IL-17在小鼠柯萨奇B病毒性心肌炎不同时期的变化

＜0.01);(2)VMC小鼠在2-8周时脾细胞IL-23 mRNA水平均明显高于对照组(P＜0.01),在6周和8周时脾细胞IL-23 mRNA水平均明显高于2周和4周时(P＜0.01);(3)VMC小鼠在2周时心室肌组织无IL-17表达,4周时心室肌组织IL-17表达最高,6-8周呈明显下降趋势(P＜0.01).结论 小鼠CVB心肌炎4周时,心肌组织中出现IL-17表达,同时脾组织IL-17 mRNA以及IL-23 mRNA水平升高,可能与Th17细胞亚群分化有关.     

病毒性心肌炎模型研究进展

病毒性心肌炎是一种发病率非常高的疾病,多种病毒(如柯萨奇病毒、巨细胞病毒、脑心肌炎病毒和单纯疱疹病毒等)感染均可能引发心肌炎.研究病毒性心肌炎的细胞(原代Sprague Dawley 大鼠心肌细胞、原代Sprague Dawley大鼠心肌成纤维细胞、人脐静脉内皮细胞)模型和动物(小鼠、猪、狒狒等)模型的特点,可以更好地认识该疾病的发生、发展过程.     

白细胞介素-17A对病毒性心肌炎小鼠抗心肌抗体水平的影响

目的观察IL-17A对病毒性心肌炎(VMC)小鼠血清抗心肌抗体水平的影响。方法雄性野生型(WT)和IL-17A基因敲除型(IL-17A-/-)BALB/c小鼠,腹腔注射柯萨奇病毒B3(CVB3)建立病毒性心肌炎模型(VMC-WT组和VMC-IL-17A-/-组),同时选取野生型BALB/c小鼠腹腔注射PBS作为正常对照组(WT组)。14 d后取心肌组织作石蜡切片,行HE染色观察病理改变,ELISA测定血清中抗心肌线粒体内膜ADP/ATP载体(ANT)抗体、抗β-肌球蛋白重链(β-MHC)抗体、抗心肌L型钙通道(CACH2)抗体水平。结果与WT组比较,VMC-WT组小鼠抗ANT抗体、抗β-MHC抗体水平升高明显,差异有统计学意义(P0.01,P0.05),抗CACH2抗体水平差异无统计学意义(P0.05);与VMC-WT组比较,VMC-IL-17A-/-组小鼠抗ANT抗体水平降低,差异有统计学意义(P0.05),抗β-MHC抗体、抗CACH2抗体水平差异无统计学意义(P0.05)。结论IL-17A参与VMC小鼠血清抗ANT抗体的产生,对抗β-MHC抗体、抗CACH2抗体水平无显著影响。     

清心胶囊对病毒性心肌炎不同分期Th细胞分化的影响

目的:观察病毒性心肌炎(VMC)不同分期Th细胞分化的变化以及清心胶囊对这一环节的干预作用。方法:复制VMC急性期和恢复期BALB/c小鼠模型,给予清心较囊治疗后,采用光镜和透射电镜观察心肌病理改变,ELISA法检测血清IFN-γ、IL-2、IL-4和IL-10水平。结果:无论急性期还是恢复期,经清心胶囊治疗后,VMC小鼠心肌病变均明显减轻;VMC小鼠血清中IL-2、IFN-γ水平显著降低(P<0.01,P<0.05),IL-10或IL-4水平显著升高(P<0.05),与正常组比较无显著差异(P>0.05)。结论:清心胶囊能够通过抑制Th1应答,促进Th2应答从而恢复Th1/Th2细胞平衡。     

黄芩提取物对柯萨奇B3m病毒性心肌炎病毒复制及Fas配体表达的影响

病毒性心肌炎（MV）严重危害人类健康，现代研究证实，病毒的直接损伤与细胞介导的细胞毒作用（CMC）是MV心肌细胞损伤的主要原因.CMC致靶细胞损伤主要有两条途径——穿孔素和Fas／FasL途径。黄芩提取物具有明显的抗病毒和调节免疫的作用，但其对MV鼠心肌中柯萨奇病毒嗜心肌株CVB3m的复制及浸润细胞中Fas配体表达的影响，迄今尚未见文献报道，本研究对此作初步探讨。     

柯萨奇B3病毒对心肌细胞钙平衡的影响

目的 探讨柯萨奇Ｂ３病毒（Ｃｏｘｓａｃｋｉｅｖｉｒｕｓ Ｂ３,ＣＶＢ３）对膜离子通道及离子交换载体的影响,了解病毒感染导致细胞内钙超载的原因。方法 酶灌注法获得单个心肌细胞后用光聚焦显微镜和钙离子荧光探针（Ｆｌｕｏ ３／ＡＭ）检测ＣＶＢ３感染对心肌细胞内游离钙离子浓度的影响及利用模片钳全细胞电流记录技术观察ＣＶＢ３对Ｌ型钙通道电流,钠通道电流和钠钙交换电流的影响。结果 ＣＶＢ３感染使细胞内的游离钙     

