线粒体促凋亡因子Omi/HtrA2在肝癌中的表达及意义

丝氨酸蛋白酶Omi／HtrA2是最近发现的线粒体促凋亡因子。近期研究发现其在肿瘤的发生发展中起到某种作用，在肝癌中的表达及其可能的作用尚无报道。我们研究Omi／HtrA2在肝癌细胞及肝癌组织中的表达情况，探讨Omi／HtrA2在肝癌发生发展中的作用。     

线粒体丝氨酸蛋白酶Omi/HtrA2在食管鳞癌组织中的表达及临床意义

目的 探讨Omi/HtrA2与食管鳞状细胞癌(ESCC)临床病理生理特征的关系.方法 采用免疫组织化学En Vinsion system法检测40例食管鳞癌组织、40例癌旁组织及13例食管良性病变黏膜组织中Omi/HtrA2的表达.结果 Omi/HtrA2的阳性表达率在食管癌组织中为70.00％,癌旁组织Omi/HtrA2为27.50％,食管良性病组织为23.08％ (P ＜0.05);在中高分化癌中表达阳性率为83.33％,低分化癌中表达阳性率50.00％ (P ＜0.05);无淋巴结转移组的阳性表达率为88.23％,有淋巴结转移组为56.52％ (P＜0.05) Omi/HtrA2阳性表达组5年生存率为47.8％,阴性表达组为15.0％(P＜0.05). 结论 Omi/HtrA2可能作为促癌基因参与了食管癌的发生发展.     

慢性细菌性前列腺炎患者精子中促凋亡蛋白Omi/HtrA2的表达

目的:检测慢性细菌性前列腺炎患者精子中促凋亡蛋白Omi/HtrA2的表达,探讨该疾患影响男性生育的可能机制。方法:采集41例慢性细菌性前列腺炎患者(A组)和12例健康生育男性(B组)的精液后,分别检测精液中炎症细胞因子(TNF-α、IL-1β)的浓度和精子密度、活动力及形态。精液经47.5%、57%、76%和95%Percoll梯度分离法分离后,分别用RT-PCR和Western印迹法检测精子促凋亡蛋白Omi/HtrA2的表达。结果:A组与B组炎症因子TNF-α、IL-1β的浓度分别为:(53.62±27.60)pg/ml、(60.75±32.42)pg/ml和(25.03±5.02)pg/ml、(18.70±7.06)pg/ml,两组相比差异有显著性(P<0.05)。A组中促凋亡蛋白Omi/HtrA2的转录和表达水平亦显著升高(P<0.05)。结论:慢性细菌性前列腺炎患者精子中促凋亡蛋白Omi/HtrA2的表达上调。     

高表达Omi/HtrA2对PED/PEA-15表达缺陷前列腺癌细胞凋亡的影响

我们通过载体构建、转染和筛选，建立PED／PEA-15表达缺陷的前列腺癌亚克隆细胞系，探讨Omi／HtrA2与PED／PEA-15间的作用对前列腺癌细胞凋亡的影响，以阐明前列腺癌细胞凋亡机制。[第一段]     

胃癌组织中Omi/HtrA2的表达及与预后的关系

目的 探讨丝氨酸蛋白酶Omi/HtrA2在胃癌组织中的表达及其与胃癌临床病理特征及预后的关系.方法 采用免疫组化法检测68例胃癌组织、15例癌旁组织及15例正常胃黏膜组织中Omi/HtrA2的表达,并分析其表达与胃癌临床病理特征及预后的关系.结果 Omi/HtrA2在胃癌组织中的阳性表达率为73.5%（50/68）,高于癌旁组织（13.3%,2/15）和正常胃黏膜（6.7%,1/15）,差异有统计学意义（P＜0.05）.胃癌组织中Omi/HtrA2的表达与患者的性别、年龄、肿瘤大小及浸润深度无关（P＞0.05） 与肿瘤的分化程度、淋巴结转移和临床分期有关（P＜0.05）.本组胃癌患者5年总体生存率为63.3%,其中Omi/HtrA2表达阳性组和阴性组分别为72.0%和61.1%,两组比较,差异并无统计学意义（P＞0.05）.结论 Omi/HtrA2在胃癌组织中高表达,其表达与胃癌分化程度、淋巴结转移及TNM分期有关,但并不影响胃癌患者的预后.     

HtrA1丝氨酸蛋白酶在原发性肝癌中的表达及其临床意义

目的 探讨原发性肝细胞癌(HCC)中HtrA1丝氨酸蛋白酶(HtrA1 serine protease)的表达水平及其与临床病理特征之间的关系.方法 采用实时荧光定量逆转录-聚合酶链反应(Realtime-PCR)检测手术切除的肝细胞癌患者的肝癌组织标本及癌旁肝组织标本中HtrA1 mRNA的表达.结果 肝癌组织中HtrA1 mRNA值为1.2729±0.9911,癌旁组织中的HtrA1 mRNA值3.8667±2.8099,肝癌组织中 HtrA1 mRNA明显低于相应的癌旁肝组织中的表达(P=0.000).多因素Logistic回归分析显示HtrA1 mRNA表达,肝内外转移及包膜是影响肝癌静脉浸润的独立因素.结论 HtrA1在肝癌中的表达可望作为判断肝癌预后或转移复发的指标之一.     

