牙周病优势菌群内毒素脂多糖对人牙龈成纤维细胞生长繁殖的影响

将牙周病优势菌之 LPS 作用于体外培养的 HGF,计数不同时间点细胞浓度的变化,观察 LPS 对HGF 生长曲线、相对增殖率的影响。结果发现 LPS 对 HGF 的生长繁殖具有抑制作用,表现为细胞浓度减小,生长曲线降低变平,相对增殖率下降。抑制作用在HGF对数生长期最明显。抑制能力以 H.act29523和 Y4,F.nec,F.nuc 的 LPS 最强,次为 B.g,B.5,B.m 的 LPS,再次为 C.g,C.o,C.s的 LPS,后者与 E.coli 的 LPS 的抑制能力接近。     

槲皮素对牙龈卟啉单胞菌脂多糖刺激的人牙龈成纤维细胞生物学行为的影响研究

目的研究槲皮素对牙龈卟啉单胞菌脂多糖(Porphyromonas gingivalis lipopolysaccharide,P.g LPS)刺激的人牙龈成纤维细胞(human gingival fibroblasts,HGFs)生物学行为的影响。方法采用DNA片段凝胶电泳、CCK-8法、细胞划痕法观察不同浓度槲皮素(10、20、50、100μmol/L)对体外培养HGFs的毒性作用,以及对HGFs增殖与迁移的影响。采用P.g LPS刺激HGFs来建立体外炎症刺激模型,通过流式细胞术、细胞活性氧(reactive oxygen species,ROS)检测、酶联免疫吸附试验(ELISA)和实时荧光定量PCR(qRT-PCR)进一步观察槲皮素对HGFs凋亡、ROS的产生及肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factorα,TNF-α)和前列腺素E2(prostaglandin E2,PGE2)表达的影响。结果槲皮素对HGFs无毒性作用,且对HGFs的增殖无影响(P>0.05)。各组细胞迁移率总的比较,差异有统计学意义(F=9.973,P<0.05),在处理48 h后,20μmol/L槲皮素处理组细胞迁移率大于10、50μmol/L槲皮素处理组以及对照组,差异均有统计学意义(均P<0.05)。槲皮素对P.g LPS刺激的HGFs凋亡具有抑制作用,且其能够抑制并预防P.g LPS刺激的HGFs中ROS相对产生量增加现象(均P<0.05)。槲皮素处理显著抑制了P.g LPS诱导的TNF-α表达增加现象(P<0.05),而槲皮素处理组PGE2的表达水平与对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论浓度为20μmol/L的槲皮素能够促进体外培养HGFs的迁移,且具有抗氧化、抗炎保护作用。     

牙龈卟啉单胞菌脂多糖对人牙周膜成纤维细胞胶原吞噬作用的影响

目的研究牙周病致病菌牙龈卟啉单胞菌脂多糖（LPS）对体外培养的人牙周膜成纤维细胞（hPDLF）胶原吞噬作用的影响。方法将不同质量浓度的LPS加入体外培养的hPDLF 48 h后,采用荧光定位术和流式细胞技术检测hPDLF胶原吞噬率的变化。结果LPS导致hPDLF胶原吞噬率显著增加（P<0.05）。结论牙龈卟啉单胞菌脂多糖具有促进hPDLF吞噬胶原的作用,可能是牙周组织破坏机制之一。     

补体C1q对牙龈成纤维细胞作用的研究

牙龈成纤维细胞可因补体Ｃ１ｑ受体的特征分为两个亚群,一群成纤维细胞表面含高密度、高亲和力的Ｃ１ｑ受体,另一群成纤维细胞则只含少数低亲和力的Ｃ１ｑ受体。为了阐明Ｃ１ｑ与牙龈成纤维细胞相互作用的本质和意义,研究了Ｃ１ｑ对健康部位、龈炎部位和牙周炎部位牙龈成纤维细胞生长和胶原合成的影响,发现Ｃ１ｑ能促进上述部位牙龈成纤维细胞的生长和胶原合成,尤对牙周炎部位的牙龈成纤维细胞的作用是为明显。说明Ｃ１ｑ通过与     

可溶性CD14对LPS诱导人牙龈成纤维细胞活化的影响

目的:观察重组表达的sCD14对LPS的炎症介导作用的影响。方法:将异硫氰酸荧光素(fluoresceinisothiocyanate,FITC)标记的LPS分别和sCD14以及阳性对照内毒素中和蛋白(endotoxin neutralizing protein,ENP)孵育后,加入人牙龈成纤维细胞培养系统中,通过流式细胞仪测定LPS与细胞结合后的荧光强度;采用ELISA检测细胞培养上清中的TNF-α和IL-6的含量。结果:sCD14和ENP可导致细胞膜平均通道荧光强度减低,LPS诱导的细胞因子TNF-α和IL-6分泌量显著下降。结论:sCD14和ENP使人牙龈成纤维细胞的LPS结合量显著下降,表明sCD14和LPS中和蛋白可竞争性结合LPS,引起细胞培养系统中游离LPS浓度下降,对细胞的炎症介导作用减小。     

