肝X受体调控脂代谢研究进展

肝X受体(LXR)属于核受体家族成员,通过与类视黄醇X受体结合形成异二聚体,调控靶基因的表达.LXR是胆固醇和脂质代谢的重要调节因子,通过调控其靶蛋白ATP结合盒转运蛋白A1、ATP结合盒转运蛋白G1和细胞色素P4507A1等促进胆固醇逆转运.此外,LXR激动剂能够调控脂质代谢及炎症介质基因的表达,改善糖代谢,从而发挥...     

载脂蛋白嵌合模拟肽对巨噬细胞胆固醇流出的影响

目的观察载脂蛋白嵌合模拟肽Ac-hE-18A-NH2对RAW264.7巨噬细胞胆固醇流出的影响,并探讨其机制。方法 RAW264.7巨噬细胞种植于24孔板,用0.5μCi/孔3H-胆固醇和含50mg·mL-1氧化低密度脂蛋白共同孵育24h之后,给予不同浓度的Ac-hE-18A-NH2(0～100mg·mL-1)干预24h,收集细胞用液体闪烁计数法检测胆固醇流出。采用ELISA测定细胞内cAMP含量,采用实时荧光定量PCR及Westernblot检测ABCA1、LXRα和PPARγ的mRNA及蛋白表达。结果 Ac-hE-18A-NH2以浓度依赖方式介导胆固醇流出;50mg·mL-1Ac-hE-18A-NH2干预不同时间,其介导的胆固醇流出率分别为(10.86±1.46)%(6h),(13.43±1.55)%(12h),(20.58±1.34)%(18h),和(26.93±4.37)%(24h)。同时,Ac-hE-18A-NH2还以浓度依赖方式增加细胞内cAMP水平,上调ABCA1、LXRα和PPARγmR-NA和蛋白表达。加用cAMP刺激剂8-Br-cAMP,Ac-hE-18A-NH2介导的胆固醇流出率由26.93±4.37增加至35.81±2.73,ABCA1mRNA表达增加了66.67%。而加用PPARγ特异性抑制剂预处理细胞后,PPARγ的表达几乎完全抑制,ABCA1和LXRα的表达也受到一定程度抑制,Ac-hE-18A-NH2介导的胆固醇流出率明显减少。结论模拟肽Ac-hE-18A-NH2可以明显促进巨噬细胞胆固醇流出,其机制可能与cAMP-ABCA1和PPARγ-LXRα-ABCA1两种途径有关。     

阿托伐他汀对金黄地鼠糖尿病模型巨噬细胞胆固醇外流的影响

目的：研究不同剂量阿托伐他汀对糖尿病动物模型体内巨噬细胞胆固醇含量的影响，进一步探讨他汀类药物抑制动脉粥样硬化斑块进展的机制。方法：建立糖尿病金黄地鼠动物模型，体外培养腹腔巨噬细胞，在体外与不同剂量阿托伐他汀孵育，利用酶法结合高效液相色谱法测定细胞内胆固醇及胆固醇脂含量。RT—PCR方法检测细胞ABCA1 mRNA表达量的不同。结果：在apoA1存在时，阿托伐他汀可以显著促进巨噬细胞内胆固醇外流，可能与药物增强细胞内胆固醇酯水解酶活性、促进巨噬细胞AB—CA1的表达有关。结论：阿托伐他汀促进ABCA1介导的细胞内胆固醇外流。     

PPARγ激动剂对RAW264.7巨噬细胞源性泡沫细胞胆固醇流出的影响

目的观察PPARγ激动剂吡格列酮对RAW264.7巨噬细胞源性泡沫细胞胆固醇流出调节蛋白三磷酸腺苷结合核转运蛋白G1(ABCG1)、肝X受体α(LXRα)表达的影响。方法 (1)体外培养RAW 264.7巨噬细胞,用50 mg/L的氧化型低密度脂蛋白胆固醇(ox-LDL)孵育48 h诱导成泡沫细胞,油红O染色并在光镜下鉴定泡沫细胞形态及变化。(2)以不同浓度吡格列酮(0、5、10、20、30μmol/L)作用泡沫细胞24 h后,酶法检测泡沫细胞内胆固醇酯的含量。用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)及免疫印迹法测定ABCG1、LXRα的mRNA及蛋白的表达。结果 PPARγ激动剂吡格列酮可显著减少泡沫细胞内胆固醇酯含量,并呈浓度依赖性增加RAW264.7巨噬细胞源性泡沫细胞ABCG1、LXRα的mRNA和蛋白的表达。结论 PPARγ激动剂吡格列酮减少泡沫细胞内胆固醇酯的含量可能是通过上ABCG1、LXRα的mRNA及蛋白表达来实现的。     