Omi/HtrA2预测肝细胞癌预后中的作用及其与缺氧诱导因子-1α的相关性

目的 探讨Omi/HtrA2的表达水平在预测肝细胞癌预后中的作用及其与缺氧诱导因子(HIF)-1α的相关性.方法 采用免疫组化法检测43例原发肝癌组织标本中Omi/HtrA2和HIF-1α的表达水平,并结合随访资料进行分析.将重组质粒pTRE-HIF-1α转染到HepG2Tet-on细胞,以含0、0.02、0.20、1.00、2.00、5.00 mg/L浓度强力霉素的培养液体外培养已转染pTRE-HIF-1α的HepG2Tet-on细胞,应用RT-PCR法检测不同表达水平HIF-1α对Omi/HtrA2表达的影响.结果 Omi/HtrA2表达与肝细胞癌肝门淋巴结转移和术后2年内肝内复发相关.Omi/HtrA2表达阳性患者肝癌切除术后1、2、3、4、5年累积生存率明显高于Omi/HtrA2表达阴性患者(x2=6.13,P=0.013).HIF-1α和Omi/HtrA2在免疫组化染色的同一切片中,HIF-1 α表达阴性或者弱阳性标本中Omi/HtrA2多表达为阳性或强阳性,HIF-1α表达阳性或者强阳性标本中Omi/HtrA2多表达为阴性或弱阳性.RT-PCR方法检测结果显示,随着HIF-1α表达水平的增加,Omi/HtrA2基因的表达强度逐渐降低(F=106.766,P＜0.01).结论 Omi/HtrA2可能成为预测肝细胞癌预后的一个重要分子标记.肝癌组织中Omi/HtrA2与HIF -1α表达水平呈负相关,在Omi/HtrA2参与肝癌细胞凋亡过程中,HIF-1α可能参与调控了Omi/HtrA2的表达.     

Omi/HtrA2对前列腺癌细胞的促凋亡作用

目的检测人前列腺癌细胞（PC-3M）中Omi／HtrA2的表达情况，并构建其小干扰RNA（siRNA）表达载体。探讨Omi／HtrA2对PC-3M凋亡的影响。方法以细胞免疫组织化学和逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）法检测Omi／HtrA2在前列腺癌细胞系（PC-3M）和正常前列腺细胞中的表达。利用软件辅助设计Omi／HtrA2特异性siRNA序列。体外合成后将其克隆入真核表达载体psiRNA-hHlneo。以脂质体法转染psiRNA-Omi／HtrA2载体至PC-3M中，以RToPCR和Western blot法检测psiRNA-Omi／HtrA2对Omi／HtrA2转录和表达的沉默效应。用噻唑蓝（MTT）比色法和流式细胞法检测siRNA导致Omi／HtrA2基因沉默后。PC-3M细胞凋亡的变化。结果细胞免疫组织化学和RT-PCR均显示Omi／HtrA2在PC3M细胞中高表达。酶切和DNA测序证实合成的siR-NA基因序列正确。并已被准确克隆入psiRNA-hHlneo载体中。psiRNA-Omi／HtrA2载体可特异性抑制PC3M细胞中Omi／HtrA2的表达。转染psiRNA-Omi／HtrA2载体的PC-3M细胞凋亡下调。结论促凋亡因子Omi／HtrA2可导致前列腺癌细胞凋亡，Omi／HtrA2的表达对前列腺癌的发展有重要作用。     

甲胎蛋白在肝癌细胞系HepG2不同亚群中的差异表达分析

甲胎蛋白（AFP）对原发性肝癌的诊断及预后有临床意义，病理学证实其在肝癌组织中的表达具有显著异质性，但其分布规律及意义尚不明确。成熟肝细胞AFP表达为阴性，原始幼稚细胞（如被认为是肝祖细胞的卵圆细胞）AFP表达常为阳性。肝癌组织中AFP差异表达可能反映肝癌细胞在分化程度上的差异。利用流式细胞荧光激活分选法可获得组织中具有原始干细胞特征的成体细胞，[第一段]     

Effects of selected chemotherapeutic agents on PCNA expression in prostate carcinoma cell lines

