淫羊藿苷对人牙周膜细胞增殖及内毒素作用下IL-6表达的影响

目的初步研究淫羊藿苷对人牙周膜细胞(human periodontal ligament cells,h PDLC)增殖以及在内毒素(Lipopolysaccharide,LPS)作用下淫羊藿苷对h PDLC白细胞介素6(IL-6)表达的影响。方法组织块法原代培养并鉴定h PDLC,采用MTT方法检测淫羊藿苷(0、10-5、10-6、10-7、10-8、10-9、10-10mol/L)作用下h PDLC增殖的变化;利用PCR、ELISA方法检测淫羊藿苷对在LPS刺激下的人牙周膜细胞IL-6分泌的情况。结果一定浓度范围下(10-6~10-7mol/L)淫羊藿苷对h PDLC的增殖具有积极作用;在10μg/m L LPS作用下h PDLC的IL-6表达增多、活性增强,加入10-6mol/L淫羊藿苷处理后,对此加强效果有一定的抑制作用。结论在一定浓度范围作用下淫羊藿苷可促进h PDLC的增殖;同时,淫羊藿苷对LPS导致h PDLC的IL-6表达增强有一定的抑制作用。     

淫羊藿苷对人牙周膜细胞增殖及骨向分化的影响

目的：探讨淫羊藿苷对人牙周膜细胞增殖及骨向分化的影响,为淫羊藿苷在治疗牙周病方面的应用提供一定依据。方法：体外培养人牙周膜细胞,矿化诱导条件下将第3代细胞与10～0.001mg/L,6个浓度的淫羊藿苷作用,通过噻唑蓝（MTT）比色法、ALP活性测定及BSP表达水平,反应其对人牙周膜细胞增殖及分化的影响。结果：作用24h,各药物浓度均能促进人牙周膜细胞增殖（P〈0.05）。作用48h,1～0.001mg/L组可促进人牙周膜细胞增殖（P〈0.05）。作用72h,0.1～0.001mg/L组可促进人牙周膜细胞增殖（P〈0.05）,10mg/L组抑制人牙周膜增殖（P〈0.05）;作用72h,1～0.001mg/L组可促进人牙周膜碱性磷酸酶（ALP）活性（P〈0.05）;作用72h,0.1～0.001mg/L组的BSP表达水平较对照组显著增加（P〈0.05）。结论：淫羊藿苷在一定浓度范围内可促进人牙周膜细胞增殖及骨向分化。     

淫羊藿苷对人牙周膜细胞增殖和骨保护素mRNA表达的影响

目的：研究淫羊藿苷对人牙周膜细胞（periodontal ligament cells，PDLCs）增殖和骨保护素（osteoprotegerin，OPG）mRNA表达的影响。方法：体外培养人PDLCs，用MTT法检测不同浓度的淫羊藿苷（0．001、0．01、0、1μg／mL）、不同时间（24、48、72、96h）作用下人PDLCs的增殖水平；RT-PCR检测OPG mRNA的表达。结果：淫羊藿苷（0、001-0．1μg／mL）对人PDLCs增殖和OPG mRNA表达具有促进作用（P〈0．01），0．01μg／mL浓度作用最明显。结论：淫羊藿苷能够促进人PDLCs增殖和OPG mRNA表达。     

五倍子水提取物对LPS抑制PDLC的ALP活性的影响

目的：观察五倍子水提取物对LPS抑制牙周膜细胞(Periodontal ligament cell，PDLC)的ALP活性的影响。方法：本实验采用细胞培养技术和酶联免疫技术，对LPS抑制PDLC的ALP活性的影响进行观察。结果：100μg／mL LPS可显著抑制ALP活性。加入五倍子水提取物后，对LPS抑制ALP活性有拮抗作用，该作用随五倍子水提取物浓度增加而增加，到10μg／mL时，达到峰值。另外，培养液中先加入不同浓度的五倍子水提取物溶液，培养24h后再加入LPS时(A组)，与LPS和五倍子水提取物溶液同时加入组(B组)相比，除对LPS抑制ALP活性有同样拮抗趋势外，A、B两组间比较，B组效果更佳。结论：五倍子水提取物对LPS抑制ALP活性具有保护作用。     

