Wilson病ATP7B基因启动子区的研究

目的 检测肝豆状核变性（Wilson disease，WD）ATP7B基因启动子区的DNA序列，分析其结构，发现存在的突变，通过报告基因瞬时表达研究突变对启动子功能的影响。方法 检测36个WD家系71名成员（其中48例WD患者）及20名正常人的基因组DNA序列并进行分析。对发现的突变，进行荧光素酶报告基因瞬时表达研究。结果 （1）在正常对照、患者一级亲属和WD患者的启动子区-190、-78和＋260位（转录起始点为＋1）均发现存在单个碱基的不同；（2）在48例病人中发现3例存在-183位C→T突变，其中2例为纯合突变，另1例为杂合突变，在正常对照、患者一级亲属中未发现此改变；（3）通过荧光素酶报告基因瞬时表达研究，发现-183位C→T突变不影响ATP7B基因启动子的功能。结论 本研究在ATP7B基因启动子区未发现存在致病突变，提示ATP7B基因启动子区存在致病突变在中国人群中是不常见的。     

肝豆状核变性病基因突变的检测及酶切诊断方法

目的 筛选中国人肝豆状核变性的高频突变点,并建立酶切诊断方法。方法 对中国人ＷＤ３９个家系４５例患者的３￣２０号外显子进行聚合酶链反应（ＰＣＲ）－单链构象多态性（ＳＳＣＰ）分析,对有异常者进行序列分析,并通过对该突变点的酶切再次筛选。     

外伤诱发Wilson病司法鉴定1例

1病例男,19岁,高中学生。母孕期、出生时及生长发育无异常。8岁入学,成绩中等。性格内向。既往健康,家族史(一)。3个月前脸部被打了一拳,当即倒下,无昏迷,但流口水,不能讲话,用手势及书写示意。进食、行走困难;且烦躁,易怒,失眠,时有莫名哭泣等。当日头颅CT无异常,磁共振检查示：脑干、双侧基底核区信号异常。     

应用PCR—SSCP技术检测肝豆状核变性基因突变及多态

目的 检测国人肝豆状核变性病（ＷＤ）基因外显子突变及多态。方法 应用聚合链反应－单链构像多态性（ＰＣＲ－ＳＳＣＰ）技术分析２４个ＷＤ家系１２５名成员及５０名正常对照组外周血白细胞ＤＮＡ的ＷＤ基因第５、１４外显子（ｅｘｏｎ５，ｅｘｏｎ１４）。结果 ３６例ＷＤ患者有１０例可能发生ｅｘｏｎ５突变，占２７．８％；表现为４种不同的单链构像；并在正常人及ＷＤ患者均同ｅｘｏｎ５多态。在ｅｘｏｎ１４未发现估变。结     

Wilson病基因全长外显子的突变检测和分析

目的 研究报道Wilson病（WD）基因7种新突变和5种多态,结合前期在部分外显子发现并报道的突变和多态现象,进一步分析WD基因全长外显子的突变特征,以期对中国人WD基因的突变状况有一个完整的认识。方法 研究对象包括60名无亲缘关系的正常对照和84例分别来自65个家系的WD患者。抽取上述研究对象为外周静脉血,用盐析法或过柱法抽提基因组DNA。用聚合酶链反应方法分别扩增全部的21个外显子顺序,以单链构象多态分析及DNA测序方法,检测上述研究对象的基因突变和多态。结果 共检测到18种突变和17种多成,包括7种突变和5种新多态。其中Arg778Leu和Thr935Met为基因突变热点,突变频率分别高达37．7％和10．0％,其余突变的频率均低于4．0％。此次研究还发现曾作为突变形式加以报道的IIe48Thr应考虑为一种多态现象。结论 我国WD基因突变是是少数几个热点突变和广泛存在的罕见突变为特征。     

肝豆状核变性8号外显子778密码子基因突变的酶切检测

目的应用酶切方法对中国人肝豆状核变性患者ＡＴＰ７Ｂ基因中的高频突变点进行检测，并对家系进行基因诊断分析。方法根据高频突变点所处序列设计合适的内切酶ＭｓｐⅠ，对中国人肝豆状核变性３９个家系４５个患者以及６０例正常人的ＡＴＰ７Ｂ基因８号外显子ＰＣＲ扩增后进行酶切分析。对有异常者进行序列分析（自动测序）。结果正常人组未见异常，患者组有２例突变纯合子，占患者总数４４％，１１例杂合子，占患者总数２４４％。酶切的异常率为２８８％。序列分析证实所有异常表现者均为Ｇ２２７３Ｔ置换，即Ａｒｇ７７８Ｌｅｕ突变。并检测和分析了３个高频突变家系。结论ＡＴＰ７Ｂ基因的８号外显子７７８密码子为中国人肝豆状核变性患者的高频突变点。用ＰＣＲ－酶切的方法可以作为检测中国人肝豆状核变性患者基因突变的快速诊断方法     

