聚合酶链反应检测肿瘤细胞P16基因缺失及其临床意义

目的：探讨P16基因缺失与肿瘤的关系。方法：用聚合酶链反应（PCR）技术，检测56例肝癌、25例白血病患的P16基因缺失情况。结果：56例肝癌患中有13例P16基因缺失，25例白血病患中有8例P16基因缺失，缺失率分别为23.2%、32.0%。结论：P16基因缺失与肿瘤的发生密切相关，检测P16基因缺失有助于肿瘤的辅助诊断。     

白血病白细胞p16基因纯合缺失的检测和临床意义

目的 探讨p16基因纯合缺失与白血开门见山发病的关系。方法 用聚合酶链反应（PCR）检测73例白血病患者白细胞p16基因纯合缺失情况。结果 73例白血病患者中有5例p16基因纯合缺失,其中,21例慢性粒细胞性白血病患者未见p16基因纯合缺失,27例急性非淋巴细胞性白血病（急非淋）患者有1例缺失,缺失率为3.7%(1/27)。25例急性淋巴细胞性白血病患者有4例缺失,缺失率为16%（4/25）。20例正常对照未发现p16基因缺失。结论 p16基因在急性淋巴细胞性白血病（急淋）中有较高的缺失率。     

喉癌P16基因纯合缺失和异常甲基化检测

目的：以原发性喉癌患者为研究对象，检测喉癌组织中P16抑癌基因纯合缺失和异常甲基化情况。方法：采用PCR、多重PCR、限制性内切酶解-PCR方法对25例喉癌患者和25例喉部非恶性肿瘤(息肉、慢性炎症)患者，进行P16基因纯合缺失和异常甲基化检测。结果：25例喉癌患者纯合缺失20％(5／25)，异常甲基化24％(6／25)，25例非恶性肿瘤患者纯合缺失未检出(0／34)，异常甲基化8(2／25)。结论：本研究喉癌患者P16抑癌基因总失活率44％(11／25)，表明P16基因失活在喉癌患者中是较为常见的基因变化。喉癌患者中甲基化异常是P16基因失活的另一重要途径，值得引起重视。     

白血病白细胞p16基因纯合缺失的检测和临床意义

目的探讨p16基因纯合缺失与白血病发病的关系。方法用聚合酶链反应(PCR)检测73例白血病患者白细胞p16基因纯合缺失情况。结果73例白血病患者中有5例p16基因纯合缺失。其中,21例慢性粒细胞性白血病患者未见p16基因纯合缺失。27例急性非淋巴细胞性白血病(急非淋)患者有1例缺失,缺失率为3.7%(1/27)。25例急性淋巴细胞性白血病患者有4例缺失,缺失率为16%(4/25)。20例正常对照未发现p16基因缺失。结论p16基因在急性淋巴细胞性白血病(急淋)中有较高的缺失率。     

非霍奇金淋巴瘤患者p16INK4/MTS1/CDKN2表达与纯合性缺失的研究

p16基因是1994年由Kamb和Skolnick率先报道的一种新型抑癌基因。新近研究发现,它的失活与多种肿瘤的发生发展过程有着至关重要的关系。我们采用免疫组织化学(免疫组化)和聚合酶链反应(PCR)方法对非霍奇金淋巴瘤(NHL)进行p16基因的蛋白表达和失活检测,并同步对比Rb的蛋白表达,以探讨p16基因在NHL中的意义。材料和方法1 标本 47例NHL的石蜡包埋标本,取自第一军医大学南方医院1994～1997年的病理档案。10％甲醛固定,石蜡包埋,4～5μm厚制片,HE染色。并做LCA、     

