重症急性胰腺炎大鼠DDFA对肺损伤细胞凋亡及Bax,Bcl-2表达的影响

目的:探讨DDFA对重症急性胰腺炎(SAP)大鼠肺组织内细胞凋亡及Bax,Bcl-2基因表达的影响. 方法:大鼠45只随机分为对照组(CG), SAP组和DDFA治疗组,每组15只. 大鼠SAP模型采用分2次ip 200 g/L-精氨酸溶液方法建立,建模后24, 48和72 h时测定血清TNF-a,淀粉酶. 血钙及光镜观察肺组织病理变化,细胞凋亡原位检测(TUNEL)法测定肺组织内细胞凋亡,SABC免疫组化染色法测定肺组织Bax, Bcl-2基因表达. 结果:SAP组血清淀粉酶, TNF-a和肺组织内细胞凋亡指数, Bax, Bcl-2基因表达较CG组升高,光镜下见肺组织损害明显;经DDFA治疗后,血清淀粉酶, TNF-a和肺组织内细胞凋亡指数, Bax基因表达下降,而Bcl-2基因表达增强,光镜下见肺组织损害减轻. 结论:肺组织细胞凋亡, Bax, Bcl-2基因表达参与SAP发病机制,在SAP早期给予DDFA治疗对减轻肺脏损害是有益的.     

胰岛素样生长因子-1在大鼠重症急性胰腺炎中的作用

目的 观察胰岛素样生长因-1(IGF-1)在重症急性胰腺炎(SAP)大鼠中的治疗作用.方法 将30只SD大鼠按随机数字表法分为正常对照组、假手术组、SAP组、高剂量IGF-1组和低剂量IGF-1组,每组6只.采用改良的Aho法制作SAP模型,在造模6 h后处死大鼠,收集胰腺组织、外周血和腹水.采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测各组大鼠血清细胞因子(IL-1β、IL-6)表达.Real-time PCR方法检测胰腺组织(TLR-4、MAPK p38、NF-κB p65)mRNA转录水平及蛋白水平变化.结果 SAP组大鼠腹水量、转氨酶、血清及腹水淀粉酶和炎症细胞因子IL-1β、IL-6较正常对照组及假手术组显著升高,差异均有统计学意义(P<0.05);经IGF-1干预后,大鼠腹水量、转氨酶、血清及腹水淀粉酶、IL-1β和IL-6较SAP组明显下降,且随IGF-1剂量的增加,大鼠腹水量、转氨酶、血清及腹水淀粉酶、IL-1β和IL-6下降更加显著,差异均有统计学意义(P<0.05).结论 IGF-1能有效减轻SAP大鼠胰腺炎的病情.     

胰岛素样生长因子-1抗氧化损伤雪旺细胞凋亡的实验研究

目的探讨胰岛素样生长因子-1（IGF-1）对H2O2损伤的雪旺细胞（SCs）抗凋亡的作用。方法将培养的SCs分为H₂O₂处理组、H₂O₂加IGF-1保护组和正常对照组。检测各组细胞内超氧化物歧化酶（SOD）及丙二醛(MDA)的含量,丫叮橙（AO）染色观察细胞存活、凋亡情况,蛋白印迹（Western blot）法检测Bcl-2的表达水平。结果与正常组及保护组相比,H₂O₂处理组细胞具有典型的凋亡形态特征：核染色质浓染、边集,细胞体积缩小,细胞存活率降低;SOD含量明显减少（P＜0.01),MDA含量明显增加（P＜0.01),Bcl-2表达下调;而IGF-1保护组细胞存活率明显升高（P＜0.01),SOD含量较损伤组增高（P＜0.01),MDA含量较损伤组明显减少（P＜0.01),Bcl-2表达明显上调。结论本实验结果提示IGF-1对氧化损伤的SCs具有保护作用。     

胰岛素样生长因子1促许旺细胞生长的实验研究

目的 探索促进许旺细胞增殖的方法。方法 将原代大鼠许旺细胞进行体外培养，并在培养基中加入不同浓度的胰岛素样生长因子１（ＩＧＦ－１）。通过绘制细胞生长曲线及＾３Ｈ－ＴｄＲ渗入等方法，观察ＩＧＦ－１对许旺细胞的作用。结果 ＩＧＦ－１能使培养的许旺细胞增殖加快，提前进入平台期。许旺细胞的增殖与ＩＧＦ－１的浓度在一定范围内呈现量效关系，同时ＩＧＦ－１的作用并不导致许旺细胞的肥大。结论 ＩＧＦ－１对许旺细胞     

