疟疾病人血样中特异性乳酸脱氢酶检测的研究

应用直接电泳法和多克隆抗体捕捉法检测恶性疟和间日疟病人血样各４０份，正常对照血样２０份中恶性疟原虫特异性乳酸脱氢酶（ＬＤＨ－ｐ）。结果表明，两种方法检测恶性疟病人血样的阳性率分别为９０％和９５％；而间日疟和正常人血样中皆未检出ＬＤＨ－ｐ的活性。结果还表明，蛋白酶抑制剂可有效地保护ＬＤＨ－ｐ，而反复冻融则可使ＬＤＨ－ｐ受到破坏，检出率降低。应用直接电泳法和多克隆抗体捕捉法，在蛋白酶抑制剂存在的条件下，检测新鲜血样中ＬＤＨ－ｐ是诊断恶性疟的理想方法。     

恶性疟原虫乳酸脱氢酶的快速电泳法检测及影响因素

目的建立一种敏感、特异的恶性疟快速诊断方法。方法：应用快速电泳法检测恶性疟病人血样中恶性疟原虫乳酸脱氢酶（ＬＤＨ－Ｐ），并对可能影响检测结果的几种因素进行观察。结果：检测４０份恶性疟病人血样，３８份检测出ＬＤＨ－Ｐ，阳性率为９５％，假阴性率为５％；同时检测４０份间日疟病人血样和２０份正常人血样，均为阴性，无假阳性；血样反复冻融可使ＬＤＨ－Ｐ受到破坏，蛋白酶抑制剂对保存血样中的ＬＤＨ－Ｐ保护作用明显；新鲜血样中加否蛋白酶抑制剂，检测结果差异不明显。结论：快速电泳法检测ＬＤＨ－Ｐ诊断恶性疟，方法简便、敏感性和特异性高，具有很好的现场应用价值。检测新鲜血样中ＬＤＨ－Ｐ效果好。     

快速薄层色谱法用于诊断恶性疟的研究

为建立一种快速、简易而实用的恶性疟诊断方法,应用快速薄层色谱法检测恶性疟病人血样中的恶性疟原虫乳酸脱氢酶（Ｌａｃｔａｔｅ ｄｅｈｙｄｒｏｇｅｎａｓｅ ｏｆ Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ ｆａｌｃｉｐａｒｕｍ,ＬＤＨ－Ｐ）,诊断恶性疟感染。结果显示,该方法的敏感性和特异性分别为９０％和９３．７％。应用快速薄层色谱法检测ＬＤＨ－Ｐ诊断恶性疟,方法快速、简便、敏感性高、特异性强,具有很好的临床和现场应用前景。     

重组质粒DNA探针用于间日疟诊断的研究

用＾３２Ｐ标记含间日疟原虫ＤＮＡ片段的重组质粒ｐＶＡ１作为探针，通过ＤＮＡ打点杂交试验检测红内期间日疟原虫。该探针检测间日疟原虫基因组ＤＮＡ的敏感度达１ｎｇ；与现场采集的２５份间日疟患者血样（原虫血症为０．００３％－０．７％）的杂交阳性率为７２％；与６例恶性疟和３例食蟹猴疟血样中各１例杂交阳性；与３例约氏疟和６例正常人血样均为阴性。     

恶性疟原虫乳酸脱氢酶的提纯及其特异性鉴定

恶性疟原虫乳酸脱氢酶得以与人红细胞ＬＤＨ（ＬＤＨ－ｒ）分开并纯化，并对他们的特性进行了比较，结果表明，ＬＤＨ－ｐ和ＬＤＨ－ｒ均可利用烟酰胺腺嘌呤二核苷酸，促进乳酸盐与丙酮酸的相互转化。而只有ＬＤＨ－ｐ可更快速地利用ＮＡＤ类似物－乙酰吡啶腺嘌呤二核苷酸完成同一反应，ＬＤＨ－ｒ不能利用ＡＰＡＤ。在ＰＡＧＥ电泳中，ＮＡＤ使ＬＤＨ－ｐ和ＬＤＨ－ｒ均被染色，目前为一条带，后者为三条不同的带；当以ＡＰＡＤ染色     