帕金森病患者parkin基因外显子纯合性缺失及其功能学的意义

目的：观察不同亚型帕金森病（PD）患者中parkin基因外显子2－10的缺失分布，探讨parkin基因在PD发病机制中的可能作用。方法：63例患者被分为早发性PD和晚发性PD。以提取的基因组DNA为模板，扩增parkin基因第2－10号外显子，然后行琼脂糖电泳，观察外显子纯合性缺失的分布。结果：63例PD患者中发现外显子2、4纯合性缺失各1例，外显子3纯合性缺血2例，这些缺失均出现于早发性PD组。结论：parkin 基因外显子2－4的纯合性缺失是我国早发性PD患者的致病原因之一。     

胃癌中FHIT基因外显子5、8纯合性缺失及其蛋白表达的研究

目的:探讨FHIT基因外显子5、8纯合性缺失与蛋白表达的关系及其在胃癌发病机制中的作用.方法:应用PCR及免疫组化SP法检测30例胃癌组织、18例正常胃组织中FHIT基因外显子5、8的纯合性缺失和FHIT蛋白的表达.结果:FHIT蛋白阴性表达率及外显子5、8纯合性缺失率在胃癌组织中均高于正常胃组织(P＜0.05).FHIT蛋白表达与胃癌的分化程度有关(P＜0.05):胃癌组织中FHIT基因外显子5、8纯合性缺失与FHIT蛋白阴性表达有显著相关性(r=0.59,P＜0.05).结论:胃癌组织中FHIT基因外显子5、8纯合性缺失可能是引起FHIT蛋白表达降低并进而导致胃癌发生的重要机制.     

p16抑癌基因的纯合缺失与血液系统恶性肿瘤

p16基因,又称MTS1,INK4,CDK4I,CDKN2基因,是新近研究发现的一种肿瘤抑制基因,并迅速成为继p53抑癌基因后肿瘤分子研究中的另一新热点。本文概述p16基因在血液系统恶性肿瘤中异常表达的研究近况。     

P16基因与人类血液系统肿瘤

Ｐ１６基因是新近发现的一种肿瘤抑制基因，位于人类染色体９Ｐ２１上，其表达产物Ｐ１６蛋白系细胞周期领事激酶４抑制剂。现已表明，在人类多种组织类型的肿瘤中存在Ｐ１６基因的缺失和突变，在人类血液系统恶性肿瘤中，尤以急性淋巴细胞白血病中Ｐ１６基因的纯合子缺失常见。     

淋巴细胞白血病P16基因的检测及意义

Ｐ16基因为肿瘤抑制基因 ,它的缺失可见于不同来源的肿瘤细胞。在造血系统恶性肿瘤中 ,Ｐ16基因的失活主要发生在淋巴细胞来源的肿瘤[1] 。本文收集了淋巴细胞白血病42例 ,用免疫组化、双重对照ＰＣＲ、银染ＰＣＲ -ＳＳＣＰ的方法 ,检测Ｐ16基因的缺失、突变及表达的缺陷。1　材料与方法1.1　标本 :42例淋巴细胞白血病为 1996年至 1998年本院门诊与住院病人 ,其中急性淋巴细胞白血病 (ＡＬＬ) 30例 ,慢性淋巴细胞白血病 (ＣＬＬ) 12例 ;男性 2 5例 ,女性 17例。均经形态学、免疫组化确诊。1.2　ＤＮＡ提取 :取ＡＬＬ ,ＣＬＬ病人骨髓或外周…     

同时检测三种Myc基因的聚合酶链反应技术

目的建立同时检测Ｍｙｃ基因３个成员Ｌｍｙｃ、Ｎｍｙｃ及Ｃｍｙｃ异常扩增的简便方法。方法采用聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术，用一对引物同时扩增Ｍｙｃ基因３个成员第２外显子中的高度保守区，扩增产物经非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳及激光扫描。结果此法可以检测Ｍｙｃ基因家族中３个成员的扩增情况。经检测，正常组织细胞没有Ｍｙｃ基因扩增，３２例喉癌组织中４７％有Ｌｍｙｃ和Ｃｍｙｃ扩增，４１％有Ｎｍｙｃ扩增，与正常比差异均有显著意义（χ２＝６．７６４，７．６０９，５．９６１；Ｐ均＜００５）。Ｃｍｙｃ扩增率与用ＰＣＲ琼脂糖凝胶电泳检测的结果基本相符（χ２＝０．２５４，Ｐ＞００５）。结论此法对检测肿瘤组织中Ｍｙｃ基因３个成员提供了简易、特异、无放射污染，并且适于临床应用的、优于ＰＣＲ琼脂糖凝胶电泳的方法。     