骨髓基质细胞的生长特性和转染胰岛素样生长因子-1后的凋亡研究

目的:探讨体外培养大鼠骨髓基质细胞(MSC)的生长特性,同时转染胰岛素样生长因子-1(IGF-1)观察对其凋亡的影响。方法:相差显微镜观察细胞的大体形态,亚甲蓝染色观察细胞集落,细胞计数法研究细胞的增殖能力;逆转录病毒载体pBabe-IGF-1或pBabe转染到MSC,RT-PCR检测IGF-1的表达,流式细胞仪Annexin V-FITC凋亡试剂盒检测细胞凋亡,RT-PCR检测促凋亡基因Bax和抗凋亡基因Bcl-2的表达。结果:骨髓基质细胞主要呈梭形,细胞呈集落性生长,细胞生长到第6代几乎生长停滞;转染IGF-1的MSC组的细胞凋亡率和Bax的表达明显低于其它转染空载体组和对照组,而Bcl-2的表达率则高于后两组(P<0.05)。结论:此方法能较容易地获得大量骨髓基质细胞,IGF-1基因转染后能够明显降低MSC的细胞凋亡,并和Bax基因的升高、Bcl-2基因的降低相关。     

大鼠重症急性胰腺炎胰腺细胞凋亡的研究

目的 :探讨大鼠重症急性胰腺炎 (SAP)胰腺组织细胞凋亡与细胞因子TGFβ1和凋亡调控基因Bax蛋白表达的关系 .方法 :32只雌性SD大鼠以 4 %牛磺胆酸钠诱导建立SAP模型 ,2 4只雌性SD大鼠建立假手术模型作为对照 .TUNEL法检测胰腺组织细胞凋亡 ;免疫组化SP技术检测胰腺组织细胞因子TGFβ1、凋亡调控基因Bax蛋白表达 .结果 :HE染色显示胰腺组织炎症随时间进展而迅速加重 .TUNEL显示假手术组胰腺组织存在极少量的凋亡细胞 ,与时间变化无关 ;SAP模型组胰腺组织中凋亡细胞明显增多 ,并随胰腺炎症程的变化而变化 :3h达到高峰 ,随后迅速减少 ,12h时细胞凋亡以坏死为主 .建模后 1,3,6 ,12h凋亡指数分别为 2 5 .0(8.5 )‰ ,78.5 (11.8)‰ ,4 2 .0 (11.3)‰ ,9.0 (2 .5 )‰ ,均明显高于假手术组 (P <0 .0 0 1) .免疫组化显示假手术组TGF β1,Bax蛋白仅有极少量表达 ;SAP模型组TGFβ1,Bax蛋白的染色阳性率明显高于对应时相的假手术组 ,建模后 1,3,6 ,12hTGFβ1蛋白的阳性表达率分别为 2 7.5 (5 .0 ) % ,2 7.5 (5 .0 ) ) % ,5 2 .5 (8.8) % ,77.5 (8.8) % ;Bax蛋白的阳性表达率分别为 4 5 .5 (12 .5 ) % ,80 .0 (7.5 ) % ,6 7.5 (10 .0 ) % ,35 .0(8.75 % .结论 :SAP大鼠胰腺细胞凋亡与胰腺炎症程度有关 ;胰腺细胞凋亡可     

胰岛素样生长因子对COPD大鼠膈肌凋亡的保护作用及对肺功能的影响

目的 探讨重组的人胰岛素样生长因子1(rhIGF-1)对COPD大鼠膈肌凋亡的保护作用,并观察其对肺功能的影响.方法 45只雄性Wistar大鼠随机分为对照组、模型组和干预组,每组15只.模型组和干预组大鼠置于烟雾浓度为5%的密闭熏箱内(每天30 min,共28 d),第1 d和第14 d向气管内注射脂多糖200μg.干预组大鼠同时每日皮下注射rhIGF-1(60μg/100 g)1次,持续28 d.对照组不予特殊处理.第1、14、28 d各组随机取5只大鼠处死,测定各组离体膈肌的重量、细胞凋亡率、膈肌中Fas基因及蛋白表达水平.第28 d处死前测定各组大鼠的肺功能.结果 28 d后模型组和干预组大鼠分钟呼气量(VE)、最大呼气流速(PEF)、深吸气量(IC)、第0.3 s用力呼气容积(FEV0.3)及膈肌质量均较对照组下降(P<0.05).干预组膈肌质量、IC及VE值高于模型组(P均<0.05),PEF和FEV0.3与模型组比较无显著差异(P>0.05).第14和28 d,干预组膈肌细胞凋亡率、Fas基因及蛋白表达均低于模型组(P均<0.05),仍高于对照组(P均<0.05).结论 Fas/FasL介导的凋亡途径参与了膈肌凋亡的发生,rhIGF-1可能通过干预Fas/FasL途径减少膈肌凋亡,在一定程度上改善COPD大鼠的VE和IC值.     