小檗碱对脂质代谢相关基因PPARα和CPTIA表达的影响

目的研究小檗碱(Berberine,Ber)对HepG2细胞的PPARα基因及其调控基因CPTⅠA表达的影响。方法以PPARα激动剂非诺贝特作阳性对照药,采用RT-PCR法研究Ber对HepG2细胞PPARα基因及其调节基因CPTⅠAmR-NA表达影响的时—效和量—效关系。结果非诺贝特明显促进CPTⅠAmRNA表达;Ber也呈浓度和时间依赖性促进CPTⅠAmRNA的表达,而对PPARαmRNA表达无影响;PPARα特异拮抗剂MK-886能阻断非诺贝特和Ber上述作用。结论Ber可能通过激动PPARα促进与脂质代谢相关的靶基因CPTⅠAmRNA的表达。     

大黄素诱导LXRα-ABCA1信号通路减少非酒精性脂肪性肝病细胞模型的脂质沉积

目的 通过体外模型探究大黄素改善肝细胞脂质沉积的作用机制,为大黄素治疗非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)提供实验依据。方法 使用油酸和棕榈酸构建肝细胞脂肪变性模型,实验分为正常对照组、模型对照组、大黄素组和阿托伐他汀钙(阳性对照)组,油红O染色和尼罗红染色分析细胞的油脂蓄积情况,并测定细胞中三酰甘油(TG)和胆固醇(TC)含量。使用RT-qPCR和Western blotting检测大黄素对LXRα和ABCA1的mRNA和蛋白影响,使用荧光素酶报告基因考察大黄素对LXRα-ABCA1通路的作用,使用RNA干扰实验敲低LXRα考察大黄素通过LXRα-ABCA1通路减少细胞脂质的机制。结果 大黄素显著降低了细胞的脂质蓄积,并降低细胞内TG和TC含量(P<0.05)。大黄素增加了LXRα和ABCA1基因以及蛋白表达水平,并提高了LXRα-ABCA1双荧光素酶系统的相对荧光值(P<0.05)。敲低LXRα后,大黄素减少细胞脂质蓄积的作用显著降低。结论 大黄素可显著改善体外细胞脂质蓄积,激活LXRα-ABCA1信号通路促进脂质外排可能是大黄素缓解NAFLD的重要机制。     

DHA虾青素双酯抑制脂肪细胞与巨噬细胞共培养体系中炎症反应

摘要：目的 在体外水平研究DHA虾青素双酯对脂肪组织炎症的改善作用并探究其作用机制。方法 采用Transwell小室法建立脂肪细胞与巨噬细胞共培养体系,模拟体内脂肪组织炎症状态,检测培养上清中炎症因子水平以及游离脂肪酸和甘油含量,油红O染色观察脂肪细胞脂解情况,免疫荧光表征巨噬细胞极化情况,qRT-PCR测定脂肪细胞脂解与巨噬细胞极化相关基因表达。结果 DHA虾青素双酯能显著降低共培养体系中促炎因子TNF-α（P<0.01）和MCP-1（P<0.05）的水平;抑制脂肪细胞脂解,降低培养上清中甘油含量（P<0.05）;促进巨噬细胞向M2型极化,显著降低巨噬细胞内M1型标志基因IL-1β、INOS的表达（P<0.01）;并且显著抑制脂肪细胞脂解相关基因TNFR（P<0.01）、JNK（P<0.01）、G0S2（P<0.05）、ATGL（P<0.01）和NF-κB信号通路关键基因MyD88、NF-κB及TNF-α（P<0.01）的表达。结论 DHA虾青素双酯可降低脂肪细胞与巨噬细胞共培养体系中炎症因子分泌,抑制脂肪细胞脂解、促进巨噬细胞M2型极化,最终抑制共培养体系中的炎症反应。     