多位点连锁分析检测Wilson病基因携带者及症状前患者

应用Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交技术，以ＷＮＤ位点两侧的四个ＤＮＡ多态标记－Ｄ１３Ｓ１、Ｄ１３Ｓ３１、Ｄ１３Ｓ２６对１０个Ｗｉｌｓｏｎ病家系的５４名个体进行多位点限制性片断长度多态性（ＲＦＬＰ）连锁分析，检出２例症状前患者，１１例肯定携带者及５名正常纯合子，证实它们用于Ｗｉｌｓｏｎ病的症状前诊断及杂合子筛选是有效可靠的。     

Wilson病的基因及细胞移植治疗的研究进展

Wilson病(WD)是一种常染色体隐性遗传性铜代谢障碍性疾病,ATP7B基因突变是该病的根本病因。基因及细胞治疗是最可能从根本治愈本病,最具前景的治疗途径。目前,国内外的基础研究主要是以质粒、腺病毒、慢病毒等为载体介导基因治疗。细胞移植的方法有肝细胞移植、胎儿肝祖细胞移植、骨髓干细胞移植、胚胎干细胞移植。本文就以上方法的基础研究以及对促进干细胞向肝细胞方向分化的因素作一综述。各种基因及细胞移植技术均能达到一定的治疗动物模型作用,但仍存在许多不足之处。促进干细胞向肝细胞方向分化的肝细胞核因子是重要的研究方向之一。     

Wilson病基因产物在人肝细胞内存在和定位的研究

目的证实Wilson病铜转运P型ATP酶(WD蛋白)在人肝内的存在,并初步研究其在肝细胞内的具体定位.方法应用Western-blot蛋白印迹技术对离体培养正常人肝细胞内蛋白进行分离;通过高浓度铜及P型ATP酶阻滞剂矾酸钠、激动剂长春新碱孵育培养,差速离心分离肝细胞胞浆、溶酶体、线粒体和微粒体,对各亚细胞铜含量分别对照分析.结果人肝细胞内分离出155 kDa的WD蛋白特异性条带;在人肝细胞质膜、微粒体内存在有铜转运P型ATP酶,其阻滞剂及激动剂对肝细胞铜转运有显著影响.结论证实正常人肝细胞存在WD蛋白,其存在部分可能在肝细胞质膜、内质网和高尔基器.     

经DNA测序证实的肝豆状核变性基因突变热区的研究

目的研究我国肝豆状核变性（ＷＤ）基因突变的特征。方法应用聚合酶链反应－单链构像多态（ＰＣＲ－ＳＳＣＰ）技术，结合ＤＮＡ测序技术，筛查４０个ＷＤ家系的５６例患者及无亲缘关系的６０名正常人的ＷＤ基因第５、８、１４号外显子（ｅｘｏｎ５，ｅｘｏｎ８，ｅｘｏｎ１４）的突变及多态。结果２１例患者（来自１５个ＷＤ家系）在ｅｘｏｎ８检出２种错义突变，占３７．５％（１５／４０），其中２例（来自同一家系）发生Ａｒｇ７７８Ｇｌｎ纯合子突变（２．５％），８例（分别来自８个ＷＤ家系）发生Ａｒｇ７７８Ｌｅｕ纯合子突变（２０．０％），余１１例（来自６个ＷＤ家系）发生Ａｒｇ７７８Ｌｅｕ杂合子突变（１５．０％，６／４０）。此外，在第８号外显子区域发现了两种多态；在ｅｘｏｎ５和ｅｘｏｎ１４侧翼的内含子区域各发现了１种新多态。这是我国首次经ＤＮＡ测序证实的ＷＤ基因突变热区。结论ｅｘｏｎ８为我国ＷＤ病人基因突变的热区之一，这对于建立准确快速的ＷＤ直接基因诊断方法具有重要意义，该测序方法对明确基因变异的具体部位和内容的具有一定的重要性。     

DNA restriction fragment length polymorphism of HLA-DR2: Correlation with HLA-DR2-associated functions

HLA-DR2 can be divided into at least 3 distinct HLA-D clusters which correlate with structural differences within the HLA-D region. Further, a functional counterpart of this subdivision has been previously identified. The presence of a particular DR beta 2 polypeptide chain correlated precisely with the susceptibility of measles virus-infected HLA-DR2 homozygous typing cell lines to lysis by measles virus-specific, HLA class II-restricted CTL clones. To determine if a genetic basis for these functional differences could be detected, the degree of polymorphism at the DNA level within the serologically defined HLA-DR2 haplotype has been examined. By using DNA probes for DR beta and DQ beta 4 of the 5 HLA-D clusters of HLA-DR2 could be distinguished and a RFLP pattern was identified which correlates with known immunological functions associated with these various D types. In addition, this technique of 'molecular genotyping' was used to investigate a limited panel of patients with multiple sclerosis (MS) who were HLA typed as either HLA-DR2,2 or HLA-DR2,blank. The RFLP profile of the HLA-DR2 Dw2 D type was found in all of these MS patients.     