脑出血模型大鼠脑组织胰岛素样生长因子-1表达的实验研究

目的：观察脑出血模型大鼠脑组织胰岛素样生长因子-1（IGF-1）的表达及其对细胞凋亡的影响。方法随机将105只大鼠分为正常对照组、假手术组及脑出血组,应用立体定向技术,将自体未抗凝血注入大鼠基底节区制备脑出血模型;分别在造模后6、24、48、72h和1周将大鼠断头取脑制作标本,采用TUNEL染色检测脑组织细胞凋亡、荧光定量RT-PCR检测IGF-1 mRNA表达,免疫组化分析IGF-1表达。结果脑出血后6h血肿周围脑组织IGF-1及TUNEL染色阳性细胞表达升高,其中IGF-1在24h达高峰,48h开始下降,而细胞凋亡于72h达高峰,1周开始下降,表达均明显高于假手术组和正常对照组（P〈0.05,P〈0.01）;且IGF-1表达与细胞凋亡数呈正相关（P〈0.05）。结论脑出血后IGF-1表达上调,参与了脑出血的病理生理过程,可能对脑出血继发神经损伤起重要的保护作用。     

血管内皮凋亡对大鼠重症急性胰腺炎肺损伤的影响

目的：从肺微血管内皮细胞凋亡可能对肺造成的潜在影响着手，研究重症急性胰腺炎(severe acute panereatitis，SAP)肺微循环变化与急性肺损伤的密切关系．方法：将SAP大鼠分别在1，3，5，7，9和12h点剖杀，取肺组织行组织病理观察、组织含水量、微血管通透性等检测；并检测肺组织中血管内皮细胞凋亡及凋亡相关基因Bax及Bcl-2的蛋白表达．结果：SAP制模后肺损伤程度随时间而逐渐加重，肺组织含水量及微血管通透性逐渐升高；肺组织血管内皮细胞凋亡随时间呈增加的趋势；Bax蛋白表达与凋亡变化的规律一致，Bcl-2蛋白表达则与凋亡变化的规律相反．结论：SAP合并急性肺损伤进展过程中，肺血管内皮细胞凋亡所引起的微循环障碍是引起肺损伤的重要原因之一．     

昆虫细胞表达重组人胰岛素样生长因子1的研究

目的 利用杆状病毒ＡｃＭＮＰＶ载体在昆虫细胞中表达重组人胰岛素样生长因子１（ｒｈＩＧＦ－１）。方法 含有胰岛素样生长因子１（ＩＧＦ－１）ｅＤＮＡ的重组ＡｃＭＮＰＶ感染昆虫细胞株Ｓｆ不及Ｓｆ２１后,采用酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）检测被重组病毒感染的昆虫细胞表达产生的ｒｈＩＧＦ－１,以野生型ＡｃＭＮＰＶ感染的昆虫细胞及空白细胞的细胞培养液、细胞裂解物作对照。结果 （１）重组ＡｃＭＮＰＶ感染的昆虫细     

