察六味地黄汤对5/6肾切除大鼠肾间质纤维化的拮抗作用和对肝细胞生长因子（hepatocyte growth factor,HGF）及其特异性受体c-Met表达的影响。方法 SD大鼠分为假手术组、模型组和六味地黄汤组,采用5/6肾切除法复制慢性肾间质纤维化模型。造模1周后,灌胃干预8周。观察残肾病理改变,采用免疫组化检测肾组织中HGF和c-Met蛋白的表达。结果模型组和六味地黄汤组残肾均出现肾间质纤维化,模型组更为严重;与假手术组相比,模型组HGF表达升高（P〈0.05）,六味地黄汤组表达也升高（P〈0.01）,六味地黄汤组HGF表达强于模型组（P〈0.05）;与假手术组相比,模型组和六味地黄汤组c-Met表达均升高（P〈0.01）,六味地黄汤组表达强于模型组（P〈0.01）。结论六味地黄汤可能通过促进5/6肾切除大鼠肾组织HGF及其受体c-Met的表达,减轻肾间质纤维化程度。     

六味地黄汤对小鼠诱发性肺腺瘤 P53 基因表达的影响

六味地黄汤能够显著降低氨基甲酸乙酯所致小鼠肺腺瘤的诱发率，且这种抑制作用在甲状腺素“阴虚”小鼠中表现得更为明显。诱发肺腺瘤小鼠的肺组织中，肿瘤抑制基因Ｐ５３ｍＲＮＡ表达比正常肺组织明显下降，给予六味地黄汤后，Ｐ５３基因表达明显回升；在甲状腺素“阴虚”小鼠中，六味地黄汤也具有同样作用。     

急性肝衰竭模型中医证型探讨

目的 应用小鼠急性肝衰竭模型,筛选有效方剂,以方测证探讨该模型的中医证型。     

六味地黄汤对细胞诱导的杀伤细胞体外扩增及抗骨肉瘤细胞的影响

目的:探讨六味地黄汤对不同人群来源的多种细胞诱导的杀伤细胞(cytokine-induced killer cells,CIK)细胞增殖及其对骨肉瘤细胞毒活性的作用。方法:实验分为6组,通过向10名健康男性的外周血单个核细胞(PBMC)中分别加入在白介素-2(IL-2)、干扰素-γ(IFN-γ)、白介素-1(IL-1)、抗CD3单克隆抗体(CD3McAb)及不同浓度中药血清,诱导CIK细胞,检测其形态及表型,测定CIK细胞对骨肉瘤细胞的细胞毒性作用。结果:单纯中药含药血清对CIK无诱导作用,细胞因子联合含药血清培养的CIK增殖倍数明显高于无药血清和无血清培养(P<0.05),而在联合培养中中剂量中药的CIK增殖速度高于低和高剂量血清培养(P<0.05),且对CIK细胞CD3+CD5 6+表达最为稳定;各组对骨肉瘤细胞均有一定杀伤作用,其中联合培养含药血清中剂量培养CIK细胞对骨肉瘤细胞杀伤效果最好。结论:单纯六味地黄汤含药血清对CIK细胞基本无诱导作用,联合细胞因子有促进CIK细胞的体外扩增作用,对骨肉瘤细胞有较强的杀伤活性,但与浓度相关。     

加味补中益气汤治疗自汗35例观察

目的:观察加味补中益气汤(自拟)治疗自汗虚证的疗效。方法:60例随机分为治疗组35例和对照组25例,治疗组用加味补中益气汤,对照组肺卫不固型用桂枝加黄芪汤合玉屏风散、心血不足型用归脾汤。结果:总有效率治疗组91.5%、对照组80.0%,两组比较有显著性差异(P0.05)。结论:加味补中益气汤治疗自汗虚证有显著疗效。     

六味地黄汤对实验性骨关节炎兔软骨细胞凋亡与增殖的体内实验

目的:探讨六味地黄汤对实验性膝骨关节炎兔软骨细胞增殖、凋亡的影响。方法:20只新西兰兔用Hu lth法造骨关节炎动物模型,随机分成空白对照组、实验组;实验组用六味地黄汤灌胃,空白对照组用生理盐水,治疗第4、8、12、24周后每组各取2只动物,用亚硝酸盐还原酶法测定关节滑液NO水平,关节软骨组织HE染色,光镜观察形态学变化、电镜观察软骨细胞内结构变化及原位末端标记(TUNEL)法观察软骨细胞凋亡病理改变,进行组织病理学评估。结果:空白对照组NO活性在不同时期均高于实验组(8周,P<0.05;12、24周,P<0.01),两组间比较有显著性差异(P<0.05,0.01);实验组的关节软骨病理变化总积分、软骨细胞病理改变积分和软骨表层病理改变积分均明显低于空白对照组(P<0.05);实验组的软骨细胞凋亡指数与对照组的软骨细胞凋亡有显著性差异(P<0.05),与关节液中NO含量显著相关。结论:六味地黄汤对兔膝关节实验性骨关节炎软骨退变具有保护作用,通过NO诱导途径减少软骨细胞的凋亡,可能是其作用机制之一。