类糜蛋白酶抑制剂对人大肠肥大细胞类胰蛋白酶释放的影响

目的：研究类糜蛋白酶抑制剂对人大肠肥大细胞释放类胰蛋白酶的影响。方法：人大肠组织经酶消化后，细胞成份有全HBSS重新悬浮。激发过程在LP4试管中、37℃条件下完成。类胰蛋白酶水平用酶联免疫吸附试验（ELISA）方法测定。结果：促分泌剂抗IgE抗体和CI在培养15分钟和35分钟时可明显刺激人大肠肥大细胞类胰蛋白酶的释放，在相同实验体系中，类糜蛋白酶抑制剂ZIGPFM、TPCK和α1-抗胰蛋白酶无明显刺激人大肠肥大细胞释放类胰蛋白酶的作用。类糜蛋白酶抑制剂均可以剂量依赖性的方式抑制抗IgE抗体诱导的类胰蛋白酶的释放，最大浓度的ZIGPFM（1 μmol／ml）、TPCK（80 μmol／ml）和α1-抗胰蛋白酶（30 μmol／ml）可分别抑制37％、40％和36．6％的类胰蛋白酶释放。在37℃条件下同大肠细胞预培养20分钟与无预培养相比，ZIGPFM和TPCK对抗IgE抗体诱导的类胰蛋白酶释放的抑制作用略增强。Amastatin对抗IgE抗体诱导的类胰蛋白酶的释放无作用。类糜蛋白酶抑制剂均可以剂量依赖性的方式抑制CI诱导的类胰蛋白酶的释放，抑制范围在23％-35．3％。在37℃条件下同大肠细胞预培养20分钟与无预培养相比，ZIGPFM对CI诱导的类胰蛋白酶释放的抑制作用有增强，TPCK则无此特点。结论：类糜蛋白酶抑制剂可抑制人大肠肥大细胞IgE依赖性和非依赖性类胰蛋白酶的释放，提示类糜蛋白酶抑制剂可望成为炎症性肠病或其它肥大细胞相关疾病的一个新的治疗途径。     

肥大细胞类胰蛋白酶与支气管哮喘

支气管哮喘 (以下简称哮喘 )一直被认为与I型变态反应密切相关 ,而肥大细胞是介导I型变态反应的重要成分之一。肥大细胞的活化信号主要来自变应原与IgE的桥联 ,但神经肽及其它因素也能使肥大细胞活化。活化肥大细胞脱颗粒 ,释放出颗粒中预先合成和新合成的各种介质 ,如类胰蛋白酶、类糜蛋白酶、组胺、肝素等。这些介质作用于靶分子、靶细胞和靶组织 ,引起哮喘在病理、病理生理等方面的变化。目前普遍认为哮喘是一种复杂的慢性呼吸道炎症 ,其主要特征为对特异性和非特异性刺激物诱发的气道高反应性、炎症细胞浸润及气道重塑[1,2 ,2 1] 。虽…     

类胰蛋白酶抑制剂对人大肠肥大细胞组胺释放的影响

目的 :研究类胰蛋白酶抑制剂 (TPI)对人大肠肥大细胞释放组胺的影响。方法 :大肠组织经胶原酶和透明质酸酶消化后 ,将细胞成分用全HBSS重新悬浮。肥大细胞在LP4试管中于37℃条件下与各种刺激剂反应 15min而完成激发过程。激发液中的组胺水平用以玻璃纤维为基础的荧光方法测定。结果 :4种TPI中 ,高浓度的亮抑酶肽素和鱼精蛋白可刺激人大肠肥大细胞释放组胺 ;而TLCK和乳铁蛋白则无明显的刺激作用。 4种TPI均可以剂量依赖的方式抑制抗IgE抗体诱导的大肠肥大细胞释放组胺。最大浓度的亮抑酶肽素(2 0 0mmol/L)、TLCK(10 0mmol/L)、乳铁蛋白 (30mmol/L)和鱼精蛋白 (10 0mg/L) ,可分别抑制 4 8.7%、36 .7%、4 0 .2 %和 34.1%的组胺释放。在 37℃条件下 ,将 4种TPI同大肠肥大细胞预培养 2 0min ,与未进行预培养相比较 ,它们对抗IgE抗体诱导的组胺释放无明显改变。 4种TPI还可抑制CI诱导的组胺释放 ,抑制范围在 2 5 %～ 32 %之间。与抗IgE抗体诱导的组胺释放则不同 ,与大肠肥大细胞预培养 2 0min ,与未进行预培养相比较 ,亮抑酶肽素和TLCK对CI诱导的组胺释放的抑制作用明显增强 ;而鱼精蛋白则无此作用。结论 :我们首次发现TPI可抑制人大肠肥大细胞IgE抗体依赖和非IgE抗体依赖的组胺释放 ,提示TPI可望成为炎症性肠     

