应用DNA探针检测蚊体内丝虫幼虫的研究

本文用人工合成的寡核苷酸探针，经斑点杂交法检测蚊体内马来丝虫幼虫。可测到丝虫和微丝蚴２ｎｇ的ＤＮＡ量，不与其它动物丝虫标本发生交叉反应。将单个蚊直接压于硝酸纤维素膜上进行检测，感染蚊中含有１条感染期幼虫就可出现阳性反应。将一组蚊虫在裂解液中研磨集体检测时，在２０只蚊虫中有１只感染蚊即可检出。显示该探针可用于马来丝虫地区的蚊媒监测。     

马来丝虫非放射性寡核苷酸探针的制备及现场应用研究

目的 寻找一种高度特异，敏感的马来丝虫的检测方法，并将其用于现场检测。方法 根据马来丝虫HhaⅠ重复序列，合成马来丝虫特异性引物1对和寡核苷酸探针1条，采用地高辛加尾标记试剂盒对人工合成寡核苷酸探针进行非放射性标记，并对标记后的探针进行标记效率检测，将血液标本和蚊虫标本分别用蛋白酶K等处理液和Chelex-100处理后，结合PCR技术，对该探针的特异性和敏感展出一进行检测；并将此探针用于平远县马来丝虫病的监测。结果 经测定，标记后探针的有效浓度为1.5-2fmol/μl；结合PCR技术，该探针可检出100μl阳性血样中1条微丝蚴；50只蚊中含有1只只感染1条幼丝虫阳性蚊亦能准确检出，班氏丝虫等其它寄生虫标本的检测结果均为阴性；采自平远县的240份血液标本和1008只中华按蚊标本均为阴性。结论 该探针杂交检测方法特异性强，敏感性高，可作为一种新的马来丝虫病监测方法在现场中使用。     

马来丝虫非放射性寡核苷酸探针的制备及现场应用研究

目的　寻找一种高度特异、敏感的马来丝虫的检测方法 ,并将其用于现场检测。　方法　根据马来丝虫 Hha 重复序列 ,合成马来丝虫特异性引物 1对和寡核苷酸探针 1条 ,采用地高辛加尾标记试剂盒对人工合成寡核苷酸探针进行非放射性标记 ,并对标记后的探针进行标记效率检测 ;将血液标本和蚊虫标本分别用蛋白酶 K等处理液和 Chelex- 10 0处理后 ,结合 PCR技术 ,对该探针的特异性和敏感性进行检测 ;并将此探针用于平远县马来丝虫病的监测。　结果　经测定 ,标记后探针的有效浓度为 1.5～ 2 fmol/μl;结合 PCR技术 ,该探针可检出 10 0 μl阳性血样中 1条微丝蚴 ;5 0只蚊中含有 1只只感染 1条幼丝虫阳性蚊亦能准确检出。班氏丝虫等其它寄生虫标本的检测结果均为阴性 ;采自平远县的 2 4 0份血液标本和 10 0 8只中华按蚊标本均为阴性。　结论　该探针杂交检测方法特异性强 ,敏感性高 ,可作为一种新的马来丝虫病监测方法在现场中使用。     

PCR及PCR-ELISA法检测蚊体内马来丝虫幼虫

目的：建立一种检测蚊体内马来丝虫幼虫的灵敏、快速、特异的方法。方法：选择应用PCR及PCR－ELISA法检测马来丝虫幼虫DNA的最佳反应条件，并在该条件下分别以马来丝虫Ⅰ期、Ⅱ期、Ⅲ期幼虫各1条作模板，测定检测的灵敏度及检测实验室人工感染中华按蚊体内的马来丝虫幼虫。结果：PCR及PCR－ELISA法均能检测出1条Ⅰ期幼虫（L1），而PCR的检测下限为1／10条L1，PCR－ELISA检测下限为1／100条L1；将分离的感染期幼虫加阴性蚊媒进行粗提、扩增及电泳，结果未见明显的扩增条带，扩增产物作ELISA检测，全部为阴 性；个体解剖人工感染的中华按蚊120只，分别收集113只阳性蚊体内的幼丝虫，用两种方法检测，结果均为阳性。结论：初步建立了PCR及PCR－ELISA法检测蚊体内马来丝虫幼虫的方法。     

应用单克隆抗体检测蚊体内幼丝虫的实验观察

以马来丝虫感染期幼虫为靶抗原制备多株单克隆抗体（ＭｃＡｂ）从中筛选出１Ｇ１、１Ｈ１单克隆抗体，检测人工感染马来丝虫的中华按蚊。当中华按蚊吸食含马来微丝蚴的兔血后，分别解剖，同时以ＥＬＩＳＡ及Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ检测饲养不同时间的中华按蚊。结果显示，饲养９ｄ的按蚊马来丝虫幼虫阳性率，人工解剖为８６．６％，ＥＬＩＳＡ和Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ法分别为８２．２％和７７．８％。经统计学处理，人工解剖与单抗检测无显著性差异，其灵敏度为每只蚊０．５条幼虫。实验证明，此ＭｃＡｂ与牛腹腔指状丝虫、猪肺丝虫抗原无交叉反应，显示了一定的特异性。     