提高乙型肝炎病毒P基因区聚合酶链反应检测阳性率的策略

目的：提高乙型肝炎病毒（HBV）DNA P基因区聚合酶链反应（PCR）检测的阳性率。方法：采用优化PCR反应条件，降低退火温度以及采用3'末端碱基游移兼并引物，减少引物与模板引物结合区的错配对PCR的影响等多种方法，对常规PCR检测HBV DNA P基因区阴性的病人血清，再进行PCR检测。结果：通过降低退火温度及减少3'末端错配，PCR检测阳性率由81．7％（67／82）增加至92．7％（76／82，P＜0．05）。结论：综合采用优化PCR反应条件，降低退火温度和采用3'末端碱基游移兼并引物等方法，可提高基因高突变区PCR检测阳性率。     

MAGE-1基因在胃癌中的表达及其意义

目的探讨MACE-1(黑色素瘤抗原-1)基因在胃癌组织中的表达及意义。方法采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测58例胃癌组织及30例正常组织中MAGE-1基因表达。结果58例胃癌组织标本中有34例(58.6%)表达MAGE-1基因,而30例正常组织均不表达MAGE-1基因,两组比较差弄有显著性(P<0.05)。结论MAGE-1基因在胃癌组织中有较高的表达,对胃癌病人的免疫治疗和预后有重要意义。     

荧光定量逆转录聚合酶链反应在前列腺特异性抗原基因检测中的应用价值

目的　利用Taqman技术 ,建立荧光定量逆转录聚合酶链反应 (FQ RT PCR)技术 ,对前列腺癌病人外周血中前列腺特异性抗原基因 (PSAmRNA)进行定量检测。方法　在PSA基因的外显子 2和 3之间设计一对引物和一条Taqman探针 ;优化反应体系的条件 ,以不同LNCaP细胞含量为标准品和其循环阈值 (Ct值 )制作标准曲线 ,检测外周血中PSAmRNA含量 ;对本方法进行方法学评价及初步临床应用评价。结果　成功建立了FQ RT PCR检测PSAmRNA技术 ,本方法最低检测限为每毫升全血 5个LNCap细胞 ,线性范围为 5～ 1 0 8细胞 /ml,批内和批间变异系数分别为 9 5 %～1 4 3%和 1 5 2 %～ 2 0 1 % ,扩增产物克隆和测序分析显示本扩增片段为PSAmRNA序列的特异性片段。初步临床研究显示 ,1 0例经ECT ,检查证实骨转移的前列腺癌患者的外周血均检到PSAmRNA ,其含量变化为 8～ 1 0 4细胞 /ml,健康男性、女性各 5名外周血中PSAmRNA含量均小于本法最低检测限。结论　荧光定量逆转录聚合酶链反应检测PSAmRNA具有灵敏、特异、简便、结果数据化等特点 ,该方法可为前列腺癌微转移诊断、预后判断、指导治疗等奠定良好基础 ,同时也为其他肿瘤患者外周血中肿瘤细胞检测提供了方法学启示     