Alzheimer病患者线粒体DNA点突变的研究

目的旨在观察Alzheimer病(Alzheimerdisease,AD)患者线粒体DNA(mitochondrialDNA,mtDNA)上点突变的情况,并探讨mtDNA点突变与AD发生的关联性。方法入组了111例AD患者作为AD组和性别/年龄与之相匹配的正常老人117名组成对照组,应用PCR-RFLP的方法对被研究对象mtDNA上分别位于第4336、5460和8021三个位置的点突变情况进行检测。结果第4336位置上的碱基未发现存在突变的现象。第8021位置上的碱基仅在正常老人组内检测到1例突变型,其余均为野生型。在第5460位置上对照组突变率为2.6%(3/117),AD老人组中突变率为6.3%(7/111),显著性检验χ2=1.902,P=0.168。结论在我国上海汉族人群中线粒体DNA上第4336位置上可能不存在点突变的现象,第8021位置上突变也很少发生,在第5460位置上的碱基可能出现A或T的点突变,但这种突变的发生可能与AD的发生无直接关联。     

The correlation of clinical phenotype in Friedreich ataxia with the site of point mutations in the FRDA gene

Most cases of Friedreich ataxia (FRDA) are due to expansions of a GAA trinucleotide repeat sequence in the FRDA gene coding for frataxin, a protein of poorly understood function which may regulate mitochondrial iron transport. However, between 1% and 5% of mutations are single base changes in the sequence of the FRDA gene, causing missense, nonsense, or splicing mutations. We describe three new mutations, IVS4nt2 (T to G), R165C , and L182F , which occur in patients in association with GAA expansions. These cases, and a further five reported cases of point mutations causing FRDA, demonstrate that splicing, nonsense, or initiation codon mutations (which cause a complete absence of functional frataxin) are associated with a severe phenotype. Missense mutations, even in highly evolutionally conserved amino acids, may cause a mild or severe phenotype. Received: March 24, 1998 / Accepted: May 28, 1998     

Novel point mutations in survival motor neuron 1 gene expand the spectrum of phenotypes observed in spinal muscular atrophy patients

The aim of our study was to identify point mutations in a group of 606 patients diagnosed for spinal muscular atrophy with excluded biallelic loss of the SMN1 gene. Point missense mutations or small deletions in the SMN1 gene were ultimately identified in 18 patients. Six patients were found to have small deletions, the c.429_435del mutation in 3 cases, the c.431delC mutation in 2 and c.722delC in one. Those mutations, not described previously, were characteristic of patients presenting a severe phenotype. The most frequent missense mutation – p.Thr274Ile, was identified in 9 patients presenting a rather mild phenotype. Three other missense mutations, i.e. p.Ser230Leu, p.Ala111Gly and p.Pro244Leu, were identified in a further 3 SMA3 patients. Mutation p.Pro244Leu, not described so far, was identified in a patient with a mild form of SMA and more distal distribution of muscle weakness. Our results suggest a specific point mutation spectrum in the Polish population. The existence of small deletions not identified thus far could suggest a possible founder effect. In patients with preserved one SMN1 allele without common exon 7 deletion, presenting a mild form of SMA, a special consideration should be given to the p.Thr274Ile mutation.     

变性高效液相色谱在检测肝豆状核变性基因突变中的作用

目的　建立变性高效液相色谱 (denaturinghighperformanceliquidchromatography,DHPLC)技术检测肝豆状核变性 (WD)基因第 8外显子突变。方法　利用聚合酶链式反应 (PCR)扩增WD基因第 8外显子片段 ,扩增产物直接进行DHPLC分析 ;对峰型有改变的样品经测序分析确认突变。结果　在 5 1例WD先证者中共发现两种错义突变 (Arg778Leu和Arg778Gln)、一种插入突变 (Ins2 30 2C)和一种多态性位点 (C2 310G)。其中 12例先证者带有Arg778Leu杂合错义突变 ,3例为Arg778Leu纯合错义突变 ,1例为Arg778Gln杂合错义突变 ,1例为杂合 2 30 2C插入突变。多态位点C2 310G与Arg778Leu突变完全连锁。结论　WD基因第 8外显子阳性检出率为 33 3% (17/ 5 1) ,说明DHPLC技术是一种可用于临床WD基因诊断的高效、灵敏和操作简便的方法     

动脉硬化性血栓性脑梗塞与载脂蛋白B基因XbaI,EcoRI多态的相关性研究

应用聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术研究了８４例动脉硬化性血栓性脑梗塞（ＡＴＣＩ）患者和１０７例正常人的载脂蛋白Ｂ（ａｐｏＢ）基因的ＸｂａＩ、ＥｃｏＲＩ位点的多态性。结果ＡＴＣＩ组Ｘ－频率（０．８２７）低于对照组（０．９１６），ＡＴＣＩ组Ｘ＋Ｘ－基因型频率增高，与对照组比较有显著性差异，而且Ｘ＋Ｘ－基因型与血脂水平增高有相关性。提示，ａｐｏＢ基因的ＸｂａＩ多态及连锁失衡可能作为动脉粥样硬化的遗传背景影响血脂质代谢，并参与ＡＴＣＩ的发病机制。