Bivariate flow cytometric analysis of proliferating cell nuclear antigen (PCNA) was performed on prostate carcinoma cell lines (PC-3, DU-145). For both cell lines 100% methanol fixation provided optimal fluorescence intensity of PCNA. The ratio of PCNA/DNA increased in late G1 through early S/phase, followed by a decrease in mid- and late S and enhancement in G2/M phase. PCNA expression was increased in G2/M phase cells treated for 48 h with vinblastine. A slight decrease in PCNA expression was observed with cyclohexamide treatment. Hydroxyurea induced an increase in S-phase fraction along with enhanced PCNA expression. Methotrexate and Adriamycin had little effect on the cell cycle compartments of PC-3 or DU-145; however, methotrexate decreased PCNA expression, while Adriamycin enhanced it. Cisplatin increased S-phase in both cell lines, increasing PCNA expression in PC-3 and decreasing it in DU-145 cells. The data on the effects of drug treatment point to a dissociation between PCNA expression and S-phase fraction as calculated from the DNA distribution. In some cases, e.g., the cisplatin studies, different effects were obtained in the two different cell lines treated with the same drugs. Whether changes in PCNA expression will provide more useful information than S-phase fraction for evaluation of potential antitumor drugs is not known.Supported by NIH grants Ro-1-CA 14134     

去甲基化剂5-氮杂-2''''-脱氧胞苷对胃癌细胞生物学行为的影响

目的:探讨去甲基化剂5氮杂2’脱氧胞苷(5AzaCdR)对胃癌细胞生物学行为的影响。方法:使用浓度5×106mol/L和105mol/L的5AzaCdR处理胃癌细胞株AGS、SGC7901、MKN28及MKN45。通过MTT、平板克隆实验观察处理前、后细胞的生长活性,RTPCR检测处理前、后抑癌基因RASSF1AmRNA表达的改变,并应用流式细胞仪进行细胞周期和凋亡率的分析。结果:4株胃癌细胞经不同浓度之5AzaCdR处理后,与对照组相比,生长速度出现不同程度减慢;实验组AGS细胞较对照组细胞克隆形成率显著降低(32.4%、28.5%比57.0%,P<0.01);5AzaCdR处理后,3株无RASSF1AmRNA表达的细胞(AGS、MKN28和SGC7901)均检出基因重新表达;处理前后4株胃癌细胞无明显G1期、G2/M期改变,AGS细胞凋亡率由0.6%增至18.6%和20.2%,MKN28细胞亦出现凋亡率由1.85%增至3.85%和6.61%。结论:去甲基化剂5AzaCdR对胃癌细胞生长周期无显著影响,可能系通过诱导抑癌基因再表达或凋亡等途径,间接抑制胃癌细胞的生长。     

NDUFA4L2 expression predicts poor prognosis in clear cell renal cell carcinoma patients

Background: NDUFA4L2 is overexpressed in VHL-deficient cell lines and neuroblastoma. The clinical significance of NDUFA4L2 in clear cell renal cell carcinoma (ccRCC) has not been well studied. Therefore, we evaluated the prognostic value of NDUFA4L2 in ccRCC patients.

Methods: In our study, NDUFA4L2 expression in 86 cases of ccRCC and adjacent normal tissues was monitored by immunohistochemistry, semi-quantitative RT-PCR, and Western blot analyses. The relationship between NDUFA4L2 expression and the clinical features of ccRCC was assessed.

Results: The results showed that NDUFA4L2 protein expression was found to be higher in ccRCC tissues 81.4% (70/86) than in normal tissues 26.7% (23/86) (p?=?0.021). The average level of NDUFA4L2 mRNA expression was found to be 122.23?±?6.018 and 21.34?±?1.036 in ccRCC tissue and adjacent normal tissue (p?Conclusions: Our study has provided the significant clinical relevance of NDUFA4L2 in ccRCC and suggested that ccRCC patients with NDUFA4L2 overexpression may be suitable as a potential therapeutic target for ccRCC patients.     

Bcl-2与VEGF在膀胱移行细胞癌的表达及其意义

目的:探讨凋亡抑制基因Bcl-2与血管内皮生长因子(VEGF)蛋白在膀胱移行细胞癌(TCC)组织的表达,以及二者表达与TCC生物学行为的相关性.方法:分别对45例TCC组织、34例相应的癌旁组织和10例正常膀胱组织,采用免疫组织化学法检测Bcl-2的表达,免疫蛋白印迹(Western Blotting)法检测VEGF蛋白的表达,并采用DNA原位末端标记(TUNEL)法检测细胞凋亡指数(AI).结果:Bcl-2和VEGF蛋白在45例TCC组织中的阳性表达率分别为51.1%和62.2%,均显著高于癌旁组织(7.9%和5.9%)(P<0.05);而在正常膀胱组织二者均无表达.同时,Bcl-2在VEGF表达阳性的TCC组织中呈高度表达,Bcl-2和VEGF的表达密切相关(x2=5.148,P<0.05).结论:提示Bcl-2可能参与TCC的发生和发展;Bcl-2可能通过上调VEGF的表达而促进TCC的转移,同时VEGF也可能通过诱导Bcl-2的表达而抑制肿瘤细胞的凋亡.