淫羊藿苷、黄芩苷和大黄素抑制LPS对体外培养人牙龈成纤维细胞的作用

目的：探讨不同浓度淫羊藿苷、黄芩苷和大黄素对细菌内毒素脂多糖（lipopolysaccharide,LPS）刺激人牙龈成纤维细胞（human gingival fibroblasts,HGF）产生前列腺素E：（prostaglandin E2,PGE2）的影响。方法：以培养的人牙龈成纤维细胞为实验模型,用MTT试验检测淫羊藿苷、黄芩苷和大黄素抑制LPS对牙龈成纤维细胞毒性作用的效果,初步筛选其作用浓度：然后用酶联免疫法检测三种提取物对LPS刺激牙龈成纤维细胞产生重要的骨吸收因子PGE：的影响。结果：LPS对HGF有明显的细胞毒性,三种提取物均可显著提高细胞成活率。LPS作用6h后培养上清中PGE,含量上升,而同时加入淫羊藿苷、黄芩苷和大黄素各浓度组PGE：含量显著低于对照组qo〈o．01）。结论：淫羊藿苷、黄芩苷和大黄素均可抑制LPS对HGF的细胞毒性作用,并且可抑制LPS刺激HGF产生PGE2。     

淫羊藿素对 SD 大鼠骨髓基质细胞增殖与成骨分化的影响

目的：研究淫羊藿素（ICT）对体外培养 SD 大鼠骨髓基质细胞（rBMSCs）增殖与成骨分化的影响。方法：体外分离培养 rBMSCs,传代至第4代作多向分化鉴定。分别以10－9、10－8、10－7、10－6、10－5 mol／L ICT 刺激 rBMSCs 后3、6、9 d,分别用 cck-8及碱性磷酸酶 ALP 试剂盒检测 rBMSCs 的增殖及 ALP 活性;10－9 mol／L ICT 处理 rBMSCs 后21 d 作茜素红（AR）染色以判断钙结节的形成。结果：原代培养的 rBMSCs 贴壁生长、呈梭形,能多向分化;ICT 明显抑制了 rBMSCs 的增殖;但增高其 ALP 活性、钙结节形成。结论：ICT 以剂量依赖方式抑制 rBMSCs 的增殖但促进其分化和矿化。     

淫羊藿苷对腺样囊性癌细胞Bcl－2、Bax表达的影响

目的：①探讨淫羊藿苷体外抑制涎腺腺样囊性癌细胞（SACC－M）的最佳浓度和时间点及作用于SACC－M后相关细胞因子Bcl－2、Bax的表达变化。方法：①以不同浓度（0μg／mL、6．25μg／mL、12．5μg／mL、25μg／mL、50μg／mL、100μg／mL、200μg／mL、400μg／mL、800μg／mL）的淫羊藿苷分别作用于SACC－M（24 h、48 h、72 h）,选择淫羊藿苷对高转移SACC－M细胞株的最佳作用浓度和作用时间,通过形态学观察淫羊藿苷对SACC－M细胞形态的改变。②正常对照组中加入同种剂量的药物溶剂,实验组中加入不同浓度的淫羊藿苷处理高转移SACC－M细胞株,免疫组化检测Bcl－2、Bax表达量的变化。结果：①与对照组（0μg／mL）相比较,淫羊藿苷在不同浓度（50、100、200、400、800μg／mL）对SACC－M细胞株的增殖具有抑制作用（P＜0．05）。在同一药物浓度下,从50μg／mL浓度开始,与同浓度24 h淫羊藿苷比较有统计学意义（P＜0．05）,但到了800μg／mL浓度时已经没有时间依赖性（P＞0．05）。当用（50、100、200、400μg／mL）作用于细胞24 h后,显微镜下观察显示ACC－M细胞具有典型的凋亡细胞形态学特征。②淫羊藿苷能呈浓度依赖性下调ACC－M中Bcl－2同时上调Bax蛋白的表达。结论：体外淫羊藿苷可以抑制ACC－M的增殖,其机制可能与下调Bcl－2和上调Bax的表达有关。     