依那普利对CVB3诱导的病毒性心肌炎小鼠的保护作用

目的探讨依那普利对CVB3诱导的病毒性心肌炎小鼠的保护作用。方法将小鼠分为对照组、病毒性心肌炎模型组、依那普利10 mg/kg组、依那普利20 mg/kg组,每组8只。103半数感染量CVB3病毒溶于0.1 ml磷酸缓冲液,腹腔注射构建病毒性心肌炎小鼠模型。对照组小鼠腹腔注射等量生理盐水。依那普利10 mg/kg组和依那普利20 mg/kg组小鼠每天分别灌胃10、20 mg/kg的依那普利。7 d后处死小鼠,收集血液,全自动生化仪检测血清中乳酸脱氢酶(LDH)、谷草转氨酶(AST)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)的含量;苏木伊红染色观察心肌组织病理变化;使用试剂盒检测心肌组织中谷胱甘肽过氧化物(GSH-Px)、超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)的含量;酶联免疫吸附实验检测心肌组织中炎症因子的含量;蛋白质印迹检测心肌组织中诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、p-p65、Toll样受体4(TLR4)以及Nrf2通路相关蛋白的表达水平。结果与对照组相比,病毒性心肌炎模型组血清中LDH、AST、CK-MB的含量显著升高(P0.01);心肌细胞排列不规则,细胞间出现较大缝隙(P0.01);心肌组织中GST-px、SOD的活性显著降低(P0.01),MDA的含量显著升高(P0.01);白细胞介素1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)和γ干扰素(IFN-γ)的含量显著升高(P0.01);iNOS、p-p65、TLR4的表达量显著升高(P0.01),而Nfr2、HO-1、NQO-1的表达水平显著降低(P0.01)。与病毒性心肌炎模型组相比,依那普利10、20 mg/kg组血清中LDH、AST、CK-MB的含量显著降低(P0.01);心肌细胞排列较规则,炎性细胞数量减少(P0.01);心肌组织中GST-px、SOD的活性显著升高(P0.01),MDA的含量显著降低(P0.01);IL-1β、TNF-α和IFN-γ的含量显著降低(P0.01);iNOS、p-p65、TLR4的表达量显著降低(P0.01),而Nfr2、HO-1、NQO-1的表达水平显著升高(P0.01)。结论依那普利能抑制CVB3病毒性心肌炎小鼠的心肌组织氧化应激和炎症反应,减轻心肌组织损伤,对病毒性心肌炎小鼠具有保护作用,其作用机制与TLR4通路的抑制、Nrf2通路的激活有关。     

穿孔素和Fas配体在柯萨奇B3病毒性心肌炎小鼠心肌…

探讨穿孔素和Ｆａｓ配体介导的细胞毒作用在病毒性心肌炎发症中的作用。方法将４０只ＢＡＬＢ／ｃ小鼠随机等分为实验组和对照组，分别用柯萨奇Ｂ３病毒及不含病毒的病毒稀释液经腹腔接种，于接种后７天处死取其心脏。     

实验性柯萨奇B3m病毒性心肌病变及其病原的原位逆转录—聚合酶链反应检测

目的　建立柯萨奇B     

柯萨奇B3病毒诱导小鼠单核-巨噬细胞产生肿瘤坏死因子和白细胞介素6

观察柯萨奇Ｂ３（ＣｏｘＢ３）病毒对小鼠单核－巨噬细胞（Ｍｏ／Ｍφ）的感染，及诱导白细胞介素６（ＩＬ－６）和肿瘤坏死因子（ＴＮＦ）的产生。发现ＣｏｘＢ３能够感染小鼠腹腔巨噬细胞，并释放感染性病毒颗粒；一定感染量病毒的感染，对Ｍｏ／Ｍφ的存活率无明显影响。在体内和体外实验中，ＣｏｘＢ３的感染均可明显诱导Ｍｏ／Ｍφ释放单核因子，在受染的Ｍｏ／Ｍφ培养上清液中及ＣｏｘＢ３感染急性期小鼠血浆和心肌匀浆液中均可测到ＩＬ－６和ＴＮＦ浓度明显升高。     