人肥大细胞的IgE依赖性组胺和类胰蛋白酶分泌

目的　利用人结肠组织的肥大细胞和肥大细胞激活的体外研究系统评价人肥大细胞释放类胰蛋白酶和组胺的能力及其机制。方法　经酶悬浮的人结肠肥大细胞与抗IgE抗体共同培养后记录浓度相关曲线和时间关系曲线。类胰蛋白酶用酶联免疫吸附试验的方法测量 ,而组胺则由一种以玻璃纤维为基础的荧光比色法测量。结果　抗IgE抗体可引起浓度相关性的组胺和类胰蛋白酶释放 ,最大组胺和类胰蛋白酶分泌量分别比基础分泌量超出 2 .7和 2 .5倍以上。抗IgE抗体的作用从加样后 10s开始 ,6min后达高峰并至少持续 15min。百日咳毒素和代谢抑制剂能够分别抑制抗IgE抗体引起的组胺和类胰蛋白酶释放。百日咳毒素还能够减少自发性类胰蛋白酶释放。结论　人结肠肥大细胞在受到抗IgE抗体刺激时具有平行释放类胰蛋白酶和组胺的能力 ,这个过程与肥大细胞膜G蛋白偶联受体的激活有关 ,并消耗能量。肥大细胞自发性释放组胺和类胰蛋白酶的功能可能是通过不同的机制实现的。     

蛋白酶抑制剂对肥大细胞类胰蛋白酶分泌的影响

目的 探讨蛋白酶抑制剂和组胺对肥大细胞类胰蛋白酶分泌的影响。方法 扁桃体组织经酶消化后，细胞成份用全HBSS重新悬浮，肥大细胞激发和抑制剂作用的试验在37℃条件下完成。类胰蛋白酶水平用酶联免疫吸附试验（ELISA）方法测定。结果 鱼精蛋白具有刺激人类扁桃体肥大细胞释放类胰蛋白酶的作用，其分泌量可高达基础分泌量的5倍。高浓度TLCK和TPGK可抑制抗-IgE诱导的类胰蛋白酶释放，TLCK在有否预培养的情况下均能抑制钙离子导入剂（cal-cium ionophore,CI)诱导的类胰蛋白酶释放，而TPCK则只有在20min预培养后才能显示此作用。结论 TLCK和TPCK抑制IgE依赖性和非依赖性类胰蛋白酶释放提示具有胰蛋白酶和糜蛋白酶活性的酶参与肥大细胞的激活-分泌偶联过程。     

哮喘支气管黏膜中类胰蛋白酶的表达增强

目的 观察含类胰蛋白酶的肥大细胞在豚鼠支气管黏膜的表达和分布特征。方法 Dunkin Hartley豚鼠随机分为哮喘组(A组)和生理盐水组(B组)。用100m/mL卵蛋白进行致敏，并于致敏后第5周行抗原特异性支气管激发试验。激发后2h取各组豚鼠支气管组织标本，免疫组化染色以抗人类胰蛋白酶(Tryptase)单克隆抗体(AAl)为一抗，过氧化物酶标记的绵羊抗鼠IgG为二抗，并用联苯二胺(Diaminobenzidine，DAB)显色。仅选择阳性染色细胞进行计数。结果 鼠抗人Trvptase单克隆抗体即可识别人支气管Tryptase又可识别豚鼠支气管Tryptase。哮喘支气管组织中Tryptase阳性细胞数明显多于正常支气管组织。相似地，支气管激发试验后的豚鼠支气管组织中的肥大细胞数要比生理盐水吸入组多出2．0倍以上。结论 抗人Tryptase单克隆抗体可以用于识别豚鼠支气管的肥大细胞。哮喘者和激发试验阳性的豚鼠支气管肺组织中的Tryptase阳性肥大细胞数明显多于正常支气管组织，表明肥大细胞在支气管哮喘发病机制中可能起重要作用。     

类胰蛋白酶与动脉粥样硬化

类胰蛋白酶是肥大细胞被激活时以脱颗粒的形式释放的一种蛋白酶,可能通过募集炎症细胞,削弱胆固醇的逆向转运,影响斑块破裂及血栓形成而参与动脉粥样硬化的发生与发展。     

类胰蛋白酶阳性肥大细胞在大鼠马兜铃酸肾病模型中的分布及意义

马兜铃酸肾病(aristolochic acid nephropathy，AAN)发病机制目前尚不十分清楚，细胞免疫是否参与疾病的启动过程，国内外尚有争论。虽然一般认为，AAN为少细胞性的间质纤维化，但其病理证据来自于肾移植后的摘除肾。近年研究发现，肾间质中可见CD4^ 、CD8^ 和CD68^ 细胞浸润，并且早期应用泼尼松治疗取得了一定疗效，说明AAN的发病可能伴随炎性反应过程。     