淫羊藿苷对犬骨髓间充质干细胞增殖、成骨和成脂分化的影响

目的:研究淫羊藿苷对犬骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)增殖和成骨、成脂分化的影响。方法:将淫羊藿苷配制成终浓度为1×10-9、1×10-8、1×10-7、1×10-6、1×10-5、1×10-4 mol/L的溶液,以0 mol/L组为空白对照组,分别用于体外培养犬BMSCs。CCK-8试剂盒检测细胞增殖情况,碱性磷酸酶试剂盒检测碱性磷酸酶活性。然后实验分为淫羊藿苷组和对照组,分别在含或不含成骨、成脂诱导液条件下,行成骨、成脂诱导分化实验,通过茜素红和油红O染色检测各组钙沉积和脂质形成面积。结果:发现淫羊藿苷1×10-6 mol/L组促进犬BMSCs增殖,而1×10-4mol/L组抑制增殖。碱性磷酸酶活性与淫羊藿苷浓度呈剂量依赖性关系。不含成骨、成脂诱导液条件下,各组均几乎未见明显钙沉积和脂质形成;含成骨、成脂诱导液条件下,淫羊藿苷组(1×10-6 mol/L)钙沉积面积高于对照组,脂质形成面积低于对照组。结论:淫羊藿苷能促进犬BMSCs增殖和成骨分化,并抑制其成脂分化。     

骨形成蛋白—2和碱性成纤维细胞生长因子对牙周膜细胞碱性磷酸酶活性的联合效应

目的了解重组人骨形成蛋白-2（rhBMP-2）和碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)单独和联合作用对人牙周膜细胞（PDLC）碱性磷酸酶（ALP）活性的影响。方法体外培养人PDLC,分别用不同浓度的rhBMP-2和bFGF单独或联合作用,用酶动力学方法检测PDLC的ALP活性。结果50～200μg/L浓度的rhBMP-2可显著增强人PDLC的ALP活性（P<0.01）,而10μg/L浓度的bFGF可显著抑制人PDLC的ALP活性(P<0.01),rhBMP-2和bFGF联合作用仍可较明显地增强人PDLC的ALP活性（P<0.05）。结论rhBMP-2和bFGF联合应用可增强人PDLC的ALP活性。     

淫羊藿苷抑制牙龈卟啉单胞菌超声提取物对人牙周膜细胞增殖及骨保护素表达的影响

目的 探讨不同浓度淫羊藿苷抑制牙龈卟啉单胞菌超声提取物对人牙周膜细胞增殖及骨保护素（OPG）表达的影响.方法 体外培养人牙周膜细胞,用四唑盐（MTT）法检测不同浓度淫羊藿苷（0、0.001、0.01、0.1、1 μg/ml）及50μg/ml牙龈卟啉单胞菌超声提取物,不同时间（24、48、72h）作用下人牙周膜细胞的增殖水平.用RT-PCR及Western blot检测48h人牙周膜细胞骨保护素mRNA和蛋白的表达.结果 淫羊藿苷从0.01～1μg/ml对人牙周膜细胞增殖及骨保护素mRNA和蛋白的表达有促进作用（P＜0.01）,浓度为0.1μg/ml作用最显著.结论 淫羊藿苷可抑制牙龈卟啉单胞菌超声提取物对人牙周膜细胞增殖及骨保护素mRNA和蛋白表达的影响,促进人牙周膜细胞增殖及骨保护素mRNA和蛋白表达.     