竹节参总皂苷改善高脂饮食诱导的小鼠睾丸生殖功能障碍

目的探讨竹节参总皂苷(saponins of Panax Japonicus,SPJ)改善高脂饮食诱导的小鼠睾丸生殖功能障碍的作用及机制。方法采用血球计数板于光镜下进行精子计数,伊红Y染色法检测精子存活率;苏木精伊红(HE)染色法检测小鼠睾丸组织形态;TUNEL法检测睾丸生精细胞的凋亡;Western blot法检测睾丸组织内p-NF-κB及其下游炎症因子肿瘤坏死因子α(TNF-α)和白细胞介素1β(IL-1β)的蛋白表达水平;免疫荧光法检测睾丸巨噬细胞数量。结果 SPJ可减轻高脂饮食小鼠的体质量,提高睾丸和附睾的质量及其指数,提高精子存活率和精子数量,改善生精小管形态并减轻生精细胞的凋亡,明显下调p-NF-κB、TNF-α和IL-1β的蛋白表达水平,减少睾丸巨噬细胞的数量。结论 SPJ对高脂饮食小鼠睾丸生殖功能障碍有明显改善作用,其机制可能与减轻巨噬细胞浸润,抑制NF-κB通路介导的睾丸炎症有关。     

辛伐他汀对新诊断2型糖尿病患者单核巨噬细胞胆固醇外流的影响

目的研究新诊断2型糖尿病患者外周血单核巨噬细胞SR-B1、ABCA1表达及胆固醇外流的变化,以及辛伐他汀治疗对上述指标的影响。方法采用Western印迹法及RT-PCR方法检测新诊断糖尿病患者(A1、B1组)、正常对照组(C组)及辛伐他汀治疗后(A2、B2组)外周血单核巨噬细胞SR-B1、ABCA1蛋白及mRNA表达、胆固醇外流率。结果新诊断糖尿病患者单核巨噬细胞SR-B1蛋白及mRNA表达各组间以及治疗前后比较差异无统计学意义(P>0.05)。ABCA1蛋白及mRNA表达明显降低(P<0.05),辛伐他汀治疗后B2组升高明显(P<0.05),但仍显著低于C组(P<0.05)。两个糖尿病组胆固醇外流率明显下降(P<0.05),A1、B1两组间差异无统计学意义(P>0.05)。治疗后的A2组胆固醇外流率轻度升高,但差异无统计学意义(P>0.05),B2组胆固醇外流率显著升高(P<0.05),但未达到C组水平(P<0.05)。巨噬细胞胆固醇外流率与ABCA1蛋白及mRNA表达密切相关(r1=0.752,r2=0.724,P<0.05)。结论新诊断2型糖尿病患者的外周血单核巨噬细胞胆固醇外流率较正常对照组明显下降,这种变化可能与转运体ABCA1表达下降有关。辛伐他汀治疗可能通过部分提高ABCA1表达从而增加胆固醇外流而起到抗动脉粥样硬化作用。     

LXR激动剂3β-羟基-5α、6α仪环氧胆酸甲酯对血管内皮细胞ABCA1、LXRα表达的影响

目的初步研究LXRα激动剂3β-羟基-5α、6α环氧胆酸甲酯(Methyl 3β—hydroxy-5α、6α-epoxycholanate MHEC）对体外培养的人ECV-304血管内皮细胞ABCA1mRNA、LXRαmRNA表达的影响，探寻血管内皮细胞中LXR途径激活的机制及意义，并为国产LXR激动剂MHEC作为临床药物应用的可能性提供实验依据。方法以ECV-304血管内皮细胞株为研究对象，应用RT-PCR方法栓测LXR激动剂MHEC作用前后细胞ABCAlmtLNA、LXRαmRNA表达的变化，应用免疫组化S-P法检测MHEC对ECV-304细胞ABCA1蛋白表达的影响。结果MHEC能够显著上调血管内皮细胞中ABCA1、LXRα基因的表达，并呈时间和剂量依赖性。实验证实血管内皮细胞中存在LXRα基因的自身激活机制。结论MHEC是一种强力有效的LXR激动剂，能以剂量和时间依赖的方式上调血管内皮细胞中ABCA1和LXRα基因的表达。     

肿瘤坏死因子α与心血管疾病

肿瘤坏死因子α(TNF-α)是一种具有多种生物学效应的炎症细胞因子,它在心血管疾病发生、发展中的作用日益受到重视。目前研究发现TNF-α主要与充血性心力衰竭、病毒性心肌炎、扩张型心肌病及心脏移植排异反应等的病理过程有关。 1 TNF-α的生物学特征及其作用 TNF-α位于人的第六号染色体短臂,与主要组织相容性复合体(MHC)基因紧密相连,在Ⅰ类基因与Ⅲ类基因的交界区,这种紧密连锁的遗传定位,提示TNF-α在免疫调节基因产物的联合反应和调控中起重要作用。体内多种细胞如单核/巨噬细胞、内皮细胞等均能表达TNF-αmRNA及其蛋白质。最近研究表明,在某些应激状态下,心脏     