重复片段引物聚合酶链反应用于医院感染流行病学研究

目的　建立一种简便易行的细菌 Ｄ Ｎ Ａ 指纹图谱分析的方法用于医院感染流行病学研究。方法　选用肠道菌广泛存在的基因间重复片段作为引物,比较不同的聚合酶链反应（ Ｐ Ｃ Ｒ） 的扩增条件,对临床分离的大肠埃希菌的 Ｐ Ｃ Ｒ 扩增产物电泳图谱作了初步分析。结果　建立了重复片段引物 Ｐ Ｃ Ｒ 的扩增方法,对大肠埃希菌扩增出了较为丰富的区带图谱,其中１ 例病人的两个分离株其 Ｐ Ｃ Ｒ 产物图谱变化与其抗生素耐药变化极为相关。结论　该方法简便易行,适合于医院感染流行病学研究。     

巢式聚合酶链反应快速检测贝氏柯克斯体的研究

目的 建立特异敏感的快速检测贝氏柯克斯体的分子生物学方法。方法 采用巢式聚合酶链反应（ＰＣＲ）方法,进行实验室模拟检测。结果 以贝氏柯克斯体ｃｏｍｌ基因（编码２７０００蛋白）为靶标设计了２对引物;该引物特异性实验表明仅贝氏柯克斯体特异性 段可以扩增出来,其余相关立克次体均扩不出;敏感性测试结果可检测出１．５ｆｇdisplay structure     

巢式甲基化特异性聚合酶链反应在p16基因启动子过甲基化检测中的应用

目的　介绍巢式甲基化特异性聚合酶链反应 (nMSP)法 ,探讨了最佳PCR扩增条件 ,并用该法分析新鲜癌组织、石蜡包埋组织及肿瘤患者血清中p16基因启动子的甲基化状态。方法　将基因组DNA变性成为单链 ,用亚硫酸氢盐修饰单链DNA ,将所有未甲基化的胞嘧啶被转变为尿嘧啶 ,而甲基化的胞嘧啶则不变。设计针对甲基化和非甲基化等位基因特异引物 ,进行巢式聚合酶链反应扩增 ,最后经凝胶电泳检测目的片段。结果　在 3种类型的标本中都检测出了p16基因启动子甲基化。用甲基化特异性聚合酶链反应法 (MSP)和nMSP法分别检测 34例非小细胞肺癌 (NSCLC)患者血清 ,p16基因启动子甲基化阳性率分别为 5 3% (18/34)和 74 % (2 5 /34) ,nMSP法具有更高的灵敏度。结论　筑巢式甲基化特异性聚合酶链反应是一种灵敏度高、特异性强的甲基化检测方法 ,可广泛应用于不同类型标本基因启动子甲基化分析。     

清道夫受体SR-AⅡ基因定点突变的研究

目的:利用聚合酶链反应技术对清道夫受体SR-AⅡ基因进行定点突变的研究。方法:利用聚合酶链反应定点突变技术,首先设计4条(其中2条包含预定突变位点)引物,通过3轮PCR反应扩增出含有所需突变位点的片段,通过酶切连接方法将其重组到pEGFP-C1中形成pEGFP-SR-AⅡ-335质粒。结果:在真核表达载体pEGFP-SR-AⅡ-335基础上获得了SR-AⅡcDNAA1201G和A1202C的突变体,测序结果表明在序列中发生了预期的突变,使SR-AⅡ受体蛋白第335位的赖氨酸变为丙氨酸。结论:SR-AⅡ定点突变体的构建为进一步的功能研究奠定了基础。     

连接酶链反应与培养法检测沙眼衣原体的比较

目的 比较连接酶链反应（ＬＣＲ）与培养法检测沙眼衣原体（ＣＴ）在泌尿生殖道感染中的临床意义。方法 应用ＬＣＲ对４０２份门诊患者的尿标本进行ＣＴ检测,其中２２６份取尿道拭子（男）或宫颈拭子（女）同时用培养法和ＬＣＲ检测ＣＴ,对两种方法的检测结果进行了比较分析。结果 ＬＣＲ法检测４０２份尿标本,ＣＴ阳性率为２８．３％（１１４／４０２）,２２６份拭子标本用ＬＣＲ法检测,阳性率为２７．０％（６１／２２６）