树突状细胞与膀胱癌的治疗进展

树突状细胞（DC）是人体内抗原递呈能力最强的细胞，由DC激活的T细胞介导的免疫应答在机体抗肿瘤过程中起着主导作用，本文订对DC的生物学特性，DC参与抗肿瘤的机制，膀胱癌病人DC的变化及目前DC对膀胱癌免疫治疗的研究进展作一综述。     

负载冻融抗原的树突状细胞诱导特异性抗膀胱癌作用的研究

目的研究负载膀胱癌冻融抗原的树突状细胞（DC）诱导的对膀胱癌细胞的特异性杀伤效应。方法反复冻融法获得BIU-87细胞抗原;人单个核细胞在含重组人GM—CSF、IL-4和TNF-a的RPMI1640培养基中体外诱导出人DC并负载肿瘤抗原;9d后成熟DC与自体T细胞共孵育诱导膀胱癌抗原特异性CTLs; 用MTT法检测其对BIU-87体外杀伤效应;用ELISA法检测DC分泌IL-12的能力。结果负载膀胱癌抗原的DC诱导的特异性CTLs可明显杀伤BIU-87细胞,在效靶比为40：1时杀伤率为（65．5±6．4）％,显著高于各对照组（P〈0．01）;负载抗原DCs较未负载抗原DCs有更强的分泌IL-12能力（P〈0．05）,而且不同时期的DC分泌的量不同。结论负载膀胱癌抗原的DC在体外可诱导出高效而特异的抗膀胱癌效应,提示以DC为中心的肿瘤生物治疗有望提高膀胱癌综合治疗水平。     

膀胱癌患者外周血树突状细胞免疫状态变化及其临床意义

目的探讨膀胱癌患者外周血中树突状细胞（DC）的免疫功能状态变化及其与膀胱癌发生的关系。方法检测15例临床确诊的中晚期膀胱癌患者外周血DC表面CD1a、CD83表达水平及免疫诱导T淋巴细胞增殖的能力，并与10名健康成人比较。结果膀胱癌患者DC表面CDla及CD83表达水平（分别为57．4±1．6，72．1±1．1）明显低于正常对照组（64．9±1．4，80．6±1．2，P〈0．05）；其体外诱导T细胞增殖的能力亦明显低于正常对照组（P〈0．05）。结论膀胱癌患者DC存在免疫功能缺陷可能是膀胱癌逃避宿主免疫监视的重要原因之一。     

树突状细胞与膀胱癌的治疗进展

树突状细胞 (DC)是人体内抗原递呈能力最强的细胞 ,由DC激活的T细胞介导的免疫应答在机体抗肿瘤过程中起着主导作用。本文主要对DC的生物学特性、DC参与抗肿瘤的机制、膀胱癌病人DC的变化及目前DC对膀胱癌免疫治疗的研究进展作一综述     

上皮钙黏附素和树突细胞在膀胱癌中的表达及其意义

目的探讨膀胱癌中上皮钙黏附素（E—cd）和树突细胞（DC）的表达及其与生物学行为的关系。方法免疫组织化学检测采用链霉素一生物素（LSAB）免疫酶染色法，对65例膀胱癌手术切除标本中的E—cd、DC的表达进行了对照检测，染色时用已知E—cd和S100阳性的正常膀胱黏膜及膀胱肌层内神经作阳性对照，用PBS取代一抗作阴性对照。结果65例膀胱癌中33例E—cd正常表达（50．8％），20例DC正常表达（30．8％），E—cd正常表达率在Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ级肿瘤中分别为70．1％、66．6％和25．9％，在T^is-1期和T2-4期肿瘤中分别为80．6％和23．5％；DC正常表达率在Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ级肿瘤中分别为76．5％、33．3％和0，在Tis-1期和T2—4期肿瘤中分别为63．3％和2．7％。在不同病理分级和临床分期的膀胱癌中，E—cd和DC的正常表达率差异有统计学意义（P〈0．05）。结论E—cd和DC的正常表达率均随膀胱癌的病理分级、临床分期的上升而下降，E—cd和DC正常表达者的肿瘤复发率和死亡率均显著低于异常表达表。E—cd和DC可作为预测膀胱癌生物学行为的指标之一。     

