甲真菌病患者多部位红色毛癣菌感染分离株DNA同源性分析

目的 探讨甲真菌病患者多部位红色毛癣菌感染分离株基因型的差异。方法 采用PCR扩增红色毛癣菌rDNA非转录间隔区（NTS）中TRS1片段,并用随机引物OPAA11随机扩增DNA,检测基因多态性。比较同一患者不同感染部位分离菌株的基因型差异。结果 共分离30株红色毛癣菌,按照PCR扩增TRS1区指纹图分为5型,随机引物OPAA11扩增指纹图分为11型,基因型分布与感染部位关系不大。在10例受试患者中,PCR扩增TRS1区显示,7例不同感染部位分离得到的菌株基因型有差异;随机引物OPAA11扩增显示,8例不同感染部位分离得到的菌株基因型有差异。结论 甲真菌病患者不同部位红色毛癣菌感染可能为不同菌株引起,提示部分甲真菌病患者不同部位皮肤癣菌感染可能存在不同菌株的感染。     

多部位红色毛癣菌感染分离菌株DNA分型研究

目的 探讨多部位红色毛癣菌感染不同部位分离菌株基因型的差异。方法 采用巢式PCR扩增真菌rDNA非转录间隔区(NTS)中Trs-1片段,检测基因多态性。并比较同一患者不同感染部位分离菌株的基因型差异。结果 受试36株菌株按照PCR指纹图共分为10型,基因型分布与感染部位关系不大。在17例受试患者中,8例不同感染部位分离得到的菌株基因型有差异,且与不同感染部位的病程差异无关。结论 多部位红色毛癣菌感染可能为多菌株引起,提示部分多部位皮肤癣菌感染患者不同部位皮肤癣菌感梁的传染源可能来源于外界,而与机体原已存在的感梁灶关系可能不大。     

HLA-DRB等位基因与苏皖籍汉族人群甲真菌病的相关性初步研究

【摘要】 目的 探讨HLA-DRB等位基因与苏皖籍汉族人群甲真菌病的相关性。 方法 采用聚合酶链反应-序列特异性引物方法对50例红色毛癣菌甲真菌病患者、14例须毛癣菌甲真菌病患者和52例健康对照进行HLA-DRB等位基因分型。应用SPSS for windows 13.0软件包,采用χ2检验比较甲真菌病患者组与对照组的HLA-DRB等位基因频率。 结果 红色毛癣菌甲真菌病患者HLA-DRB各等位基因频率与健康对照组相比差异均无统计学意义。须毛癣菌甲真菌病患者HLA-DRB1*14等位基因频率为17.86%,较健康对照组（3.85%）升高（P < 0.01,OR = 5.435,95% CI：1.353 ~ 21.835）,HLA-DRB1*15频率为0,较健康对照组（16.3%）下降（P < 0.05,OR = 0.837,95% CI：0.768 ~ 0.911）,差异均有统计学意义。 结论 HLA-DRB等位基因可能与苏皖汉族人群甲红色毛癣菌感染无明显相关;HLA-DRB1*14可能是甲须毛癣菌感染的易感基因,而HLA-DRB1*15可能是甲须毛癣菌感染的拮抗基因;不同菌种感染所致的甲真菌病的遗传背景可能存在异质性。     

两足一手型手足癣致病菌种红色毛癣菌的基因型分析

目的对两足一手型手足癣患者致病菌种红色毛癣菌进行菌株水平的基因型分析,通过手足间菌株基因型异同推测手足间菌株传染途径。方法扩增红色毛癣菌NTS区的串联重复系列TRS-1区,对临床分离菌株进行基因分型。结果共分析了229株红色毛癣菌,包括从63例两足一手型手足癣患者手足部位分离到173株红色毛癣菌和15例两足两手型手足癣患者手足部获得56株红色毛癣菌。两组中,80%以上的患者手足部位菌株基因型相同,且两组患者基因型无统计学差异。结论两足一手型手足癣患者手部菌株主要来自其感染的足部。     