类胰蛋白酶与疾病

70年代以来 ,人们用胰蛋白酶 (ｔｒｙｐｓｉｎ)的组织酶　　 1998年 ,Ｐｅｒｅｉｒａ等[3] 解决了人 β -类胰蛋白酶的晶体结构 ,为一指环状同源四聚体。每个四聚体有如舒张支气管的神经肽、血管活性肠肽 (ｖａｓｏａｃｔｉｖｅｉｎ ｔｅｓｔｉｎａｌｐｅｐｔｉｄｅ ,ＶＩＰ)和组氨酸甲硫氨酸肽 (ｐｅｐｔｉｄｅｈｉｓ 的气道平滑肌和成纤维细胞负担增加有关 ,由于肌细胞和成纤维细胞[10 ] 的增生 ,这可能与哮喘病人以上提到的β -类胰蛋白酶的可能作用外 ,过敏性疾病病人体内含量的升高也引起了人们的注意。使用(ＫＩＴＷ/ＫＩＴＷ -ｖ)中…     

组胺对人结肠肥大细胞类胰蛋白酶释放的调节作用

探讨组胺对人结肠肥大细胞类胰蛋白酶释放的调节作用。经酶消化后获取人结肠组织肥大细胞,激发后行多种干预实验。用酶联免疫吸附试验法测定类胰蛋白酶。结果发现组胺可诱导人结肠肥大细胞释放类胰蛋白酶,浓度为100μg/L时组胺释放量最大,为基础值的3．5倍。浓度为10μg/L时对人肥大细胞的刺激强度与10mg/L的抗IgE抗体相似。组胺的作用从加样后10s开始,5min后完成。百日咳毒素和抗霉素A联合2．脱氧-D-葡萄糖可显著抑制组胺诱导人结肠肥大细胞释放类胰蛋白酶。100及1000μg/L的组胺与抗IgE抗体或离子载体钙同时加入细胞中,诱导类胰蛋白酶释放的能力低于组胺单独作用组。结论为组胺可激活人结肠肥大细胞,还以自身放大机制调节肥大细胞的脱颗粒过程。     

肥大细胞中前列腺素合成酶的组织化学观察

用正常成年豚鼠20只、大鼠10只,颈椎脱臼或重击头部处死后,立即取胸腺、淋巴结和小肠,部分材料投入-70℃液氮速冻,部分材料入10%甲醛和纯甲醇固定,石蜡切片,HE和肥大细胞特殊染色;肠系膜铺片经氮气吹干后,与液氮速冻的组织块一并置-70℃低温冰箱保存。可随时取出做恒冷箱切片,部分冰冻切片及肠系膜铺片用Janszen和Nugteren前列腺素合成酶组织化学法显示,以此法同步显示家兔肾脏。每种切片均用酶的特异抑制剂消炎痛作对照。部分连续冰冻切片,做HE和肥大细胞特殊染色。结果表明,前列腺素合成酶活性存在于肥大细胞的胞质内,颗粒和胞核为阴性。家兔肾脏集合管恒为阳性。消炎痛抑制反应极弱。确证前列腺素合成酶的组织化学方法可靠并且具特异性。前列腺素合成酶阳性反应的细胞,见于大鼠和豚鼠的小肠粘膜及粘膜下层、胸腺被膜和胸腺隔的结缔组织以及胸腺髓质、淋巴结被膜和小梁结缔组织及深皮质区;散布于肠系膜铺片上的细胞多呈椭圆形。以上所示酶活性细胞的分布,与肥大细胞的其他特殊染色结果相符。证明酶反应确是在肥大细胞内。本文用组织化学技术,证实肥大细胞内存在前列腺素合成酶,此酶是衡量前列腺素合成的敏感指标,可考虑用此方法研究肥大细胞的生理和病理。     

ESTROGEN REGULATES CYTOKINE RELEASE IN HUMAN MAST CELLS

Estrogens are important for bone homeostasis and are classified as anti-resorptive agents. In ovariectomized rats, mast cell changes occurred during the activation of resorption. In addition, quantitative changes occurred in mast cell population residing near the site undergoing resorption. Considering these studies, mast cells may play a role in osteoporosis. Therefore, it is of paramount importance to study mast cell cytokine production also in the presence or absence of estrogen. When cultured in the absence of estrogen, human mast cells treated with PMA or A23187 demonstrated significantly greater release of TNF-α and IL-6 than cells grown under estrogen-depleted condition. Our results show that treatment of mast cells with estrogen prevented PMA or A23187-stimulated TNF-α or IL-6 release. These data provide evidence for a potent inhibition of cytokines by estrogen in human mast cells. This study may help to explain the association between mast cells and osteoporosis.     