负载膀胱癌酸洗抗原肽对树突状细胞分泌IL-12的影响及意义

目的：研究负载膀胱癌酸洗抗原肽对树突状细胞（DCs）分泌IL-12的影响和意义.方法：用弱酸洗脱法获得膀胱癌细胞株BIU-87肿瘤抗原肽;联合应用重组人GM-CSF、IL-4和TNF-α体外诱导健康志愿者DCs并负载膀胱癌肿瘤抗原肽;DC诱导膀胱癌抗原特异性CTLs;用MTT法检测其对BIU-87体外杀伤效应;用ELISA法检测第3、6、9天培养细胞的上清液,评价DCs分泌IL-12 p70的能力.结果：联合应用重组人GMCSF、IL-4和TNF-α可在体外诱导出DCs;负载膀胱癌抗原肽的DC诱导的特异性CTLs可杀伤高达（78.5±7.0）%的BIU-87细胞,显著高于各对照组（P〈0.01）;经ELISA方法检测不同时期的DCs分泌IL-12的量不同,而且负载抗原肽DCs较未负载抗原DCs有更强的分泌能力（P〈0.05）.结论：IL-12 p70在DCs刺激特异性CTLs的过程中发挥重要作用,其分泌量受DCs的成熟状态及某些刺激信号的影响,膀胱癌酸洗抗原肽是其刺激信号之一.     

树突状细胞与膀胱癌关系研究进展

树突状细胞 (Dendriticcell,DC)是专职的抗原呈递细胞 (APC) ,DC在机体抗肿瘤中起重要作用。在我国 ,膀胱癌是泌尿系最常见的肿瘤。本文就DC与肿瘤免疫逃避关系 ,采用DC治疗膀胱癌的临床应用状况及存在问题作一综述     

树突状细胞与膀胱癌关系研究进展

树突状细胞(Dendritic cell,DC)是专职的抗原呈递细胞(APC)，DC在机体抗肿瘤中起重要作用。在我国，膀胱癌是泌尿系最常见的肿瘤。本文就DC与肿瘤免疫逃避关系，采用DC治疗膀胱癌的临床应用状况及存在问题作一综述。     

左旋精氨酸对大鼠成骨细胞的影响

一氧化氮（NO）是一种可高度弥散的自由基。作为第2信使和神经递质，是细胞-细胞间信息传递的重要调节因子。NO可以调节成骨细胞（osteoblast，OB）的增殖及其功能活性，从而在维持骨形态和骨重建中起着重要作用。我们在以往实验基础上，观察不同浓度的NO外源性供体左旋精氨酸（L—arginine）对大鼠OB增殖，护骨素（OPG）分泌及cNOS和iNOS表达的影响。[第一段]     

树突状细胞疫苗对人化荷人膀胱癌SCID鼠循环微转移转归的影响

目的将人外周血淋巴细胞（PBL）以腹腔转输方法构建具备人免疫环境SCID鼠模型,探讨树突状细胞（Dc）疫苗对荷瘤SCID鼠血循环膀胱癌细胞微转移转归的影响。方珐体外侵袭法从膀胱癌细胞株T24中筛选具有高转移能力亚群（T24。）;从人外周血中分离PBL,经腹腔注射小鼠（4× 10^7／鼠）,1d后,于鼠右后肢内侧皮下接种3× 10^6个T24-3细胞,2、4、5、6周分别检测鼠体内人免疫状态（包括血清IgG水平和CD3＋、CD4＋、CD8＋T细胞数量）及外周血细胞角蛋白20（CK20）mRNA表达;用含10％人AB型血清的RPMI-1640培养基,在rhGM—CSF和rhIL-4存在下,37℃、5％CO2环境下体外诱导培养人外周血单个核细胞（PBMC）来源DC。用冻融法获得的T24-3细胞裂解上清液致敏DC;并干预荷人瘤细胞的SCID鼠自发血循环肿瘤细胞微转移,观察大体情况、外周血CK20mRNA表达及瘤体MMP-7mRNA表达。结果SCID鼠于接种T24-3肿瘤细胞后5周进行DC疫苗干预。DC疫苗治疗组小鼠外周血中CK20mRNA表达均阴性,无远处转移发生;PBS处理组小鼠外周血中有2例CK20mRNA表达阳性,3例发生远处转移;DC治疗组小鼠外周血中有1例CK20mRNA表达阳性,1例发生远处转移。DC疫苗治疗组小鼠瘤组织中MMP-7mRNA表达最低,较PBS处理和DC治疗组差异有显著性意义（P〈O．01）。结论DC疫苗可以有效控制荷人膀胱癌SCID鼠血循环肿瘤细胞微转移发生,进而延缓或阻止肿瘤转移。     