EDTA凝胶和氯亚明对人牙周膜细胞增殖和碱性磷酸酶活性的影响

目的：探讨EDTA凝胶（EDTA gel）和氯亚明（chloramine-T）对人牙周膜细胞（periodontal ligament cell,PDLC）增殖和碱性磷酸酶（alkaline phosphatase,ALP）活性的影响。方法：将5种不同浓度的EDTA凝胶和氯亚明溶液分别作用于体外培养的PDLC。MTT法观察PDLC的增殖情况,酶动力学方法检测PDLC的碱性磷酸酶活性。结果：浓度为0.005%、0.0025%和0.00125%的EDTA凝胶溶液及浓度为0.0025%和0.00125%的氯亚明对PDLC的增殖和ALP活性无抑制作用。浓度为0.02%和0.01%的EDTA凝胶溶液及浓度为0.02%、0.01%和0.005%的氯亚明对PDLC的增殖和ALP活性有抑制作用（P〈0.05）,抑制作用随药物浓度和作用时间的增加而增加。结论：EDTA凝胶和氯亚明对PDLC的增殖和碱性磷酸酶活性具有一定的抑制作用。     

骨碎补柚皮苷对人牙周膜细胞增殖、碱性磷酸酶活性影响的实验研究

目的研究骨碎补柚皮苷对人牙周膜细胞（hPDLC）增殖、碱性磷酸酶（ALP）活性的影响。方法采用酶消化结合组织块法,体外培养人牙周膜细胞;运用MTT法测定不同质量浓度骨碎补柚皮苷在不同时间对hPDLC增殖的影响;采用IFCC推荐法测定不同质量浓度骨碎补柚皮苷作用后hPDLC的ALP活性,采用考马氏亮兰法,测定样本中蛋白量,从而测定每毫克冻融蛋白中所含的ALP比活性。结果10、1、0.1 mg·L-1这3种质量浓度的骨碎补柚皮苷对hPDLC的增殖有促进作用;100、10、1、0.1 mg·L-1的骨碎补柚皮苷均可促进hPDLC的ALP活性,其中以1 mg·L-1组的促进作用最强。结论骨碎补柚皮苷对hPDLC具有促进增殖、促进碱性磷酸酶活性的作用。     

低分子釉原蛋白的纯化及其对人牙髓细胞和牙周膜细胞作用的研究

目的：纯化低分子猪釉原蛋白（LMWPA）,并观察其对人牙髓细胞（HDPCs）和牙周膜细胞（HPLCs）增殖及碱性磷酸酶（ALP）活性的影响。方法：取六月龄猪第二磨牙牙胚牙釉质,用液相色谱法分离纯化LMWPA,分别采用MTT法和酶动力学方法测定LMWPA对HDPCs和HPLCs的体外作用。结果：得到的LMWPA是分子量约为5.0KDa的单一组分;在50和100μg/mL时,能的显著促进HDPCs和HPLCs的增殖,ALP活性上调（P〈0.01）;而在≥150μg/mL时,能显著抑制细胞的增殖,ALP活性下调（P〈0.01）。结论：LMWPA影响HDPCs和HPLCs的增殖和碱性磷酸酶活性,并存在剂量和时间依赖性。     

茶多酚对炎性牙周膜细胞生物活性的影响

目的观察茶多酚对内毒素脂多糖(LPS)作用的人牙周膜细胞增殖和碱性磷酸酶活性的影响,为茶多酚在牙周疾病的防治中提供一定依据。方法体外培养人牙周膜细胞,采用MTT比色法观察茶多酚对LPS作用的人牙周膜细胞增殖活性的影响,通过碱性磷酸酶(ALP)活性测定法观察茶多酚对人牙周膜细胞的分化作用。结果100μg/ml LPS可抑制人牙周膜细胞的增殖活性和碱性磷酸酶活性。加入LPS同时分别给予50～1100μg/ml不同浓度茶多酚,能对抗LPS的抑制作用,增强人牙周膜细胞的增殖活性和碱性磷酸酶活性,其中在800μg/ml作用24h时促进作用达到最强。结论茶多酚可对抗内毒素对人牙周膜细胞的毒性作用,促进细胞的增殖和骨向分化。     