聚合酶链反应掺入法制备标记地高辛探针检测间日疟原虫感染的初步研究

根据间日疟原虫环子孢子蛋白基因设计合成特异性引物一对，采用ＰＣＲ技术，以Ｄｉｇ－１１－ｄＵＴＰ代替部分ｄＴＩＰ直接扩增并标记含间日疟原虫环子孢子蛋白基因中央重复序列的基因片段作为ＤＮＡ探针并用于检测间日疟原虫感染，结果表明：（１）采用ＰＣＲ法直接制备并标记地高辛探针的方法较ＰＣＲ扩增后再标记的方法更为快速、简便和经济；（２）探针只与间日疟患者血样核酸抽提物杂交阳性，而与其亲缘关系相近的三株恶性疟原虫、利什曼原虫、弓形虫及正常人血核酸抽提物杂交阴性，该探针可以检测出相当于１００μｌ感染血样中４４虫／μｌ的水平；（３）将该探针用于深圳地区及湖北随州地区收集的间日疟患者血样的检测，１４７份镜检阳性的血样中，１１３份杂交阳性，与镜检的符合率为７６．８７％，２０份正常人血杂交阴性。     

聚合酶链反应掺入法制备标记地高辛探针检测间日疟原…

根据间日疟原虫环子孢子蛋白基因设计合成特异性引物一对，采用ＰＣＲ技术，以Ｄｉｇ－１１－ｄＵＴＰ代替部分ｄＴＩＰ直接扩增并标记含间日疟原虫环子孢子蛋白基因中央重复序列的基因片段作为ＤＮＡ探针并用于检测间日疟原虫感染，结果表明；（１）采用ＰＣＲ法直接制备并标记地高辛探针的方法较ＰＣＲ扩增后再标记的方法更为快速，简便和经济；（２）探针只与间日疟中层得血样核到抽提物杂交阳性，而与其亲缘关系相近的三株恶性疟     

单克隆抗体3A3、2E7用于恶性疟Dipstick检测的初步研究

目的 建立一种快速、简便，适用于基层的恶性疟免疫诊断方法。方法 将抗恶性疟原虫HRP－Ⅱ的单克隆抗体3A3、2E7纯化后经配对筛选，利用Dipstick-免疫胶体金技术，制成诊断恶性疟的Dipstick层析条。用该层析条对115份疟疾患者血样，20份非疟疾病人血样及10份正常人血样进行检测，评价其敏感性和特异性，并对其稳定性、重复性等进行了初步研究。结果 用该法检测145份血样，其对恶性疟的敏感性和特异性分别为83．1％及97．5％，已包被抗原、抗体的Dipstick条在4℃及室温下可保存3个月以上，对30份血样重复检测4次结果完全一致。结论 Dipstick-免疫胶体金模式快速、简便，适用于基层应用，为疟疾的快速诊断提供了新的有效的手段。     

疟疾复合PCR检测系统的建立

目的：建立简易、快速的复合ＰＣＲ系统,用于检测间日疟、恶性疟及混合感染。方法：以疟原虫小亚单位核糖体核糖核酸基因为靶片段,设计疟原虫属特异性上游引物Ｓ１和间日疟原虫、恶性疟原虫种特异性下游引物Ｓ２和Ｓ３,建立双温度点复合ＰＣＲ扩增系统并用于临床血样的检测。结果：从间日疟原虫和恶性疟原虫感染血样中分别扩增出７０５ｂｐ和５７５ｂｐ特定扩增带,而食蟹猴疟原虫、诺氏疟原虫及健康人血样均未见扩增带。检测原虫水平达２－１０虫／μｌ全血。限制性内切酶酶切分析证实扩增产物为目的片段。检测１０４份镜检确诊疟疾患者血样,其中８１份与镜检结果相符,并查出镜检未发现的１７份混合感染和２份虫种鉴别失误的恶性疟。结论：本系统敏感性高,特异性强,操作简便,可在一次扩增中同时检出间日疟和恶性疟两种原虫。     

套式/多重PCR诊断疟疾的敏感性、特异性和稳定性初探

目的 提高标签引物?鄄套式/多重PCR诊断疟疾的敏感性、特异性与稳定性。 方法 用滤纸法采集非疟疾发热病人血样30份及其他传染病（感冒， 流感， 伤寒， 肝炎等）患者血样20份；抽取恶性疟和间日疟各1例患者血4 m1，进行系列稀释制备不同疟原虫含量的感染血样；健康者血样作对照。用热裂解法制备DNA模板，用线粒体细胞色素氧化酶基因作为靶基因，应用相关软件和网络资源（Primer Premier 5.0, PUBMED, NCBI-BLAST和Mfold服务器）设计和优化标签引物?鄄套式/多重PCR，并用于检测所采集制备的各种血样。 结果 间日疟与恶性疟患者血系列稀释为含 1 000、100、10和1个虫/μl后经标签引物?鄄套式/多重PCR检测，恶性疟和间日疟患者各稀释含虫血样分别在611 bp和255 bp出现1条带，能检测到原虫密度均为1个虫/μl血；非疟疾发热病人血样30份及其他传染病患者血样均为阴性；健康者血样未出现扩增条带，每种血样反复测试3次以上均获得同样结果。 结论 经优化的标签引物-套式/多重PCR在疟疾诊断中具有较高的敏感性、特异性和稳定性。     