聚合酶链反应检测蚊体内马来丝虫幼虫的实验

目的　建立一种特异、灵敏和简捷的聚合酶链反应 (PCR)检测蚊体内马来丝虫幼虫的方法。方法　在应用一种新的模板纯化处理技术 (Microcon 10 0 )基础上 ,采用适应于检测我国马来丝虫的两套DNA扩增引物(P1、P2与P3、P4) ,对实验感染马来丝虫的中华按蚊进行扩增检测。结果　两套引物均可检出蚊体内不同发育期幼丝虫 (L1、L2 和L3) ,其灵敏度达 1只蚊体内 1/ 6 4条L1和 2 0 0只群体蚊中含有 1只感染蚊 (体内有 1条L3)的水平 ,而对犬恶丝虫及未感染蚊却不能扩增出特异条带。结论　初步建立特异、灵敏和简捷的PCR检测蚊体内马来丝虫幼虫的方法。     

应用单克隆抗体检测蚊体内幼丝虫的实验观察

以马来丝虫感染期幼虫为靶抗原制备多株单克隆抗体从中筛选出１Ｇ１，１Ｈ１单克隆抗体，检测人工感染马来丝虫的中华按蚊。当中华按蚊吸食马来微丝蚴的兔血后，分别解剖同时以ＥＬＩＳＡ及Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ检测饲养不同时间的中华按蚊。结果显示，饲养９ｄ的按蚊马来丝虫幼虫阳性率，人工解剖为８６．６％，ＥＬＩＳＡ和Ｄｏｔ－ＥＬＳＩＡ法分别为８２．２％和７７．８％。     

嗜人按蚊自然感染班氏丝虫的调查

安徽省舒城县芦镇乡为班氏、马来丝虫病混合流行区，班氏丝虫病占９８．９０％。自然界捕获并解剖嗜人按蚊５５９只，幼丝虫感染率为６．４４％，密度为１～２９条／蚊；感染期幼丝虫率为１．０７％，密度为１～５条／蚊。均为班氏丝虫幼虫。因而认为嗜人按蚊是安徽省班氏丝虫病传播媒介之一。     

人房内中华按蚊,嗜人按蚊自然感染牛腹腔丝虫的纵向观察

中华接蚊、嗜人按蚊均可感染牛腹腔丝虫和马来丝虫。在马来丝虫病流行区进行蚊媒调查，特别是在马来丝虫病防治后期的蚊媒监测中，蚊体内人、畜丝虫幼虫的鉴别尤为重要[1]。为了排除牛腹腔丝虫幼虫对马来丝虫病防治后期蚊媒监测的干扰，1987～1992年，1995～1996年，我们选定已无微丝蚴血症者的蔡金镇两个原马来丝虫病流行村，总人口1963人为观察区、先后共8年观察人房内中华接蚊和嗜人按蚊自然感染牛腹腔丝虫的情况。材料与方法1．牛腹腔丝虫自然传染原调查：上午抽采观察区村民饲养的水牛耳背静脉血各6大滴（约120μl），涂制成1．5×3．0…     

嗜人按蚊自然感洒斑氏丝虫的调查

安徽省舒城县芦镇乡为斑氏，马来丝虫病混合流行区，斑氏丝虫病占９８．９０％。自然界捕获为并解剖嗜人按蚊５５９只，幼丝虫感染率为６．４４％，密度为１－２９条／蚊；感洒期幼丝虫率为１．０７％，密度为１－５条／蚊。均为斑氏丝虫幼虫。因而认为嗜人按蚊是安徽省班氏丝虫病传播媒介之一。     

周期型马来丝虫人工感染杂交小鼠的实验研究

在实验室首次让长爪沙鼠和小白鼠进行杂交，得MKG杂交小鼠。从东乡伊蚊体内收集周期型马来丝虫感染或幼虫200～250条注入杂交鼠腹腔内，125～284d在12只杂交鼠腹腔抽液中4只检获微丝蚴，密度为5～353条／60μl，其形态大小与沙鼠和人体内的无可见差异。感染30～165d的16只杂交小鼠，解剖9只，有6只检获丝虫是虫或成虫。实验感染率为56.25％（9／16）。丝虫杂交鼠模型的建立，为丝虫生物学、病理学、免疫化学、新药筛选和分子生物学（DNA探针）等研究开辟新的途径。     