人牙龈成纤维细胞和牙周膜成纤维细胞的培养和生物学特征

目的：探讨采用不同方法建立体外培养人牙龈成纤维细胞和人牙周膜成纤维细胞并对其生物学特性作初步探讨。方法：分别采用消化培养法和组织块培养人的牙龈和牙周膜成纤维细胞。通过倒置显微镜活体观察，以及光镜、透射电镜、免疫组化和生长曲线等方法对其生物学特性作初步观察。结果：消化培养法成功率低于组织块培养法。光镜下和透射电镜下观察两种细胞在形态和结构上相似。免疫组化染色证实此两种细胞均来源于中胚层的纤维母细胞。生长曲线表明牙龈成纤维细胞的倍增时间比牙周膜成纤维细胞稍短，而牙周膜成纤维细胞的增殖活性比牙龈成纤维细胞高。结论：组织块培养法适用于此二种细胞的培养。细胞生物学特征方面有许多相似形，提示这两种细胞来于同一个细胞群。     

纤维结合蛋白及细菌内毒素对人牙龈成纤维细胞生长繁殖功能和电泳行为的影响

采用体外组织培养的方法，通过相差显微镜、光学显微镜的观察，Ｈ－胸腺嘧啶核苷细胞掺入试验，以及细胞电泳技术，观察分析：１．纤维结合蛋白（Ｆｎ）以及细菌内毒素（ＢａｃｔｅｒｉａｌＬＰＳ）对人牙龈成纤维细胞（ＨＧＦ）形态结构、功能状态的影响；２．纤维结合蛋白（Ｆｎ）在对抗细菌内毒素脂多糖（ＬＰＳ）对ＨＧＦ毒性的作用；３．ＨＧＦ的电泳行为，以及Ｆｎ，ＬＰＳ对ＨＧＦ电泳行为的影响。实验结论：１．Ｆｎ促进ＨＧＦ的生长繁殖功能；ＬＰＳ对ＨＧＦ有直接毒性作用，抑制ＨＧＦ的生长繁殖功能。２．Ｆｎ具有对抗ＬＰＳ对ＨＧＦ毒性的作用；３．ＨＧＦ表面带有负电荷，其电泳率值在３７℃，电压２０Ｖ时为０．８１３６＋５．４×１０／ｓ／Ｖ／ｃｍ；４．Ｆｎ能增加ＨＧＦ的电泳率值，ＬＰＳ则降低Ｆｎ的电泳率值；Ｆｎ具有对抗ＬＰＳ对ＨＧＦ电泳率值降低的作用。     

纤维结合蛋白及细菌内毒素对人牙龈成纤维细胞生长繁殖功能和电泳行为的影响

促使因牙周病而丧失的牙周组织再生,消除病理性牙周袋,是牙周病治疗中的一个重要课题。近年,不少学者对此提出了各种促进新附着的方法,其中纤维结合蛋白(Fn)被认为一种具有广泛生物学活性的有效生物制剂。存在于炎性牙龈组织及牙骨质中的细菌内毒素脂多糖(LPS),则是妨碍牙周组织新附着的重要因素,如何消除或降解病变牙根面的内毒素,是目前牙周治疗面临的主要问题之一。     

LPS调控人牙龈成纤维细胞表达uPA的研究

目的：观察LPS对牙龈成纤维细胞表达尿激酶型纤溶酶原激活剂（uPA)的影响。方法：采用Western blotting和Northern blotting分别观察LPS对牙龈成纤维细胞内uPA蛋白质表达水平和mRNA表达水平的影响。结果：经1.0μg/mL LPS处理8h后，牙龈成纤维细胞内uPA蛋白表达量明显增强，且这一增强作用可持续24h；经1.0μg/mL LPS处理4h后，牙龈成纤维细胞内uPA mRNA表达量明显增强。结论：LPS能够促进牙龈成纤维细胞表达uPA，参与牙周组织的破坏。     

内毒素对牙龈成纤维细胞增殖活性及分泌基质金属蛋白酶的影响

目的观察内毒素对牙龈成纤维细胞增殖活性及分泌基质金属蛋白酶-1,3量的影响,探讨基质金属蛋白酶在牙周炎致病机制中的可能作用。方法通过改良酶消化组织块法进行牙龈成纤维细胞的原代培养,用内毒素对其进行刺激,运用MTT法观察内毒素对牙龈成纤维细胞增殖活性的影响,通过免疫组化法检测内毒素对牙龈成纤维细胞分泌基质金属蛋白酶-1,3的影响。结果MTT结果显示,低浓度内毒素在短期内可以促进牙龈成纤维细胞的增殖,但随着时间的延长,也表现为对细胞的毒性作用,抑制其增殖;高浓度内毒素抑制牙龈成纤维细胞的增殖;免疫组化研究结果表明,未受LPS刺激的牙龈成纤维细胞MMP-1,3表达弱阳性,受刺激后阳性表达增强,在12h时达到顶峰,且MMP-3的整体表达较MMP-1弱。结论LPS可以影响牙龈成纤维细胞的增殖活性;LPS可以促进牙龈成纤维细胞对基质金属蛋白酶的分泌,加快牙周细胞外基质的降解,加速牙周炎的进程。     