白介素12对T淋巴细胞作用与表面分子表达的关系

目的：探讨IL-12对T细胞作用效应与表面分子（CD25、FasL和TNFR1）变化的关系。方法：dUTP缺口末端标记和Annexin V法检测T细胞凋亡，FITC标记CD25和TNFR1的抗体、生物素标记FasL抗体，用流式细胞仪检测HTB176、TIB152和正常人T细胞表面分子表达的变化。结果：HTB176和TIB152的细胞在IL-12处理1 h，CD25和FasL的表达开始增加，24 h达到高峰，但正常T细胞在24 h后才有反应；正常T细胞经IL-12处理1 h内FasL的表达开始增加，在以后的试验期内始终保持恒定水平；但IL-12不促进三种T细胞表面TNFR1的表达。结论：IL-12对T细胞作用过程有多个表面分子参与，形成不同的效应。     

Inhibition of murine B1 lymphocytes by interleukin-12

B1 cells are a subset of B lymphocytes found in many spectes and are implicated in the development of autoimmunity. B1 cells have previously been shown to be suppressed by the T helper (Th)1 cytokine interferon (IFN)-γ, and to be stimulated by the Th2 cytokines interleukin (IL)-2, IL-4, IL-5 and IL-10. To examine further the interactions of B1 cells and Th1 cells, we have now tested the effects of the Th1 cell-inducing cytokine IL-12 on murine B1 cells. BALB/c mice were immunized with phosphorylcholine conjugated to keyhole limpet hemocyanin (PC-KLH) and simultaneously treated with 1 μg recombinant murine IL-12 for 3 consecutive days. In addition to altering the isotype and idiotype distribution of anti-PC antibodies, IL-12 treatment was found to cause a loss of peritoneal, but not splenic B lymphocytes in immunized mice. B cell depletion required exposure to IL-12 plus antigenic stimulation. Levels of peritoneal B lymphocytes were fully restored by day 45, but the majority of these cells belonged to the B2 subset. Additionally, proliferation of B1 cells in vitro induced by IL-5 was substantially inhibited by IL-12. IL-12 itself had no effect on viable cell recovery of peritoneal cells (PeC) cultured in vitro, but viable cell recovery was significantly decreased in PeC cultured with IL-5 plus IL-12. These results show that IL-12 causes the loss of murine peritoneal B1 cells and suggest that treatment with this cytokine may be useful for disease conditions that involve B1 cell dysfunction.     

Sex differences in TLR2 and TLR4 expression and their effect on coxsackievirus-induced autoimmune myocarditis

Coxsackievirus B3 (CVB3) infection of C57Bl/6 mice shows a sex bias with males developing more severe cardiac inflammation than females because males develop a Th1 inflammatory response, whereas females develop a Th2 response. Since their discovery, Toll-like receptors have been shown to play an important role in the development of the immune response against harmful pathogens. To assess the role of TLRs in coxsackievirus-induced myocarditis wild type and Toll-like receptor 2 −/− male and female mice were infected and assessed for viral replication, myocarditis, helper T-cell generation, and regulatory T-cell generation. TLR2 −/− mice show reduced Th1 expression compared to controls. Treatment of wild type mice with either Pam3CSK4 (TLR2) or LPS (TLR4) specific TLR agonists resulted in increased Th1 expression in male and female mice and a decrease in FoxP3 + regulatory T-cells in male mice. The suppression of T regulatory cells by TLR signaling in males but not females correlates with the increased myocarditis susceptibility of the males.     

柯萨奇B3病毒亲心肌株与非亲心肌株感染小鼠心肌细胞的实验比较

柯萨奇Ｂ３非亲心肌株病毒（ＣＶＢ３ｏ）是否引起心肌炎还缺乏直接的实验依据。我们采用柯萨奇Ｂ３亲心肌株（ＣＶＢ３ｍ）和ＣＶＢ３ｏ感染鼠培养心肌细胞，对两株病毒感染细胞的特性进行了比较，结果表明，ＣＶＢ３ｏ与ＣＶＢ３ｍ在乳鼠心肌细胞培养液中的滴度，１２小时和２４小时无明显差别，４８小时后ＣＶＢ３ｍ的滴度变化不大，而ＣＶＢ３ｏ有所下降；两株病毒均能使鼠心肌细胞死亡，但随着时间的延长ＣＶＢ３ｍ感染后心肌细胞死亡率明显高于ＣＶＢ３ｏ；ＣＶＢ３ｏ不能阻断ＣＶＢ３ｍ对心肌细胞的感染。因此我们认为，ＣＶＢ３ｏ能感染心肌细胞，但其程度低于ＣＶＢ３ｍ。     