不同底物体外诱导不同基因型红色毛癣菌产生角蛋白酶的活性比较

目的:通过探讨红色毛癣菌体外分泌角蛋白酶的活性与诱导底物及其基因型的关系,从而了解红色毛癣菌的侵袭力与感染部位及其基因型的关系。方法:分别以指甲、趾甲、皮屑和头发为底物,对不同基因型红色毛癣菌T1a和T1b进行体外培养,利用keratin-azure和酶标仪检测其产生的角蛋白酶活性。结果:不同底物诱导红色毛癣菌T1a和T1b产生角蛋白酶活性的高低比较,指(趾)甲高于皮屑(P0.05),皮屑高于头发(P0.05),指甲和趾甲之间差异无统计学意义(P0.05)。同一底物诱导菌株T1a和T1b产生的角蛋白酶活性间差异无统计学意义(P0.05)。结论:不同底物诱导的角蛋白酶活性不同;红色毛癣菌的侵袭力可能与其感染部位所含的诱导底物有关,而与基因型无关。     

巢式PCR诊断甲真菌病中红色毛癣菌和须癣毛癣菌

目的：评价巢式PCR诊断甲真菌病中红色毛癣菌和须癣毛癣菌的敏感性和特异性。方法：液氮冷冻甲标本,微量法提取DNA,应用特异性引物,巢式PCR方法扩增DNA。结果：36例直接镜检和培养均为阳性的甲标本,培养显示24例为红色毛癣菌,12例为须癣毛癣菌。巢式PCR中FirstPCR34例阳性,34例标本均产生了650bp目的片段;NestPCR32例阳性,32例中有22例标本产生了137bp的片段,为红色毛癣菌;10例标本产生了102bp的片段,为须癣毛癣菌。PCR敏感性为88．9％,特异性为100％。结论：巢式PCR是一种快速、特异和敏感的诊断甲真菌病中红色毛癣菌和须癣毛癣菌的方法。     

HLA-DRB1等位基因与广东汉族人群甲真菌病的相关性研究

 目的:探讨人类白细胞抗原HLA DRB1等位基因与广东汉族人群甲真菌病的关联性。方法：纳入64例广东汉族甲真菌病患者(包括10例红色毛癣菌甲癣患者)以及64例健康对照者,采用聚合酶链式反应-序列特异性引物（PCR-SSP）技术,对研究对象全血基因DNA进行HLA DRB等位基因分型,比较等位基因频率,分析甲真菌病与HLA基因多态性的关系。结果：甲真菌病患者HLA-DRB1*10基因频率高于健康对照组（ X²=5.10,P<0.05）。红色毛癣菌感染的甲癣患者组HLA DRB1*12基因频率低于健康对照组（  X²=4.70,P<0.05）。结论：HLA-DRB1*10等位基因可能是广东汉族人群甲真菌病遗传易感基因,而HLA-DRB1*12等位基因可能是红色毛癣菌感染的甲真菌病患者的保护性基因,HLA基因多态性与甲真菌病的发生可能存在遗传免疫关联性。     

儿童、青少年甲真菌病临床特点及致病菌分析

目的:确定儿童、青少年甲真菌病的主要临床特征和致病菌的种类。方法:回顾性分析220例(年龄18岁)甲真菌病患者的临床特征和致病菌种类。结果:220例患者中男110例,女100例,年龄3个月~17岁,儿童、青少年甲真菌病最常见的感染类型是远端侧缘甲下型(50.45%)和白色浅表型(42.27%)。趾甲较指甲感染常见,共分离出病原菌228株(混合感染8例),其中皮肤癣菌199株(87.28%)、念珠菌属27株(11.84%)、曲霉菌属2株(0.88%)。在199株皮肤癣菌属中红色毛癣菌192株(96.48%),趾甲真菌病多为红色毛癣菌,指甲多为念珠菌属。结论:儿童、青少年甲真菌病中最常见的病原菌为红色毛癣菌,其次为念珠菌属。     

红色毛癣菌菌落表型和基因型的分型研究

目的:确定红色毛癣菌菌落表型和基因型的相关性以及与感染部位的关系。方法:收集红色毛癣菌临床分离株138株,采用传统培养方法对红色毛癣菌进行表型分型,利用红色毛癣菌特异性引物扩增TRS-1区重复序列进行种内基因分型,并分析检测结果与感染部位的相关性。结果:138株红色毛癣菌共分离出3种菌落表型:绒毛型、沟纹型和粉末型;分离出5型基因型,其中Type1 64株,Type2 18株,Type3 19株,Type4 12株,Type5 25株。红色毛癣菌的表型和基因型与感染部位均无相关性(均P0.05),红色毛癣菌的菌落表型与基因型有一定的相关性(P0.05)。结论:红色毛癣菌基因型与菌株来源有关而与感染部位无关,可为判断复发和再感染提供依据。     