LPS刺激对体外培养人牙龈成纤维细胞环氧合酶表达的影响

目的检测脂多糖（LPS）刺激后体外培养人牙龈成纤维细胞环氧合酶-1和环氧合酶-2（COX-1,COX-2）表达的改变,探讨牙龈成纤维细胞与牙周炎症发生发展的关系。方法组织块法原代培养正常人牙龈成纤维细胞并进行来源鉴定,MTT法检测不同浓度LPS刺激后活细胞数量的改变;以10ug/ml刺激第4代细胞,24h后用免疫细胞化学方法检测COX-1和COX-2在细胞中的表达,多功能彩色细胞分析管理系统进行图像分析和统计学分析。结果 LPS刺激可使牙龈成纤维细胞的增殖速度降低,生长曲线大致呈＂S＂形;10ug/ml LPS刺激24h后细胞数量未见明显变化。免疫细胞化学染色结果显示COX-1在LPS刺激前后均有表达但无显著差异（P〉0.05）,COX-2在LPS刺激前无表达,LPS刺激后则表达增强并有显著差异（P〈0.01）。结论 LPS对牙龈成纤维细胞生长增殖有抑制作用,不影响COX-1的表达强度,但可使COX-2表达显著增强,说明牙龈成纤维细胞对LPS刺激的反应可能影响牙周炎症进展。     

p38 MAPK在LPS诱导牙龈成纤维细胞表达uPA中作用的研究

目的：研究p38 MAPK在LPS诱导牙龈成纤维细胞表达uPA中的作用。方法：采用Western blotting观察LPS对牙龈成纤维细胞内p38 MAPK活性的影响；蛋白激酶活性实验SB203580地p38 MAPK活性的抑制作用；Northern blotting观察SB203580对LPS诱导uPA表达的影响。结果：LPS能够迅速地激活牙龈成纤维细胞内p38 MAPK的活性；SB203580能够有效地抑制牙龈成纤维细胞内的p38 MAPK的活性；经SB203580处理后，LPS对uPA的诱导作用受到显著的抑制。结论：LPS通过p38 MAPK信号转导途径诱导牙龈成纤维细胞表达uPA。     

牙齿外伤钛固定夹板浸提液对人牙龈成纤维细胞生物学性能的影响

目的:观察牙齿外伤钛固定夹板(titanium trauma splint,TTS)浸提液对人牙龈成纤维细胞(human gingival fibroblasts,HGF)生物学性能的影响,为临床应用提供理论依据。方法:分离、培养鉴定人牙龈成纤维细胞,将牙齿外伤钛固定夹板浸提液加入人牙龈成纤维细胞培养基中,通过倒置显微镜观察细胞形态学改变、MTT法细胞毒性实验和细胞凋亡实验,观察牙齿外伤钛固定夹板浸提液对人牙龈成纤维细胞生物学性能的影响。结果:牙齿外伤钛固定夹板浸提液对人牙龈成纤维细胞的形态无明显改变,其增殖和凋亡的影响较正常人牙龈成纤维细胞相比无明显细胞毒性,不引起细胞凋亡。结论:牙齿外伤钛固定夹板具有良好的生物安全性,有一定的临床应用前景。     

排龈药物对体外培养人牙龈成纤维细胞的毒性比较

目的评价6种常用的排龈药物对人牙龈成纤维细胞（HGF）毒性作用的大小,以指导临床选择最佳排龈药物。方法将6种不同体积分数的排龈药物（20%硫酸铝、5%硫酸铝、15.5%硫酸铁、13.3%硫酸铁、0.1%盐酸肾上腺素、0.01%盐酸肾上腺素）分别作用于体外培养的HGF,MTT比色法测定细胞的损伤与增殖,透射电镜观察细胞超微结构的变化。结果所有实验药物均能引起细胞的直接损伤与增殖抑制,细胞毒性由小到大分别是0.01%盐酸肾上腺素、0.1%盐酸肾上腺素、5%硫酸铝、20%硫酸铝、硫酸铁,2种体积分数的硫酸铁毒性比较差异无统计学意义（P>0.01）。透射电镜显示2种体积分数的盐酸肾上腺素及5%硫酸铝可引起细胞器数量减少,线粒体及内质网肿胀;20%硫酸铝造成细胞水肿明显,细胞核和染色质分布不均匀;硫酸铁可导致细胞变性。结论0.01%盐酸肾上腺素细胞毒性作用最小,硫酸铁毒性最大。