磁转染MUC1/Y基因入树突状细胞抗膀胱肿瘤的免疫效应研究

目的：研究体外磁转染人MUC1/Y基因至人树突状细胞（DC）的可行性,以及在体外诱导特异忡抗MUC1／Y膀胱癌的免疫效应。方法：以葡聚糖磁性纳米颗粒（DMN）作为载体,在多聚赖氨酸（PLL）的辅助下,通过静电作用结合MUC1／Y基因的真核表达载体pEGFP-C1—MUC1／Y．在铜-硼-锡磁块的固定磁场作用下转染至人DC中,荧光显做镜下以及流式细胞仪观察其转染效率;再将这种转基因DC与自体T细胞共培养,观察其致敏的细胞毒性T淋巴细胞（CTL）对MUC1／Y特异性抗膀胱癌（膀胱肿瘤BIU87细胞系）的杀伤活性,即分别用LDH释放法检测CTL杀伤活性和透射电镜观察CTL诱导靶细胞凋亡情况：ELISA法测定基冈修饰后的DC刺激自体T细胞分泌IFN-γ了的能力。结果：pEGFP-C1／-MUC1／Y转染效率为15％左右,荧光显微镜下可观察到明显绿色荧光蛋白的表达;与自体T细胞混合培养后能诱导出湿著的MUC1/Y特异性的CTL对BIU87细胞的杀伤实验表明T-DC-MUC1的杀伤活性约为52％,显著高于埘照组T-DC诱导的CTL;住透射电镜下也可以清楚的观察到部分BIU87膀胱肿瘤细胞出现了细胞核核仁消失,染色质浓集于核膜周围等早期凋亡表现;基因修饰后的DC能刺激自体T细胞分泌高水平的IFN-γ,与未转染的DC相比差异有统计学意义（P〈0．05）。结论：葡聚糖磁性纳米颗粒（DMN）在固定磁场的作用下成功将MUC1/Y基因转入DC,并可有效诱导出特异性的抗MUC1/Y膀胱癌的免疫效应。     

IκBα突变体对树突状细胞成熟及其信号通路的影响

不成熟树突状细胞（DC）低表达共刺激分子，通过T细胞凋亡、无能及调节性T细胞增多等多种机制诱导免疫耐受。如何有效抑制DC成熟从而诱导免疫耐受是移植免疫的重要课题。不成熟DC发育为成熟DC主要由NF—κB信号通路控制。我们利用IκBα突变体（MMM）阻断NF-κB活化，观察它对DC成熟的影响。     

负载肿瘤抗原的DC疫苗体外诱导的特异性抗膀胱癌效应研究

目的 探讨负载膀胱癌抗原成分树突状细胞(dendritic cells,DC)疫苗的制备和体外诱导T淋巴细胞特异性杀伤膀胱癌细胞的作用.方法 冻融法制备EJ细胞裂解物抗原成分,体外培养的人外周血单个核细胞(hu-PBMC)在rhGM-CSF、rhIL-4、TNF-α诱导下分化出DC,负载EJ细胞裂解物抗原后制备膀胱癌DC疫苗;免疫磁珠分离法从人免疫重建Balb/c裸小鼠脾脏组织中分离CD3+ T淋巴细胞,3H-TdR掺入试验测定DC疫苗刺激自体T淋巴细胞增殖的能力,51Cr释放试验检测DC疫苗诱导的T细胞对EJ细胞的杀伤作用.结果 Hu-PBMC在细胞因子rhGM-CSF、rhIL-4和TNF-α的刺激下分化为成熟DC,负载EJ抗原的DC疫苗体外可使同源T淋巴细胞活化,增殖指数增加,活化的T淋巴细胞对EJ细胞的杀伤率为(62.58±6.13)%,和对照组比较差异有统计学意义(P＜0.05).结论 负载膀胱癌冻融抗原的DC疫苗体外可诱导人T淋巴细胞活化增殖,对EJ细胞有明显的杀伤作用.     