外源性胰岛素样生长因子-1对脓毒血症大鼠肺保护的作用

目的观察外源性胰岛素样生长因子-1对大鼠脓毒血症引起急性肺损伤的肺保护作用。方法选择Wistar大鼠40只,随机分为4组（每组各10只）：对照组,脓毒血症组,IGF-1治疗1组和治疗2组（50μg/kg和100μg/kg）。采用颈静脉注射脂多糖（LPS,15 mg/kg）制作脓毒血症大鼠ALI模型。注射LPS 12 h后,测定各组大鼠血清和支气管肺泡灌洗液IL-6和IL-8浓度。结果与对照组比较,脓毒血症组大鼠血清IL-6浓度[（25.5±3.71）vs（14.6±2.34）ng/mL]和支气管肺泡灌洗液IL-6浓度[（17.9±2.56）vs（9.1±1.19）ng/mL]均高于对照组,也高于IGF-1治疗组（均P〈0.05）,同时脓毒血症组在血清IL-8[（2.03±0.15）vs（1.62±0.13）ng/mL]和支气管肺泡灌洗液的IL-8浓度[（1.35±0.37）vs（0.98±0.11）ng/mL]均高于对照组和IGF-1治疗组（均P〈0.05）。IGF-1治疗2组大鼠血清和支气管肺泡灌洗液IL-6[（17.3±4.59）vs（17.3±4.59）,（11.4±2.93）vs（13.6±2.71）ng/mL]和IL-8[（1.73±0.11）vs（1.87±0.26）,（0.99±0.39）vs（1.09±0.43）ng/mL]浓度均低于IGF-1治疗1组（P〈0.05）。结论外源性IGF-1对脓毒血症大鼠引起的急性肺损伤具有保护作用,且随着剂量的加大保护作用更明显。     

大黄素对重症急性胰腺炎大鼠肠黏膜细胞凋亡和血清瘦素表达的影响

目的：探讨大黄素对重症急性胰腺炎大鼠肠黏膜屏障的保护机制。方法：60只成年SD大鼠随机分为假手术组、模型组和大黄素组。通过3％牛磺胆酸钠逆行胰胆管注射建立重症急性胰腺炎模型。造模成功后24h门静脉取血,检测血清瘦素含量、淀粉酶活性及血浆内毒素含量。取近回盲部回肠黏膜组织,光学显微镜、电子显微镜下观察肠黏膜病理学改变及超微结构改变;细胞凋亡原位标记法检测回肠黏膜上皮细胞凋亡率,免疫组织化学法检测回肠黏膜组织中Bax蛋白的表达情况。结果：术后模型组血浆内毒素含量、血清瘦素含量、血清淀粉酶活性、Bax蛋白表达及肠黏膜细胞凋亡率均显著高于假手术组（P〈0．01）,而大黄素组血浆内毒素含量、血清淀粉酶活性、Bax蛋白表达和肠黏膜细胞凋亡率则明显低于模型组（P〈0．01）,血清瘦素水平较模型组明显升高（P〈0．05）。模型组胰腺和肠黏膜的病理损害较假手术组加重,而大黄素组病理损害较模型组减轻。结论：大黄素通过抑制肠黏膜上皮细胞过度凋亡,上调血清瘦素水平,达到维持肠黏膜屏障完整性的功效,进而抑制重症急性胰腺炎细菌内毒素移位。     

ICAM-1高表达在大鼠重症急性胰腺炎早期急性肺损伤中的作用

摘要：目的 探讨细胞间粘附分子-1（ICAM-1）高表达在大鼠重症急性胰腺炎早期急性肺损伤中的作用机制。方法 健康成年雄SD大鼠40只,随机分为SO组(n=10)、SAP组（n=30）,BD针胰胆管逆行注入牛磺胆酸法,建立重症急性胰腺炎急性肺损伤大鼠模型。SAP组在建模后3h,6h,12h检测血淀粉酶、血气分析、肺含水率,肺组织髓过氧化物酶（MPO）活性,光镜下进行胰腺和肺组织病变程度评分。免疫组化法检测肺组织ICAM-1的表达,结果应用IPP图像分析系统定量分析。SO组在术后12h检测上述相关指标。结果 制模后肺组织ICAM-1表达在3h后逐渐上升,至12h达到峰值(P<0.05)。肺损伤程度逐渐加重,组织含水量及MPO活性逐渐升高（P<0.05）,PaO2,氧合指数明显降低（P<0.05）。ICAM-1的表达量与肺MPO活性呈正相关（r=0.842, P<0.05）。结论 ICAM-1在大鼠重症急性胰腺炎早期并发急性肺损伤中过度表达是其重要发病机制之一。     