苦参碱对病毒性心肌炎小鼠蛋白激酶B表达的影响

目的 评价苦参碱对柯萨奇B3型病毒（CVB3）感染的病毒性心肌炎（VMC）小鼠心肌组织蛋白激酶B（Akt）表达的影响,以探讨苦参碱保护心肌的作用机制.方法 实验采用雄性Balb/c小鼠连续3 d腹腔注射0.2ml 100TCID50的CVB3的方法制备VMC的动物模型.分为6组：苦参碱每日80 mg/kg、40 mg/kg、20 mg/kg治疗组,利巴韦林组、病毒组及正常对照组.药物于末次注射病毒的60 min后开始,连续腹腔注射10 d,正常组给予同体积的生理盐水.分别于给药后第5天和第10天处死小鼠,应用Tunel标记法检测各组心肌细胞凋亡情况;于给药后第10天应用免疫组化及Western Blot法检测心肌组织磷酸化AktSer-473蛋白的表达.结果 与正常组比较,病毒组心肌组织凋亡明显增加（P＜0.05）;与病毒组比较,苦参碱各剂量组心肌组织凋亡明显减少（P＜0.05）.于给药后第10天,苦参碱每日40 mg/kg组磷酸化AktSer-473蛋白的表达明显上调（P＜0.05）.结论 苦参碱可能通过促进磷酸化AktSer-473蛋白的表达,抑制CVB3感染的VMC小鼠心肌组织凋亡.     

肿瘤坏死因子α mRNA在小鼠病毒性心肌炎中的表达及意义

目的　研究病毒性心肌炎 (VMC)小鼠肿瘤坏死因子α(TNF α)的动态变化及mRNA的表达及其在VMC小鼠发病中的意义。方法　用逆转录 聚合酶链反应 (RT PCR)方法检测小鼠VMCTNF αmRNA的表达 ,同时用酶联免疫吸附试验法 (ELISA)检测VMC小鼠在接种病毒后 3、5、7、9、15、35d血清TNF α的变化 ,并分析了TNF α与VMC发病的可能关系。结果　实验发现VMC小鼠TNF αmRNA表达量明显增加 ,而且接种病毒后 7d的表达量 (1 94 )大于 3d(1 0 9)和对照组 (0 0 7)。VMC小鼠在接种病毒后 3～ 35d各时点的血清TNF α水平 (分别为D3组 15 9 7± 4 0 8;D5组 2 12 7± 4 6 0 ;D7组 2 96 7± 34 3;D9组 2 6 7 3± 4l 4 ;D15组 187 8± 4 9 6 ;D35组 15 5 4± 35 9)均明显高于对照组 (12 7 2± 13 8,P <0 0 5或 0 0 1)。结论　小鼠VMC血清TNF α及其mRNA水平升高 ,TNF α可能参与了VMC的发病     

鼠巨细胞病毒感染对小鼠脾细胞IL-12 p35和p40基因转录和表达的影响

目的 探讨鼠巨细胞病毒（MCMV）感染对小鼠脾细胞内TH-1细胞调控因子白细胞介素-12（IL-12）p35和p40基因转录和表达影响的时序性变化特点。方法 制备全身播散型MCMV感染小鼠模型，于感染后3d,5d、7d、10d和14d分离小鼠脾细胞，在PHA刺激后用RT-PCR法检测脾细胞内IL-12 p35和p40 mRNA水平时序性变化，ELISA法测定脾细胞培养上清中IL-12 p70和IFN-γ蛋白水平变化。结果 模型鼠在感染后第3天IL-12 p70表达显著增高（P〈0．05），但第5天后急剧下降，显著低于正常鼠（P〈0．05）；IFN-γ在感染后第3天增高达峰值（P〈0．01），随后逐渐下降，在感染后第10～14天降至正常水平；IL-12 p35mRNA水平变化与IL-12 p70完全一致；而p40mRNA则从感染第3天开始持续高水平表达（P〈0．01）。结论 IL-12 p35mRNA和IL-12 p70在感染5d后持续明显下降是感染后期TH1类细胞因子持续低表达、TH1反应受抑制的主要原因之一；感染后IL-12 p40mRNA持续高水平可能导致拮抗剂（p40）2表达增加，后者可进一步抑制IL-12功能。     

IL-12诱导T细胞凋亡对Fas/FasL和TNFR/TNFα表达的影响

目的:探讨白介素12(IL-12)诱导T细胞凋亡过程中对T细胞的Fas/FasL和TNFR/TNFα表达的影响作用。方法:dUTP缺口末端标记法和Annexin V法;用FITC标记TNFR1,PE标记CD95,生物素标记FasL,流式细胞仪检测3种T细胞(人淋巴瘤T细胞株HTB176、人急性白血病T细胞株TIB152和正常人T细胞)的百分率;用半定量PCR的方法检测FasL和TNFα的mRNA的表达作用。结果:HTB176和TIB152的细胞在IL-12处理1 h,生物素标记FasL百分率和FasL的mRNA表达率开始增加,24 h达到高峰,但正常T细胞在24 h后才有反应;正常T细胞经IL-12处理1 h内细胞FasL百分率和FasL的mRNA表达率开始增加,在以后的试验期6、12、24 h始终保持恒定水平;但3种T细胞在IL-12作用下不促进细胞CD95和TNFR1及TNFα的表达。