Clusterin对膀胱癌细胞抗凋亡作用机制的研究

目的：探讨新的抗细胞凋亡因子Clusterin对膀胱癌EJ细胞的作用机制。方法用丝裂霉素（MMC）诱导膀胱癌EJ细胞凋亡，采用流式细胞术（FCM）检测不同浓度的Clusterin对抗EJ细胞的凋亡率。结果：小剂量Clusterin可以特异性抑制MMC诱导的EJ细胞凋亡作用。结论Clusterin通过抗凋亡机制作用于膀胱癌EJ细胞，可能与膀胱癌细胞的复发、耐药等临床特性有关、此项研究对阐明膀胱癌发生发展的生物学机制以及临床应用Clusterin抗体的治疗胱癌提供帮助。     

树突状细胞疫苗诱导免疫效应细胞对PC3生长的抑制作用

耳的体内外观察多种细胞因子及肿瘤相关抗原（TAA）体外培养的树突状细胞（DC）诱导免疫效应细胞对PC3的抑制。方法用淋巴细胞分离液分离抗凝新鲜全血以获得单核细胞（PBMC），用贴壁法获取DC和去DC的单核细胞（免疫效应细胞），并分别用粒／巨噬细胞集落刺激因子（GM-CSF）、人白细胞介素（IL）-4、肿瘤坏死因子（TNF）-α、PC3肿瘤相关抗原（PC3TAA）和人白介素2（IL-2）培养正常人DC和免疫效应细胞，5．6d后将DC和免疫效应细胞混合培养1-2d。观察DC，免疫效应细胞生长状况。酶法检测DC诱导免疫效应细胞对PC3的毒性作用。体内观察DC诱导免疫效应细胞和DC培养上清液对裸鼠PC3移植瘤的生长抑制作用。结果体外多种细胞因子和肿瘤相关抗原能有效引起DC增殖。DC疫苗诱导免疫效应细胞对PC3的最大杀伤效率为62．4％。体内实验见：阴性对照组Ⅰ，单纯细胞治疗组Ⅲ及其联合培养上清液治疗组Ⅳ裸鼠均于第12天发生移植瘤；预防治疗组Ⅱ，观察30d时，6例只有2例发生移植瘤；于移植瘤产生后的第45天处死所有裸鼠并称瘤体的重量，各组比较差异有统计学意义（P〈0．05），两两比较。组Ⅰ分别与组Ⅱ、Ⅲ比较差异有统计学意义（P〈0．001），组Ⅰ与组Ⅳ、组Ⅱ与组Ⅲ比较差异有统计学意义（P〈0．05）。结论DC疫苗在抗恶性肿瘤中有重要作用。     

肿瘤坏死因子α和干扰素α对膀胱癌患者LAK细胞增殖和细…

为探讨联合应用白细胞介素２（ＩＬ－２）和干扰素（ＩＦＮ）或肿瘤坏死因子（ＴＮＦ）对膀胱癌患者ＬＡＫ细胞的增殖和细胞毒作用的影响，采用淋巴细胞分离液梯度离心法从２１例膀胱癌患者外周血分离ＬＡＫ细胞并用ＩＬ－２激活培养，细胞于９６孔细胞培养板用细胞计数方法观察了不同浓度ＴＮＦα和ＩＦＮα对细胞增殖的影响，用膀胱癌细胞系ＢＩＵ－８７和ＥＪ细胞作为靶细胞，用ＭＴＴ法测定ＬＡＫ细胞的细胞毒。结果：ＴＮＦα呈     