银杏叶提取物GBE50对培养细胞内胆固醇代谢的影响

目的研究银杏叶提取物GBE50对不同培养细胞内胆固醇含量的影响,及对HepG2细胞内胆固醇代谢相关基因HMGCR和SREBF2表达的调节。方法采用MTT法观察了GBE50对HepG2细胞生长的影响,用胆固醇氧化酶终点法检测GBE50对培养细胞HepG2、HUVEC、SH-SY5Y总胆固醇含量的影响;用荧光实时定量PCR技术检测了药物处理后HMGCR和SREBF2基因表达水平在HepG2细胞中的改变。结果GBE50在不影响HepG2细胞的增殖的剂量下可不同程度降低培养细胞HepG2,HUVEC内总胆固醇含量。对HepG2细胞内总胆固醇的影响呈一定的剂量及时间-效应关系,同时可以调节其中HMGCR、SREBF2基因的表达。结论GBE50可有效降低部分培养细胞内总胆固醇的含量,部分胆固醇代谢相关基因表达量的改变可能是GBE50调节HepG2细胞内胆固醇水平的机制之一。     

当归对阴虚哮喘小鼠的平喘作用及肺组织中水通道蛋白5表达的影响

目的 探讨当归对阴虚哮喘小鼠的平喘作用及对肺组织中水通道蛋白5 (AQP5)表达的影响.方法 通过注射卵清白蛋白(OVA)致敏、吸入OVA激发的方法复制哮喘小鼠模型,实验后期给予甲状腺素复制阴虚哮喘模型,观测哮喘发作及其程度、肺功能、肺液清除功能,血清白介素-13(IL-13)、α-肿瘤坏死因子(TNF-α)的水平和肺组织中AQP5及其基因的表达.结果 当归能抑制哮喘发作并缓解其症状,改善肺功能,促进肺组织AQP5及其基因的表达,降低血清IL-13与TNF-α的水平;当归与地塞米松配伍后,对改善肺功能、调节AQP5及其基因表达等有一定的协同作用.结论 当归具有一定的平喘作用,调节AQP5及基因表达进而促进肺组织水代谢平衡是其作用机制之一.     

重组人成纤维细胞生长因子-21对2型糖尿病模型大鼠LXRα及GLUT1 mRNA表达的调节作用

目的研究重组人成纤维细胞生长因子-21(rhFGF-21)对2型糖尿病(T2DM)模型大鼠LXRα及GLUT1mRNA表达的调节作用。方法将T2DM大鼠模型随机分组,每日皮下注射rhFGF-21,8周后,测定大鼠空腹FBG、FA、TG、TC、HDL-C、LDL-C含量,采用RT-PCR方法检测LXRα及GLUT1 mRNA的表达水平。结果(1)rhFGF-21能稳定降低T2DM模型大鼠血糖。(2)rhFGF-21用药组大鼠较T2DM模型组大鼠LXRα和GLUT1 mRNA表达量显著增加。(3)大、中剂量rhFGF-21能显著降低T2DM模型大鼠血清FA、TG、TC、LDL-C含量,同时显著升高血清HDL-C含量。结论rhFGF-21能上调T2DM模型大鼠LXRα、GLUT1 mRNA表达,增加基础水平的葡萄糖转运,从而降低血糖,改善脂质代谢紊乱。     

B类Ⅰ型清道夫受体SR-BI表达上调剂的研究进展

目的综述B类I型清道夫受体(scavenger receptor class B type I,SR-BI)基因表达上调剂的研究进展。方法查阅近年来国内外相关文献29篇,对其进行归纳总结和分析。结果 SR-BI是高密度脂蛋白(high density lipoprotein,HDL)受体,能选择性介导胆固醇和HDL颗粒中胆固醇酯的吸收,在HDL的代谢中起重要作用。提高SR-BI基因表达,可促进胆固醇外流,降低血浆胆固醇水平,因此SR-BI基因表达上调剂有望成为新型抗动脉粥样硬化药物。许多报道的天然或合成小分子化合物具有SR-BI基因表达上调活性,有进一步研究价值。结论已报道的化合物虽然活性值不高,直接作为SR-BI基因表达上调剂候选药物应用较为困难,但以其为先导化合物,进行结构优化,对发现新的结构新颖、活性显著的SR-BI基因表达上调剂有重要意义。     