辛伐他汀对人牙周膜成纤维细胞增殖和成骨分化的影响

目的:评价辛伐他汀对人牙周膜成纤维细胞增殖和成骨分化的影响。方法:采用组织块法进行人牙周膜成纤维细胞的分离培养。在培养液中加入不同浓度的辛伐他汀,分为对照组(0 mol/L)和5个实验组(10-8、10-7、10-6、10-5和10-4mol/L),检测各组细胞增殖能力和碱性磷酸酶活性。通过矿化结节茜素红染色和RT-PCR,评价辛伐他汀对细胞成骨能力和成骨相关基因表达的影响。结果:辛伐他汀浓度为10-7mol/L时,细胞增殖能力显著提高(P﹤0.05)。辛伐他汀浓度为10-8、10-7、10-6和10-5mol/L时,细胞碱性磷酸酶活性均有显著增强(P﹤0.05),其中,10-7mol/L组增强作用最明显。茜素红染色显示,10-7mol/L辛伐他汀能促进细胞矿化结节形成;RT-PCR结果表明,辛伐他汀促进细胞碱性磷酸酶和骨形成蛋白-2基因表达呈时间依赖性增高。结论:10-7mol/L的辛伐他汀不仅有利于人牙周膜成纤维细胞增殖,而且促进其成骨分化和相关基因的表达。     

Nd：YAG激光照射对提高人牙周膜成维细胞增殖力的作用

目的观察Nd：YAG激光对人牙周膜成纤维细胞增殖和碱性磷酸酶（ALP）活性的影响。方法采用酶消化组织块法原代培养人牙周膜成纤维细胞，并进行波形蛋白及角蛋白的免疫细胞化学染色，对所培养的细胞进行鉴定。将牙周膜成纤维细胞分组，接受不同能量密度的Nd：YAG激光照射。测定牙周膜成纤维细胞碱性磷酸酶活性并观察其生长情况。结果5个实验组的细胞增殖速度及碱性磷酸酶含量均高于对照组，其中能量密度为60j／cm^2组、80j／cm^2组、100i／cm^2组与对照组相比有统计学的差异。结论低能量密度，短时间的Nd：YAG激光照射能促进牙周膜成纤维细胞的增殖，提高碱性磷酸酶活性。     

BMP-2、bFGF和Dex联合应用对犬牙牙周膜细胞成骨分化能力的影响

目的:观察骨形成蛋白(BMP-2)、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)和地塞米松(Dex)联合应用对犬牙周膜细胞(PDLCs)成骨分化能力的影响。方法:将第4代犬PDLCs分为5组:bFGF+Dex、BMP-2+bFGF、BMP-2+Dex、BMP-2+bFGF+Dex、对照组。检测各组碱性磷酸酶(ALP)活性,并应用RT-PCR检测各组PDLCs成骨关键基因OPN、COL-1的表达。结果:第7、14 d,各组ALP表达均较空白组显著增强(P<0.05),其中200μg/L BMP-2+10μg/LbFGF+10-8mol/L Dex诱导组犬PDLCs的ALP活性显著高于其他各组(P<0.05)。RT-PCR显示,200μg/L BMP-2+10μg/L bFGF+10-8mol/L Dex诱导组OPN、COL-1基因表达最为显著。结论:3种诱导因子两两结合均能增强犬PDLCs成骨能力,但在最佳浓度下3种因子联合应用诱导能力最强(P<0.05)。     

牙周优势菌内毒素对人牙周膜细胞增殖和碱性磷酸酶活性的影响

目的：研究牙周优势菌牙龈卟啉菌、中间普氏菌、具核梭杆菌的内毒素对人牙周膜细胞（PDL细胞）增殖和碱性磷酸酶活性（ALP）的影响。方法：采用MTT比色试验及酶动力学方法，测定PDL细胞的增殖和ALP活性。结果：内毒素在10μg/mL、100μg/mL高浓度时，可显著抑制PDL细胞增殖，而在0.01μg/mL、0.1μg/mL低浓度时，则促进PDL细胞增殖；在10μg/mL、100μg/mL可呈浓度依赖性方式抑制PDL细胞ALP活性。结论：内毒素对牙周膜细胞的抑制作用主要和其浓度有关，不同来源内毒素差异并不显著；内毒素可能通过影响PDL细胞功能而影响牙周组织的代谢和修复过程。