乳腺癌树突状细胞瘤苗对自体CIK细胞生物活性的影响

目的探讨乳腺癌树突状细胞瘤苗（DCs）对自体CIK细胞生物活性的影响。方法取诱导7d的活化DCs瘤苗和诱导7d的自体CIK细胞混合培养（DC—CIK细胞）,同期自体CIK细胞为对照组。检测2、8、14d的DC—CIK细胞CD3与CD56表型、培养上清液IL．12的水平及测定混合培养8d时对乳腺癌细胞MCF．7的细胞毒效应。结果混合培养14d的DC-CIK细胞增殖率显著高于CIK细胞（P〈0．01）,但CD3和CD56表型无显著变化（P〉0．05）。DC—CIK细胞对MCF-7乳腺癌细胞的特异性溶解率和细胞毒活性均高于CIK细胞（P〈0．01）：CIK细胞强烈刺激DCs分泌IL-12．混合培养2d时,DCs的IL-12p40分泌水平达到高峰。结论乳腺癌DCs瘤苗与自体CIK细胞混合培养后（DC—CIK细胞）,进一步促进了DCs的成熟并增强了CIK细胞的细胞毒活性。     

K-ras突变多肽负载的DC细胞增强CIK细胞对胰腺癌细胞的杀伤作用

目的：观察经K-ras（12-Val）突变多肽负载的树突状细胞（DC）与细胞因子诱导的杀伤细胞（CIK）共培养以后对胰腺癌PANC-1细胞的杀伤作用。 方法：取健康人外周血体外诱导分别扩增出DC和CIK;用K-ras突变体抗原表位肽负载DC（K-ras-DC）,将单纯DC或K-ras-DC与CIK共培养,获得DC-CIK或K-ras-DC-CIK。比较CIK与K-ras-DC-CIK的增殖活性;分别分析DC与K-ras-DC以及CIK与K-ras-DC-CIK的免疫表型差异;检测CIK、DC-CIK、K-ras-DC-CIK上清液中IFN-γ、IL-12的水平;检测K-ras-DC-CIK、DC-CIK、CIK对PANC-1细胞的体外杀伤力。 结果：K-ras-DC-CIK的增殖能力明显强于单纯CIK（P<0.05）;K-ras-DC的成熟表面分子CD1a、CD80、CD83、HLA-DR的表达明显高于单纯DC,而K-ras-DC-CIK细胞群的CD3+CD8+、CD3+CD56+表达率明显高于单纯CIK细胞群（均P<0.05）;上清液中IFN-γ、IL-12的水平以及对PANC-1细胞的杀伤力由高到低均依次为K-ras-DC-CIK、DC-CIK、单纯CIK（均P<0.05）。 结论：K-ras突变多肽负载后能促进DC的成熟,负载K-ras突变多肽后的DC能增加CIK的增殖及对胰腺癌细胞的杀伤作用。     

氯胺酮对卵蛋白激发的致敏大鼠离体肺泡巨噬细胞胞内钙和自由基的影响

目的 研究氯胺酮对卵蛋白（OVA）刺激的致敏大鼠肺泡巨噬细胞胞内游离钙离子（[Ca^2＋]i）及自由基的作用，探讨氯胺酮在哮喘治疗中的作用及其机制。方法 体外培养的致敏肺泡巨噬细胞经氯胺酮（10、100和1000μM）处理、OVA刺激后，测定细胞[Ca^2＋]i并检测细胞培养上清液中一氧化氮（NO）和羟自由基（·OH）水平。结果 OVA激发可引起致敏肺泡巨噬细胞[Ca^2＋]i增高及NO和·OH的生成增多，氯胺酮对此具有浓度依赖性抑制作用。结论 氯胺酮可抑制OVA所致的氧化应激，其分子机制可能与[Ca^2＋]i相关。     

树突状细胞与细胞因子诱导杀伤细胞共培养体外抗肾癌的效应

细胞因子诱导杀伤细胞（CIK）为非特异性杀伤免疫效应细胞，杀伤活性有待提高。树突状细胞（DC）是目前发现的功能最强的专职抗原提呈细胞（APC），可诱发抗原特异性免疫应答。本研究旨在探讨肾癌（RCC）肿瘤冻融抗原致敏的DC与CIK共培养后能否提高DC-CIK细胞对RCC的特异性杀伤活性。