巨噬细胞移动抑制因子siRNA对肺泡上皮细胞Toll样受体及其下游信号转导通路的影响

目的:研究巨噬细胞移动抑制因子siRNA对脂多糖刺激的肺泡上皮细胞Toll样受体(TLR)及其下游信号转导通路的影响和作用机制.方法:用LPS刺激A549细胞,脂质体法分别将巨噬细胞移动抑制因子(MIF) siRNA和非特异性siRNA加入A549细胞进行干预.RTPCR法检测MIF和TLR2、TLR4 mRNA的表达,Western Blot法分析TLR下游信号转导通路元件髓样分化因子88 (MyD88)和干扰素调节因子3(IRF3)蛋白表达,细胞免疫荧光法观察NF-κB核迁移,ELISA法测定细胞培养上清炎症介质TNF-α、IL-1β、IL-6,免疫介质IFN-β分泌水平.结果:MIF siRNA对LPS刺激诱导的MIF和TLR2、TLR4 mRNA高表达有显著的下调作用和部分阻断NF-κB(p65)核迁移.LPS刺激诱导后,MIF siRNA显著降低MyD88蛋白表达和炎症介质TNF-α、IL-1β和IL-6的分泌水平,但MIF siRNA对IRF3蛋白表达和免疫介质IFN-β分泌水平无影响.结论:MIF siRNA能抑制A549细胞的炎症介质TNF-α、IL-1β、IL-6过度分泌,其机制可能是MIF siRNA降低了LPS刺激A549细胞诱导的MIF和TLR2、TLR4高表达,及阻断TLR下游信号转导通路元件MyD88和NF-κB核迁移.     

微小RNA-206对apoE~(-/-)动脉粥样硬化小鼠肝脏X受体α表达的影响

目的探讨微小RNA(mi R)-206对apo E-/-动脉粥样硬化小鼠肝脏X受体α(LXRα)表达的影响。方法取4周龄apo E-/-小鼠30只,喂以高脂饮食,14周后随机分成对照组、mi R-206 mimic组、mi R-206 inhibitor组,每组10只。尾静脉采血检测总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C),油红O染色观察主动脉粥样硬化程度,荧光定量聚合酶链反应(RT-PCR)测定LXRαm RNA表达量,蛋白印迹法测定LXRα蛋白表达量。结果 mi R-206 mimic组HDL-C较对照组升高;mi R-206 inhibitor组与对照组、mi R-206 mimic组相比,TC、LDL均显著升高,HDL明显下降。各组TG无明显不同。苏木精-伊红(HE)染色示对照组主动脉粥样硬化程度较轻,mi R-206 inhibitor组主动脉粥样硬化程度最重,mi R-206 mimic组主动脉粥样硬化病变极其微弱。mi R-206 mimic组肝LXRα表达增多,而mi R-206 inhibitor组表达减少。结论mi R-206可能与LXRα构成反馈环,共同调节胆固醇逆转运。     

利用猪脱氧胆酸合成细胞核肝X受体激动剂

利用来自畜牧业的丰富原料猪脱氧胆酸为甾体骨架研究细胞核肝X受体（LXR）激动剂，合成了3个胆酸衍生物；在体外培养的人胚胎肾细胞HEK293内，使用双荧光报告基因法测定目标物调节LXR的能力。结果显示，合成的3个化合物中，化合物1、2可以激活LXRα和LXRβ，而化合物3有亚型选择性，只对LXRα有激活作用。这类化合物有望成为调控体内胆固醇代谢的临床药物。     

FATP5基因沉默抑制油酸诱导的HepG2细胞脂肪化及炎症作用

目的 明确FATP5作为脂肪酸转运蛋白家族成员，其基因沉默对肝脏细胞脂肪化及炎症作用的影响，并初步探究该影响可能的机制。方法 设计合成5条shRNA序列，并借助siCHECK^TM系统筛选得到FATP5有效干扰序列。将有效干扰序列包装成慢病毒后，通过细胞感染和嘌呤霉素筛选获得FATP5基因沉默HepG2细胞株。使用Western blot方法检测FATP5基因沉默的效率。之后，利用检测试剂盒、Western blot、核质分离及报告基因方法分别分析FATP5基因沉默细胞中油酸诱导ROS和MDA生成、TNF-α和IL-6蛋白表达与分泌，以及NF-κB活化的变化情况。结果 基因沉默细胞中FATP5蛋白表达水平下降90%,并且脂质蓄积作用也被显著抑制。此外，FATP5基因沉默可减少油酸诱导的ROS及MDA生成，同时还可降低NF-κB的转录活性，并下调其下游炎症因子TNF-α及IL-6的蛋白表达和分泌。结论FATP5基因沉默可减轻脂肪化肝脏细胞的炎症作用，其机制可能与抑制氧化应激和脂质过氧化作用有关。