PREVALENCE OF ANTIBODY TO CIRCUMSPOROZOITE PROTEIN REPEATS AND CHARACTERIZATION OF PlASMODIUM VIVAX IN HUBEI PROVINCE, CHINA

收集湖北省间日疟现症病人、无症状病人及复发病人滤纸血，按ＥＬＩＳＡ法检测抗间日疟原虫环子孢子蛋白（ＣＳＰ）Ⅰ型（ＧＤＲＡＤＧＱＰＡ）、Ⅱ型（ＡＮＧＡＧＮＱＰＧ）和Ⅲ型（“Ｐ．ｖｉｖａｘ－ｌｉｋｅ”）（ＡＰＧＡＮＱＥＧＧＡＡ）重复体抗体。结果发现８３例受检血样中有３２例至少存在１型抗体，其中有Ⅰ型抗体的２７例、Ⅱ型抗体的５例、Ⅲ型抗体的１６例，包括两型混合感染的１０例和三型混合感染的４例。但只有Ⅰ型能被ＰＣＲ－探针确认。所收集的４份湖北间日疟病人全血中，虽然无１例检测到抗重复体抗体，但有３例被ＰＣＲ－探针确定为Ｉ型ＣＳＰ间日疟原虫单纯感染。本文还首次注意到间日疟原虫复发与Ⅰ型抗ＣＳＰ重复体ＩｇＧ抗体水平相关，并认为是休眠体刺激的结果。     

广西间日疟原虫环子孢子蛋白基因型的初步研究

目的：了解广西间日疟原虫种群的基因型组成及其地理分布。方法 用滤纸法采集经镜检确诊的间日疟原虫阳性病人血样31份，Chelex-100离子交换法用于提取滤纸血样中的DNA，改进的套式－等位特异－PCR和琼脂糖凝胶电泳用于鉴别性片段的扩增，分析和鉴定。结果 在19份广西当地间日疟病例血样中17份鉴定为温带族虫株（89．5％），2份为热带族株（10．5％）；12份输入病例血样中，温带族8份（66．7％），热 带型3份（25．0％）PV－2型1份（8．3％）。结论 目前广西当地流行的间日疟以温带族虫株为主，少数热带族病例出现在环江和防城县，但输入间日疟病例中热带族虫株感染占较大比例。     

聚合酶链反应用于鉴别恶性疟原虫不同分离株的研究

用恶性疟原虫主要裂殖子表面抗原基因序列（ＭＳＡ－１）为引物的聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术检测恶性疟原虫感染。用此方法扩增实验室体外培养的ＦＣＣ１／ＨＮ株恶性疟原虫，显示１条３００ｂｐ的ＤＮＡ片断，而对实验室培养的巴布亚新几内亚ＦＣＱ－２７株则显示１条４４０ｂｐＤＮＡ条带。用此方法检测１５份采自云南中缅边界的恶性疟血样均能扩增出ＤＮＡ条带，但不同血样的ＤＮＡ条带的分子量不同，部分血样还存在１条以上的ＤＮＡ条带。在同时扩增的１０份正常人血样和１０份采自江苏间日疟流行区的现症间日疟血样中均没有发现ＤＮＡ条带。表明此方法具有很高的种和株的特异性。     

PCR检测疟疾混合感染的现场应用研究

目的 评价PCR检测技术在间日疟与恶性疟混合感染区诊断疟疾的现场应用价值。方法 采集海南省疟疾混合感染流行区304份滤纸干血滴样本，根据红内期疟原虫SSUrRNA基因序列，设计合成3条引物．采用PCR技术在同一反应体系中扩增出间日疟原虫和恶性疟原虫不同的DNA片段，检测现场所采样本中的间日疟原虫或恶性疟原虫DNA；同时与镜检法进行比较。结果 在304份样本中，PCR法阳性15份，其中间日疟7份．恶性疟8份；镜检法阳性11份，其中间日疟6份，恶性疟5份。镜检阳性的样本PCR均为阳性；镜检阴性而PCR阳性的4份样本，其扩增产物经限制性酶切鉴定，证实为间日疟原虫或恶性疟原虫DNA。结论 此PCR检测体系灵敏、特异．对诊断或鉴别诊断间日疟原虫和恶性疟原虫混合感染具有实用价值。     