内蒙古医科大学附属医院47年浅部真菌病及病原菌分析

目的探讨内蒙古医科大学附属医院近50年浅部真菌病分布以及致病菌种构成的动态变化。方法对该院皮肤性病科47年真菌培养阳性的15 648例患者临床资料、真菌培养鉴定结果进行分析。结果浅部真菌病位列前3的是足癣、手癣和甲真菌病;甲真菌病病原菌以红色毛癣菌为主,白念珠菌和其他酵母菌随着年代的增加逐渐增多;体癣与头癣病原菌以犬小孢子菌为主,并随着年代逐渐增多;所有培养阳性菌株中,列前3位的是红色毛癣菌、须癣毛癣菌复合体和犬小孢子菌。结论从1970—2016年浅部真菌病的病原菌变化不大,皮肤癣菌仍占主要优势,以红色毛癣菌、须癣毛癣菌复合体为主。     

Molecular strain typing of Trichophyton rubrum indicates multiple strain involvement in onychomycosis

BACKGROUND: Trichophyton rubrum is an important cause of onychomycosis. Molecular strain typing methods have recently been developed to address questions of epidemiology and source of relapse following treatment. OBJECTIVES: To determine whether T. rubrum nail infections are caused by one or more strains of this fungus. METHODS: Nail specimens from 10 patients with onychomycosis due to T. rubrum were cultured and five colonies per culture plate were selected for molecular strain typing. DNA was extracted from these isolates and subjected to a polymerase chain reaction-based typing method that analyses variations in numbers of repetitive elements in the non-transcribed spacer region of the ribosomal RNA gene repeats. RESULTS: In six of 10 specimens, there were two or more T. rubrum strain types present. CONCLUSIONS: This preliminary study suggests that in many cases of fungal nail infection by T. rubrum, multiple strains are involved. This has important implications for epidemiological studies and possibly for therapy.     

武汉地区甲真菌病的致病菌及菌种变迁分析

目的了解1999年1月~2005年12月武汉地区甲真菌病的致病菌种分布及变迁情况。方法对1999年1月~2005年12月甲真菌病患者的真菌培养资料1237例进行系统分析总结。结果真菌培养阳性895例,阳性率72.4%。致病菌中,皮肤癣菌559株(61.1%),酵母菌287株(31.4%),霉菌69株(7.5%)。皮肤癣菌中红色毛癣菌占95.0%(531/559),酵母菌中念珠菌属占71.8%(206/287),霉菌中曲霉属占53.6%(37/69);混合感染20例占2.2%。结论武汉地区甲真菌病的致病菌中以皮肤癣菌为主,其中红色毛癣菌为优势菌种,但是占致病菌的比例下降;酵母菌属和念珠菌属的比例上升;霉菌中以曲霉属和镰刀菌属为主。甲真菌病混合感染的比例上升。     

红色毛癣菌基因型与表型的研究

目的 探讨红色毛癣菌基因型与表型、侵犯部位及其来源地区的相关性.方法 基因分型采用ITS区域探针与DNA印迹杂交法,表型分型采用传统方法.结果 所试49株红色毛癣菌(南京21株、大连26株、北京2株)分为20型(A-T型),其中A型9株均为大连株;B型9株中7株为南京株;C型6株均为南京株.5种表型除颗粒型外其他4型均有A型,17株绒毛型和7株沟纹型B型占居首位,6株羊毛型和17株粉末型A型占居首位.分离自甲癣的21株以C型为主;股癣10株和体癣6株以A型为主;足癣8株,B型占居首位;头癣4株G型占居首位.结论 红色毛癣菌基因型与表型、侵犯部位及其来源地区可能具有一定的相关性.     

红色毛癣菌raubitschekii变种致Majocchi肉芽肿一例

目的 报道1例Majocchi肉芽肿,对其病原菌红色毛癣菌变种raubitschekii的形态学、生理学及分子学特征进行研究,并通过基因分型的方法分析其深在感染与浅表皮肤感染的关系.方法 进行临床和病理检查,真菌镜检和培养,尿素酶试验,内转录间隔区(ITS区)序列分析.对来源于该患者病变趾甲及组织的菌株及7株红色毛癣菌的rDNA非转录间隔区(NTS)串联重复亚单位1(TRS-1区)进行PCR.结果 48岁女性患者,背部、臀部、大腿出现红色丘疹、结节2个月.9个月前曾行肝移植术,甲癣病史3年,术后加重.经病理和真菌学检查,确诊为Majocchi肉芽肿.足趾甲和组织真菌培养菌落和显微镜下形态、尿素酶试验阳性,结合ITS区序列分析结果,证实致病菌为红色毛癣菌变种raubitschekii.TRS-1区扩增后显示,病变趾甲和组织来源的菌株基因型完全一致,与其余临床分离株有差异.结论 NTS区的TRS-1区显示基因多态性,病变趾甲和组织基因型完全一致,提示两者来源相同.     