纤维结合蛋白和巨噬细胞移动抑制因子在大鼠重症急性胰腺炎相关肺损伤中的作用

目的 探讨纤维结合蛋白(FN)和巨噬细胞移动抑制因子(MIF)在大鼠重症急性胰腺炎相关肺损伤发病机制中的作用.方法 30只雌性SD大鼠随机分为正常对照组、胰腺炎模型2、4、8和12 h组.采用5%牛磺胆酸钠逆行胰胆管注射的方法 ,复制大鼠重症急性胰腺炎相关肺损伤模型.分别对胰腺、肺损伤程度进行病理评分,测定肺组织湿/干质量比、胰腺组织湿重、血清淀粉酶;用ELISA法检测血浆FN和血清MIF含量,用RT-PCR法检测肺组织FNmRNA和MIFmPNA表达水平.结果 造模后各组肺、胰腺损伤评分,肺组织湿/干质量比,胰腺组织湿重及血清淀粉酶均逐渐升高.造模后各组血浆FN及肺组织FNmRNA较正常组降低,而血清MIF及肺组织MIFmRNA较正常组升高.结论 大鼠重症急性胰腺炎相关肺损伤发病过程中,血清及肺组织MIF表达明显增加,血浆及肺组织FN表达明显降低,提示MIF和FN与重症急性胰腺炎相关肺损伤的发生可能有关.     

大黄素对重症急性胰腺炎大鼠胰腺细胞凋亡的干预作用

目的 探讨大黄素对重症急性胰腺炎大鼠胰腺组织细胞凋亡的干预作用及机制。 方法 采用逆行胰胆管注射牛磺胆酸法进行造模,模型大鼠随机分入对照组、大黄素低剂量组、大黄素中剂量组和大黄素高剂量组;各组再随机编入3 h、6 h、12 h和24 h等4个时相点进行标本留置。检测血清淀粉酶、血清总钙和胰腺组织病理评分;应用DNA断裂的原位末端标记(TUNEL)法测定细胞凋亡并计算凋亡指数,免疫印迹法检测胰腺组织Notch-1、Hes-1和Hes-5蛋白表达情况。 结果 大黄素治疗组的血清淀粉酶均较模型对照组显著降低(P<0.01),血清总钙水平则均较模型对照组显著增高(P<0.05)。大黄素中剂量组和高剂量组胰腺病理评分均较模型对照组明显改善(P<0.01),高剂量组改善最显著。治疗各组的胰腺细胞凋亡指数在不同时间点均较模型对照组有不同程度升高,高剂量组效果最显著,低剂量组与模型对照组差异无统计学意义(P>0.05)。治疗各组的Notch-1蛋白表达量均较模型对照组增加,中剂量组和高剂量组效果相对显著(P<0.05)。大黄素高剂量组Hes-1蛋白表达量显著高于模型对照组(P<0.05)、低剂量组(P<0.05)和中剂量组(P<0.05)。大黄素中剂量组和高剂量组Hes-5蛋白表达量均显著高于模型对照组(P<0.05),且高剂量组蛋白表达量较低剂量组显著增加(P<0.05)。 结论 SAP时大黄素可以通过促进胰腺局部细胞凋亡而减轻胰腺炎反应,Notch-1/Hes信号通路是大黄素调控胰腺局部细胞凋亡的重要途径。      

大承气汤治疗重症急性胰腺炎大鼠的实验研究

目的 探讨大承气汤治疗重症急性胰腺炎(SAP)的作用机制.方法 健康Wistar大鼠50只随机分成5组,分别为:假手术组(A组),SAP模型组(B组),SAP+乌司他丁治疗组(C组),SAP+大承气汤治疗组(D组),SAP+大承气汤+乌司他丁治疗组(E组).采用胰胆管逆行注射5%牛磺胆酸钠法建立SAP大鼠模型,于制模后24 h收集样本,检测大鼠肺组织、回肠和血浆中促炎因子白细胞介素-6(IL-6)、内毒素(ET)和抑炎因子白细胞介素-10(IL-10)的含量变化.结果 SAP+乌司他丁治疗组、SAP+大承气汤治疗组、SAP+大承气汤+乌司他丁治疗组与SAP模型组比较血浆及组织ET、IL-6含量明显降低(P<0.05),IL-10含量明显升高(P<0.05);SAP+大承气汤+乌司他丁治疗组与SAP+乌司他丁治疗组、SAP+大承气汤治疗组比较血浆及组织ET、IL-6含量明显降低(P<0.05),IL-10含量明显升高(P<0.05).结论 大承气汤可能通过减少致炎因子ET、IL-6和增加抑炎因子IL-10来影响SAP的炎症反应,大承气汤和乌司他丁对大鼠SAP具有相加或协同的抗炎作用.