神经肽对肥大细胞内钙离子水平的影响

采用新型的钙荧光指示剂Ｆｕｒａ－Ⅱ检测了神经肽刺激后ＲＰＭＣ内ｃａ２＋的变化情况。在细胞外无钙离子存在下，用能诱导组胺释放的最适浓度的Ｐ物质（１０μｍｏｌ／Ｌ）、β－内啡肽（６μｍｏｌ／Ｌ）和强啡肽（２μｍｏｌ／Ｌ）刺激ＲＰＭＣ后，胞内Ｃａ２＋迅速上升，然后很快下降，该过程约需１５秒钟左右。这与组胺释放的时间基本吻合。推测上述三种神经肽触发胞内钙池释放Ｃａ２＋可能与组胺的释放有关。     

人腭扁桃体肥大细胞的性质—免疫组化法研究

收集手术切除的人腭扁桃体标本６例，常规石蜡切片，分别以血管活性肠肽、阿尔新蓝－番红花红、长时间甲苯胺蓝和普通甲苯胺蓝染色观察肥大细胞。结果显示：肥大细胞呈血管活性肠肽免疫反应阳性，分布于淋巴小结中央及周围的弥散淋巴组织、被膜及小梁的结缔组织、固有层和小血管周围。阿尔新蓝－番红花红染色呈浅蓝色颗粒。长时间甲苯胺蓝染色显示的肥大细胞数目较多，颗粒为深蓝色。普通甲苯胺蓝染色未以显示肥大细胞。结果提示，人     

胎儿消化器官发育中的肥大细胞超微结构特点

实验对１０例不同胎龄肥儿消化器官的胎大细胞进行了超微结构观察，发现胎儿发育接近成熟时，其肥大细胞根据颗粒的超微结构可分ＴＣ肥大细胞和Ｔ肥大细胞两型；胎儿发育后期以大细胞有分泌活动呈活化状态；胎儿肥大细胞与成纤维细胞，上皮细胞，血管，神经等密切接触。     

不同固定液、染色法显示结缔组织肥大细胞效果的比较

本研究用6种固定液、4种染色法,观察对显示小鼠耳廓、舌和背皮肤结缔组织肥大细胞的影响。结果表明:一种固定液固定的组织,用不同的染色法染色或不同固定液固定的组织,用一种染色法染色,显示肥大细胞的效果不同。这可能是由于固定液能影响肥大细胞颗粒对染料的亲合力。本文对不同部位的结缔组织肥大细胞对固定液的反应有差异这一现象,进行了讨论。     

肥大细胞与肺成纤维细胞共育的形态学观察

用分离纯化的大鼠腹腔肥大细胞（ＰＭＣ）与同源胎鼠肺成纤维细胞（ＬＦｂ）共育，对ＬＦｂ进行形态学观察和形态计量分析。结果表明：与ＰＭＣ共育的ＬＦｂ呈复层生长，单位面积内细胞计数明显增加，粗面内质网（ＲＥＲ）增生，电镜见ＰＭＣ与ＬＦｂ紧密接触和部分ＰＭＣ有脱颗粒现象，提示ＰＭＣ可促进ＬＦｂ增值，并使其功能活跃。     

小鼠呼吸道肥大细胞分布的研究

10只中国1号小鼠,5只为幼鼠(45天)和5只成鼠(95天),其呼吸道组织标本固定于等渗甲醛-醋酸混合液,分别用甲苯胺蓝和Alcian蓝-藏红染色,以显示肥大细胞。并用其皮肤肥大细胞作对照。结果表明:单位面积呼吸道粘膜的结缔组织肥大细胞(CTMC)数,在鼻腔粘膜显著高于喉、气管和肺。同时,呼吸道肥大细胞随年龄而增加,在成鼠明显多于幼鼠(p<0.05)。用Alcian蓝-藏红染色的成鼠肥大细胞颗粒,其Alclan蓝阳性率高于幼鼠。气管和肺内偶见粘膜型肥大细胞(MMC)。     

天花粉对小鼠子宫肥大细胞影响的组织化学研究

目的 研究子宫肥大细胞在给天花粉后的组织化学特性,方法：甲苯胺蓝色染色,Ａｌｃｉａｎ蓝－藏红染色,临界电解质浓度测定和硫酸小蘖碱芝光染色,结果：用天花粉２０小时,２１小时,２２小时,２４小时后,子宫肥大细胞数量均明显增多,增多的肥大细胞ＴＢ染色为浅紫色,ＡＢ－Ｓ染色呈蓝色,硫酸小蘖碱荧光染色不显荧光,临床电解质浓度偏低。结论;增多的肥大细胞首先表现为幼稚的结缔组织型肥大细胞,随天花粉作用时间延长,