Fast and sensitive detection of Trichophyton rubrum DNA from the nail samples of patients with onychomycosis by a double-round polymerase chain reaction-based assay

BACKGROUND: Trichophyton rubrum is one of the most frequently isolated pathogens in onychomycosis. Isolation of T. rubrum from nail samples by traditional methods is time-consuming and has a high false-negative rate of detection. OBJECTIVES: To investigate the detection of T. rubrum in nail samples using DNA detection methods. METHODS: A total of 62 nail samples from onychomycosis patients with T. rubrum infection were evaluated by culture on Sabouraud's dextrose agar plus chloramphenicol, cycloheximide and gentamicin and compared with genotyping methods utilizing DNA extracted directly from nails. Trichophyton rubrum DNA isolated directly from nails was amplified using two different conserved regions [actin gene and internal transcribed spacer 1 (ITS)] in double-round polymerase chain reaction (PCR) assays. RESULTS: Forty-eight of 62 (77.4%) samples were potassium hydroxide (KOH) positive, but T. rubrum culture was positive in only 14 of 62 (22.6%) samples. By contrast, direct T. rubrum DNA detection rate was 59.7% (37/62) by actin gene and 45.2% (28/62) by ITS1 region PCR assays corresponding to higher detection frequencies compared with culture with P < 0.001 and < 0.008, respectively. The combined detection of actin and ITS1 was 69.4% (43/62). Interestingly, T. rubrum DNA was detected in 9 out of 14 (64.3%) of KOH- and culture-negative samples. Importantly, 15 culture-negative samples collected from patients undergoing antifungal treatment tested PCR positive using the actin region. CONCLUSIONS: These results suggest that a direct DNA detection protocol is more sensitive, accurate and faster than traditional culture-based methods. It can be useful to detect T. rubrum in patients undergoing antifungal therapy and who have been reported mycologically cured on the basis of a culture-based method.     

红色毛癣菌变种raubitschekii变种致Majocchi肉芽肿一例

目的　报道1例Majocchi肉芽肿,对其病原菌红色毛癣菌变种raubitschekii的形态学、生理学及分子学特征进行研究,并通过基因分型的方法分析其深在感染与浅表皮肤感染的关系。方法 进行临床和病理检查,真菌镜检和培养,尿素酶试验,内转录间隔区（ITS区）序列分析。对来源于该患者病变趾甲及组织的菌株及7株红色毛癣菌的rDNA非转录间隔区（NTS）串联重复亚单位1（TRS-1区）进行PCR。 结果 48岁女性患者,背部、臀部、大腿出现红色丘疹、结节2个月。9个月前曾行肝移植术,甲癣病史3年,术后加重。经病理和真菌学检查,确诊为Majocchi肉芽肿。足趾甲和组织真菌培养菌落和显微镜下形态、尿素酶试验阳性,结合ITS区序列分析结果,证实致病菌为红色毛癣菌变种raubitschekii。TRS-1区扩增后显示,病变趾甲和组织来源的菌株基因型完全一致,与其余临床分离株有差异。结论 NTS区的TRS-1区显示基因多态性,病变趾甲和组织基因型完全一致,提示两者来源相同。     

甲真菌病400例致病真菌分析

目的:确定上海地区甲真菌病的致病菌种。方法:对本院皮肤科门诊就诊的直接镜检阳性的400例甲真菌病患者的甲标本做真菌分离培养和分析。结果:分离出致病真菌233株,其中皮肤癣菌120株(红色毛癣菌104株,须癣毛癣菌10株,犬小孢子菌3株,絮状表皮癣菌3株),酵母菌68株,非皮肤癣菌11株(曲霉6株,青霉5株),其余为丝状真菌。结论:上海地区甲真菌病的致病真菌以皮肤癣菌为主,酵母菌中非白念珠菌占有一定比例。