班氏丝虫特异生物素DNA探针的制备及用于丝虫基因检测的研究

为寻找一种敏感、特异的丝虫病监测方法,根据班氏丝虫ｐ Ｗ ｂ１２ 重复序列,用聚合酶链反应扩增班氏丝虫特异的 Ｄ Ｎ Ａ 片段（４９０ ｂｐ）,回收后用光敏生物素标记该片段,制备成非放射性 Ｄ Ｎ Ａ 探针,并在探针的制备方法上做了新的尝试。实验结果显示,该探针只与班氏微丝蚴及其感染蚊 Ｄ Ｎ Ａ 出现杂交,与马来微丝蚴、正常蚊以及人白细胞的 Ｄ Ｎ Ａ 未出现杂交;检测 ６ 份现场镜检班氏微丝蚴阳性的血样 Ｐ Ｃ Ｒ 产物全部阳性,８ 份正常对照均阴性;与微丝蚴模拟血样本和 Ｄ Ｎ Ａ 样本的 Ｐ Ｃ Ｒ 扩增产物杂交时,敏感性分别达１ 条微丝蚴／１００ μｌ和 ２ ｐｇ;检测人工感染的班氏丝虫阳性蚊虫扩增产物全部阳性,正常蚊全部阴性。     

不同蚊种对亚周期型马来丝虫的易感性研究

本文用中华按蚊、东乡伊蚊、淡色库蚊分别人工感染亚周期型马来丝虫,通过观察其微丝蚴摄人数、幼虫穿壁率、幼虫发育成熟率及感染24h 幼虫的黑化率等指标探讨了蚊种对亚周期马来丝虫的易感性。结果表明,中华按蚊、东乡伊蚊对亚周期型马来丝虫易感,淡色库蚊不易感。黑化反应在三蚊种体内均可发生,从多方面影响幼虫在淡色库蚊体内的发育。     

从落水蚊虫逸出的布鲁属丝虫感染期幼虫经口感染沙鼠

本文作者对布鲁属丝虫感染期幼虫能否从落水已死的或将死的蚊虫体内逸出,以及感染期幼虫在水中较长时间之后对沙鼠能否感染进行了实验研究。使骚扰阿蚊叮咬彭亨丝虫阳性沙鼠,埃及伊蚊叮咬马来丝虫阳性     

丝虫感染对蚊虫飞翔肌的损害

彭亨丝虫和亚周期型马来丝虫均在蚊媒飞翔肌纤维中发育,本文报告这两种丝虫幼虫的感染对蚊虫飞翔肌的损害情况。使实验室纯系培养的埃及伊蚊叮咬彭亨丝虫或亚周期型马来丝虫微丝蚴阳性家猫,并从野外采     

四川峨嵋八代按蚊与贵阳按蚊传播马来丝虫病的观察

1980年杨彦空等在调查四川省赫坎按蚊类群自然感染马来丝虫时,发现2只产“中间型”卵的成蚊体内有马来丝虫感染期幼虫。根据已有报告,产该类型卵的蚊虫分布在我省的有八代和贵阳按蚊。它们是否为马来丝虫媒介?1984年6～9月我们在峨眉县作了调查。 调查方法 一、普查:选八代按蚊较多的平城乡友谊、钢铁2个村为调查点,6月份捕蚊12次,每次在上午逐户捕捉蚊帐内全部按蚊,单管饲养,以蚊     

马来丝虫微丝蚴定量注射感染中华按蚊和致倦库蚊的实验观察

本文报告采用改进的微量注射技术和较为精细的计数方法,以2—10条微丝蚴/蚊,定量注射感染中华按蚊和致倦库蚊,找出了这两种蚊虫的微丝蚴感染量与感染期幼丝虫阳性率、幼丝虫平均发育成熟率之间的定量关系;比较了在注射感染条件下两种蚊虫对马来丝虫易感性的差异。     

应用DNA探针检测蚊体内疟原虫的研究

本文用生物素标记的克隆ＤＮＡ探针，以斑点杂交法检测蚊体内恶性疟原虫。将一组蚊虫在还原性缓冲液中研磨后集体检测时，在２５只蚊中有１只感染蚊即可检出，亦可将单个蚊虫直接压在硝酸纤维素膜上进行检测。本技术的高特异性，敏感性以及试剂的稳定性等表明，它可作一个适用的流行病学调查工具。     

中华按蚊传播亚周期型马来丝虫能力的研究

用中华按蚊人工感染亚周期型马来丝虫,观察其摄入的微丝蚴数、胸肌中的幼虫数和感染期幼虫数。以每蚊体内感染期幼虫数与摄入微丝蚴数之比作为传播能力。结果表明,在温度为28±1C,相对湿度75％的条件下,亚周期型马来丝虫在中华按蚊体内约需10～12d发育成熟,传播能力为10％。     

应用DNA探针检测蚊体内疟原虫的研究

本文用生物素标记的克隆ＤＮＡ探针，以斑点杂交法检测蚊体内恶性疟原虫。将一组蚊虫在还原性缓冲液中研磨后集体检测时，在２５只蚊中有１只感染蚊即可检出，亦可将单个蚊虫直接压在硝酸纤维素膜上进行检测。本技术的高特异性、敏感性以及试剂的稳定性等表明，它可作为一个适用的流行病学调查工具。