湖北省间日疟原虫环子孢子蛋白重复体抗体的流行及其 …

收集湖北省间日疟现症病人，无症状病人及复发病人滤纸血，按ＥＬＩＳＡ法检测抗间日疟原虫环子孢子蛋白（ＣＳＰ）Ｉ型（ＧＤＲＡＤＧＱＰＡ）Ⅱ型（ＡＮＧＡＧＮＱＰＧ）和Ⅲ型（ＡＰＧＡＮＱＥＧＧＡＡ）重复体抗本。结果发现８３例受检血样中有３２例至少存在１型抗体，其中有Ｉ型抗体的２７例，Ⅱ型抗体的５例，Ⅲ型抗体的１６例，包括两型混合感染的１０例和三型混合感染的４例。但只有Ｉ型能被ＰＣＲ－探针确认。所收集的４份     

末端标记间日疟寡核苷酸探针在疟疾监测中的应用

本文报道了应用合成间日疟ＤＮＡ片段经同位素末端标记作为探针．检测了２１份经镜检确诊的间日疟病人血样，结果全部阳性．敏感性可测出０．００１３３％的原虫血症，与培养的恶性疟及正常人血没有交叉反应。随后将该探针应用到疟疾监测中，在山东采集的３１０份发热病人血和２４５份流动人口血，应用本探针检测，未出现阳性结果，经镜检复核．结果相符．在安徽省滁州市采集３５２份病灶点人群血，有２８份出现了阳性，阳性率为７．９５％。对以上血样经ＩＦＡ方法进行抗体测定，显示合成间日疟ＤＮＡ探针杂交结果与抗体阳性率具有明显的一致性。结果表明本合成间日疟ＤＮＡ探对可应用于灭疟后期的疟疾监测．特别对流动人口集中检查和传染源检索具有潜在的应用价值。     

合成间日疟DNA探针在疟疾监测中的应用研究

本文报道了应用合成间日疟ＤＮＡ片段经同位素末端标记作为探针，检测了２ｌ份经镜检确诊的间日疟病人血样，结果全部阳性，敏感性可测出０．００１３３％的原虫血症，与培养的恶性疟及正常人血没有交叉反应。随后将该探针应用到疟疾监测中，在山东采集的３１０份四热病人血和２４５份流动人口血，应用本探针检测，未出现阳性结果，经镜检复核，结果相符。在安徽省滁州市采集３５２份病灶点人群血，有２８份出现了阳性，阳性率为７．９５％。对以上血样经ＩＦＡ方法进行抗体测定，显示合成间日疟ＤＮＡ探针杂交结果与抗体阳性率具有明显的一致性。结果表明本合成间日疟ＤＮＡ探针可应用于灭疟后期的疟疾监测，特别对流动人口集中检查和传染源侦查具有一定潜力。     

西双版纳疟疾患者RESA抗体的初步调查

用RESA—IFA试验对云南省西双版纳州恶性疟患者血样41份,恶性和间日疟原虫混合感染患者血样12份及间日疟患者血样38份进行RESA抗体检测。恶性疟患者阳性者9例,阳性率为22.0％(9/41);混合感染者阳性1例,阳性率为8.3％(1/12);间日疟患者全部阴性。RESA抗体阳性的患者IFA试验的GMRT为1552.1,阴性患者为741.8,差异非常显著。RESA抗体阳性患者平均原虫密度为5042个原虫/μl血,阴性患者为25398个原虫/μl血。表明恶性疟患者血清中的RESA抗体与临床免疫有一定关系。     

快速免疫色谱测试卡诊断恶性疟和间日疟的效果评价

目的： 评价快速免疫色谱测试卡（ Ｉ Ｃ Ｔ） 在疟区诊断恶性疟和间日疟的效果。方法： 以疟原虫镜检结果为标准, 用 Ｉ Ｃ Ｔ 检测门诊“四热”病人中的恶性疟和间日疟。结果： Ｉ Ｃ Ｔ 检测恶性疟与间日疟的敏感性分别为９６７ ％ 和９０４ ％ , 特异性为９８６ ％ 。与原虫镜检结果的符合率为９４７ ％ 。恶性疟与间日疟之间无交叉反应。结论： 免疫色谱测试卡可同时检测恶性疟和间日疟, 较镜检法快速、简易。     

重组质粒DNA探针用于间日疟诊断的研究

用~(32)P标记含间日疟原虫DNA片段的重组质粒pVA1作为探针,通过DNA打点杂交试验检测红内期间日疟原虫。该探针检测间日疟原虫基因组DNA的敏感度达1ng;与现场采集的25份间日疟患者血样(原虫血症为0.003％～0.7％)的杂交阳性率为72％,与6例恶性疟和3例食蟹猴疟血样中各1例杂交阳性;与3例约氏疟和6例正常人血样均为阴性。